α-klotho蛋白拮抗瘦素损伤小鼠足细胞的实验研究

目的:探讨瘦素对小鼠足细胞的损伤效应及α-klotho蛋白拮抗这一效应的可能。方法:小鼠足细胞分为三组,分别为空白对照组,瘦素刺激组(瘦素15 ng/ml),α-klotho干预组(α-klotho 0.1μg/ml及瘦素15 ng/ml)。mRNA检测采用实时定量PCR方法,蛋白质检测采用免疫印迹法。结果:瘦素能显著抑制足细胞标志蛋白podocin,nephrin,podocalyxin,podoplanin表达,与对照组比较,蛋白质表达的抑制率分别为24%、25%、25%和23%;mRNA表达的抑制率分别为42%、27%、39%、24%,P均0.05。α-klotho干预后,上述足细胞标志蛋白均被上调,与瘦素组比较,蛋白质表达分别上调1.36、1.25、1.29和1.22倍;mRNA表达分别上调1.77、1.48、1.66、1.26倍,P均0.05。此外,瘦素能显著活化Wnt/β-catenin信号通路,与对照组比较,Wnt2b、Wnt5a、Wnt6、Wnt7a的mRNA表达分别上调2.06、1.72、2.14、1.59倍,P0.05;β-catenin的蛋白磷酸化水平抑制率为26%,P0.05。α-klotho干预后,上述信号通路分子均被抑制,与瘦素组比较,Wnt2b、Wnt5a、Wnt6、Wnt7a的mRNA表达抑制率分别为42%、28%、43%、30%,P均0.05,磷酸化的β-catenin上调1.27倍,P0.05。结论:瘦素可能通过Wnt/β-catenin信号通路损伤足细胞,而α-klotho可逆转足细胞损伤,其机制可能与抑制瘦素的作用有关。     

槲皮素通过G3BP1调控Wnt/β-catenin信号通路对前列腺癌细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化的影响

目的探讨槲皮素对前列腺癌(PCa)细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)的影响,并分析其可能机制。方法人前列腺癌细胞(PC-3)随机分为空白对照组及槲皮素低、中、高浓度组,转染GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1(G3BP1)siRNA及其阴性对照、pcDNA3.1-G3BP1及其阴性对照至PC-3细胞,并用槲皮素处理。分别采用细胞划痕试验和Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测G3BP1 mRNA表达,Western blot法检测G3BP1蛋白、EMT相关蛋白及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路蛋白表达。结果槲皮素抑制PC-3细胞迁移、侵袭,上调E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达,下调N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail表达;槲皮素下调PC-3细胞G3BP1 mRNA和蛋白表达,下调Wnt家族成员3A(Wnt-3α)、β-catenin、磷酸化糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)表达,上调GSK-3β表达;沉默G3BP1增强槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用,过表达G3BP1逆转槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素可通过抑制EMT抑制PCa细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与其靶向G3BP1抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

lncRNA ANCR调节骨质疏松大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制

目的探讨lncRNA ANCR调节骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制。方法将lncRNA ANCR siRNA慢病毒载体及慢病毒空载体分别转染至脂肪源性干细胞,分为siRNA组、空载体组、干细胞组。分别通过碱性磷酸酶染色观察ALP染色效果、Western blot法检测Wnt/β-catenin蛋白水平、茜素红染色实验检测成骨染色效果、免疫组化法检测Wnt/β-catenin信号阳性表达的差异性。结果与空载体组、干细胞组相比较,siRNA组细胞中ALP染色显著加深(P均0.05),成骨染色更为显著(P均0.05);与空载体组,干细胞组相比较,siRNA组细胞Wnt/β-catenin蛋白表达显著上升(P均0.05),Wnt/β-catenin阳性数显著升高(P均0.05);空载体组与干细胞组比较,细胞中Wnt/β-catenin蛋白、ALP表达水平、Wnt/β-catenin阳性数相近,无显著差异(P0.05)。结论 lncRNA ANCR的表达水平与骨质疏松大鼠体内脂肪源性干细胞的分化存在显著相关性,下调lncRNA ANCR能够促进脂肪源性干细胞向成骨细胞分化,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin的表达有关。     

