CD14+单核细胞人类白细胞抗原DR表达率与脓毒症关系的研究

目的了解烧伤延迟复苏时CDl4^＋单核细胞人类白细胞抗原DR（HLA—DR）表达率的变化，分析其与脓毒症的关系。方法选择烧伤面积大于30％TBSA的25例烧伤延迟复苏患者，于伤后1、3、7、14、28d取外周血，其中7例患者住院期间并发脓毒症，于脓毒症发生后连续2d亦取其外周血。另取20例健康体检者外周血作为对照。流式细胞仪检测CD14^＋单核细胞HLA．DR表达率，酶联免疫吸附测定法检测血浆中肿瘤坏死因子α（TNF—α）、白细胞介素10（IL-10）的浓度。结果非脓毒症患者伤后1、3、7、14、28dCD14^＋单核细胞HLA—DR表达率分别为（15±6）％、（74±5）％、（264±17）％、（284-16）％、（474-16）％，明显低于健康体检者[（924±10）％，P〈0．01]；脓毒症患者发生脓毒症后1、2d，该指标亦明显低于健康体检者及非脓毒症患者伤后1、7、14、28d（P〈0．01）。脓毒症患者TNF—d检出率及TNF—α、IL-10浓度，均高于非脓毒症患者和健康体检者（P〈0．05或P〈0．01）。伤后1、7、28d，外周血CD14^＋单核细胞HLA—DR表达率与IL—10浓度呈显著负相关（r分别为-0．9963、-0．7459、-0．8474，P〈0．01）。结论烧伤延迟复苏患者免疫功能低下，促炎性介质释放量增加，并发脓毒症时则更为严重。外周血CD14^＋单核细胞HLA—DR表达率可作为动态检测患者免疫功能状态的有效指标。     

CD14基因多态性与严重烧伤患者T淋巴细胞免疫功能的相关性研究

目的 探讨严重烧伤患者CD14基因多态性与T淋巴细胞免疫功能的关系.方法 采集77例烧伤体表总面积大于30%患者血标本,通过聚合酶链反应.限制性片段长度多态性方法检测CD14-159C/T基因多态性,观察其外周血T淋巴细胞增殖反应和白细胞介素-2(IL-2)的产生能力,并通过流式细胞仪检测T淋巴细胞CD4+/CD8+的比值、CD4+细胞的凋亡率.结果 严重烧伤后患者T淋巴细胞增殖能力明显下降,与CC纯合子患者比较,TT、TC基因型患者伤后第5、21、28天T淋巴细胞对丝裂原刺激增殖反应显著受抑(P<0.05或P<0.01).烧伤后携带TC、TT型患者IL-2产生一直处于较低水平,而CC型在伤后14 d分泌IL-2逐渐上升.与CC型患者比较,携带TT、TC型患者T淋巴细胞比值均降低,尤其在伤后第1、3、14、21、28天差异明显(P<0.05或P<0.01).三型CD3+CD4+T淋巴细胞凋亡率比较,TT型患者伤后第5、7、21天凋亡率显著高于CC型患者(P<0.05),TC型患者伤后7、14 d其凋亡率高于CC型患者(P<0.05),而,TT、TC型之间上述免疫功能指标比较均无显著差异(P>0.05).结论 CD14-159C/T多态性可影响大面积烧伤患者T淋巴细胞免疫功能状态,进而参与了严重感染并发症的发生与发展过程.     

