食欲肽及其对睡眠-觉醒的调节

食欲肽是一种神经肽,在下丘脑分布有大量的食欲肽A和食欲肽B神经元.食欲肽受体有2种亚型OX1R和OX2R,OX2R是2种食欲肽的非选择性受体,OX1R仅对食欲肽A有选择性.食欲肽神经元在人脑的分布与鼠类似.食欲肽除调控摄食行为外,对睡眠与觉醒有重要的调控作用.在调节睡眠-觉醒的相关区域,存在大量的食欲肽受体OX1R和OX2R与高表达的OX1R和OX2R的前体mRNA.食欲肽还与调控觉醒和快波睡眠的神经位点LC、乳结节神经核(TMN)、DR与基底前脑(BF)有复杂的联系,这些区域的食欲肽神经元在觉醒与快波睡眠状态时都异常活跃.食欲肽增多可促进睡眠,食欲肽缺失能诱发发作性睡病.损毁下丘脑某些区域以致食欲肽神经元胞体减少,则可引起睡眠-觉醒功能障碍(如原发发作性睡病等).     

慢性肾衰大鼠下丘脑组织食欲素A、食欲素1型受体和瘦素受体表达的变化

目的探讨大鼠慢性肾衰(CRF)动物模型下丘脑组织食欲素A及其前体mRNA(Prepro-OX mRNA)、食欲素1型受体(OX1R)及其mRNA和瘦素受体(ob-R)表达的变化.方法随机将62只200～250 g雄性Wister大鼠分为:正常组(n=5),假手术组(n=25),CRF组(n=32).采用放射免疫法测定下丘脑组织食欲素A;逆转录-聚合酶链反应方法分析下丘脑组织Prepro-OX mRNA和OX1R mRNA的表达;免疫组化方法分析下丘脑组织食欲素A、OX1R和ob-R的表达;酶联免疫吸附法测定血清瘦素水平;生化自动分析仪测定血清肌酐.结果与假手术组大鼠相比,CRF大鼠下丘脑组织食欲素A水平明显下降并与血清瘦素水平呈显著负相关(r=-0.63,P＜0.001);CRF大鼠术后12周的下丘脑组织Prepro-OX mRNA表达水平明显低于假手术组(P＜0.01),并分别与血清瘦素水平和血清肌酐水平呈显著负相关(r=-0.81,P＜0.001;r=-0.68,P＜0.05).CRF大鼠术后12周下丘脑OX1R mRNA水平低于假手术组,但无显著差异(P＞0.05).CRF大鼠术后8周食欲素A阳性信号位于下丘脑组织神经元细胞的核周质,OX1R沿神经纤维走行分布,ob-R阳性信号位于下丘脑组织神经元细胞的胞膜,CRF组和假手术组大鼠相比,食欲素A阳性信号在下丘脑表达明显减少;OX1R阳性信号在下丘脑表达无明显变化;ob-R阳性信号在下丘脑表达明显增多.结论CRF大鼠下丘脑组织食欲素A表达降低可能与血清瘦素水平增高有关,其下丘脑组织Prepro-OX mRNA表达明显下降,可能是下丘脑食欲素A水平降低的重要原因之一;CRF大鼠下丘脑组织OX1R表达有下降趋势,ob-R表达有增高趋势,这些变化与CRF时食欲减退的关系值得进一步研究.     

Orexin在睡眠-觉醒中的作用机制

Orexins是一组神经肽,分为orexin A、orexin B（OXA、OXB）2种,它们来源于同一前体。Orexins主要由下丘脑外侧区一组特定的神经元产生,通过其神经纤维的直接投射或释放入脑脊髓液作用于靶位点,激活2种G蛋白耦联的细胞表面受体OX1R、OX2R,参与了许多生理活动的调节。其中除了调控摄食行为外,在睡眠-觉醒方面也起着重要的作用。为此,对Orexin在睡眠—觉醒的作用机制作一综述。     

