HCV结构区基因重组体免疫大鼠抗体反应的各种影响因素

为寻求丙型肝炎病毒基因免疫的最佳动物实验方法,探讨不同方式对重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１诱发Ｂａｌｂｈ／ｃ小鼠产生抗体的影响。采用分子生物学技术构建了ＨＣＶ重组体,用不同免疫次数,途径,剂量和不同处理方式将其免疫小鼠。结果显示;重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１（１００μｇ／只／次,ｎ＝１２）经肌肉１次,２次,３次和４次免疫小鼠后,抗体水平分别为０．１８３±０．０６,０．４２８±０．０５,０．７０７±０．０８（ＯＤ     

丙型肝炎病毒基因重组体免疫诱发小鼠产生抗体的研究

以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因免疫的动物实验方法,将构建的ＨＣＶ基因重组体（ｐＣＤ ＨＣＶ１）,采用不同方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,观察其诱发小鼠抗体水平变化。结果：ｐＣＤ ＨＣＶ１经肌肉注射３次免疫小鼠后,比１、２次免疫抗体水平要高;经灌胃、腹腔注射、皮下注射和肌肉注射不同途径免疫小鼠,以肌肉注射免疫效果最佳;不同剂量（１０μｇ、５０μｇ和１００μｇ）３次免疫小鼠,以１００μｇ剂量组诱发小鼠抗体反应最强;用普鲁卡因处理小鼠后再肌肉、皮下注射同剂量ｐＣＤ ＨＣＶ１,抗体水平均比直接注射同剂量ｐＣＤ ＨＣＶ１明显增高。     

丙型肝炎病毒DNA核酸免疫的初步探讨

目的：探索ＨＣＶ－ＤＮＡ核酸免疫效应。方法：将构建的重组体ｐＣＤ－ＨＣＶｓ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用ＥＬＩＳＡ和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测了免疫鼠血清抗体、脾细胞和ＰＢＭＣ对ＨＣＶ抗原的增殖反应。结果：重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１、ｐＣＤ－ＨＣＶ２和ｐＣＤ－ＨＣＶ３均可诱导小鼠（ｎ＝６）产生抗体（０．６６５￣０．７０７,ＯＤ值）和脾细胞对ＨＣＶ抗原增殖反应（ｎ＝６,ＳＩ为３．８９￣４．４７）,但各重组体间的     

乙型肝炎病毒基因疫苗诱导小鼠产生特异免疫应答

构建编码乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面蛋白Ｓ的重组质粒ｐＣＲ３．１－Ｓ。将之直接肌肉注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,观察小鼠ＨＢＶ特异的免疫应答。以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定淋巴细胞增殖,＾５１Ｃｒ４ｈ释放法检测淋巴细胞杀伤功能。结果表明,与空载体对照组相比较,基因疫苗诱发小鼠产生良了的抗ＨＢｓ反应及ＨＢＶ特异的细胞免疫应答（Ｐ〈０．０５）,提示基因疫苗ｐＣＲ３．１－Ｓ有可能成为控制ＨＢ     

逆转录病毒载体介导乙型肝炎病毒反义基因的转录表达

为了探索在真核细胞内转录表达乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）反义核酸的方法，用基因重组技术将ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因（ＰｒｅＣ／Ｃ）和前Ｓ／Ｓ基因（ＰｒｅＳ／Ｓ）片段反向插入逆转录病毒载体质粒，再将重组体分别转染ＰＡ３１７包装细胞，进而获得能够介导ＨＢＶ反义基因向小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞转移表达的重组逆转录病毒。经分子杂交试验表明，含有ＨＢＶ反义基因的重组逆转录病毒序列已经整合到转染的ＰＡ３１７细胞染色体上；转导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞内有ＨＢＶ反义ＲＮＡ转录表达。结论：逆转录病毒载体包装细胞系统能够介导ＨＢＶ反义基因在真核细胞中转录表达，因而有可能利用反义技术和基因转移方法进行抗－ＨＢＶ基因治疗     

