CDKN2／p16基因5‘—CpG岛SmaⅠ位点甲基化与肺癌的关系

目的 研究ＣＤＫＮ２／ｐ１６基因５’端调控序列ＣｐＧ岛甲基化的状态与肺癌发生发展的关系。方法 采用对甲基化敏感的核酸内切酶ＳｍａⅠ,酶切基因组ＤＮＡ的方法,对８９例肺癌标本和１０例正常肺组织的ＣＤＫＮ２／ｐ１６,基因进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析。结果 ８９例肺癌中,ＣＤＮＫ２／ｐ１６基因甲基化１５例,甲基化频率为１６．９％。４２例ｐ１６蛋白阴性的肺癌患中,有１２例发生甲基化,甲基化频率为２８．６％;另有４７例ｐ１６蛋白阳性患中仅有３例发生甲基化。１０例正常肺组织中均未发现ＣＤＮＫ２／ｐ１６基因有甲基化现象。结论 ＣＤＮＫ２／ｐ１６基因５’端ＣｐＧ岛甲基化是该基因失活的重要机制,是肺癌细胞区别于正常细胞的分子事件之一,可能参与肺癌的发生发展过程。     

结肠癌组织中p16／MTS1基因5′CpG岛甲基化研究

〔目的〕研究结肠癌组织中p１６基因５′端ＣpＧ岛异常甲基化现象。〔方法〕采用甲基化特异ＰＣＲ方法（ＭＳＰ）检测了２８例结肠癌和２０例癌旁正常组织标本。〔结果〕２８例结肠癌组织中有９例５′端ＣpＧ岛异常甲基化（３２％），而２０例正常组织中均阴性。〔结论〕p１６基因５′端ＣpＧ岛异常甲基化在人类结肠癌的发生中可能起一定作用。     

中国人肺癌p16基因失活的研究

目的：分析研究中国人肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况，探讨该基因在肺癌发生、发展中的作用。方法：对２６例临床切除的原发性肺癌标本分别用甲基化特异性ＰＣＲ（ＭＳＰ）以及限制性内切酶－ＰＣＲ法检测了ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因５’启动子区及第一外显子区ＣｐＧ岛甲基化的情况，选取与ｐ１６紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点进行微卫星不稳定性分析，同时对其中１７例病例的肿瘤及癌旁组织标本用双色ＦＩＳＨ分析ｐ１６基因丢失情况，并用免疫组织化学法检测了ｐ１６蛋白表达。结果：用ＭＳＰ检测到５０％（１３／２６）的标本存…     

脑胶质瘤p15基因缺失及5‘CPG岛甲基化研究

目的 探讨ｐ１５基因变异及其与脑胶质瘤的发生、恶性进展的关系。方法 利用ＰＣＲ和ＰＣＲ－ｂｓｅｄ甲基化检测技术检测了５６例脑胶质瘤中ｐ１５基因外显子１缺失及５’ＣＰＧ岛甲基化情况。结果 ４３例高级别的脑胶质瘤中，１４例发生了ｐ１５基因缺失（３２．６％），而１３例低级别的脑胶质瘤中无一例发生ｐ１５基因缺失，差异具有显著性（Ｐ〈０．０５）。１例低级别的脑胶质瘤、３例高级别的脑胶质瘤发生了ｐ１５基因５’ＣＰＧ岛甲基化。结论 ｐ１５基因异常可能参与脑胶质瘤的发生、恶性进展。基因纯合缺失是脑胶质瘤中ｐ１５基因失活的主要机制。     