1,25(OH)2D3对人骨肉瘤MG63细胞基质GLA蛋白及Wnt信号通路的影响

目的观察1,25(OH)_2D_3对人成骨肉瘤MG63细胞株Wnt信号通路及MGP表达的影响,探讨其在骨质疏松发病中可能的新机制。方法分别使用10-8mol/L 1,25(OH)_2D_3、200 ng/ml Wnt信号通路阻断剂DKK-1、10-8mol/L 1,25(OH)_2D_3+200 ng/ml DKK-1干预人骨肉瘤细胞MG63细胞株48 h,使用实时荧光定量RT-PCR及western-blot技术测定Wnt/β-catenin信号通路中相关因子β-catenin、Runx2、LRP5及MGP基因及蛋白表达的影响。结果 (1)10-8mol/L 1,25(OH)_2D_3上调MG63细胞中Wnt/β-catenin信号通路中相关因子β-catenin、Runx2、LRP5及MGP的基因表达及蛋白的表达,其中上调基因分别是对照组的2.73倍、3.72倍、1.53倍、2.31倍,差异有统计学意义(P0.05);上调蛋白表达分别是对照组的1.13倍、1.17倍、1.14倍、1.21倍,差异有统计学意义(P0.05)。(2)DKK1下调β-catenin、LRP5、Runx2、MGP的基因及蛋白表达,其中下调基因表达分别是对照组的0.34倍、0.52倍、0.42倍、0.78倍,差异有统计学意义(P0.05)。下调蛋白表达分别是对照组的0.93倍、0.92倍、0.87倍、0.86倍,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3有可能通过Wnt/β-catenin信号通路影响MGP的表达。     

NOB1基因对膀胱癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨干扰NOB1基因对膀胱癌细胞凋亡和Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将膀胱癌T24细胞分为对照组(CON组),不进行转染、siRNA阴性对照组(siRNA-CON)、NOB1-siRNA组。分别采用RT-PCR和Western blot检测转染后三组细胞中NOB1 mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞活力;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;Western blot检测β-catenin和c-Myc蛋白表达水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535处理NOB1-siRNA组细胞,设置为NOB1-siRNA-FH535组,检测细胞活力、细胞凋亡情况和β-catenin、c-Myc蛋白表达水平。结果NOB1-siRNA组NOB1 mRNA和蛋白表达水平均低于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。NOB1-siRNA组细胞活力低于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,NOB1-siRNA组细胞凋亡率高于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。NOB1-siRNA组β-catenin和c-Myc蛋白表达水平均低于siRNA-CON组和CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。NOB1-siRNA-FH535组细胞活力低于NOB1-siRNA组(P<0.05)。流式细胞技术检测结果显示,NOB1-siRNA-FH535组细胞凋亡率高于NOB1-siRNA组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,NOB1-siRNA-FH535组β-catenin及c-Myc蛋白表达水平低于NOB1-siRNA组(P<0.05)。结论干扰NOB1表达可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而促进膀胱癌细胞的凋亡。     

青娥丸调控Wnt1/β-catenin信号通路治疗糖尿病骨质疏松

目的 探究青娥丸对糖尿病骨质疏松（diabetic osteoporosis，DOP）小鼠模型Wnt/β-catenin通路的影响。方法 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲菌素建立DOP小鼠模型，对小鼠进行药物干预，分为空白组、模型组、青娥丸低、中、高剂量组及阿仑膦酸钠组，进行一般状态观察，股骨组织进行HE染色，验证造模成功情况。生化检测各组小鼠碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、天冬氨酸转氨酶（AST）的水平，免疫组化检测股骨Wnt/β-catenin信号传导通路中相关蛋白Wnt1、β-catenin、Runx2表达水平，HE染色观察各组股骨组织细胞形态，qPCR检测股骨组织中GSK-3β、低密度脂蛋白受体相关基因5(LRP5)、COL1A1 mRNA水平。结果 与对照组相比，模型组小鼠骨小梁间隔增大，骨小梁之间连接减少，小鼠多饮多尿少动，尾静脉血糖值增加（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均增加（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平下调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白呈少量阳性表达（P＜0.01）。与模型组相比，青娥丸组和阿仑膦酸钠组骨小梁间隔变小，骨小梁间的连接增多，尾静脉血糖值下降（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均减少（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平上调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白阳性表达增多（P＜0.01）。结论 青娥丸可增强DOP小鼠骨组织的修复作用，其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路的激活有关。 关键词：中医中药；青娥丸；糖尿病性骨质疏松；骨组织；Wnt1/β-catenin信号通路     