睾丸切除改变小鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1表达

目的 探讨睾丸切除对小鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1（huntingtin-associated protein 1,HAP1）表达的影响.方法 观察HAP1在主要分泌促性腺激素释放激素神经元的区域分布特点,继而应用免疫印迹技术观察去势对下丘脑HAP1表达的影响,最后选择HAP1水平变化最显著的时段,应用免疫组织化学技术观察下丘脑视前区及弓状核等部位HAP1免疫反应性变化的区域特征.结果 HAP1在雄性小鼠下丘脑广泛表达,以视前核、视交叉上核、室周核、室旁核、背内侧核、弓状核等部位免疫反应性较强,在隔外侧核、隔内侧核、斜角带核及下丘脑乳头体上核、正中隆起及下丘脑腹内侧核等部位呈低至中等水平表达.HAP1免疫反应产物在神经元胞质和神经毡内呈弥散、均匀分布,并可见强反应的stigmoid小体.下丘脑HAP1水平在睾丸切除后第2-4日显著升高,第7日接近假手术组水平,术后3周显著降低（P＜0.01）.小鼠睾丸切除后2d,与假手术组比较,HAP1在下丘脑腹内侧视前核及弓状核的免疫反应性增强,而下丘脑膈外侧核及背内侧核等区域HAP1免疫反应性无明显变化（P＜0.05）.结论 HAP1可能与参与下丘脑视前区弓状核等部位神经元内GnRH的分泌和转运.     

大白鼠上丘水平导水管周灰质外侧区的传入联系

HRP注入大白鼠上丘水平导水管周灰质外侧区后,标记细胞出现在下列脑区:前额内侧皮质,额顶运动皮质,额顶体感皮质,扣带前、后皮质,纹状皮质17、18区,颞叶听皮质,下托及海马1、2区:缰核、丘脑室旁核、背内侧核、前背核、束旁下核、未定带,下丘脑前区、背侧区,下丘脑背、腹内侧核,乳头体上核,背、腹侧乳头体前核,下丘脑外侧区:中缝背核、被盖背外侧核、中缝正中核、黑质网状部,外侧丘系腹侧核及二叠体旁核;兰斑、上橄榄核、第四脑室底灰质、脑桥尾侧网状核、三叉神经脊束核、外侧网状核小细胞部、薄束核及楔束核     

大鼠隔外核的传入联系—HRP法

用ＨＲＰ法研究大鼠隔外侧核的传入联系。主要在下列脑部见标记细胞：额皮质，嗅内皮质，海马，盖带，灰被，灰小束，杏仁基底内，外侧核，丘脑后核群，未定带，下丘脑室周核，下丘脑背侧区，下丘脑背，腹内侧核，弓状核，下丘脑后核，中脑中央灰质腹外侧部，中缝背核，被盖背外侧区，黑质密部及蓝斑。     

大鼠下丘脑视上核NOS与ER双染神经元的表达

目的 探讨一氧化氮合酶（NOS）和雌激素受体（ER）在下丘脑视上核的分布及共存，为揭示雌激素与一氧化氮之间内在联系提供形态学依据。方法 对30只SD雌性大鼠下丘脑切片，采用还原型辅酶Ⅱ-黄递酶（NADPH—d）组织化学法与免疫组织化学技术相结合的方法，分别观察大鼠下丘脑视上核内NOS阳性神经元、ER阳性神经元以及NOS／ER双染神经元的形态及分布。应用图像分析技术，测量并统计视上核内NOS阳性神经元、ER阳性神经元以及NOS／ER双染阳性神经元的截面直径、数目及双染神经元所占的比例。结果 ①NOS阳性神经元在视上核内分布广泛，呈内侧稍宽的带状分布于视交叉的外上部，大部分集中分布在视上核的背内侧部和背外侧部。②ER阳性神经元在下丘脑视上核的表达不及NOS阳性神经元广泛，主要分布在下丘脑视上核的外侧部。③NOS与ER双染阳性神经元主要分布在下丘脑视上核背内侧和背外侧部。结论 ①在大鼠下丘脑视上核内，不仅NOS阳性神经元分布广泛，且ER阳性神经元也有较强表达。②NOS与ER双染阳性神经元主要集中分布于视上核背内侧和背外侧部，在下丘脑室旁核等其他核团内也有相应的表达。     

