应用免疫磁珠分离-改良罗氏培养技术检测痰结核分枝杆菌的研究

目的通过免疫磁珠分离技术(immunomagnetic beads separation techniques,IMBS)富集痰液中的结核分枝杆菌,提高痰液培养的阳性率,以期用于结核病的快速诊断。方法制备兔抗结核杆菌IgG抗体,并将其结合于免疫磁珠表面。采集71例确诊结核病患者的痰液标本,通过免疫磁珠分离技术捕获、富集吸附结核分枝杆菌后用改良罗氏培养基培养,并与传统改良罗氏(L-J)培养法和痰涂片抗酸染色法作比较。结果 71例结核病患者痰涂片抗酸染色检查阳性26例,阳性率36.6%;传统改良L-J培养阳性34例,阳性率47.9%;免疫磁珠分离技术捕获、富集结核分枝杆菌后进行改良L-J培养阳性48例,阳性率67.6%。三者阳性率差异有统计学意义(P<0.05),改良L-J培养和痰涂片检查阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用免疫磁珠分离技术捕获、富集痰液中的结核分枝杆菌后进行培养,可显著提高痰培养的阳性率,该方法可用于结核病的快速诊断。     

快速结核分枝杆菌菌型鉴定方法的应用评估

目的评估MGIT 960液体培养分枝杆菌阳性时,免疫胶体金法MPB64抗原检测及荧光探针PCR法在结核分枝杆菌快速菌型鉴定中的应用价值。方法临床MGIT960TM液体培养得到203例分枝杆菌阳性菌株,平行采用上述两种方法进行结核分枝杆菌菌型鉴定。结果免疫胶体金MPB64抗原检测法灵敏度为97.7%(169/173×100%),特异度为100%(30/30×100%);荧光探针PCR法灵敏度为100%(173/173×100%),特异度为96.7%(29/30×100%)。结论免疫胶体金法检测MPB64抗原及荧光探针PCR法作为液体培养时结核杆菌菌型鉴定的方法均是快速可靠的。免疫胶体金法检测MPB64抗原由于操作简便,实验要求条件低,更易为临床TB实验室接受。     

MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究

目的 对应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群进行方法学评价.方法 对临床分离菌株,取BacT/ALERT 3D系统的液体培养液或改良罗氏固体培养基分离培养菌落室温静置约2 h、浊度为1麦氏单位的生理盐水菌悬液0.1 ml为检测样本,应用胶体金标记抗MPB64单克隆抗体采用免疫层析色谱法进行MPB64分泌蛋白检测,而后与菌种鉴定结果相比较.对参考菌株,则同时采用两种样本进行检测.结果 对23株分枝杆菌参考菌株、267株临床分离菌株进行了检测.①对于参考菌株的两种样本,MPB64检测结果均为:结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌菌株阳性,其他20株非结核分枝杆菌为阴性.分群鉴定准确度为100%.②在111株BacT/ALERT 3D系统分离培养临床株中,55株为结核分枝杆菌,其中51株MPB64检测阳性;56株为非结核分枝杆菌,其中54株MPB64检测阴性.分群鉴定准确度为94.59%.③在156株改良罗氏培养基分离培养临床菌株中,121株为结核分枝杆菌,其中115株MPB64检测阳性;35株为非结核分枝杆菌,MPB64检测全部阴性.分群鉴定准确度为96.15%.④对于所有研究样本,应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群的敏感度、特异度与准确度分别为94.41%、98.20%和95.86%.结论 应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群是一种准确、快速、简便而又不需要任何仪器设备的实用型方法,值得临床推广应用.     

脑脊液标本结核分枝杆菌的快速培养

目的建立结核性脑炎脑脊液中结核分枝杆菌快速培养的方法。方法在7H9液体培养基加入一定浓度的复苏因子蛋白,接种脑脊液后进行培养,并用不含复苏因子蛋白质的7H9培养做对照。分别在第0、6、11、16和30d检测培养物的吸光度(A)值;取培养物10μl涂7H11平板,培养后进行CFU计数、抗酸染色。同时将标本进行罗氏培养和涂片抗酸染色。结果结核分枝杆菌复苏培养阳性率、涂片阳性率分别为55.00%和30.00%,差异有统计学意义(P<0.05);复苏培养阳性率与罗氏培养阳性率35.00%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。复苏培养的结核杆菌平均在第10d进入对数生长期,其A值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论结核杆菌复苏因子能促进脑脊液中结核杆菌的生长。     