胃癌患者p53基因甲基化的研究

作者应用限制性内切酶ＨｐａⅡ和ＭｓｐⅠ酶切胃癌组织及正常胃组织ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增ｐ５３基因第５外显子，琼脂糖凝胶电泳分析其电泳图谱，比较胃癌组织及正常胃组织ｐ５３基因第５外显子特定序列５′－ＣＣＧＧ－３′位点甲基化差异。结果显示：１５例胃癌组织中１２例ｐ５３基因第５外显子出现高甲基化状态，而１０例正常胃组织为低甲基化状态，结果提示，ｐ５３基因高甲基化状态与胃癌发生有关。     

p16抑癌基因研究进展

ｐ１６基因（ＭＴＳ１，ＣＤＫ４Ｉ，ＣＤＫＮ２）是新近发现的抑癌基因。它以突变或缺失异常形式广泛存在于各种肿瘤细胞中。ｐ１６蛋白为细胞周期依赖激酶ＣＤＫ４的抑制物，参与正常细胞周期Ｇ→Ｓ期的调控，并与Ｒｂ、ｐ５３等抑癌基因有着密切联系。ｐ１６抑癌基因的...     

子宫内膜癌中p16基因甲基化与表达的研究

目的 研究ｐ１６基因甲基化状态及其ｐ１６基因表达异常与子宫内膜癌发生发展的关系。方法 采用限制性内切酶酶切、ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ检测子宫内膜检测ｐ１６基因５’ＣｐＧ岛甲基化状态及ｐ１６基因ｍＲＮＡ表达。结果 ８例正常子宫内膜无甲基化,且ｐ１６ ｍＲＮＡ表达正常。６例子宫内膜非典型增生中,有１例甲基化;３８例子宫内膜癌中,１３例甲基化,占３４．２％。６例子宫内膜单纯及复合增生中,有５例ｐ１６ ｍＲＮ     

非小细胞肺癌pl6/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况,探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与ｐ１６基因紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点,对１７例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析,用甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ, ＭＳＰ）检测 ｐｌ６基因启动子区 ＣｐＧ岛甲基化状况,用免疫组织化学法检测Ｐ１６蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明,在１３例Ｄ９Ｓ１７４８位点存在多态性的肿瘤ＤＮＡ中有 ９例（６９ ．２％）发生了杂合性缺失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ, ＬＯＨ）。 ＭＳＰ的结果显示,有 ７０． ６％（１２／１７）的肿瘤组织存在ｐ１６启动子区的异常高甲基化。在本研究中,８２．４％（１４／１７）的肿瘤组织可以检测出一种或两种ｐ１６基因的异常改变。对此１７例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示,有 １３例 Ｐ１６蛋白表达阴性,其中 ９２ ３％（１２／１３）存在一种或两种ｐ１６基因的异常改变。免疫组化结果与ｐ１６基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因,ｐ１６在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明,ｐ１６基因失表达是非小细胞肺癌     

人胎盘型谷胱甘肽S转移酶在胃癌组织中的表达与基因甲基化关系的研究

目的：研究胃癌组织中ＧＳＴ－π的表达与其基因甲基化状态的关系。方法：应用Ｓ－Ｐ法检测１１６例胃癌和５３例胃癌前病变的ＧＳＴ－π表达和限制性内切酶及ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹方法检测１４例胃癌及其相应正常胃粘膜ＧＳＴ－πＤＮＡ５′端调控区ＣＣＧＧ特定位点的甲基化水平。结果：ＧＳＴ－π阳性率,正常胃粘膜１０％（４／３９）,胃癌７７％（８９／１１６）,肠上皮化生７６％（１９／２５）,不典型增生８９％（２５／２８）。ＧＳＴ－π在胃癌及癌前病变中的表达较正常胃粘膜增高（Ｐ＜００１）。胃癌组织中ＧＳＴ－π基因较正常胃粘膜呈现高度去甲基化（Ｐ＜００１）,胃癌ＧＳＴ－π基因５′端调控区低甲基化与其ＧＳＴ－π表达增加呈相关性（Ｐ＜００５）。结论：ＧＳＴ－π在胃癌及癌前病变中的表达与胃癌的发生发展密切相关,ＧＳＴ－π可作为胃癌的肿瘤相关抗原;ＧＳＴ－π基因５′端调控区低甲基化可能是ＧＳＴ－π高表达的分子机理。     

