一氧化氮对兔关节软骨细胞凋亡的影响

目的　探讨NO对软骨细胞凋亡的影响。方法　以NO供体硝普钠 3mmol/L和 6mmol/L诱导培养的兔关节软骨细胞凋亡 ,在加药处理后 4,8,12 ,16及 2 0小时取样检查 ,利用透射电镜技术、流式细胞术 ,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 ,观察细胞凋亡现象。结果　在 3mmol/L硝普钠诱导下 ,随着作用时间的延长 ,细胞从核边集到核裂解 ;加药后 12小时 ,凋亡率为 ( 12 .71± 3 .2 6) % ,2 0小时后的凋亡率已达 ( 93 .47± 4.12 ) % ;在 6mmol/L硝普钠诱导下 ,细胞出现肿胀、破裂成碎片等坏死变化。结论　高浓度的NO可诱导兔关节软骨细胞凋亡 ,过高浓度的NO可引起细胞坏死。细胞凋亡率异常增高可能是影响组织工程化软骨修复软骨缺损的原因之一     

羧甲基壳聚糖对体外培养髓核细胞增殖及硝普钠诱导凋亡的影响

[目的]研究不同浓度羧甲基壳聚糖对体外培养椎间盘髓核细胞增殖及硝普钠诱导细胞凋亡的保护作用.[方法]体外培养大鼠椎间盘髓核细胞,Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定;分别加入不同浓度羧甲基壳聚糖培养24h,通过CCK-8细胞计数法检测髓核细胞的增殖情况;采用不同浓度硝普钠诱导髓核细胞凋亡,通过流式细胞仪检测早期凋亡细胞比例,并通过Hoechst 33342荧光染色检测髓核细胞凋亡核的形态学变化.[结果]CCK-8检测结果表明10～500μg/ml羧甲基壳聚糖作用髓核细胞24 h对髓核细胞增殖无明显作用(P＞0.05);流式细胞检测结果表明1～3mmol/L的硝普钠可诱导髓核细胞发生早期凋亡,加入50～200μg/ml羧甲基壳聚糖后硝普钠诱导的髓核细胞凋亡有不同程度的降低(P＜0.05).Hoechst 33342染色结果表明羧甲基壳聚糖可降低硝普钠诱导髓核细胞凋亡.[结论]一定浓度的羧甲基壳聚糖对髓核细胞增殖无明显影响,羧甲基壳聚糖对硝普钠诱导下髓核细胞凋亡有保护作用.     

白藜芦醇对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡bax及bcl-2表达的影响

[目的]探讨白藜芦醇对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡及凋亡调控基因bax及bcl-2表达的影响。[方法]常规培养关节软骨细胞后,按不同浓度白藜芦醇(分别为25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)处理后分组并用硝普钠(SNP)(2.5 mmol/L)诱导细胞凋亡。采用MTT法检测各组软骨细胞活性、DAPI染色和流式细胞术检测各组细胞凋亡,采用western-blot技术检测各组细胞sirt1、bax、bcl-2的表达,RT-PCR法检测各组细胞sirt1mRNA的表达。[结果]随着白藜芦醇浓度的升高,MTT法结果显示处理后细胞活性依次增高;DAPI染色、流式细胞术检测显示处理后细胞凋亡相对较少;western-blot检测显示随着白藜芦醇浓度的升高,处理后细胞sirt1、bcl-2依次增高,而bax逐渐降低;RT-PCR法检测显示白藜芦醇处理后细胞sirt1 mRNA表达随浓度逐渐增高。[结论]白藜芦醇激活sirt1,使bcl-2/bax表达增高,是白藜芦醇抑制软骨细胞凋亡、预防骨关节炎的机制之一。     

京尼平苷对硝普钠诱导软骨细胞凋亡与细胞周期的影响

目的:研究京尼平苷(Geniposide)对硝普钠(SNP)诱导软骨细胞凋亡与细胞周期的影响.方法:3周龄SD大鼠,用于分离培养软骨细胞.将第Ⅱ代软骨细胞进行分组,噻唑兰染色(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,硝酸还原酶法检测培养液中NO含量.结果:京尼平苷干预SNP诱导软骨细胞凋亡后,细胞处于GO/G1期的百分比减少,S及G2/M期的细胞百分比增加;同时显著降低软骨细胞凋亡率及培养液中NO含量(r=0.917,P＜0.01).结论:京尼平苷干预SNP诱导软骨细胞凋亡,可降低培养液中NO含量,促进细胞增殖,这可能是京尼平苷治疗骨性关节炎的作用机制之一.     

马钱子对三种软骨细胞凋亡模型的影响

目的：观察中药马钱子对三种软骨细胞凋亡模型的影响。方法：在兔软骨细胞培养体系中分别加入2mmol／L硝普钠（SNP）、2mmol／LSNP＋马钱子、10mol／L全反式维甲酸（ATRA）、10mold／L ATRA＋马钱子；在人胚胎软骨细胞培养体系中加入30ng／L肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、TNF—α＋马钱子，各组培养24h后，采用Annexin V／PI双参数法对软骨细胞凋亡进行定量检测。结果：软骨细胞在加入SNP、ATRA、TNF—α发生凋亡时，加入马钱子能降低SNP、ATRA诱导的软骨细胞凋亡率（P〈0．01，P〈0．05），但对TNF—α诱导的软骨细胞凋亡，无明显抑制作用（P〉0．05）。结论：中药马钱子对部分软骨细胞凋亡有一定抑制作用。     

