莲子心提取物毛细管电泳指纹图谱研究

目的建立中药材莲子心提取物毛细管电泳（HPCE）指纹图谱。 方法制备莲心碱对照品溶液和10批莲子心提取物供试品溶液。采用毛细管区带电泳模式压力进样,分析10批莲子心提取物供试品所有的峰数、峰值和峰位等参数以及色谱图,建立HPCE指纹图谱,并利用“中药指纹图谱相似度评价系统（2004A）”软件分析其指纹图谱的相似度。 结果 选定15个共有峰作为构成莲子心提取物指纹图谱稳定的特征峰,建立HPCE指纹图谱。相似度评价分析结果表明10批莲子心提取物HPCE指纹图谱相似度均在0．900～1．000之间,表明其指纹图谱整体面貌基本一致。 结论 建立的莲子心提取物HPCE指纹图谱稳定、可靠,可作为莲子心提取物的特征指纹图谱,为莲子心提取物的定性鉴别及内在质量评价提供了新的参考依据。     

中药色谱指纹图谱在中药质量评价中的应用

中药指纹图谱作为中药鉴定与质量控制的重要工具,正受到越来越广泛的关注。在诸多研究方法中,色谱法因其本身特点逐渐成为主流。从对样本数据的预处理,到中药色谱指纹图谱的建立以及指纹图谱的可视化,综合介绍了中药色谱指纹图谱技术,重点介绍了色谱指纹图谱的几种分析方法的特点及各自适用范围,可视化技术与指纹图谱技术的结合使分析更加直观方便,并对指纹图谱技术中遇到的问题进行讨论,就发展趋势予以展望。     

蛋白质指纹图谱技术在实验诊断与临床医学中的研究进展

蛋白质指纹图谱技术是近五年发展起来的实验室诊断新技术,它具有操作较简便、多样本检测、检测快速、灵敏性和特异性高等优点,是实验室诊断技术革命性的进展。蛋白质指纹图谱技术在医学领域中,主要用于多种疾病,如肿瘤的早期检测,对肿瘤早期检测的敏感性和特异性均在80%左右。以蛋白质指纹图谱技术为基础的免疫组质谱检测是在一个抗体组上同时捕获多个生物标志,并对捕获的变异或修饰的生物标志进行质谱精确分析。蛋白质指纹图谱技术及免疫组质谱检测技术特别对评估传统肿瘤标记物阴性的恶性肿瘤有意义。而且具有在分子或基因水平早期诊断的特点。蛋白质指纹图谱技术是一项发展前景非常好的诊断技术,具有广阔的临床应用前景。     

中药指纹图谱的开发应用进展

通常人们所说的指纹强调的是个体筹异，即个体特异性，因为每个人的指纹都不同。但中药指纹图谱强调的是同种药用植物的共同特征性，因此具有整体性。借此可以对不同种属药材进行鉴别。对于同种植物，对照样品与待测样品指纹图谱的相似性，可依据相似度来确定，不是完全相同，因此，中药指纹图谱也具有模糊性。借以鉴别真伪，评价原料药材，半成品和成品质量均一性和稳定性。其基本属性是“整体性”和“模糊性”。这一定义说明中药指纹图谱是从一个整体、全面、综合的角度对中药材进行鉴别。     

中药指纹图谱分析及其FPGA实现

目的:研究用于中药色谱指纹图谱相似性分析的算法及其在FPGA上实现硬化.方法:液相色谱指纹图谱的原始数据存在很多种漂移和数据干扰,在进行相似度分析之前必须去除这些干扰因素,我们使用带阻滤波消除原始信号中的噪声,使用遗传算法实现图谱间指纹峰的匹配,并采用相关系、夹角余玄和相关系数作为相似度判别的标准.上述算法均可移植到FPGA上,借助FPGA内部计算与操作全过程可完全并行化的能力,实现该算法的高速运算操作.结果:经相关领域专家检验,认为夹角余弦与相关系数的评价结果比较接近,欧氏距离测度则具有较好的综合评价能力.结论:用3种相似性测度计算不同批次丹参粉针注射液指纹图谱相似性的结果表明,夹角余弦测度更适于分析评价不同批次间药品质量的稳定性.整套算法能够无缝移植到FPGA硬件架构上,实现中药指纹图谱的现场分析,在中药炮制过程中实时分析炮制情况,指导中药炮制达到最优控制.     