胸腺肽α1对脂多糖刺激后人外周血单核细胞和淋巴细胞免疫功能的影响

目的:观察胸腺肽α_1对脂多糖刺激后人外周血单核细胞人类白细胞组织相容性抗原-DR(HLA- DR)表达率及淋巴细胞凋亡率的影响。方法:分离、培养正常人外周血单核细胞和淋巴细胞,空白对照组仅加1640培养液,内毒素(LPS)组加LPS刺激,LPS 胸腺肽α_1组先用不同浓度(100、10、1、0.1、0.01μg/ml)胸腺肽α_1预处理细胞,5min后再加入LPS(100 ng/ml)刺激。培养12 h后用流式细胞术检测CD14~ 单核细胞HLA-DR表达率和外周血淋巴细胞凋亡率。结果:LPS单独刺激单核细胞时,CD14~ 单核细胞HLA-DR表达率[(11.14±5.09)%]较空白对照组[(74.00±3.50)%]明显降低,用胸腺肽α_1预处理后,HLA-DR表达率随着胸腺肽α_1浓度的增高而增高(P均<0.01)。LPS单独刺激淋巴细胞时,淋巴细胞凋亡率[(8.16±0.51)%]较空白对照组[(4.40±0.53)%]明显增加,而用胸腺肽α_1预处理后,淋巴细胞凋亡率随着胸腺肽α_1浓度的增高而降低,胸腺肽α_1浓度为10μg/ml和100μg/ml时,淋巴细胞凋亡率[(4.65±0.75)%和(4.50±0.36)%]与空白对照组比较差异无显著性(P均<0.01)。结论:胸腺肽α_1对LPS引起的人外周血单核细胞和淋巴细胞免疫功能下调有显著抑制作用。     

胸腺肽α1对烫伤延迟复苏大鼠单核细胞Ⅰa抗原的影响

目的:研究烫伤延迟复苏后大鼠单核细胞表面Ⅰa抗原变化规律及应用胸腺肽α1对单核细胞表面Ⅰa抗原的影响.方法:将104只成年雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、单纯烫伤组(48只)和胸腺肽α1治疗组(48只).正常对照组不作烫伤处理;其它组均造成30%TBSA Ⅲ度烧伤延迟复苏模型.分别于6 h、1 d、2 d、3 d、7 d和14 d处死动物,取血分离单核细胞,流式细胞仪检测Ⅰa抗原表达率.结果:大鼠烫伤延迟复苏后单核细胞Ⅰa抗原表达率降低,其中6 h、和1 d时间点Ⅰa抗原表达率严重降低,3 d、7 d和14 d时间点开始有所恢复,但明显低于正常大鼠(P均＜0.01).给予胸腺肽α1后3 d、7 d和14 d时间点单核细胞Ⅰa抗原表达率与单纯烫伤组比较明显提高(P均＜0.01).结论:严重烧伤延迟复苏后,单核细胞抗原递呈功能减弱,免疫功能障碍.胸腺肽α1作为一种免疫增强剂可明显改善烧伤延迟复苏后单核细胞抗原递呈功能.     

胸腺肽α1对烫伤延迟复苏大鼠单核细胞Ia抗原的影响

目的:研究烫伤延迟复苏后大鼠单核细胞表面Ia抗原变化规律及应用胸腺肽α1对单核细胞表面Ia抗原的影响。方法:将104只成年雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、单纯烫伤组(48只)和胸腺肽α1治疗组(48只)。正常对照组不作烫伤处理;其它组均造成30%TBSAⅢ度烧伤延迟复苏模型。分别于6h、1d、2d、3d、7d和14d处死动物,取血分离单核细胞,流式细胞仪检测Ia抗原表达率。结果:大鼠烫伤延迟复苏后单核细胞Ia抗原表达率降低,其中6h、和1d时间点Ia抗原表达率严重降低,3d、7d和14d时间点开始有所恢复,但明显低于正常大鼠(P均<0·01)。给予胸腺肽α1后3d、7d和14d时间点单核细胞Ia抗原表达率与单纯烫伤组比较明显提高(P均<0·01)。结论:严重烧伤延迟复苏后,单核细胞抗原递呈功能减弱,免疫功能障碍。胸腺肽α1作为一种免疫增强剂可明显改善烧伤延迟复苏后单核细胞抗原递呈功能。     

