米非司酮对早孕绒毛滋养层细胞Bcl-2和caspase-3表达的影响

探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞中Bcl—2和caspase-3表达的影响及其在滋养细胞凋亡中的作用。方法：将105例自愿要求终止妊娠的早孕妇女随机分成两组，即米非司酮流产组(55例)及人工流产组(50例)。采用免疫组化染色方法检测早孕妇女的绒毛组织中Bcl—2和caspase-3的表达。结果：米非司酮组与人流组绒毛滋养细胞中Bcl—2的表达率分别为54．6％和88．0％；caspase-3的表达率分别为89．1％和42．0％。米非司酮组与人流组相比较绒毛滋养层细胞Bcl—2呈低表达(P＜0．01)，caspase-3呈高表达(P＜0．01)。结论：Bcl—2和caspase-3在米非司酮诱导的早孕绒毛滋养层细胞凋亡的信号传导中起关键作用。     

细胞凋亡基因及相关蛋白在早期自然流产胎盘绒毛和蜕膜组织中的表达

目的探讨自然流产和正常人流患者胎盘绒毛和蜕膜组织细胞增殖与凋亡的变化规律,及相关细胞因子在胎盘组织生长发育中的表达意义。方法应用免疫组织化学、末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记法（terminal de-oxynucleotidy transferase mediated dUTP-biotin nick end labing,TUNEL）检测第40-90天自然流产和正常人流患者胎盘组织中细胞凋亡的表达状况。结果第40-90天的正常人流患者的绒毛和蜕膜组织细胞的增殖占主导地位,大部分细胞增殖活跃,细胞的增殖与凋亡始终处于一种动态平衡;而自然流产患者的绒毛和蜕膜组织中,凋亡细胞的比例明显增大,细胞增殖与凋亡的动态平衡被打破。结论妊娠妇女胎盘组织内细胞凋亡比例增高,细胞增殖与凋亡的动态平衡被打破是自然流产发生的基础。     

妊娠期慢性静脉疾病增加胎盘绒毛血管和淋巴管生成及绒毛细胞凋亡

目的探究妊娠期慢性静脉疾病(CVD)中胎盘绒毛血管和淋巴管等相关关键因子的变化。方法根据临床-病因学-解剖学-病理生理学(CEAP)分类标准收集CVD患者的组织样本,并分为对照组和CVD组。实时定量PCR检测胎盘组织的CD31、D2-40、fms相关酪氨酸激酶1 (FLT-1)、胎盘生长因子(PlGF)和低氧诱导因子1α(HIF-1α)的mRNA表达水平;免疫组织化学染色检测胎盘绒毛血管和淋巴管组织CD31、D2-40、FLT-1、PlGF、HIF-1α、B细胞淋巴瘤相关因子2 (Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、胱天蛋白酶3 (caspase-3)和caspase-9的蛋白表达水平;通过光学显微镜和透射电子显微镜观察胎盘绒毛组织中平均合体滋养层细胞结的数量变化;通过高碘酸希夫(PAS)染色检测胎盘绒毛中PAS阳性物质。结果与对照组相比,CVD组胎盘平均绒毛数量、平均合体滋养层细胞结数量、平均合体滋养层细胞结/绒毛数量和合体滋养层细胞绒毛间连接桥显著提高,而平均纤维蛋白样坏死数量无显著变化。与对照组相比,CVD组CD31、D2-40、FLT-1、PlGF、HIF-1α的mRNA表达水平显著提高,BAX、caspase-3和caspase-9阳性的绒毛细胞百分比显著增加,而Bcl2阳性的绒毛细胞无明显变化。与对照组相比,CVD组CD31、D2-40、FLT-1和PlGF阳性的血管数量显著增加,合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞和胎儿毛细血管绒毛中的HIF-1α表达水平显著提高,CVD组绒毛中带有PAS阳性物质的胎盘所占百分比显著提高。结论 CVD患者胎盘绒毛中血管和淋巴管生成增加,绒毛细胞凋亡增加;同时CVD患者的胎盘绒毛功能受损,并阻碍母婴气体交换。     

CXCR2在不明原因自然流产患者绒毛和蜕膜组织中的表达

目的研究CXCR2在不明原因自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达情况。方法应用免疫组织化学染色和图像分析技术,观察CXCR2在不明原因自然流产患者（病例组）和正常人工流产者（对照组）绒毛及蜕膜组织中的表达情况;HE染色后光镜下观察不明原因自然流产患者绒毛与蜕膜组织的形态学变化。结果免疫组化染色结果显示：两组CXCR2蛋白主要表达于绒毛的滋养层、蜕膜组织中的腺体,病例组绒毛滋养层和腺体CXCR2蛋白表达均强于对照组,两组比较,有显著性差异（P〈0.01）。病例组蜕膜细胞CXCR2蛋白呈阳性表达,对照组呈阴性;HE染色可见不明原因自然流产患者绒毛组织的滋养层变薄、滋养层细胞变性甚至坏死、滋养层嗜酸性增强、绒毛中轴纤维化程度增强;蜕膜组织中蜕膜细胞连接松散、蜕膜细胞空泡化、蜕膜组织中有大量炎细胞浸润。结论 CXCR2可能通过与其配体白细胞介素-8结合而参与不明原因自然流产的病理过程。     