晚期糖基化终末产物通过Wnt/β-catenin信号通路调控足细胞自噬和迁移

目的探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导Wnt/β-catenin信号通路活化对足细胞自噬和迁移的影响。方法将小鼠永生化肾足细胞系分为牛血清白蛋白组(100mg/L BSA)、糖基化终末产物组(100 mg/L BSA-AGEs)和糖基化终末产物+DKK-1组(100mg/L BSA-AGEs+100 DKK-1 mg/L),以未加干涉的正常足细胞为对照组。Western blot检测足细胞β-catenin蛋白、自噬膜蛋白微管相关蛋白轻链3-II(LC3-Ⅱ)以及自噬底物p62蛋白表达水平,免疫荧光观察足细胞自噬情况,ELISA检测细胞上清液中Nephrin蛋白含量,划痕试验检测足细胞迁移能力。用AGEs和AGEs+RAGE(糖基化终末产物受体)中和抗体处理足细胞系,Western blot检测足细胞β-catenin蛋白的表达。结果与对照组相比,AGEs组p-β-catenin、p62表达升高(P0.05),LC3-Ⅱ表达降低(P0.05)。AGEs+DKK-1组p-β-catenin、p62蛋白表达较AGEs组降低,LC3-Ⅱ表达升高(P0.05),但与对照组比较差异无显著性(P0.05)。BSA组各指标与对照组均无显著性差异(P0.05)。免疫荧光检测发现AGEs组足细胞中LC3荧光强度较对照组明显减弱,AGEs+DKK-1组较AGEs组LC3荧光强度增强,BSA组与对照组比较差异无显著性(P0.05)。AGEs组细胞培养上清中Nephrin含量较对照组明显降低(P0.05),AGEs+DKK-1组较AGEs组升高(P0.05),但仍低于对照组(P0.05),BSA组与对照组差异无显著性(P0.05)。与对照组相比,AGEs组足细胞迁移能力降低(P0.05),AGEs+DKK-1组、BSA组与对照组比较,差异无显著性(P0.05)。AGEs+RAGE中和抗体处理的足细胞β-catenin蛋白水平较AGEs组显著降低(P0.05)。结论 AGEs通过RAGE激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制足细胞自噬和迁移能力,可能是糖尿病患者足细胞损伤机制之一,在糖尿病肾病的发生和进展中发挥重要调控作用。     

阿霉素诱导的足细胞转分化中β-catenin及TGF-β的变化及活性维生素D_3的干预作用

目的:探讨阿霉素诱导的足细胞转分化(EMT)中β-catenin及TGF-β的变化及活性维生素D3干预作用。方法:以体外培养的小鼠足细胞系为研究对象,分6组进行实验:正常组(C组)、阿霉素组(即模型组,ADR组)、低剂量活性维生素D3组(LVD组)、高剂量活性维生素D3组(HVD组)、缬沙坦组(ARB组)、缬沙坦+高剂量活性维生素D3组(AHVD组)。各实验组干预24 h、48 h时通过RT-PCR检测β-catenin、TGF-βmRNA的表达,Western Bolt检测β-catenin蛋白的表达。结果:用药物干预24 h及48 h时,与正常对照组相比,ADR组足细胞β-catenin mRNA及蛋白表达均上调(P<0.01);与ADR组相比,四个药物干预组(ARB组、LVD组、HVD组、AHVD组)β-catenin mRNA及蛋白表达均下调(P<0.05)。24 h时与正常对照组相比,ADR组TGF-βmRNA表达上调(P<0.01);与ADR组相比,四个药物干预组TGF-βmRNA表达明显下调(P<0.01)。48 h时与正常对照组相比,ADR组TGF-βmRNA表达上调(P<0.01);与ADR组相比,HVD组与AHVD组TGF-βmRNA表达明显下调(P<0.01),而LVD组及ARB组无显著下降(P>0.05)。结论:活性维生素D3通过抑制信号转导通路中β-catenin、TGF-β的表达而抑制足细胞发生EMT。     