广东岗梅药材的HPLC指纹图谱研究

目的用高效液相色谱法（HPLC）建立岗梅药材的指纹图谱。方法采用RP-HPLC方法,色谱柱为phenomenex-C18柱（250×4.60mm,5μm）,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱;流速：1.0ml/min;柱温：室温;检测波长为203nm。结果该方法可使岗梅药材中各成分较好分离,检测了不同来源10批岗梅药材,并根据检测结果确定了11个共有指纹峰,相似度较高,建立了岗梅HPLC指纹图谱共有模式。结论建立的HPLC指纹图谱准确、简便、可靠,为岗梅的质量控制提供更全面的信息。     

荧光PCR在植入前诊断中的应用

荧光ＰＣＲ（Ｆ－ＰＣＲ）已被用于单个细胞的性别、囊性纤维化的诊断和ＤＮＡ指纹图谱分析。Ｆ－ＰＣＲ也已用于等位基因的丢失和扩增的研究，这种现象在单个细胞分析中普遍存在。近来，Ｆ－ＰＣＲ手段已用于：①ＤＮＡ指纹图谱的改进；②三倍体的检测；③与其它技术的比...     

肿瘤细胞诱导T细胞下调表达腺苷脱氨酶

目的 蛋白质组学分析鉴定与肿瘤细胞共培养T细胞的表达差异蛋白.方法 双向电泳分离有/无肿瘤细胞共培养的T细胞蛋白,PDQuest软件分析筛选肿瘤细胞诱导表达异常的蛋白点,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF MS)对酶解消化样品进行肽质量指纹图谱(PMF)分析,结合数据库搜索鉴定蛋白质.结果 PDQuest分析有/无肿瘤细胞共培养的T细胞蛋白双向电泳图谱,70余个蛋白点表达水平差异显著,其中与肿瘤细胞共培养的T细胞有一明显表达下调的蛋白点,质谱分析结合数据库检索表明该蛋白点为腺苷脱氨酶.结论 肿瘤细胞诱导T细胞下调表达腺苷脱氨酶.     

安徽产山银花HPLC指纹图谱初步研究

目的建立安徽不同产地金银花HPLC色谱指纹图谱。方法以超声法制备供试液，采用高效液相色谱法，甲醇和0.05%磷酸为流动相，紫外检测波长327nm，柱温30℃，流速：0.8 ml/min。结果分析了10个批号不同产地的山银花药材，确定了4个共有峰，可作为其指纹特征。结论所建立的图谱具有稳定、重现的特点，为全面控制安徽不同产地山银花的质量提供了依据。     

基于WCX纳米磁珠的血清蛋白指纹图谱模型在大肠癌诊断中的应用

目的: 探讨蛋白指纹图谱技术筛选大肠癌(CRC)患者血清中可用于诊断的特异性标志物。方法: 采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清中的蛋白,ProteinChip PBS II-C型蛋白质芯片阅读仪检测绘制成蛋白指纹图谱。所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard 3.1分析之后,用Biomarker Patterns 软件识别最终用于诊断的蛋白标志物,并优化组合建立诊断模型。结果: 在大肠癌患者和对照组之间找到68个差异蛋白峰(P<0.01),其中质荷比(m/z)为2 870.7、3 084.0、9 180.5和13 748.8的蛋白峰可用于建立大肠癌的诊断模型。该诊断模型能很好地把大肠癌患者从正常人群中区分出来,其敏感性为92.85%(91/98),特异性为91.25%(73/80)。经双盲实验验证,该模型对大肠癌诊断的敏感性为86.95%(40/46),特异性为85.00%(34/40)。结论: 采用纳米磁性微球与蛋白质芯片阅读仪联用的蛋白指纹图谱技术可以检测大肠癌患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较高的大肠癌诊断模型。     

难治性癫(痫)患者血清蛋白质指纹图谱及与预后的临床研究

目的:探讨初发癫(痫)患者与难治性癫(痫)患者血清中蛋白质指纹图谱的差异性,并观察其与难治性癫(痫)患者预后的关系.方法:对我院神经内科门诊2008年10月至2010年10月就诊的1653例癫(痫)患者,根据国际抗癫(痫)联盟(ILAE)癫(痫)发作的分类方案,结合中华医学会《临床诊疗指南-癫(痫)病分册》癫(痫)的诊断原则和方法,筛选初发癫(痫)患者20例,难治性癫(痫)患者20例,抽取患者血清标本,用美国Ciphergen Biosystem公司的蛋白质指纹仪及WCX2蛋白质芯片,经蛋白质指纹图谱技术(SEL-DI-TOF-MS)检测两组患者血清的蛋白指纹图谱,比较其间的差异性;并对难治性癫(痫)的蛋白指纹图谱与其预后的相关性进行分析.结果:在指纹图上,质荷比(M/Z)为11100Da至11900Da之间出现一峰簇样指纹标志,且蛋白峰值大于5％.该质谱峰簇丰度在难治性癫(痫)患者中明显高于初发癫(痫)患者(P＜0.01);采用Spearman相关分析难治性癫(痫)患者质谱峰簇丰度与其预后呈负相关(r=-0.528,P＜0.01),难治性癫痫预后不良者的丰度明显高于预后良好者(P＜0.01).结论:难治性癫(痫)患者血清中有特异性质谱峰簇,且与难治性癫(痫)患者的预后密切相关,提示其可作为难治性癫(痫)病情和预后评估的重要指标,具有一定的临床指导意义.     