含有丙型肝炎病毒核心基因表达质粒的构建及其基因免疫

目的：研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因免疫诱生特异性免疫应答的可行性。方法：将ＨＣＶ Ｃ基因片段插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３质粒ＣＭＶ启动子的下游,构建真核表达载体ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ,分别转染小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０和人肝癌细胞７７２１进行瞬时表达,用免疫荧光法和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测表达产物,将重组质粒注射,ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ－２＾ｄ）小鼠股四头肌,ＥＬＩＳＡ法检测血清中抗体产生水     

丙型肝炎病毒核心基因疫苗诱导小鼠细胞及体液免疫应答

为了探索丙型肝炎病毒核心区基因疫苗对小白鼠细胞及体液免疫功能的影响。本文将ＨＣＶ核心区基因定向克隆于质粒ｐｃＤＮＡ３巨细胞病毒启动子下游,构建了能在真核细胞内表达的重组基因疫苗ｐｃＤＮＡ３－ＨＣＶ,将此疫苗通过多点肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠。结果发现接种了该疫苗的小鼠出现抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性,其抗体水平明显高于对照组,同时Ｔｈ１免疫应答相关的细胞因子ＩＬ－２及γ干扰素水平也明显高于对照组,其结果     

应用S基因转染的Sp2／0细胞作为靶细胞研究HBV基因疫？…

构建编码ＨＢｓＡｇ蛋白的重组真核表达质粒ｐＣＲ３．１－Ｓ作为ＨＢＶ基因疫苗,免疫接种Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,以重组质粒ｐＣＲ３．１－Ｓ转染的Ｓｐ２／０细胞作为靶细胞,采用＾５１Ｃｒ ４ｈ释放法,体外检测免疫小鼠的淋巴细胞杀伤功能。结果显示,与空载体对照组相比较,ＨＢＶ基因疫苗可诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生ＨＢＶ特生细胞毒性Ｔ细胞应答,提示以Ｓｐ２／０基因转染的细胞作为靶细胞,检测免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠淋巴细胞     

丙型肝炎病毒及恶性疟原虫复合抗原基因表达及诱导小鼠免疫应 …

将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ及恶性疟原虫（Ｐｆ）多价抗原基因ＡＢ（ＳＰｆ６６＋ＳＰｆ１０５）克隆到表达载体ｐ＾ＷＲ４５０－１中,以β－半乳糖甘酶（ＧＺ）－ＨＣＶ－Ｐｆ复合多肽抗原的形式在大肠杆菌中高效融合表达了目的蛋白ＧＺ－ＣＡＢ,表达量约３０％。所表达的重组抗原可被ＨＣＶ患者血清及鼠抗Ｐｆ抗体特异识别,显示了该融合蛋白质具有ＨＣＶ和Ｐｆ的免疫原性。该蛋白免疫小鼠后,诱发     

丙肝病毒(HCV)基因免疫实验研究

目的：探讨ＨＣＶ核心区基因疫苗在Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的免疫应答。方法：将与ＨＣＶ核心区基因互补的ｃＤＮＡ定向克隆于真核表达载体ｐｃＤＮＡ３（ｐｃＤＮＡ－ＨＣＶ）,免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,观测小因清抗－ＨＣＶ抗体及小鼠脾细胞对ＨＣＶ核心抗原的特异性增殖反应。结果：５只经皮下注射的免疫鼠中有４只出现抗－ＨＣＶ抗体,经肌肉注射的免疫鼠全部出现抗体阳转,而对照组全阴性,肌肉注射的免疫组抗体水平高于皮下注射的免疫     