严重烧伤后细胞免疫改变及其与高迁移率族蛋白B1的相关性

目的 探讨严重烧伤患者T细胞免疫功能的变化规律及其与高迁移率组蛋白B1(HMGB1)的相关性.方法 采集35例烧伤体表总面积>30%的患者静脉血样,根据是否并发多器官功能障碍综合征(MODS)分组(MODS组13例、非MODS组22例),采集患者伤后第1、3、5、7、14、21、28大的外周静脉血,采用酶联免疫吸附试验检测血浆HMGB1水平;观察外周血T淋巴细胞增殖反应和白细胞介素2(IL-2)的产生能力,并通过流式细胞仪检测CD4+/CD8+T细胞的比值.结果 严重烧伤患者伤后第1天血浆HMGB1水平即明显升高,其中伤后第1、7、21、28天MODS组HMGB1显著高于非MODS组(P<0.05).两组间比较,外周血T淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生能力、CIM4+/CD8+T淋巴细胞比值在伤后第1、14、21、28天MODS组显著低于非MODS组(P均<0.05).大面积烧伤患者伤后血浆HMGB1含量与细胞免疫功能指标包括T淋巴细胞增殖活性、IL-2含量、CD4+/CD8+T细胞比值呈显著负相关(P<0.05).结论 大面积烧伤后T淋巴细胞免疫功能紊乱与患者并发MODS密切相关,严重烧伤患者血浆HMGBI水平的持续升高对机体细胞免疫功能异常具有显著影响.     

大面积烧伤脓毒症患者T淋巴细胞免疫功能的改变及临床意义

目的 了解大面积烧伤脓毒症患者T淋巴细胞免疫功能的变化，探讨其与脓毒症的关系。方法 选择59例烧伤面积≥30％TBSA的患者，分为脓毒症组43例和非脓毒症组16例。采集两组患者伤后1、3、5、7、14、21、28d的外周静脉血，检测T淋巴细胞增殖能力和白细胞介素2（IL-2）的分泌水平，并行相关性分析；通过流式细胞仪检测CD3^＋／CD4^＋ T淋巴细胞的百分率及其凋亡率，并行相关性分析。结果 与非脓毒症组比较，脓毒症组患者伤后l、14、2l、28dT淋巴细胞增殖能力和IL-2的分泌水平均显著下降（P〈0．05或P〈0.01），两指标呈显著正相关（r=0．82，P〈0．01）。伤后1、5、14、21、28d，脓毒症组患者CD3^＋／CD4^＋T淋巴细胞百分率明显低于非脓毒症组，而其凋亡率呈相反趋势（P〈0.05或P〈0．01），两指标呈显著负相关（r=-0.66，P〈0．05）。结论 大面积烧伤脓毒症患者T淋巴细胞免疫功能持续处于抑制状态，T淋巴细胞凋亡参与了脓毒症细胞免疫紊乱的病理生理过程。     

结肠癌术后化疗对外周血免疫细胞比例及凋亡的影响

目的研究结肠癌术后化疗患者外周血免疫细胞亚群变化特点、淋巴细胞凋亡状况及其意义。方法应用流式细胞术对40例结肠癌患者手术前后(术前1d、术后3d、化疗前1d)、化疗过程(化疗第3d、化疗后3d)中外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞水平进行检测,以AnnexinV/PI双标流式细胞术对淋巴细胞凋亡、坏死状况进行检测。结果结肠癌根治术后3d,患者外周血T淋巴细胞及NK细胞数量较术前有所减少,但无显著差异(P>0.05)。至化疗前1d,患者外周血CD3 ,CD4 T细胞及NK细胞数量较术前显著增高(P<0.01),但CD8 T细胞数量减少(P<0.05)。化疗3d后,患者外周血CD3 ,CD4 ,CD8 T细胞及NK细胞水平较术前全面下降(P<0.05),但CD4 /CD8 比例变化不大,而淋巴细胞凋亡坏死比例明显升高。至化疗结束后3天,T淋巴细胞各亚群及NK细胞数量开始逐渐回升。结论结肠癌根治术手术本身对患者外周血淋巴细胞及NK细胞影响不大,术后患者免疫细胞水平明显升高,机体免疫状况明显改善。化疗可造成患者机体的一过性免疫抑制,可能与其造成机体淋巴细胞的凋亡坏死有关。     