癌胚抗原阴性的结、直肠癌检测和结直肠癌预后相关生物标记

目的探讨结直肠癌的发生、发展过程中患者血清质谱多肽蛋白图谱的变化,筛选与结直肠癌预后及癌胚抗原(CEA)阴性检测相关的肿瘤标记分子。方法用蛋白指纹图谱技术检测结直肠癌,结直肠管状腺瘤患者和健康者血清质谱多肽蛋白图谱。结果初步筛选出对结直肠癌有代表性的7个差异蛋白;2个与其淋巴结转移相关的差异蛋白;4个与其远处转移相关的差异蛋白;3个在其根治性切除后表达下降的差异蛋白;而由3398·3u、5477·1u和8453·9u组成的诊断模型对CEA阴性表达结直肠癌的阳性检测率为100%。结论蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记差异蛋白,这对结直肠癌预后判断、CEA阴性的结直肠癌检测和改变结直肠癌的进程具有重要意义。     

现代色谱光谱分析技术在金银花研究中的应用进展

金银花的现代研究涉及到色谱、光谱、质谱及指纹图谱等多种分析方法。我们就近5年国内外现代分析技术在金银花中的应用研究做一综述。     

H22肝癌小鼠血清差异蛋白质的质谱鉴定

目的 分析正常小鼠和H22肝癌小鼠血清之间差异表达的蛋白并对部分差异蛋白进行鉴定分析,筛选可能与肝癌发生密切相关的蛋白质.方法 利用双向凝胶电泳技术（2-DE）与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）,分析正常组和肿瘤组筛选并鉴定部分差异表达的蛋白,再进行生物学分析.结果 通过2-DE图谱研究发现,与正常组相比,肿瘤组存在明显差异的蛋白质点.选择其中可能为关键功能蛋白的蛋白点进行质谱分析,获得肽指纹图谱（PMF）,运用Mascot软件查询NCBI数据库分析并鉴定得出其中2个蛋白：假尿苷合成酶和线粒体核糖体大亚基蛋白.结论 肝癌的发生机制与假尿苷合成酶和线粒体核糖体大亚基蛋白2个差异表达蛋白密切相关,其参与肝癌的发生发展.     

应用DNA指纹技术对胚胎组织进行亲子鉴定

目的　应用DNA指纹技术对强奸致孕案进行亲子鉴定。方法　分别对 6个案例所涉及的嫌疑犯、孕母的血和胎儿组织或药物流产绒毛提取了DNA ,应用Southern转移 ,辣根过氧化物酶标记的JL - 0 2多位点探针杂交 ,化学发光检测DNA指纹图。结果　通过DNA指纹图的判读和分析 ,5个案例认定父子关系 ,1例排除。结论　应用DNA指纹对强奸致孕案可以做出准确的结果。早孕药物流产的绒毛组织与中孕期的胎儿脑、肺、肌肉或胎盘组织提取的DNA ,均能得到清晰的DNA指纹图谱。对于已腐败组织 ,最好选用肌肉组织     

肺腺癌和癌旁组织蛋白质表达谱差异的研究

通过比较肺癌患者癌组织和癌旁组织的二维凝胶电泳图谱(two-dimensional electrophoresis,2DE),以寻找肺癌相关蛋白、肺癌患者癌组织和癌旁组织,采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)2DE分离总蛋白质,凝胶经银染显后,ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质并进行质谱鉴定获取肺癌相关蛋白信息。结果分析得到肺癌组织蛋白点709个,癌旁组织蛋白点722个,选择表达量差异达3倍以上的40个,进行胶内酶解,基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI TOF MS)获得肽质量指纹图谱(PMF),搜寻蛋白质数据库,得到7个肺癌标志物的候选蛋白,但这些差异蛋白点在肺癌发生发展中的作用需要进一步研究。     