FADD、Caspase-3与稽留流产的关系探讨

目的探讨FADD及Caspase-3在稽留流产绒毛滋养细胞中的表达及其关系。方法随机选取早孕稽留流产组35例（实验组）和正常早孕绒毛组30例的绒毛（对照组）检测两组绒毛滋养层细胞FADD和Caspase-3表达。结果FADD和Caspase-3在两组滋养层细胞中均有阳性表达,表达部位均以合体滋养层细胞为主。FADD和Caspase-3在稽留流产组绒毛滋养细胞中表达明显强于对照组,差异有显著性意义（P〈0.01）。结论Fas凋亡途径可能是滋养层细胞凋亡的主要凋亡途径,FADD、Caspase-3是滋养层细胞凋亡中重要的促凋亡因子,滋养层细胞凋亡的增加可能参与了稽留流产的发生。     

早期自然流产患者TNF-α异常表达

目的探讨自然流产患者母胎界面肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的异常表达.方法采用半定量免疫组化技术,检测30例早期自然流产患者(自然流产组)、25例正常妊娠妇女(正常妊娠组)绒毛和蜕膜组织内TNF-α表达强度.结果自然流产组细胞滋养层细胞及合体滋养层细胞表达TNF-α均显著强于正常妊娠组(P＜0.01).结论早期自然流产患者细胞滋养层细胞及合体滋养层细胞表达TNF-α均显著强于正常妊娠组,提示TNF-α可能在母胎界面局部发挥作用并导致流产.     

解聚素和金属蛋白酶19在早孕绒毛中的表达及其与自然流产的相关性研究

目的通过对解聚素和金属蛋白酶19（ADAM19）在早孕自然流产和正常早孕绒毛中表达的研究,探讨其在妊娠过程中的作用及其与流产的关系。方法早期妊娠和难免流产的绒毛组织各30例,应用免疫组织化学链霉素抗生物素-过氧化物酶法,检测ADAM19的表达。结果在正常妊娠的绒毛中,ADAM19主要表达在细胞膜上,在细胞滋养细胞、细胞滋养层细胞柱中均有较强的表达,表达强度均强于合体滋养细胞;在流产组绒毛中,ADAM19在细胞滋养细胞、细胞滋养层细胞柱中的表达均明显低于正常绒毛组,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论ADAM19在妊娠早期滋养细胞的侵入中有重要的作用,早期流产的发生与绒毛中ADAM19水平下降有关。     

survivin和Ki-67在自然流产小鼠模型绒毛滋养细胞的表达与相关研究

目的 通过比较正常妊娠与自然流产小鼠模型绒毛滋养细胞中survivin和Ki-67表达,从细胞和分子水平探讨自然流产的发病机制,为临床防治自然流产提供依据.方法 建立正常妊娠小鼠模型CBA×Balb/c和自然流产小鼠模型CBA×DBA/2,采用免疫组化SP法测定两组模型孕13 d绒毛滋养细胞中survivin和Ki-67的表达.结果 与正常妊娠模型相比,自然流产模型绒毛滋养细胞中survivin和Ki-67的表达均显著降低(P<0.01).结论 早孕期绒毛滋养细胞增殖和凋亡失衡是导致自然流产的机制之一,绒毛滋养细胞中survivin和Ki-67表达低下可能是引起绒毛滋养细胞增殖和凋亡失衡的重要因素.     

复发性自然流产患者绒毛及蜕膜组织中白细胞介素8的表达

目的:研究复发性自然流产患者绒毛及蜕膜组织中白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)的表达。方法:应用免疫组化法及图像分析技术,对30例复发性自然流产患者绒毛、蜕膜组织中IL-8的蛋白表达进行定位及半定量分析;H- E染色后光镜下观察绒毛及蜕膜组织的形态学变化。结果:在绒毛组织中,IL-8蛋白定位于绒毛上皮细胞的细胞质内,且病例组的表达明显高于对照组;在蜕膜组织中,病例组蜕膜细胞的胞质内可见IL-8蛋白表达,且高于对照组;H- E染色可见病例组绒毛组织的滋养层变薄,细胞变性甚至坏死、嗜酸性增强,绒毛中轴纤维化程度增强;蜕膜组织中蜕膜细胞失去细胞间连接,部分蜕膜细胞解体、核消失。结论:病例组绒毛及蜕膜组织中IL-8蛋白表达的增强与复发性自然流产有关,IL-8可能参与复发性自然流产的病理过程。     