外科术后危重患者单核细胞HLA-DR表达的临床研究

目的研究外科术后危重患者外周血CD14^＋单核细胞HLA—DR的表达及动态变化与其预后的关系。方法应用流式细胞术检测并比较30例外科手术后呼吸机脱机困难而转入ICU的危重患者和28名同期体检健康者的外周血CD14^＋单核细胞HLA—DR的表达率。动态观察入ICU第1、4、7天单核细胞HLA-DR的表达率的变化,并记录APACHEⅡ评分、全身性感染相关性器官功能衰竭评分（SOFA）及28d的短期预后。结果与健康志愿者相比,外科术后危重患者外周血CD14^＋单核细胞HLA—DR的表达率降低（P〈0．01）。人ICU第1天的HLA—DR表达率与SOFA、APACHEⅡ评分及预后无相关性。第7天HLA—DR表达率较第1天提高的患者其28d的短期预后较好（P〈0．01）。结论外科术后危重患者外周血CD14^＋单核细胞HLA—DR的表达率较正常人降低;入ICU当天的单核细胞HLA—DR的表达率不能提示预后,而在治疗过程中,动态地观察外周血CD14^＋单核细胞HLA—DR的表达率才能对患者的预后作出正确的评估。     

放射复合伤口愈合中外周血淋巴细胞凋亡及其与愈合延迟的关系

目的研究放射复合伤口愈合中外周血淋巴细胞凋亡规律并探讨其与愈合延迟的关系.方法用原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡,碱磷酶免疫组织化学方法检测Bax、Bcl-2蛋白表达.结果创伤复合照射组动物白细胞数出现下降,伤后3 d降至最低,伤后5 d仍显著低于单伤组;伤后两组动物外周血淋巴细胞凋亡率均出现升高,然而在整个伤口愈合过程中,伤照组凋亡率始终高于单伤组;伤后不同时间淋巴细胞Bax蛋白出现升高,伤照组明显高于单伤组,而Bcl-2呈现相反的变化趋势.结论照射后外周血白细胞数的降低和淋巴细胞凋亡的增加是辐射延迟伤口愈合的重要原因;Bax和Bcl-2蛋白参与了淋巴细胞凋亡的调控.     

Low HLA-DR expression on CD14+ monocytes of burn victims with sepsis, and the effect of carbachol in vitro

This study aimed to investigate changes in the expression of human leukocyte antigen-DR (HLA-DR) on CD14⁺ monocytes in the peripheral blood of burn victims with delayed resuscitation in relation to the development of sepsis, and the effect of carbachol in vitro. The study population comprised 25 people with burns of at least 30% of total body surface area and delayed resuscitation, and 20 healthy volunteers as controls. Peripheral blood was collected on post-burn days 1, 3, 7, 14 and 28. When 7 participants developed sepsis, their peripheral blood was drawn on 2 consecutive days. Expression of HLA-DR on CD14⁺ monocytes in peripheral blood of burned participants was lower than that of controls, and fell further with the development of sepsis, when the rate and concentration of tumour necrosis factor-α (TNF-α) rose above those of controls and burned participants without sepsis. Expression of HLA-DR on CD14⁺ monocytes was negatively correlated with interleukin-10 (IL-10) levels on post-burn days 1, 7 and 28. In vitro, HLA-DR expression on monocytes also decreased with lipopolysaccharide (LPS) stimulation, but after treatment with carbachol, rose in a concentration-dependent manner. Thus expression of HLA-DR on CD14⁺ monocytes may be a useful parameter for monitoring the immune function of burn victims with and without sepsis. Carbachol significantly inhibited LPS-induced immunosuppression in human monocytes in vitro.     

延迟复苏对烫伤大鼠肠道淋巴细胞凋亡率的影响

目的：探讨延迟复苏对烫伤大鼠小肠Peyer氏结淋巴细胞（PPL）、固有层淋巴细胞（LPL）和上皮内淋巴细胞（IEL）凋亡率的影响。方法：Wistar大鼠30只,分为假伤对照组、立即复苏组（ER）和延迟复苏组（DR）。建立30%体表面积Ⅲ度烫伤合并延迟复苏模型。按Davies法分离、收集上述3种淋巴细胞,采用DNA片段百分率（ap%）反映其伤后细胞凋亡百分率变化。采用DNA凝胶电泳、TUNEL法和电镜观察3种淋巴细胞凋亡特征性改变。结果：两组PPL、LPL、IEL伤后ap%均显著高于伤前（P〈0.01）;伤后6h、12h,DR组PPLap%显著高于ER组（P〈0.05或P〈0.01）,其中LPL伤后12hap%高达56.26%。伤后12hDR组LPL、IELap%显著高于ER组（P〈0.01）。伤后6hLPL、IEL基因组DNA电泳均可见凋亡特征性梯形条带;伤后12hTUNEL法和电镜均观察到3种淋巴细胞典型的凋亡形态学改变。结论：烫伤延迟复苏后细胞凋亡是肠道淋巴细胞数量急剧减少的主要原因;可能是烫伤后肠道免疫功能抑制的重要机制之一。     