采用SELDI-TOF质谱技术分析胃癌患者血清蛋白质谱的变化

目的：利用蛋白质芯片和生物信息学方法从胃癌患者血清中筛选标志蛋白质。方法：采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术（SELDI-TOF-MS）和Q10蛋白芯片对30例胃癌患者、30例胃炎患者、20例术后胃癌患者和40例健康者血清的蛋白质指纹图谱进行了检测,使用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的结果采用CIPHERGEN公司的Biomarker wizard和Biomarker Patterns System软件分析。结果：胃癌患者与健康者血清蛋白质指纹图谱相比有18个显著差异蛋白质,其中8个蛋白质在患者血清中高表达,10个蛋白质在患者血清中低表达。三个蛋白质（5907Da、5080Da、8691Da）组合构建诊断模型可鉴别胃癌与健康者。胃癌患者与胃炎患者血清蛋白质指纹图谱相比有13个显著差异蛋白质,其中7个蛋白质在胃癌患者血清中高表达,6个蛋白质在胃癌患者血清中低表达。二个蛋白质（5907Da、6436Da）组合构建诊断模型可鉴别胃癌与胃炎患者。结论：实验证明利用蛋白质组学和生物信息学方法可以从血清中筛选出胃癌相关的标志蛋白质,可见蛋白质芯片技术对于发现和筛选血清中的胃癌标志蛋白质及疗效判断是一种有效、快速的工具。     

慢性肾小球肾炎肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳分析

目的初步观察慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨肾阴虚证的发生机制奠定基础。方法采用双向凝胶电泳（2-DE）技术分离慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者、肾阳虚证患者和正常人的血浆总蛋白,银染显色;PDQest软件对凝胶图像进行定性定量差异表达分析;从中选取差异表达蛋白质斑点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析,获取肽质量指纹图谱（PMF）;通过Mscot-Wizard软件进行数据库搜索,鉴定蛋白质。结果与正常人和慢性肾小球肾炎肾阳虚证患者相比,在慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中绝对高表达的蛋白质斑点有80个,绝对低表达的蛋白质斑点有42个;定性差异表达分析发现,在慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中特异出现的蛋白质斑点有2个,缺失的蛋白质斑点有13个。结论同病异证患者血浆中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学技术有望对中医证候的发生机制进行阐释。     

体神经-内脏神经吻合后异类神经再生过程的蛋白质组学分析

目的 使用蛋白质组研究技术研究大鼠体神经-内脏神经吻合术后异类神经再生过程中不同时段蛋白质表达的变化.方法 建立大鼠体神经-内脏神经吻合动物模型,分别于术后7d、14d、28d取出再生的异类神经与对侧正常的体神经,应用双向电泳技术对提取物进行分析,经图像分析系统识别差异蛋白质,用MALDI-TOF-MS对差异表达的蛋白质进行鉴定分析,获得的肽质指纹图谱进入数据库中检索.结果质谱分析识别了25种具不同功能的蛋白质,其中包括神经髓鞘中的成分、急性期炎性因子、神经细胞骨架蛋白和脂类代谢蛋白等.这些蛋白可能在Wallerian变性、轴突再生和再髓鞘化中起作用.结论获得了再生异类神经时序性双向电泳凝胶图谱,成功鉴定25个与异类神经再生相关的蛋白质,揭示了施万细胞和巨噬细胞在异类神经再生过程中所起的重要作用.     

结核分枝杆菌耐药株和敏感株菌体碱性蛋白的比较蛋白质组学研究

目的研究结核分枝杆菌耐多药菌株与敏感菌株菌体碱性蛋白的蛋白质表达差异。方法运用双向电泳技术（2-DE）比较8株耐多药菌株与9株敏感菌株的菌体碱性蛋白表达图谱差异，差异蛋白进行胶内酶切，肽混合物使用基质辅助激光解吸一电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF-MS）进行质谱分析，将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果比较发现重复性较好的差异蛋白质斑点10个，获得5个明确的肽质量指纹谱，鉴定5个蛋白分别为：NADH-CoQ氧化还原酶B链（NuoB，Rv3146）、乙酰羟酸合成酶小亚基（HvN，Rv3002c）以及3个假定蛋白，分别由Rv2159c、Rv0068、Rv0992编码。结论上述蛋白的鉴定在深入研究结核分枝杆菌耐药形成机制，筛选具有潜在价值的结核药物靶位和耐多药结核病诊断的分子标志物方面具有参考价值。