非小细胞肺癌p16基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ｐ１６基因突变的情况,本研究应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织中ｐ１６基因外显子２的突变情况,现将结果报告如下。１　材料与方法２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织及同一病例非肿瘤肺组织均为住院病例手术切除标本,并经病理证实。按常规方法提取ＤＮＡ。ＰＣＲ反应在ＰＥ９６００热循环仪中进行,扩增ｐ１６基因第２外显子,引物序列：　　ＰＳ１：５′－ＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣ－３′ＰＳ２：５′－ＴＣＴＧＡＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧ－３′循…     

人胃癌组织中C—myc癌基因甲基化及其表达的研究

目的：研究胃癌及正常胃粘膜ｃ－ｍｙｃ基因外显子ⅢＣＣＧＧ位点的甲基化状态及其ｍＲＮＡ表达及ＳＡＢＣ法检测胃癌４５例、胃溃疡１４例、不典型增生１０例ｐ６７表达。结果：胃癌ｃ－ｍｙｃ基因外显子ⅢＣＣＧＧ位点比其相应正常胃粘膜呈高度去甲基化，ｍＲＮＡ表达升高（ｐ〈０．００１），ＤＮＡ去甲基化与ｍＲＮＡ表达存在相关性（ｐ〈０．０２５），ｐ６７在胃癌、不典型增生、胃溃疡表达率分别为８４．４４％（３８／４５）     

bcl-2反义基因调控对人宫颈癌裸鼠移植瘤体内治疗的探讨

ｂｃｌ－２基因与宫颈癌关系密切，本研究采用回体转移法（Ｅｘ ｖｉｖｏ）和活体直接转移法（Ｉｎ ｖｉｖｏ）观察反义ＯＤＮ及反义ＲＮＡ作用于移植瘤的治疗效果。１材料与方法１．１一般资料 硫代磷酸修饰ｂｃｌ－２脱氧寡核苷酸（上海生工生物工程有限公司），反义链（ＡＯＤＮ）５＇－ＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴＣＣＴＴＣＣＣ—３＇；无义链（ＮＯＤＮ）５＇－ＴＣＧＣＣＡＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＣＣＧ—３＇。含反义 ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ部分序列（６２２ｂｐ）的质粒ｐＤＯＲ－ＡＢ（７．１２ｋｂ）由第四军医大学王成济教授惠赠…     

代谢酶基因多态性与胃癌的相关性分析

目的　探讨代谢酶细胞色素Ｐ４５０ ２Ｅ１（ＣＹＰ２Ｅ１）和谷胱甘肽转硫酶Ｍ１（ＧＳＴＭ１） 基因多态性与胃癌的关系。方法　应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性技术对胃癌高发区福建省长乐市原发性胃癌病例９１ 例和正常对照９４ 例进行ＣＹＰ２Ｅ１ 与ＧＳＴＭ１ 基因型检测和分析。结果　胃癌病例与对照的ＣＹＰ２Ｅ１ 等位基因Ｃ１ 和Ｃ２ 频率差异有显著性（χ２ ＝４．９１，Ｐ＜０ ．０５） 。ＧＳＴＭ１ 基因缺失率在胃癌组和对照组分别是６１．５％ 和４５．７％ ，ＧＳＴＭ１基因缺失与胃癌易感性有关（ＯＲ＝１．９０，９５％ 可信限＝ １．０１～３．５６） 。携带ＣＹＰ２Ｅ１ 的Ｃ２／Ｃ２ 基因和ＧＳＴＭ１ 缺失基因型者长期摄入鱼露可增加胃癌发生的危险。结论　代谢ＣＹＰ２Ｅ１ 和ＧＳＴＭ１ 基因多态可能与胃癌的发生有关。     