大鼠中脑中央灰质外侧区的传入联系

用辣根过氧化物酶(H R P)逆轴突标记法,研完了成年大白鼠中脑中央灰质外侧区的传入联系。将HRP 注射到中央灰质外侧区后.可见到标记的神经元核团有:外侧丘系核、楔状区、二叠体旁核、黑质密带、丘脑底核、未定带、丘脑网状核、束旁核、丘脑腹内侧核大细胞部、Forel 氏H_1区;下丘脑背内侧核及腹内侧核、下丘脑前核、视上核、视前大细胞恢、视前外侧核、第三脑室室周灰质及隔外侧核;脑桥首尾侧网状核、被盖网状核、小细胞网状核、中缝大核;脊髓背角RexedⅡ、Ⅲ层。针对这些核团,就脑内镇痛系统的形态学基础进行了讨论。     

大白鼠视前外侧区的传入联系—HRP法研究

本文用HRP逆行追踪技术研究了大白鼠视前外侧区的传入纤维联系。结果表明:梨状皮质、杏仁皮质核、杏仁内侧核、杏仁前核、视上核、下丘脑腹内侧核,下丘脑外侧核、中缝背核、中央上核、蓝斑核、联合核和迷走神经背核等同视前外侧区有传入联系。     

下丘脑室旁核下行植物性投射的HRP顺行追踪研究

将HRP泳入大鼠室旁核,在其延髓孤束核—迷走背核复合体与脊髓侧索后部、侧角、中央灰质等处出现顺行标记的纤维与终末。连续追踪时,可以区分两条室旁核下行径路。外侧径路自室旁核入下丘脑外侧区与未定带;至下丘脑尾侧部行于被盖腹侧区及其背外侧,在内侧丘系与大脑脚间。至中脑、脑桥时,随外侧丘系移向腹侧;继则行于脑干腹外侧浅部;延入脊髓侧索,最后入灰质。内侧径路经间脑室周、中脑中央灰质、第四脑室底、孤束核—迷走背核复合体、延髓与脊髓中央管周下行。     

增食欲素受体1在营养性肥胖型大鼠胰腺组织中的表达

目的 探讨高脂膳食诱导的肥胖大鼠胰腺组织中增食欲素受体1(OX1R)蛋白的表达规律,阐明OX1R对营养性肥胖型大鼠的体重及代谢指标的影响和调节机制.方法 建立高脂膳食诱导的营养性肥胖型大鼠模型;应用微型血糖仪测定全血葡萄糖、生化酶法测定甘油三酯、化学发光免疫分析法测定血清胰岛素的变化;免疫组化鉴定胰腺组织OX1R蛋白的表达;肥胖大鼠侧脑室灌注增食欲素受体1反义寡核苷酸(OX1R-PS-ODNs),检测其对肥胖大鼠胰腺组织中OX1R蛋白产生的影响.结果 大鼠饲养8周后,高脂组大鼠体重、血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇高于正常组(P＜0.05),大鼠出现营养性肥胖.OX1R蛋白的表达定位于胰腺胰岛β细胞细胞质中,肥胖组OX1R蛋白的表达水平较正常组减低约16%(P＜0.05).肥胖大鼠侧脑室灌注反义OX1R-PS-ODNs 72 h后,胰腺组织表达的OX1R蛋白由82±6降至65±4,下降约21%(P＜0.01).结论 胰岛β细胞中有OX1R蛋白的表达.下丘脑增食欲素系统可以干预肥胖型大鼠胰腺组织中OX1R蛋白的表达,并参与肥胖的发生和血糖、血清胰岛素的代谢调节.