涂片镜检结合胶体金法对结核杆菌复合群的鉴别价值

目的探讨结核分枝杆菌在BACTEC960中湿片镜检形态特征及胶体金法对结核杆菌复合群的鉴别价值。方法收集陕西省结核病防治院经BACTEC 960培养阳性920例,进行直接涂片湿片镜检、涂片抗酸染色、胶体金法菌群鉴定,并以PNB(对硝基苯甲酸)和TCH(噻吩-2-羧酸肼)鉴别培养基菌群检测为标准。结果结核分枝杆菌(MTB)在液体培养管中呈镜检呈索状排列98.3%(832/846);非结核分枝杆菌(NTM)镜检呈团状排列32.43%(24/74)、块状排列35.13%(26/74)、散在排列为24.32%(20/74)。胶体金法检测结核分枝杆菌的敏感性98.34%(832/846),特异性98.64%,阳性预测值99.87%,阴性预测值86.90%。结论湿片观察结核分枝杆菌在BACTEC 960培养管中形成索状排列,较涂片抗酸染色更简便、快速,对鉴定分枝杆菌有初筛作用。     

痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的临床意义

目的评估痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的可行性及临床意义。方法回顾性分析2016年5月—12月在我科住院的经痰结核分枝杆菌培养确诊的136例肺结核患者的临床资料,比较痰涂片找抗酸杆菌和痰结核分枝杆菌DNA检测2种方法的检出率。结果 136例确诊的肺结核患者中,痰涂片阳性的有64例(47.06%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性的88例(64.71%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性率明显高于痰涂片找抗酸杆菌(P0.05)。72例痰涂片阴性患者中痰结核分枝杆菌DNA检测阳性29例,占痰涂片阴性肺结核患者比例的40.28%。结论痰结核分枝杆菌DNA检测优于痰涂片找抗酸杆菌,能够辅助涂阳肺结核的诊断,并提高涂阴肺结核的诊断水平,是一种快速、敏感的病原学诊断方法。     

BACTEC MGIT 960和BACT/ALERT 3D系统快速培养和鉴定痰中抗酸杆菌

目的对抗酸染色阳性痰行分枝杆菌培养和鉴定。方法采用萋一尼氏抗酸染色法对临床诊断肺结核患者的晨痰涂片直接镜检，抗酸染色阳性痰经BACTEC960和BACT/ALERT3D系统进行分枝杆菌培养，分别经对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩-2-羧基肼（TCH）培养基生长试验行分枝杆菌菌群和结核分枝杆菌复合群菌种鉴定。结果抗酸染色阳性痰标本的分枝杆菌培养阳性率100％，大多数为结核分枝杆菌（9／10），少数为非结核分枝杆菌（1／10），最快6天即可报告分枝杆菌阳性培养。结论BACTEC 960和BACT／ALERT3D系统具有快速培养分枝杆菌作用，抗酸染色阳性痰有必要行分枝杆菌培养和鉴定，有利于肺结核与非结核分枝杆菌病的鉴别诊断、结核分枝杆菌菌种鉴定和抗结核药物敏感性试验。     

胸腔积液中联检对结核性胸膜炎的诊断价值

目的评价胸腔积液结核抗体(TB-Ab)和TB-DNA联检,对结核性胸膜炎的诊断价值。方法以胸腔积液为标本,用金标免疫斑点渗滤试验检测结核抗体,用荧光探针PCR(Taq Man PCR)技术检测TBDNA,同时对其离心沉淀物进行涂片抗酸染色、酸性罗氏培养。结果 358例结核性胸腔积液TB-Ab阳性率为60.90%、TB-DNA阳性率为63.12%,TB-Ab阳性或TB-DNA阳性共280例,阳性率为78.21%。涂片抗酸染色阳性率为1.12%,罗氏培养阳性率为1.68%。30例非结核性胸腔积液,TB-Ab阳性率为6.67%,TaqMan PCR、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论 TB-Ab和TB-DNA均是诊断结核性胸膜炎的较好指标,两者联合检测可进一步提高检测敏感性。     