严重烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）CD14表达的变化

目的 探讨烧伤后早期腹腔Mφ CD14分子的动态变化。方法 采用小鼠20％TB-SAⅢ度烧伤模型，分离和培养小鼠腹腔Mφ，用免疫组织化学、RT—PCR和ELISA方法，观察了烧伤复苏组和延迟复苏组伤后24h内不同时间腹腔Mφ表达CD14和CD14 mRNA、分泌肿瘤坏死因子(TNF)和白介素-6(IL-6)的变化。结果 烧伤复苏组和延迟复苏组在伤后1h腹腔Mφ表达CD14和分泌TNFα、IL-6明显增加，这种改变在伤后24h内持续。结论烧伤能增加Mφ CD14 mRNA的表达，从而使Mφ易于被很低浓度内毒素(LPS)激活，Mφ的致敏和激活使其在伤后过度炎症反应的发生发展中起重要作用。     

Peripheral blood lymphocytes immunophenotype and serum concentration of soluble HLA class I in burn patients

The level of the soluble form of histocompatibility class I antigens, associated with beta(2)-microglobulin (sHLA-I) has been determined by an ELISA sandwich method in serum from burned patients (n=42) and healthy volunteers (n=30). The sHLA-I level was insignificantly increased in burn patients at the stage of burn shock (1284+/-324U/ml, mean+/-S.E.M.) and after day 28 postburn (1368+/-258U/ml) compared to volunteers (1150+/-90U/ml). At the same time a decrease of sHLA-I levels between 4 and 14 days (638+/-178U/ml) was determined (P<0.05). Increased levels of sHLA, though not significant, were detected in patients with TBSAB >70% in comparison to patients with TBSAB from 30 to 70% during burn shock (1493+/-528 and 1075+/-339U/ml, respectively). Expression of membranous HLA class I antigens (mHLA-I) in peripheral blood lymphocytes (PBLs) was assayed simultaneously by indirect immunofluorescence. The number of CD3(+), CD4(+), CD8(+), CD25(+), CD71(+) and CD26(+) lymphocytes was also evaluated. The expression of mHLA-I in PBLs was increased significantly in patients with TBSAB <70% at early postburn period. Daily monitoring showed that the relative numbers of CD25(+) and CD71(+) lymphocytes in patients varied greatly within short intervals of time during burn shock. The data obtained suggest that mHLA-I expression can reflect postburn lymphocyte activation. The serum content of sHLA-I does not depend on lymphocyte number or activated lymphocyte number in peripheral blood at burned patients.     

免疫调理对脓毒症免疫功能和预后的作用

目的：探讨免疫调理对改善脓毒症大鼠和患者免疫功能及预后所起的作用。
方法：（1）实验部分：将大鼠分为3组：假手术组、对照组和实验组,每组20只。后2组采用大鼠盲肠结扎穿孔的方法制备大鼠脓毒症模型,对照组接受抗生素治疗,实验组接受抗生素加免疫调理。制作模后分别在3,12,24,48 h采血。各组大鼠按时点进行淋巴细胞计数和测定CD4+,CD8+ T淋巴细胞和CD4/CD8比值;观察胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡情况,计算脓毒症大鼠的存活率。（1）临床部分：前瞻性分析70例符合脓毒症患者,随机分成对照组和观察组。对照组接受经典治疗,观察组采用经典治疗联合蛋白酶抑制剂和胸腺肽α1治疗（经典治疗+免疫调理）,免疫调理疗程为7 d,分别观察治疗前和治疗后1,3,7 d临床和相关免疫学指标。
结果：（1）实验部分：CLP脓毒症造模成功后,实验组淋巴细胞,CD4+T淋巴细胞水平,CD4/CD8值均显著高于对照组明显（P＜0.05）。对照组胸腺和脾脏的淋巴细胞凋亡指数比实验组明显增高（P＜0.05）。实验组72 h存活时间比对照组明显延长（P＜0.05）。（2）临床部分：观察组CD4+T淋巴细胞,淋巴细胞计数及CD14+单核细胞HLA-DR水平较对照组显著升高（P＜0.05）。对照组死亡20例,观察组死亡13例（P＜0.05）。
结论：免疫调理可使脓毒症大鼠免疫功能提高,降低胸腺和脾脏淋巴细胞的凋亡率,提高脓毒症大鼠的存活率。免疫调理可提高脓毒症患者免疫调理的免疫功能,改善其免疫麻痹,延长近期生存率。     