Abstract：

Objective To identify the presence of orexin receptor 1 (OXR1) in obese rat pancreas and clarify its effect and mechanism on body weight and metabolic index in obese rats.Methods The obese rat model was established a high-fat diet.And the serum levels of glucose,triglyeride and insulin were measured by Mini-Blood Glucose meter,biochemical enzymatic method and chemiluminescent immunoassay.The pancreatic expression of OX1R protein was bidentified by immunohistochemistry.After an intracerebroventricular infusion of orexin receptor 1 antisense oligodeoxynucleotide ( OX1R-PS-ODNs),the effect on OX1R protein was detected in rat pancreatic tissue with obesity.Results After feeding for 8 weeks,high-fat diet rats appear alimentary obesity body weight,serum glucose,insulin,triglyeride and cholesterol of high-diet rats were higher than those in the control group( P＜0.05 ).The expression of OX1R protein was located in the cytoplasm of pancreas Islet 3-cells.The expression of OX1R protein in obese rat pancreas decreased around 16% versus the normal group( P＜0.05 ).After the obese rats were treated by OX1R-PS-ODNs for 72 hours,the expression of OX1R protein in pancreas declined from 82 ±6 to 65 ±4,reduced about 21% compare with control group( P＜0.01 ).Conclusion The expression of OX1R protein is found in pancreas Islet β-cells.Hypothalamic orexin system can intervene the expression of OX1 R protein in rat pancreatic tissue with alimentary obesity.And it may participate in the occurrence of obesity and the metabolic regulation of serum glucose and insulin.     

低糖状态对大鼠增食欲素及受体的影响

目的　研究急性葡萄糖水平的下降对大鼠下丘脑及培养胰岛细胞中增食欲素 (orexin)及其受体(OX1 R、OX2 R)的影响。方法　应用单次皮下注射胰岛素并伴 (或不伴 )禁食的方法 ,构建急性低血糖大鼠模型 ;体外原代培养胰岛细胞并调整培养液的葡萄糖浓度 (8 3mmol L及 2 8mmol L) ;应用反转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)检测下丘脑组织和胰岛细胞中orexin系统的变化。结果　在胰岛素 (伴禁食 )诱导的急性低血糖大鼠模型中 ,下丘脑orexin的mRNA表达较对照组增加约 1 5 0 % (P <0 0 1 ) ,OX1 R的mRNA表达减少 30 % (P <0 0 1 ) ,但是OX2 R的mRNA表达没有明显变化 (P >0 0 5 ) ;在培养胰岛细胞体外实验中 ,培养基中葡萄糖浓度由 8 3降至 2 8mmol L ,6h后胰岛细胞的orexinmRNA表达增加 1 0 0 % (P <0 0 1 ) ,而OX1 RmRNA表达对培养基中葡萄糖浓度的急性波动不敏感。结论　急性葡萄糖水平降低将刺激大鼠下丘脑中orexin的表达 ,其受体的变化相反 ;进食将会抑制orexin系统的这一反应。体外实验中发现培养胰岛细胞在葡萄糖浓度改变时发生类似变化     

Orexin-A通过激活OX1R、OX2R和非Ca2+依赖的PKC抑制新生大鼠脊髓腹角神经元的γ-氨基丁酸电流

目的 研究orexin-A对脊髓腹角神经元促离子型γ-氨基丁酸（GABA）受体功能的影响及其机制。方法 选取7~12 d的新生SD大鼠,麻醉后分离出含腰骶膨大的脊髓节段并切片。使用木瓜蛋白酶（Papain,0.18 g/30 mL人工脑脊液）消化切片并孵育40~60 min。显微镜下保留腹角,使用抛光的不同口径的巴斯德吸管急性机械分离单个细胞,待细胞贴壁后,应用膜片钳记录联合药理学方法对状态良好的神经元开展研究。在电压钳模式下记录,结合预处理给药方式,应用GABA受体激动剂γ-氨基丁酸记录在脊髓腹角神经元诱发的电流,给予orexin-A观察其对GABA电流的调制作用,先后给予OX1R选择性拮抗剂SB334867、OX2R选择性拮抗剂TCSOX229、PKC抑制剂Bis-IV、PKC激动剂PMA、PKA抑制剂Rp-cAMP、Ca2+螯合剂BAPTA等药物分析orexin-A对GABA电流调制的作用机制。结果 分离的脊髓腹角神经元形态良好,胞体形状多样,表面光洁,立体感较强且突起较长;给予orexin-A后,GABA诱发的电流幅值被显著制抑（P<0.001,n=49）,抑制率为（67.48±12.50）%;同时给予SB334867和TCSOX229可完全取消orexin-A对GABA电流的抑制作用（P=0.93,n=6）;单独应用SB334867（P=0.001,n=8）或TCSOX229（P=0.02,n=8）均部分解除orexin-A对GABA电流的压抑作用;给予Bis-IV后,orexin-A不再压抑GABA电流（P=0.31,n=5）;PMA可模拟orexin-A的作用,显著抑制GABA电流,抑制率为（60.79±10.94）%,在此基础上,orexin-A不能进一步压抑GABA电流（P=0.15,n=6）。给予Rp-cAMP后,orexin-A仍可显著压抑GABA电流（P=0.001,n=5）。在无Ca2+细胞外液（P=0.004,n=8）或胞内应用BAPTA（P=0.04,n=7）时,orexin-A对GABA电流的压抑作用不受影响。结论 Orexin-A抑制脊髓腹角神经元的GABA电流,该效应可能经由OX1R和OX2R共同介导以及非Ca2+依赖的PKC信号通路的参与。     