结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果分析

目的 :通过分析结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果,探讨提高其阳性检出率的方法。方法 :采集267例临床诊断为结核性胸膜炎患者的胸腔积液,离心后弃上清,用氢氧化钠(Na OH)消化处理,磷酸盐缓冲液(PBS)中和离心,取沉淀涂片抗酸染色镜检,接种MGIT960系统培养管和罗氏培养基,分析培养和涂片镜检结果 ,采用χ~2检验比较抗酸杆菌涂片与分枝杆菌培养阳性率的差异,BACTEC MGIT 960系统与罗氏培养阳性率的差异。结果:267例结核性胸膜炎患者胸腔积液经消化处理后,抗酸杆菌涂片阳性者81例,阳性率为30.6%,涂片1~8条/300个视野至1+以下者占涂片阳性的97.5%。罗氏培养233例,培养阳性39例,阳性率为16.7%,培养1+以下者为97.4%。MGIT960系统培养221例,培养阳性72例,阳性率为32.6%。消化后涂片法阳性率高于罗氏培养法(χ~2=7.92,P0.05)。结论:结核性胸膜炎患者胸腔积液中抗酸杆菌菌量少。胸腔积液经消化集菌可显著提高抗酸杆菌涂片阳性率。相比罗氏培养,MGIT 960系统能显著提高分枝杆菌培养的阳性率。     

骨关节结核脓液中结核杆菌的复苏培养

目的探讨骨关节结核脓液中结核杆菌的复苏培养方法。方法应用含不同浓度复苏因子蛋白的7H9液体培养基培养标本，分别在第6天、第11天、第16天、第30天检测培养物的OD值、取10uL涂7H11平板培养、抗酸染色，并同时将标本进行罗氏培养和涂片抗酸染色。结果复苏培养阳性率高于涂片阳性率和罗氏培养阳性率．二者均有统计学显著差异（P〈0．05）；复苏培养平均在第10天进入对数生长期，其OD值与对照组比较有显著性差异（P〈0．01）。结论结核杆菌复苏因子能有效地促进骨关节结核脓液中结核杆菌的生长。     

不同方法检测痰和肺泡灌洗液中结核杆菌的分析

目的对比分析不同检测方法和不同检测标本在结核杆菌检测结果中的意义。方法选取本科室收治的初次我院就诊并临床诊断符合"肺结核"标准的158例患者的痰液和肺泡灌洗液,对所有的标本均进行两次抗酸染色涂片、两次快速培养检测结核杆菌(1次及1次以上阳性均记为阳性)。结果 1.快速培养法的结核杆菌检出率高于抗酸染色涂片法;2.肺泡灌洗液的结核杆菌阳性率均高于痰液。结论快速培养法是临床工作中确诊结核病的首选方法,肺泡灌洗液能有效提高肺结核的诊断率。     

二种不同方法对结核菌培养和药敏的优势互补

目的：探讨二种不同方法对结核菌培养及药敏的优势互补。方法：收集称院临床痰标本300份用BACTEC法与改良罗氏法（简称L－J法）分别对结核菌作初代培养，并收集BA CTEC法培养阳性菌75株分别进行BACETEC法和L－J法的四种药敏（INH SM RFP EMB）试验。结果：初代培养BACTEC法较L－J法阳性率提高17．3％，阳性生长时间提前23天。结论：结核菌初代培养可选择BACTEC法，药敏试验选择L－J法较好。     

HIV感染与AIDS患者CD4^＋T淋巴细胞计数与肺结核主要症状体征的相关性研究

目的探讨HIV感染与AIDS患者CD4⁺ T淋巴细胞计数与肺结核主要临床症状、体征的相关性。方法选择2010年7月至2012年6月期间在广西CDC、广西龙潭医院、南宁市第四人民医院就诊登记的HIV感染与AIDS患者733例,采用液体培养和改良中性罗氏培养方法对患者痰标本进行结核分枝杆菌培养,采用流式细胞仪检测法对CD4⁺ T细胞进行检测,分析CD4⁺ T淋巴细胞计数与肺结核相关临床症状、体征的关系。结果HIV感染与AIDS患者结核分枝杆菌痰培养阳性率为16.1%（118/733）。CD4⁺ T淋巴细胞计数分级为1级的痰培养阳性率为12.3%（9/73）,2级为10.3%（6/58）,3级为17.0%（15/88）,4级为17.1%（88/514）,不同CD4⁺ T淋巴细胞计数级别的痰培养阳性率的差异无统计学意义（χ²趋势性=2.004,P=0.157）;不同级别CD4⁺ T淋巴细胞计数与结核分枝杆菌培养阳性率之间具有相关性（r=-0.048,P=0.035）。CD4⁺ T淋巴细胞计数与是否有咳嗽、咯痰＞2周症状有关,有咳嗽、咯痰＞2周症状的患者CD4⁺ T淋巴细胞计数（1.54±0.65）lg低于无该症状的患者（1.68±0.70）lg（t=-2.621,P=0.009）。结论HIV感染与AIDS患者CD4⁺ T淋巴细胞计数级别与结核分枝杆菌痰培养结果具有相关性,临床上对于咳嗽、咯痰＞2周的HIV感染与AIDS患者应予以重视,警惕合并肺结核的可能。     