Caspase-3、survivin与胚胎停育的关系研究

目的 观察胚胎停育妇女绒毛织组中caspase-3和survivin的表达,探讨过度凋亡与胚胎停育的关系。方法 选取2018年5月1日~12月31日在天津市第一中心医院妇科计划生育门诊确诊胚胎停育患者30例作为观察组,另选取同期在我院计划生育门诊正常妊娠要求人工流产的患者30例作为对照组,采用SP法检测两组患者绒毛组织中caspase-3和survivin的表达。结果 对照组光镜下见绒毛组织大小一致,绒毛间可见正常结构的间充质细胞。观察组光镜下见绒毛组织发生不同程度的退行性改变,间充质变性,结构模糊,同时伴炎性反应;观察组绒毛组织细胞及对照组绒毛组织细胞皆有caspase-3蛋白的表达,观察组绒毛组织caspase-3表达量高于对照组,观察组阳性率为96.66%,高于对照组的86.66%,差异有统计学意义（P＜0.05）;观察组绒毛组织细胞及对照组绒毛组织细胞皆有survivin蛋白的表达,观察组绒毛组织survivin表达量低于对照组,观察组阳性率为73.33%,低于对照组的96.66%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胚胎停育可能与绒毛组织中caspase-3高表达、survivin低表达导致的细胞凋亡过度有关。     

半乳糖凝集素-3在复发性流产子宫蜕膜及绒毛组织中的表达

目的检测复发性流产患者子宫蜕膜及绒毛半乳糖凝集素-3（galectin-3）表达，为进一步探讨不明原因复发性流产提供理论依据。方法对41D例不明原因复发性流产患者及32例正常妊娠行人工流产患者，采用RT—PCR、免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶链接法（sp法）检测其子宫蜕膜及绒毛半乳糖凝集素-3的表达。结果复发性流产者子宫蜕膜及绒毛半乳糖凝集素-3的表达明显低于正常妊娠组。结论半乳糖凝集素-3与妊娠早期绒毛及子宫蜕膜发育相关，其表达降低可能是导致复发性流产的原因之一。     

IL-10在反复自然流产人绒毛组织的表达及意义

目的:通过研究白细胞介素-10 (IL-10)在反复自然流产和正常流产人绒毛组织和血清中的表达比较来探讨IL-10与不明原因反复自然流产的相关性及其临床意义.方法:采用免疫组织化学技术和逆转录-聚合酶链反应技术检测35例反复自然流产者(实验组)和35例正常流产者(对照组)人绒毛组织中IL-10的细胞学定位以及在mRNA水平的表达;ELISA法定量分析IL-10在两组血清中的表达.结果:免疫组织化学检测结果显示两组组织中均有IL-10阳性表达,实验组IL-10在人绒毛组织中的阳性表达率低于对照组(P＜0.05).RT-PCR结果显示实验组和对照组均有IL-10表达,对比显示实验组IL-10表达低于对照组.ELISA测定结果显示IL-10在实验组的表达低于对照组.结论:IL-10的表达在实验组早孕绒毛组织细胞学定位及mRNA水平检测均较对照组降低,在血清中的表达量也是实验组低于对照组,提示自然流产妊娠妇女存在IL-10细胞因子表达异常,IL-10可能在维持正常妊娠过程中起到重要作用.     

药流绒毛中波形蛋白的免疫荧光和免疫电镜研究

目的：观察米非司酮对人孕早期绒毛组织中波形蛋白(Vimentin)表达的影响。方法：应用间接免疫荧光和胶体金标记免疫电镜技术，检测正常早孕人流电吸组和米非司酮组绒毛组织中波形蛋白的表达。结果：对照组绒毛中轴间质细胞、血管内皮细胞波形蛋白阳性表达，药流组荧光着色细胞则明显减少，表达强度显著降低；对照组绒毛间质细胞波形蛋白中间丝沿细胞的长轴呈良好的丝状排列，整齐、致密，胶体金颗粒成簇或散在分布于细胞核与细胞质之间除细胞器以外的细胞质所有部位，胞核呈阴性；药流组间质细胞中间丝明显辣少，出现断裂、排列紊乱，金颗粒分布明显稀疏。结论：米非司酮显著降低绒毛中波形蛋白表达水平并影响绒毛间质细胞的细胞骨架成分。     