增食欲素受体1在大鼠胰岛细胞中的表达研究

目的确立中枢神经系统外(胰岛细胞中)增食欲素受体1(OX1R)的存在;探讨葡萄糖对胰岛细胞产生的影响及可能的作用机制。方法原位杂交定位检测大鼠胰腺组织中OX1R mRNA的表达情况;观察不同浓度葡萄糖(2.8,8.3,16.7mmol/L)对体外细胞培养的大鼠胰岛细胞中orexin系统的影响;实时定量PCR检测胰岛细胞中orexin和OX1RmRNA的表达;应用流式细胞仪检测胰岛细胞增殖情况。结果大鼠胰岛细胞胞浆中有OX1R mRNA的表达,而没有OX2R mRNA的表达。培养液中2.8mmol/L葡萄糖导致胰岛细胞中orexin的基因表达增高约100%,16.7mmol/L葡萄糖使orexin表达减少近50%;OX1R mRNA的表达对血糖快速变化的反应不敏感。培养液中葡萄糖升高或降低均抑制胰岛细胞增殖。结论OX1R基因在中枢神经系统外的胰腺组织中有表达,在周围系统可能直接参与能量平衡及内分泌代谢的调控;培养液中葡萄糖浓度的变化对胰岛细胞中OX1R的表达没有显著影响,但会影响胰岛细胞的增殖功能。     

EFFECTS OF ACUTE HYPOGLYCEMIA ON THE OREXIN SYSTEM IN RAT

OREXIN isa kind of new neuropeptideisolated from rathypothalamus, which involvedin many physiologicalregulationprogressesvia orexin1receptor(OX R )and orexin2 receptor(OX R ).The physio- 1 2logicalfunctionoforexinisstillnotcompletelyknown ,butitisidentifiedthatorexinis involvedinmany physiologicalprogressesuchasfeeding,sleep,and stress.1However ,itisstillunknown abouttheregulationoforexinsystemby hypo-thalamus,theregulationtopancreasby orexinsystem,and the regulationbetween orexin,bloodglu…     

THE OREXIN SYSTEM IN INSULIN RESISTANCE RAT MODEL INDUCED BY HIGH-FRUCTOSE DIET

INTRODUCTIONOrexin,aneuropeptidefoundin1998,hasbeenshownofbeinginvolvedinmanyphysiologicalprogressessuchasregulationoffoodintake,sleep,andinresponsetoacutestressthroughitsreceptorsorexin1receptorandorexin2receptor.Theachieve-mentofintroductionoforexintogetherwiththeintro-ductionofobesegene(obgene)anditsencodingproteinleptinin1994s,hasbeenwellrecognisedasstepstonesinthefieldofobeseresearch.Inthisstudy,weaimedatthoseregulatingfactorswithinin-sulinresistancebyevaluatingorexin/leptinandtheirre…     