关节软骨急性损伤后软骨细胞凋亡的实验研究

目的探讨关节软骨急性损伤后软骨细胞的凋亡特点。方法利用钻头钻孔造成兔膝关节软骨损伤，利用脱氧核糖核苷酸末端转酶介导的生物素脱氧尿嘧啶苷酸缺口末端标记法、透射电镜、流式细胞仪等方法对受损软骨进行检测。结果损伤后软骨细胞出现坏死和凋亡，损伤后第4天软骨细胞凋亡率最大。凋亡细胞全层分布。主要分布在浅表层和中间层。结论关节软骨损伤后软骨细胞发生凋亡，4d达高峰，以后逐渐减少。提示关节软骨急性损伤后。早期抑制软骨细胞的凋亡对防治骨关节炎可能有十分积极的意义。     

外源性一氧化氮对前列腺癌细胞作用的研究

目的研究外源性一氧化氮(NO)对前列腺癌细胞株生长的影响及作用机制.方法以硝普钠(SNP)为一氧化氮供体,不同浓度的SNP作用前列腺癌细胞,采用MTT法测细胞的生存率,Tunel法和流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,通过RT-PCR法检测细胞p21^waf1/cip1基因的表达.结果前列腺癌细胞生存率与低浓度的SNP成正比,而与高浓度的SNP成反比.高浓度的SNP可作用于细胞的G1期,诱导细胞凋亡,p21^waf1/cip1的表达也随之上调.结论低浓度的SNP促进前列腺癌细胞的生长;高浓度的SNP促进细胞的凋亡,p21^waf1/cip1的上调可能是高浓度的SNP诱导前列腺癌细胞凋亡的机制之一.     

硝普钠诱导猪软骨细胞凋亡

[目的]研究硝普钠(Sodium nitroprusside, SNP)诱导猪软骨细胞凋亡的适宜剂量和作用时间,构建猪软骨细胞的凋亡模型。[方法]体外培养并鉴定猪踝关节软骨细胞。分别用0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L的SNP处理软骨细胞。于12、24、48 h后分别检测软骨细胞增殖、凋亡和线粒体膜电位。[结果]随SNP浓度增加,细胞增殖呈曲线改变,SNP在0.1 mmol/L时OD值达峰值,而后下降,不同浓度SNP组间差异有统计学意义(P0.05)。相同SNP不同时间点的差异亦有统计学意义(P0.05)。凋亡检测显示0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L SNP处理的猪软骨细胞发生了凋亡,且凋亡率随SNP浓度的增大而加大。线粒体膜电位染色显示随着SNP浓度的增大,猪软骨细胞的红色荧光强度与绿色荧光强度的相对比值逐渐缩小。[结论] 0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L SNP均引发了猪软骨细胞凋亡,可以用于构建猪软骨细胞凋亡模型。且当SNP的浓度逐渐增大,猪软骨细胞的线粒体膜电位逐渐减小。     

创伤后早期关节腔内注射透明质酸对关节软骨细胞凋亡的影响

目的探讨关节软骨创伤后早期（立即）行关节腔内注射透明质酸对关节软骨创伤后软骨细胞凋亡的影响。方法用2nlm钻头钻孔造成兔双侧膝关节软骨急性创伤,术后立即随机选择一侧关节腔内注射1％透明质酸钠1mL（HA组）,另一侧不注射任何药物（对照组）。利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法、流式细胞仪两种方法对受损软骨进行检测。结果治疗组软骨细胞凋亡率较对照组明显小。结论关节软骨创伤后早期（立即）进行关节腔内注射透明质酸,能有效的抑制软骨细胞的凋亡,对预防创伤后骨关节炎的发生有重要意义。     

一氧化氮合酶抑制剂对炎性刺激下软骨细胞增殖和基质代谢的影响

目的　用白细胞介素 1β(IL 1β)和脂多糖 (LPS)模拟软骨细胞和软骨的炎性环境 ,探讨一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂对软骨细胞增殖和基质代谢的影响。方法　实验共分 5组 :对照组、IL 1β和LPS刺激组、IL 1β和LPS +S 甲基异硫脲 (SMT)组、IL 1β和LPS +L NIL组、IL 1β和LPS +L NMA组。清洗干净的软骨块和传至第二代的软骨细胞依次加入上述药物。采用MTT法和BrdU掺入法分别检测软骨细胞和软骨的增殖活性 ;化学比色法检测NO释放量、NOS活性 ;3 5S掺入法检测蛋白多糖合成率。结果　①外源性IL 1β和LPS可增加软骨细胞和软骨NO释放 [(2 0 4 5± 14 )μmol/L ,(2 0 9 8± 18) μmol/L],诱导iNOSmRNA表达 ,增加NOS活性 [(2 0 1 7± 17)U/ml,(2 98 7±2 0 )U/ml) ],抑制软骨蛋白多糖合成和软骨细胞增殖 (P <0 0 5 ) ;②不同浓度NOS抑制剂均能减少NO释放和降低NOS活性 ,并与药物剂量正相关 ;③ 1mmol/L的NOS抑制剂可显著逆转软骨细胞和软骨蛋白多糖合成抑制 (P <0 0 5 ) ,增加软骨细胞增殖活性。结论　NOS抑制剂能有效抑制炎性因子 (IL 1β和LPS)诱发的软骨代谢改变 ,对关节软骨损害具有潜在的保护作用。