Routine culture for Mycobacterium tuberculosis from bronchoscopy in Taiwan

BACKGROUND AND OBJECTIVE: The value of routine culture for mycobacterium from bronchoscopic washings and the cost-effectiveness is still uncertain in countries where tuberculosis is endemic. This study examined the epidemiology of positive cultures for M. tuberculosis obtained by bronchoscopy to determine the health benefit and cost of a policy of routine culture and smear. METHODS: All positive cultures for Mycobacterium tuberculosis in bronchial washings and the corresponding CXR features were analysed. RESULTS: The incidence of tuberculosis in routine bronchoscopy was 3.71%, and in patients who presented with typical tuberculosis features on CXR was 6.5%. Up to 10.6% of culture-proven pulmonary tuberculosis relied on bronchoscopy for diagnosis. The total cost of routine mycobacterium culture and acid-fast bacillus smear during the 2-year period was approximately US $24,800. CONCLUSION: Routine mycobacterium culture and acid-fast staining from bronchoscopic specimens appears to be valuable in countries where tuberculosis is prevalent.     

应用噬菌体裂解法快速鉴定结核分支杆菌

目的 研究噬菌体裂解试验对结核分支杆菌快速鉴定的意义。方法 应用结核分支杆菌噬菌斑技术快速检测结核分支杆菌、非结核分支杆菌和非分支杆菌及肺结核患者痰标本。结果 结核分支杆菌H37Rv、牛分支杆菌和非洲分支杆菌噬菌体裂解试验均为阳性,10株常见非结核分支杆菌和7株非分支杆菌均为阴性;30株结核分支杆菌临床分离株本法检测结果全部阳性;20份涂阳培阳肺结核患者痰标本,本法阳性19份（95％）;21份涂阴培阳痰标本,本法阳性15份（71％）;19份涂阴培阴痰标本,5份阳性（26％）。结论 噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌,用其检测痰标本中的结核分支杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

γ-干扰素体外释放试验在结核诊断中的应用评价

目的探寻γ-干扰素体外释放试验在结核诊断中的应用价值方法 34例菌阳肺结核患者,238例菌阴肺核患者,33例非结核患者,30例健康体检者,分别进行血清结核杆菌抗体检测、结核菌素试验(TST)以及结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放酶联免疫试验(TB-IGRA),对其检测结果进行统计分析。结果TB-IGRA、血清结核杆菌抗体试验以及TST的诊断敏感性分别为87.13%、76.10%和64.71%;诊断特异性分别为90.48%、66.67%和71.43%;阳性预测值分别为97.53%、90.79%和90.72%;阴性预测值分别为61.96%、39.25%和31.91%;诊断效率分别为87.77%、74.33%和65.97%。TB-IGRA的诊断敏感性和诊断特异性均显著高于血清结核杆菌抗体试验以及TST(P0.01)。结论 TB-IGRA对结核的诊断具有较高敏感性和特异性,对于菌阴肺结核的辅助诊断和疑似结核感染患者的排除优于其它两种方法。     