细胞色素P4501A1,2D6和谷胱甘肽硫转移酶基因多态性与肺癌易感性的研究

目的探讨细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（ＣＹＰ１Ａ１），２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）和谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴＭ１）基因多态性与肺癌易感性的关系。方法用病例对照研究方法及ＰＣＲ┐ＲＦＬＰ等技术检测原发性肺癌和住院对照各５９例，分析ＣＹＰ１Ａ１基因ＭｓｐＩＣ型、ＣＹＰ２Ｄ６Ｃｈ型（Ｔ／Ｔ型）和ＧＳＴＭ１缺陷型〔ＧＳＴＭ１（－）〕三种纯合突变型频率分布及其交互作用。结果突变型在病例和对照组的频率分别为（ＣＹＰ１Ａ１ＭｓｐＩＣ型２５．４％、１５．３％（Ｐ＝０．１７），ＣＹＰ２Ｄ６ＣｈＴ／Ｔ型３５．６％，４７．５％（Ｐ＝０．２６），ＧＳＴＭ１（－）型５７．６％、４９．２％（Ｐ＝０．４６），无显著性差异。协同分析发现在男性中，１１．６％（５／４３）肺癌兼有ＭｓｐＩＣ型和ＧＳＴＭ１（－）型，对照组无１例（０／４３），Ｐ＝０．０３。结论结果提示在男性中ＣＹＰ１Ａ１ＭｓｐＩＣ型和ＧＳＴＭ１（－）型可能协同增加患肺癌的危险性。     

原发性肝细胞癌多染色体杂合性丢失研究

研究原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）５对染色体３８个位点等位基因杂合性丢失（ＬＯＨ），ＬＯＨ与肝癌的临床病理改变和肝炎病毒的关系。方法：用ＰＣＲ微卫星多态性分析检测肝癌ＬＯＨ。结果发生高频率ＬＯＨ的位点有染色体１ｐ的Ｄ１Ｓ１８６（这，４８．１％）和Ｄ１Ｓ２４３（１ｐ３６．３，５１．６％）；染色体９ｎ２４的Ｄ９Ｓ５４（６１．８％），９这的Ｄ９Ｓ１７４７（５２．％）和ＤＤ９Ｓ１７５２（５１．８％）ＷＵＧ ＨＫ     

胃癌高低发区居民空腹胃液中N—亚硝酰胺总含量的比较

Ｎ－亚硝酰胺（ＮＡＤ）为高度可疑的人胃癌病因,但缺乏直接的流行病学证据。本研究探讨了ＮＡＤ暴露与人胃癌流行的相关性。方法利用胃液痕量ＮＡＤ总量分析和胃镜活检等技术,对胃癌高发区山东省临朐县和低发区苍山县３５～６８岁居民空腹胃液中ＮＡＤ暴露水平进行比较。结果（１）高发区样品ＮＡＤ的阳性率（ｎ＝１７６,４０．９％）高于低发区（ｎ＝９９,３０．３％）,经标化后有统计学意义（ｐ＝０．０３２４）。（２）在高发区仅４８％胃液样品的ｐＨ≤３,而在低发区则高达８４％（ｐ＜０．００１）;在ｐＨ≤３的样品中,ＮＡＤ的阳性率也是高发区高于低发区（４６．２％比２７．４％,ｐ＜０．０１）;在低发区样品中,ｐＨ值高者ＮＡＤ的阳性率高于ｐＨ值低者,在高发区则无此现象。（３）慢性缩性胃炎（ＣＡＧ）和ＣＡＧ伴异型增生者,胃液ＮＡＤ的阳性率高于胃粘膜正常和浅表性胃炎者。结论本研究揭示,ＮＡＤ的暴露与胃癌的流行可能存在正相关关系,ＣＡＧ和异型增生与ＮＡＤ致胃癌过程关系密切。     

HDAC2 cDNA的克隆及在酵母细胞中的表达

目的：研究的目的为获得ＨＪＣＡＣ２的ｃＤＮＡ及构建酵母双杂交系统中的靶基因。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从人ＨｅＬａ细胞中扩增出一约１．５Ｋｂ的ＤＮＡ片段,全自动测序后, 组人ｐＬｅｘＡ载体,构建成ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ２,用醋酸锂法转化醇母菌ＥＧＹ４８（ｐ８ｏｐ－ｌａｃＺ）。结果：结果显示,获得的１．５ＫＢ的Ｄ 段碱基序列与文献报道的ＨＤＡＣ２的ｃＤＮＡ一致。ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ２转化ＥＧＹ４８（     