The effect of rapid resuscitation upon cardiac index following thermal trauma in a porcine model

Minipigs were divided into four experimental groups: nonburned control (C); burn, minimal resuscitation (MR); burn, standard resuscitation (SR); and burn, rapid resuscitation (RR). Resuscitation was begun 30 minutes postburn and hemodynamics were measured through 24 hours postburn. At 30 minutes postburn, the three burn groups demonstrated a significant decrease in cardiac index % (CI%). At 1 1/2 hours postburn, the RR group CI% was significantly greater than for the SR group and not significantly different from that of controls. At 2 hours postburn, fluid was abruptly decreased in the RR group and the salutary effect on CI promptly dissipated. In this model, the early decrement in CI following thermal injury is responsive to rapid resuscitation, concluding that the etiology of decreased CI following thermal trauma is at least partially due to inadequate volumes of fluid administration in the early postburn period.     

烧伤患者并发高钠血症的原因及其防治措施探讨

目的　探讨烧伤患者并发高钠血症的原因及其防治措施。　方法　将 2 8例并发高钠血症的烧伤患者按是否发生脓毒症分为感染组和非感染组 ,比较两组的病因、临床特点及治疗结果。结果　非感染组高钠血症发生在伤后 3.1d,其主要诱因是早期复苏不当 ,主要表现为精神兴奋 ;血糖、血尿素氮明显低于感染组 (P <0.0 1),治愈率为 94 .12 %。感染组高钠血症发生在伤后 7.2d,其主要诱因是严重感染 ,主要表现为精神抑郁 ,治愈率为 9.0 9%。　结论　区别不同原因所致的高钠血症并采取相应防治措施 ,可降低患者死亡率。     

Immunotherapy improves immune homeostasis and increases survival rate of septic patients

Objective: To investigate the efficacy of immunotherapy on septic patients with Ulinastatin plus Thymosin-α1. Methods: Seventy postoperative septic patients were divided into two groups at random: the immunotherapy group (n=36) and the conventional therapy group (n=34). Patients in the immunotherapy group received intravenous Ulinastatin of 200 000 U, 3 times per day for 3 days, Ulinastatin of 100 000 U, 3 times per day for 4 days, and subcutaneous injection of Thymosin-α1 of 1.6 mg, twice per day for 3 days, then once per day for 4 days. While conventional therapies such as antibiotics and fluid resuscitation were undertaken in both groups. The expression levels of serum tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin- 10 (IL-10), IgG, C3, T lymphocyte subsets, CD14+ monocyte human leukocyte antigen (locus) DR (HLA-DR) and patients' 28-day survival rate of the two groups were observed and evaluated. Results: The survival rate was significantly higher in the immunotherapy group (63.9%; 23/36) compared with the conventional therapy group (41.2%; 14/34). The serum TNF-α levels [(1.38±0.50) ng/ml in the immunotherapy group vs (1.88±0.53) ng/ml in the conventional group, P<0.05] and the serum IL- 10 levels [(217.52±15.71) ng/ml vs (101.53±16.57) ng/ml, P<0.05] were significantly different between the two groups. The serum IgG levels in the immunotherapy group [(17.65±6.81) g/L] were significantly higher than in the conventional group [(11.94±5.32) g/L]. There were also significant differences in the expression levels of CD4+ T lymphocyte (35%±13% in the immunotherapy group vs 21%±7% in the conventional group, P<0.05) and CD14+ monocyte HLA-DR (50%±5% in the former vs 35%±4% in the latter, P<0.05). Conclusions: Immunotherapy with Ulinastatin plus Thymosin-α1 can enhance the inflammatory response, improve the immune homeostasis, and increase the survival rate of septic patients.