小鼠口眼HCV基因工程菌产生的细胞和体液免疫

近年来研究表明ＤＮＡ直接接种动物体内可诱导机体产生免疫反应，很可能成为预防感染的新型疫苗，即基因疫苗。含ＨＣＶ基因重组质粒ＤＮＡ的工程菌是否也有可能在预防ＨＣＶ感染中发挥一定的作用？本文初步观察了经口眼途径接种含ＨＣＶ核心基因重组质粒（ＨＣＶ，ｃｏｒｅ／ｐＭＡＬ）的大肠杆菌后，ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体内的细胞和休液免疫反应。研究分为①实验组，分别口服１～３次（Ｈ１－Ｈ３）含ＨＣＶ．ｃｏｒｅ／ｐＭＡＬ的大肠杆菌；②口眼含ＰＭＡＬ质粒的大肠杆菌的对照组（Ｐ）；③不给细菌的对照组（Ｃ）。实验组小鼠淋巴细胞在…     

应用S基因转染的Sp2/0细胞作为靶细胞研究HBV基因疫苗的细胞免疫应答

构建编码ＨＢｓＡｇ 蛋白的重组真核表达质粒ｐＣＲ３－１Ｓ作为ＨＢＶ 基因疫苗, 免疫接种Ｂａ１ｂ／ｃ 小鼠。以重组质粒ｐＣＲ３－１Ｓ转染的Ｓｐ２／０ 细胞作为靶细胞, 采用５１Ｃｒ ４ｈ 释放法, 体外检测免疫小鼠的淋巴细胞杀伤功能。结果显示, 与空载体对照组相比较, ＨＢＶ基因疫苗可诱导Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠产生ＨＢＶ 特异性细胞毒性Ｔ 细胞应答（ Ｐ＞ ０－０５） , 提示以Ｓｐ２／０ 基因转染的细胞作为靶细胞, 检测免疫Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠淋巴细胞的杀伤功能是可靠的。     

从噬菌体抗体库克隆抗人RBC单链抗体基因

目的用噬菌体抗体库技术克隆抗人红细胞（ＲＢＣ）的单链抗体（ＳｃＦｖ）基因。方法以人ＲＢＣ免疫小鼠，取脾细胞，ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＶＨ和Ｖκ基因，组装到ＳｃＦｖ－噬菌体抗体表达载体中，构建了噬菌体抗体库，以人ＲＢＣ为固相抗原，对该库进行了四轮“吸附－洗脱－扩增”筛选，获得了抗人ＲＢＣ的ＳｃＦｖ基因。结果ＤＮＡ序列分析表明其可变区基因分别属于小鼠ＶＨⅢ亚群和ＶκⅤ亚群。结论所表达的ＳｃＦｖ可与不同人ＲＢＣ结合，与ＡＢＯ血型抗原无关，可用于构建快速血凝诊断的工程抗体     

重组HCV NS3区抗原的纯化及鉴定

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染率在我国较高，目前，对丙型肝炎病毒的检测主要是检测其抗体，以确定ＨＣＶ的感染。机体在ＨＣＶ感染的不同阶段或在不同的生理条件下产生的ＨＣＶ抗体存在差异，可能仅产生某一抗原的抗体或多种抗原的抗体，因此，抗－ＨＣＶ检测试剂中应包含ＨＣＶ的多种抗原，以提高抗－ＨＣＶ的检出率，防止漏检。ＨＣＶ的非结构３区蛋白有根强的抗原性，其抗体出现较早且持续时间较长，在抗－ＨＣＶ检测方面有很大的应用价值。我们利用基因工程技术克隆表达了ＨＣＶ的非结构３区蛋白抗原，并建立了简易、快速纯化重组ＨＣ…     

基因免疫诱导9.1C3分子内影像类抗独特型抗体的产生

本文分别采用真核表达载体ｐＥＦ－ＢＯＳ及ｐＣＭＶ４构建含起始码和终止码的抗９．１Ｃ３分子单克隆抗体重链可变区基因重组表达质粒９．１Ｃ３ＶＨｐＥＦ－ＢＯＳ及９．１Ｃ３ＶＨｐＣＭＶ４，并将其分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠血清对Ｋ５６２细胞进行间接免疫染色和流式细胞仪分析表明，基因免疫小鼠体内可诱导９．１Ｃ３分子内影像类抗独特型抗体的产生。     