Sonic hedgehog和β-连环蛋白在胰腺癌组织中的表达及其相关性研究

目的 研究胚胎发育信号通路Sonic hedgehog(SHH)和WNT/β-catenin在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测胰腺癌组织及癌旁组织中SHH和β-catenin的mRNA和蛋白表达情况.结果 SHH mRNA和蛋白在胰腺癌组织中的阳性率分别为81.6%和79.6%,与癌旁组织相比,差异有统计学意义(P＜0.05).β-catenin蛋白在胰腺癌组织中的阳性率为71.4%,与癌旁组织相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而β-catenin mRNA在胰腺癌组织和癌旁组织中的表达水平均较低,差异无统计学意义(P＞0.05).SHH和β-catenin蛋白表达与年龄、肿瘤大小、组织学类型和肿瘤部位等病理因素均无关(P＞0.05),而在不同淋巴结转移状况和TNM分期的病例组中,二者表达差异有统计学意义(P＜0.05).配对资料的Spearman相关分析显示,SHH表达与β-catenin表达呈正相关关系(r=0.352,P＜0.05).结论 SHH和WNT/β-catenin信号通路在胰腺癌组织中呈活化状态,二者之间的交叉对话对胰腺癌的发生发展可能起重要作用.     

TGF-β1对病理性瘢痕成纤维细胞中β-catenin表达的影响及意义

目的 探讨TGF-β/Smad信号转导通路与Wnt/β-catenin信号转导通路在病理性瘢痕发病机制中的作用及相互关系.方法 随机选取瘢痕疙瘩(K组)、增生性瘢痕(H组)和正常皮肤组织(N组)各3例,进行原代成纤维细胞培养,用不同浓度的TGF-β1处理细胞,应用免疫组化技术检测β-catenin在各组中的表达变化.结果 β-catenin在各组中的表达水平随TGF-β1浓度变化,呈先递增后递减趋势,三者β-catenin表达变化幅度为K组＜H组＜N组,K组成纤维细胞与H组成纤维细胞相比,差异无统计学意义(P＞0.05),而N组成纤维细胞与K组、H组成纤维细胞相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TGF-β/Smad信号转导通路与Wnt/β-catenin信号转导通路联合作用,导致病理性瘢痕形成.     

马兜铃酸损伤大鼠肾小球足细胞的研究

目的 探讨马兜铃酸是否能损害肾小球足细胞.方法 用关木通浸膏水溶液间断灌胃制作马兜铃酸肾损害大鼠模型,分别于第1、4周末检测早期马兜铃酸肾损害大鼠24 h尿蛋白量,并以十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳观察尿蛋白成分.随后处死大鼠取肾组织,用激光显微切割捕获技术分离肾小球;用实时荧光定量PCR检测肾小球中nephnn、podocin、CD2AP、podocalyxin、podoplanin的mRNA表达;电镜下测量肾小球足突的平均宽度.结果 模型大鼠4周末尿蛋白量较对照组显着增多(P＜0.01),其中白蛋白含量明显增加.电镜结果显示肾小球足突平均宽度较对照组显著增宽(P＜0.01).肾小球中nephrin、podocin、CD2AP、podocalyxin、podoplanin的mRNA表达均较对照组显著减少,分别下调34％、62％、56％、50％(P＜0.01)及27％(P＜0.05).结论 马兜铃酸能损伤肾小球足细胞,导致足细胞相关蛋白mRNA表达下调,足突节段增宽,并出现白蛋白尿.     