FISH技术在检测自然流产胚胎染色体异常中的应用研究

目的探讨FISH技术在检测自然流产绒毛组织染色体异常中的应用价值。方法采用FISH技术对100例早期妊娠自然流产绒毛进行染色体数目检测,部分病例同时行常规细胞培养核型分析,分析两种方法的诊断结果。结果 100例绒毛标本FISH检测成功率100%,染色体数目异常42例,检出率42.00%。23例标本同时细胞培养,培养成功率91.30%（21/23）,核型分析异常染色体比率61.91%（13/21）,其中非整倍体占84.61%（11/13）。FISH检测结果与染色体核型分析吻合率100%,漏诊率23.08%（3/13）。结论 FISH技术具有敏感性高、特异性强、诊断快速、对标本要求低等优势,但漏诊率较高,建议条件许可者核型分析和FISH检测同时进行。     

1389例稽留流产绒毛细胞染色体核型分析

目的探讨在早期稽留流产病例中胚胎绒毛染色体核型分析的意义。方法对1389例稽留流产胚胎绒毛组织进行细胞培养,培养成功的病例进行染色体核型分析,统计学分析。结果 1389例稽留流产胚胎绒毛,培养成功1294例,成功率为93.2%。经染色体核型分析,正常核型为596例,男女比为1：2.19（187/409）;异常核型为698例（54%）,其中三体型为427例,多倍体型为114例,45,X型为89例,染色体结构异常为20例,嵌合体为17例。结论胚胎染色体核型异常是导致稽留流产的重要原因;对流产绒毛组织细胞进行染色体核型分析可以为再次妊娠提供指导依据。     

The placental barrier in allogenic immune conflict in spontaneous early abortions: immunohistochemical and morphological study

PROBLEM: Morphologic changes in the placental barrier in spontaneous early abortions under the maternal-embryonic immune conflict, and the role of maternal immunoglobulins (Igs) in these changes. MATERIALS AND METHODS: We examined chorionic villi and other tissues obtained from 54 aborts between weeks 3.5 and 8 of pregnancy. Material was divided into two groups. Group 1 (control) contained 15 medically recommended and spontaneous early aborts with no signs of inflammations or pathologic immune processes. Group 2 contained 39 spontaneous early aborts with acute chorionic villitis. Immunohistochemical and morphometric methods were used to study the Igs, different types of immunocompetent cells, and apoptosis-related components of the placental barrier. RESULTS: Acute villitis was found to be characterized by the destruction of all components of the chorionic villi, thrombovasculitis with apoptosis of the endothelium of capillaries and erythroblasts, mucous swelling of the basal membrane, and coagulation of the blood proteins. Due to destruction of the capillaries, the number of avasculate villi increased, and the average number of capillaries per villus decreased. The extremely high number of phagolysosomes with IgG and IgA in the villous monocytes in the group 2 indicates an increase in the phagocytic activity of monocytes against maternal Igs and may reflect the presence of mother-embryo immune conflict. Apoptosis of monocytes and a high number of promonocytes were seen accompanied by a high concentration of p53 protein. A large disturbance in the trophoblast occurred with disappearance of bcl-2 and the appearance of Fas ligand. CONCLUSION: Massive destruction of maternal Igs in embryonic monocytes and acute villitis in the placental barrier are manifested during the mother-embryo immune conflict, and this may be one of the reasons of spontaneous early abortions.     

PCNA和Caspase-3在妊娠滋养细胞疾病中的表达及意义

目的研究PCNA和Caspase-3在妊娠滋养细胞疾病中的表达变化及意义,为妊娠滋养细胞疾病早期诊断、预后判断提供理论依据。方法收集滋养细胞疾病标本50例,其中葡萄胎10例(均为完全性葡萄胎),侵蚀性葡萄胎20例,绒毛膜癌20例。正常早孕绒毛标本10例为对照组。应用免疫组织化学技术检测PCNA和Caspase-3在早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌组织中的表达情况。结果 PCNA在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌中的表达分别为10.24%、20.70%、50.92%、53.65%,各组差异有统计学意义(P0.05)。Caspase-3在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌中的表达先升高又降低,分别为1.25%、2.60%、6.40%、1.90%,各组差异有统计学意义(P0.05)。结论 PCNA及Caspase-3表达异常,增殖/凋亡失衡是引起GTT的重要因素。     

252例稽留流产者绒毛细胞遗传学分析及环境因素初探

目的 探讨绒毛染色体异常及其环境因素与稽留流产的关系.方法 无菌条件下取252例稽留流产患者(流产组)及50名正常早孕行人工流产术者(对照组)的胚胎绒毛,采用细胞培养法制备染色体进行G显带分析,并由专人询问、登记相关资料.结果 流产组绒毛染色体异常发生率为58.09％,显著高于对照组(P＜0.01),流产组140例核型异常中以常染色体三体、性染色体单体及三倍体为主,分别占异常总数的57.86％、20.71％及12.14％;流产组中长期接触电脑、电视的患者显著高于对照组(P＜0.01).结论 绒毛染色体数目异常是稽留流产患者的重要病因,进行绒毛细胞遗传学分析具有重要临床意义;孕妇长期接触电脑、电视是引起稽留流产的相关因素.