增食欲素受体1在营养性肥胖大鼠肾上腺皮质中的表达及意义

 目的探讨营养性肥胖大鼠肾上腺皮质组织中增食欲素受体1（OX1R）的表达规律,以及下丘脑增食欲素（orexin）系统对其调节作用。方法高脂饮食诱导构建并评估营养性肥胖大鼠动物模型;免疫组化法检测肾上腺皮质组织中OX1R 的表达;侧脑室注射orexin 反义的硫代磷酸化鄄脱氧寡核苷酸（OX鄄PS鄄ODNs）干预下丘脑增食欲素系统,分析肾上腺皮质中OX1R 的变化规律。结果大鼠高脂膳食饲养8 周后,营养性肥胖组大鼠体质量、体脂含量、Lee忆s指数、血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇高于对照组（ < 0.05）。OX1R的蛋白表达定位于大鼠肾上腺皮质束状带细胞的细胞质中;与正常对照组相比,营养性肥胖大鼠
肾上腺皮质中的OX1R的表达升高（ < 0.05）,且OX1R的表达量与Lee忆s 指数、血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇呈显著负相关（ 分别为-0.829,-0.710,-0.801,-0.733和-0.756）。OX鄄PS鄄ODNs干预下丘脑orexin 系统2 d后,营养性肥胖大鼠肾上腺皮质中OX1R的表达明显下降（ < 0.05）。结论大鼠肾上腺皮质束状带细胞的细胞质中有OX1R 的表达,营养性肥胖大鼠体内orexin 系统可能通过下丘脑鄄垂体鄄肾上腺（HPA）轴参与调控能量代谢。     

Xingshentongqiao Decoction Mediates Proliferation,Apoptosis, Orexin-A Receptor and Orexin-B Receptor Messenger Ribonucleic Acid Expression and Represses Mitogen-activated Protein Kinase Signaling

Background:Hypocretin (HCRT) signaling plays an important role in the pathogenesis of narcolepsy and can be significantly influenced by Chinese herbal therapy.Our previous study showed that xingshenton...     

胰岛素抵抗大鼠 Orexin/leptin系统变化及其影响因素的研究

目的研究IR大鼠下丘脑及脂肪组织中orexin和leptin系统的变化,分析其可能的调控因素.方法IR大鼠模型采用高脂肪膳食诱导并经钳夹技术证实;RT-PCR技术检测orexin/leptin及其受体(OX1R、OX2R、LR)mRNA的表达;生化比色法测定血清FFA、放免法测定血清TNF-α.结果该模型大鼠下丘脑中Prepro-orexin表达减少约80%,OX1R、OX2R分别增加3.4及3.2倍,leptin mRNA增加约8倍;LR减少78%;血清FFA和TNF-α均升高;钳夹技术中葡萄糖输注率(GIR60-120)明显低于对照组.结论高脂肪膳食可诱导大鼠体内IR;并导致orexin/leptin系统平衡状态的破坏;orexin与leptin相互作用共同维持机体能量代谢的稳定:FFA和TNF-α可能参与该系统的调控.     

MNES对脑损伤后昏迷大鼠PFC去甲肾上腺素α1受体表达的影响

目的 探讨正中神经电刺激(MNES)对脑损伤(TBI)后昏迷大鼠的促醒作用及其对前额叶皮质(PFC)去甲肾上腺素α1受体(α1R)表达的影响.方法 将健康成年SD大鼠72只分为对照组、假刺激组、刺激组和拮抗剂组.对照组不做任何处理,其余3组均制作TBI昏迷大鼠模型,假刺激组不做治疗,拮抗剂组大鼠侧脑室注射食欲素受体1(OX1R)拮抗剂SB334867,刺激组和拮抗剂组均给予MNES治疗.观察各组大鼠行为学变化,并应用免疫组织化学技术检测各组大鼠PFC区α1R表达水平.结果 刺激组和拮抗剂组苏醒大鼠分别为13只和8只,而假刺激组仅有4只苏醒.α1R水平从低到高依次为对照组、假刺激组、拮抗剂组、刺激组,并呈依次递增趋势,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MNES可改善TBI后昏迷大鼠的意识状态水平,其机制可能与上调PFC区α1R表达水平有关,且食欲素A参与调节此过程.