Effect of aldosterone receptor antagonist on obesity-related glomerulonephropathy

Objective To examine whether aldosterone contribute to obesity related glomerular disease. Methods C57BL/6J mice were randomly divided into three groups: a control group (low-fat-diet, n=10), a model group (high-fat-diet, n=10) and a intervention group (high-fat-diet, n=12). After 8 weeks intervention group were treated with a mineralocorticoid receptor antagonist, spirolactone (SPL).The physicochemical indexes and the renal pathology of the three groups were all detected. The mRNA and protein expressions of podocyte marker protein were determined by real-time PCR and Western blotting, respectively. Results Compared with the control group, body weight, kidney weight, Lee’s index, fat index, blood cholesterol, blood triglyceride, creatinine clearance rate, urinary protein excretion, glomerular average diameter, glomerular foot process average width were significantly up-regulated (P＜0.05); The mRNA and protein expression of nephrin, podocin, podoplanin and podocalyxin were significantly down-regulated in model group (P＜0.05). Meanwhile, these changes were attenuated by SPL. Conclusion Aldosterone can participate in the process of obesity- related renal injury, and these can be attenuated by mineralocorticoid receptor antagonist, spirolactone. This gives us preliminary clues to treat ORG.     

Ursolic acid inhibits high glucose-induced epithelial mesenchymal transition of podocyte by mediating Wnt/β-catenin signaling pathway

Objective To observe the epithelial mesenchymal transition (EMT) of podocyte induced by high glucose, and to explore the potential protective mechanism of ursolic acid (UA). Methods The podocytes cultured in vitro were divided into four groups: normal group (glucose 5.5 mmol/L), mannitol group (glucose 5.5 mmol/L+mannitol 19.5 mmol/L), high glucose group (glucose 25 mmol/L) and UA group (glucose 25 mmol/L+UA 5 μmol/L). Podocyte morphology changes were observed by inverted phase contract microscope. The expression of zonula occludens-1 (ZO-1) and α-smooth muscle actin (α-SMA) were detected by immunofluorescence. The expressions of β-catenin and glycogen synthesis kinase-3β (GSK3β) were detected by Western blotting. The expressions of Wnt1, Wnt3a, Wnt5a, Wnt5b and GSK3β were detected by real-time PCR. Results Podocytes showed irregular arborization shape in normal glucose and transited to longer cobblestone-like shape as mesenchyme cell by high glucose culture. Compared with normal group, the expression of ZO-1 protein was down-regulated and the expression of α-SMA was up-regulated by high glucose culture (P＜0.05). The expression of Wnt5a mRNA was down-regulated; β-catenin mRNA and protein were up-regulated (P＜0.05); and GSK3β protein was down-regulated by high glucose culture (P＜0.05). Compared with high glucose group, ursolic acid inhibited podocyte EMT, up-regulated the expression of ZO-1 protein, Wnt5a mRNA, GSK3β (P＜0.05), and down-regulated the expressions of α-SMA protein, β-catenin mRNA and protein (P＜0.05). Conclusion Ursolic acid attenuates high glucose induced epithelial mesenchymal transition of podocyte by inhibiting Wnt/β-catenin signaling pathway.     

肥胖相关性肾小球病小鼠模型的建立

目的：通过高脂饮食喂养建立肥胖相关性肾小球病小鼠模型.方法：12只6周雄性C57BL/6J小鼠随机均分为对照组与模型组,分别予普通及高脂饲料共喂养16周.每4周检测小鼠体重及尿蛋白量,于16周处死小鼠后检测两组体重、Lee＇s指数、腹腔脂肪指数、尿蛋白量、血糖、血肌酐、血胆固醇、血三酰甘油及肌酐清除率;光镜测量肾小球直径,电镜测量足突宽度;实时荧光定量聚合酶链反应和免疫印迹法观察肾组织nephrin、podocin、podoplanin、podocalyxin mRNA及蛋白表达变化.结果：与对照组相比,模型组体重、Lee＇s指数、腹腔脂肪指数、尿蛋白排泄、血三酰甘油、肌酐清除率、肾小球直径和足突宽度均增加,肾组织nephrin、podocin、podoplanin、podocalyxin mRNA 和蛋白均表达降低.血糖、血肌酐、血胆固醇两组间差异无统计学意义.结论：高脂饮食喂养可成功造出肥胖相关性肾小球病小鼠模型.     