凋亡相关基因表达在乳腺癌细胞生长中的作用

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（Ｃｋｉ′ｓ）ｐ２７ｋｉｐ１是ＣＤＫ２／ＣｙｃｌｉｎＥ的抑制蛋白,不仅使细胞周期停滞于Ｇ１期,还可诱导乳腺癌细胞凋亡。我们通过体外实验,分析凋亡相关基因ｂｃｌ２基因族、ｐ２７ｋｉｐ１的表达水平与乳腺癌细胞株生物特性的关系,探讨在阿霉素作用后其基因或蛋白产物表达水平的变化。材料与方法　应用体外细胞培养、细胞爬片技术,采用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ方法检测不同ＥＲ状态人乳腺癌细胞株ＭＣＦ７、ＭＤＡＭＢ２３１中ｂｃｌ２、ｂａｘ、ｐ２７ｋｉｐ１、ＰＣＮＡ蛋白表达…     

DNA甲基化与肿瘤研究进展

 ＤＮＡ甲基化是基因复制后修饰 ,目前 ,认为也是一种新的基因调控机制。尽管 ,大量事实已证明ＤＮＡ甲基化在细胞的增殖、分化过程中起重要作用 ,但其确切功能尚不清楚[1] 。人类基因的三分之一由散在的重复ＤＮＡ片段组成 ,如ＡＬＵＳ和ＬＴＮＳ ,这些ＤＮＡ片段中又有许多ＣｐＧ二核苷酸聚集区称为ＣｐＧ岛[2 ] ,它们具有潜在的转录活性[3] 。大部分ＣｐＧ岛位与基因 5′端与基因的活性有关[4 ] 。目前研究发现许多抑癌基因 5′端均存在ＣｐＧ岛 ,并受甲基化的调控 ,此外 ,ＤＮＡ甲基化的改变 ,对染色体的构形及其结构均有重要影响。ＤＮＡ甲基化异常 ,通过上述两个方面的作用 ,影响着肿瘤的发生发展 ,本文就近年的研究进展作一综述。1　ＤＮＡ甲基化异常现象及形成原因肿瘤细胞ＤＮＡ甲基化异常现象主要表现为ＤＮＡ广泛的低甲基化和区域性的高甲基化共存于一种组织 ,以及总的甲基化能力增强。真正意义上主要是与细胞生长分化有密切关系的癌基因和抗癌基因。ＤＮＡ甲基化异常的程度与肿瘤的进展程度以及转移能力均相关 ,肖文华等[5] 在肝癌的研究中还发现 ,ＤＮＡ的异常甲基化状态不但反映肝癌的恶性程度 ,而且有助于判断预后。1.1...     

FHIT基因甲基化与肿瘤发生的关系

ＤＮＡ启动子区域甲基化是人类多种肿瘤发生中常见的基因后成事件[1] 。在正常组织中 ,基因ＣｐＧ岛都是以非甲基化形式存在的 ,仅在胚胎发育、基因沉默、基因组印记、Ｘ染色体失活时 ,基因启动子区域的ＣｐＧ岛才有广泛的甲基化 ,而某些抑癌基因启动子ＣｐＧ岛被重新甲基化后 ,可使这些基因失活 ,从而导致肿瘤的发生。据估计 ,每一肿瘤中甲基化的ＣｐＧ岛数目平均可达 60 0个。ＦＨＩＴ基因的杂合性缺失在多种肿瘤中常见 ,但其另一等位基因抑制性突变却较少发生。1　抑癌基因甲基化机制的研究现状ＤＮＡ甲基化仅发生于ＣｐＧ岛。在人类基因…