新型国产改良Middlebrook液体培养试剂对结核分枝杆菌培养效果的评价

目的: 评价新型国产改良Middlebrook液体培养试剂用于临床样本中结核分枝杆菌培养的效果。方法: 采集2021年3—4月西安市胸科医院诊治的疑似肺结核患者痰液和肺泡灌洗液标本,对其中质量合格的89份痰液标本和61份肺泡灌洗液标本进行分枝杆菌改良试剂培养(改良试剂法)和BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)培养。比较两种方法检测分枝杆菌的阳性率、报阳时间和污染率差异,并以MGIT 960培养结果为参照标准,评价改良试剂法的检测效能。结果: 改良试剂法检测痰液和肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌的总阳性率[44.7%(67/150)]和报阳时间[中位数(四分位数):13.0(8.5,17.0)d]与MGIT 960培养结果[分别为42.7%(63/150)和13.0(8.0,17.5)d]相比,差异均无统计学意义(χ²=0.571,P=0.453;Z=-1.344,P=0.179)。两种方法检测肺泡灌洗液标本均未出现污染,但改良试剂法检测痰液标本的污染率[12.4%(11/89)]明显高于MGIT 960培养[4.5%(4/89)],差异有统计学意义(χ²=4.000,P=0.039)。 改良培养试剂的成本[(49.6±10.5)元/份]仅约为MGIT 960培养试剂[(75.4±15.8)元/份]的60%。以MGIT 960培养结果为参照标准,改良试剂法检测痰液和肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌的总敏感度为96.9%(62/64)、总特异度为94.2%(81/86),Kappa值为0.905,一致性好。结论: 分枝杆菌改良Middlebrook液体培养试剂检测痰液和肺泡灌洗液标本与MGIT 960培养诊断结核病的一致性好,但应注意痰液标本检测污染率较高的问题。     

手术标本中结核分枝杆菌检测及临床意义研究

目的 探讨结核病患者手术切除标本进行结核分枝杆菌检测的临床意义。 方法 应用罗氏培养、液体培养及定量RT-PCR方法检测12例不同化疗疗程后行手术,术中取材的标本中结核分枝杆菌。 结果不同化疗疗程的手术标本中可以应用罗氏培养法及液体培养法检测到结核分枝杆菌,并有病例存在结核分枝杆菌持留菌特征性ICL及ACR的高表达。 结论 手术标本是结核菌培养及持留菌检测的很好材料,对患者术后化疗指导有指导意义。     

Xpert MTB/RIF对结核菌利福平耐药的诊断价值及rpoB基因突变特点的分析

目的分析Xpert MTB/RIF检测对结核分枝杆菌利福平耐药的诊断价值及rpoB基因突变特点。方法回顾分析2016年1月至2020年6月期间来院就诊患者相同标本,同时进行了结核分枝杆菌培养及药敏试验和Xpert MTB/RIF检测,且任一种方法检出MTB。结果用Xpert MTB/RIF及培养药敏两种方法检测标本共7659例,Xpert MTB/RIF对MTB的检出率高,且有统计学意义(P<0.05)。两种方法同时检出MTB 3621例,Xpert MTB/RIF检出利福平耐药262例,培养药敏检出利福平耐药238例;两种方法检测利福平耐药的一致率为99.01%;采用Kappa检验,两种方法的检测结果完全符合。RR-TB探针突变的频率为E探针63.37%、D探针20.16%、B探针8.23%、A探针4.53%、C探针0.82%、联合探针突变2.88%;以培养药敏结果为利福平耐药的金标准,Xpert无探针突变组利福平耐药的准确性要明显低于有探针突变组;初治和复治病例探针突变频率差异有统计学意义。结论Xpert MTB/RIF检测可以快速有效的诊断利福平耐药结核,有助于早发现、早治疗。利福平耐药结核探针突变主要发生在E探针和D探针,C探针突变最少。     

西安市结核病的病原学调查

目的调查西安市结核病的分枝杆菌菌种类型及其分布。方法采用抽样调查方法收集结核病患者的痰标本及其背景资料,用痰涂片、痰培养以及PCR方法检测,用鉴别培养基对分离菌株进行菌种鉴定。结果共收集574例拟诊结核病病例,实验室检测1602份痰标本。采用痰涂片、痰培养和PCR3种方法联合应用,阳性者260例,分枝杆菌检测阳性率45.30。137例分枝杆菌培养阳性者中,结核分枝杆菌复合体占73.72,其中结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别为67.88和5.84;11.68为非结核分枝杆菌,14.60为混合感染,其中11.68为结核分枝杆菌与牛分枝杆菌,2.92为结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌混合感染。结论西安市结核病的致病菌复杂,包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非结核分枝杆菌,尤其是非结核分枝杆菌混合感染应予以高度重视。