复方积雪草防治局灶节段性肾小球硬化模型大鼠足细胞损伤的实验研究

目的:探讨复方积雪草对局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulo sclerosis,FSGS)模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白nephrin、podocin表达的影响,阐述其延缓肾小球硬化的部分分子生物学机制。方法:采用左肾摘除+阿霉素重复静脉注射方法建立FSGS模型。复方组分别予高中低剂量复方积雪草膏剂灌胃;对照组予苯那普利混悬液;于第8周末留取24h尿蛋白定量,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和血浆蛋白(Alb);留取右肾标本,光镜标本行HE染色;用免疫组化法观察裂孔膜蛋白nephrin和podocin表达;RT-PCR法检测肾组织nephrin和podocinmRNA表达。结果:各复方组24h尿蛋白定量及血Scr、BUN、TC、TG较模型组有显著改善,且与西药组疗效相似。RT-PCR及免疫组化结果显示模型组足细胞裂孔膜蛋白表达较正常组明显降低(P<0.05)。而各治疗组表达较模型组均有明显增加(P<0.05),且与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:复方积雪草能通过上调模型大鼠肾小球内nephrin和podocin分子表达,减轻足细胞损伤,延缓肾小球硬化。     

肾小球疾病患者尿沉渣足细胞分子podocin和podocalyxin分析

目的：以ELISA法检测尿沉渣足细胞podocin,podocalyxin排泌并观察其与不同肾小球疾病的关系。方法：共收集我院自2010年5月～8月以来行肾活检证实为肾小球疾病的患者,收集其临床资料,并以ELISA法检测尿沉渣足细胞分子podocin,podocalyxin。结果：共40个患者,男15例,女25例,平均年龄（38.27±16.33）岁,增殖性肾小球疾病患者19例：IgA肾病10例,新月体性肾炎2例,IgM肾病2例,Ⅳ（A/G）型狼疮性肾炎5例;非增殖性肾小球疾病患者19例：微小病变型（MCD）5例,局灶节段硬化性肾小球肾炎（FSGS）8例,膜性肾病（MN）6例,另原发性肾淀粉样变性2例,对照健康自愿者10例。尿podocin分子排泌在正常对照组最低,在增殖性肾小球疾病和非增殖性肾小球疾病间差异无统计学意义（P〉0.05）,增殖性肾小球疾病尿podocin排泌高于肾淀粉样变性患者（P〈0.05）。新月体肾炎的尿podocin排泌显著高于其他肾小球疾病（P〈0.05）,后依次FSGS,IgA肾病,狼疮性肾炎,MN,IgM肾病,MCD;尿沉渣podocalyxin排泌在正常对照组最低,而增殖性肾小球肾炎和非增殖性肾小球肾炎间差异无统计学意义（P〉0.05）。新月体肾炎尿podocalyxin排泄量最高,其后依次为FSGS,IgA肾病,MN,狼疮性肾炎,MCD,IgM肾病,以肾淀粉样变性最低。尿podocalyxin与podocin呈正相关,尿podocin与血C3呈负相关。结论：ELISA法检测尿沉渣足细胞分子检测可对肾小球疾病患者的肾病理类型提供参考,以正常人尿podocin,podocalyxin排泌最少,增殖性肾小球疾病和非增殖性肾小球疾病间差异无统计学意义,新月体性肾炎尿沉渣podocin及Podocalyxin高于其他疾病患者,FSGS患者的尿沉渣podocin及Podocalyxin排泌量也较多,肾淀粉样变性患者的尿沉渣podocin及Podocalyxin最低,血清C3与尿podocin的排泌呈负相关。     