丙型肝炎病毒及恶性疟原虫复合抗原基因表达及诱导小鼠免疫应答的研究

将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ及恶性疟原虫（Ｐｆ）多价抗原基因ＡＢ（ＳＰｆ６６＋ＳＰｆ１０５）克隆到表达载体ｐＷＲ４５０ ｌ中,以β 半乳糖甘酶（ＧＺ） ＨＣＶ Ｐｆ复合多肽抗原的形式在大肠杆菌中高效融合表达了目的蛋白ＧＺ ＣＡＢ,表达量约３０％。所表达的重组抗原可被ＨＣＶ患者血清及鼠抗Ｐｆ抗体特异识别,显示了该融合蛋白质具有ＨＣＶ和Ｐｆ的免疫原性。该蛋白免疫小鼠后,诱发针对ＧＺ ＣＡＢ、ＧＺ ＰＣＸ及ＰｆＡｇ的特异性体液免疫应答及针对ＧＺ ＣＡＢ、ＧＺ ＰＣＸ的迟发性超敏反应,ＣＤ８＋Ｔ细胞明显升高,提示该复合抗原作为ＨＣＶ Ｐｆ双价疫苗的可行性。     

重组腺病毒在小鼠体内诱导抗HCV抗体（文摘）

重组腺病毒在小鼠体内诱导抗ＨＣＶ抗体（文摘）［英／ＭａｋｉｍｕｒａＭ…Ｖａｃｃｉｎｅ１９９６；１４（１）：２８］作者构建了一种能同时表达ＨＣＶ的３种结构蛋白的重组腺病毒，在小鼠体内能显著诱导相应抗体的产生。将ＨＣＶ结构蛋白基因表达单位分别克隆至含Ｅ３...     

pcDNA3/HPV16 E6真核表达质粒的构建及裸DNA注射动物实验观察

目的探讨ＨＰＶ１６Ｅ６基因ＤＮＡ诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法利用基因工程技术构建了ＨＰＶ１６Ｅ６真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／Ｅ６，脂质体法转染Ｃｏｓ７细胞，肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫组化技术检测抗体产生及抗原表达。结果被转染的Ｃｏｓ７细胞表达ＨＰＶ１６Ｅ６蛋白免疫小鼠产生抗ＨＰＶ１６Ｅ６抗体。结论这一结果为ＨＰＶ１６相关宫颈癌治疗性ＤＮＡ疫苗的研制提供了资料。     

基因免疫诱导9.1C3分子因影像类抗独特型抗体的产生

本文分别采用真核表达载体ｐＥＦ－ＢＯＳ及ｐＣＭＶ４构建含起始码和终止码的抗９．１Ｃ３分子单隆抗全重链可变区基因重组表达质粒９．１Ｃ３ＶＨｐＥＦ－ＢＯＶ及９．１Ｃ３ＶＨｐＣＭＶ４，并将其分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠血清对Ｋ５６２细胞进行间接免疫染色和流式细胞仪表明，其因免疫小鼠体内可诱导９．１Ｃ３分子内影像８类抗独特型抗体的产生。     

DNA免疫引起小鼠产生抗丙型炎病毒核区体液应答的初步研究

采用ｐｃＤＮＡ３与ｐＭＴ两种基因表达裁体，构建包含丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区（Ｃ区）或全结构基因区（核心区、包膜区）的质粒。经纯化后直接对Ｂａｌｂ／ｃ小鼠进行骨骼肌或尾部皮内注射，２－６ｗ后采血，用ＥＬＩＳＡ法检测小鼠抗核壳区的体液应答。结果表明：ＤＮＡ免疫可引起小鼠产生抗ＨＣＶ核壳区的体液应答，加强免疫２次后可使特异性抗体平均滴度达到１：８００以上。提示ＤＮＡ免疫可作为丙型肝炎病毒感染的潜在防