中药合剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

也页目的：观察中药合剂（ TCM mixture）对糖尿病肾病（ DKD）大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子（ nephrin和podocin）表达的影响,探讨其对DKD的防治作用。方法：高脂高糖喂养8周联合小剂量STZ（30 mg/kg）建立T2DM大鼠模型,将DM模型大鼠随机分为中药合剂治疗组（B）及T2DM模型对照组（A）;另设正常对照组（NC）。各组于治疗前及干预后4、8、12周末检测大鼠血糖浓度及尿微量白蛋白;第12周末称大鼠体重（ BW）、肾重（ KW）,计算肾肥大指数（ KW/BW）,观察血清尿素氮（ BUN）、肌酐（ Scr）、总胆固醇（ TC）、三酰甘油（ TG）变化;光镜观察肾脏病理改变;应用免疫组化技术观察足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin肾组织分布与表达;采用Western blot技术测定肾皮质Nephrin、Podocin 蛋白的表达。结果：应用中药合剂干预后与T2DM模型对照组相比,大鼠的尿微量白蛋白总量、肾肥大指数、血糖、尿素氮、血肌酐较T2DM模型组明显降低（ P〈0.05）,体重增加（P〈0.05）,病理改变减轻,nephrin和podocin蛋白表达增加（P〈0.05）。结论：中药合剂能提高nephrin和podocin的表达,促进足细胞损伤修复,减少尿微量白蛋白的排泄,减缓糖尿病肾病的进展。     

EP1 receptor mediates Adriamycin-induced podocyte injury through activating p38 MAPK

Objective To investigate the effect of prostaglandin E2 receptor 1 (EP1) on Adriamycin (ADR)-induced glomerular podocytes injury and its possible mechanism. Methods (1) In vivo experiments: 6-8 weeks old male Balb/c mice were randomly divided into four groups: Control group; ADR group; EP1 agonist 17-phenyl PGE2+ADR group; EP1 antagonist SC-19220+ADR group. The mouse model of nephrotic syndrome was induced by injection of ADR (10 mg/kg) into tail vein, and then EP1 agonist (1 μg/g) and antagonist (25 μg/g) were administered respectively. Six weeks later, all mice were sacrificed and urine, blood and kidney tissues were collected. Detecting urine protein, blood chemistry, changes of renal pathology and podocyte-related proteins, electron microscopy changes of podocytes. (2) In vitro experiments: Podocytes were cultured in vitro and divided into different groups: Control group; ADR group (0.2 μmol/L); EP1 agonist (0.1, 1, 10 μmol/L)+ADR (0.2 μmol/L) group; antagonist (0.1, 0.5, 1 μmol/L)+ADR (0.2 μmol/L) group. The proliferation of podocytes was measured by CCK-8. Expression of PGE2 in podocytes was detected by ELISA. Indirect immunofluorescence was used to determine the localization of podocyte-related proteins nephrin, podocin and CD2AP. Expression of nephrin, podocin, CD2AP, COX2 in podocytes was detected by Western blotting and Real-time quantitative PCR. p38 MAPK or phospho-p38 MAPK was measured by Western blotting as well. Flow cytometry was used to detect cell apoptosis. Results (1) In vivo experiments: Compared with control group, obvious proteinuria, blood biochemical changes and renal pathological changes were observed in ADR group, proteinuria, blood biochemical and renal pathological changes were more serious in mice dealt with agonist, while antagonist could reduce ADR-induced injury (all P＜0.05). Results of immunohistochemistry showed that the expression of podocyte-related proteins nephrin, podocin and CD2AP in ADR group were significantly lower than those in control group, and EP1 agonist could further inhibit expression of these proteins, while antagonist could reverse this inhibitory effects (P＜0.05). Electron microscopic results showed that mice in ADR group appeared foot enlargement and fusion, and the agonist group further aggravated the injury, while antagonist intervention could inhibit the injury of podocytes. (2) In vitro experiments: Compared with control group, expression of PGE2 and COX2 were increased; mRNA and protein expression of nephrin, podocin, CD2AP were decreased, p38 MAPK activity and podocytes apoptosis were increased in ADR group (P＜0.05); Agonist could aggravate podocytes damage (P＜0.05), while Antagonist could down-regulate the expression of PGE2 and COX2, promote the expression of nephrin, podocin and CD2AP, and inhibit the activity of p38 MAPK and podocytes apoptosis (P＜0.05). The addition of p38 MAPK inhibitor(10 μmol/L) could reduce the inhibitory effect of EP1 agonist on the expression of podocyte-related proteins nephrin, podocin and CD2AP (P＜0.05). Conclusions EP1 receptor may activate the p38 MAPK signaling pathway to inhibit podocytes-related proteins nephrin, podocin and CD2AP, as well as mediate the ADR induced podocyte injury. Inhibition of EP1 receptor however have a protective effect.