硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990生长抑制作用的体外研究

目的 观察硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990增殖、凋亡的影响,探讨硼替佐米杀伤癌细胞的可能机制.方法 应用1、10、50、100、500 nmol/L及1、10 μmol/L的硼替佐米干预BxPC3、SW1990细胞,以硼替佐米未干预的细胞作为对照组.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR法检测Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xl、survivin mRNA表达;蛋白质印迹法检测pro-caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2、surviving蛋白表达.结果 大于50 nmol/L的硼替佐米干预胰腺癌BxPC3、SW1990细胞时,呈浓度及时间依赖性抑制细胞的增殖,其中硼替佐米对BxPC3细胞的生长抑制作用显著大于对SW1990细胞的作用,两者差异有统计学意义（P值均＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预组BxPC3和SW1990细胞凋亡率分别为（22.56±4.23）％和（（12.71±2.23）％,显著高于对照组的（2.15±0.47）％和（2.32±0.54）％（P值均＜0.05）,且BxPC3细胞的凋亡率显著高于SW1990细胞（P＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预48 h后BxPC3和SW1990细胞的Bak mRNA表达无显著变化,Bax mRNA及蛋白表达显著增加（P值均＜0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-xl mRNA表达均减少（P值均＜0.05）.survivin mRNA和蛋白表达在BxPC3细胞中均减少,而在SW1990细胞中均增加（P值均＜0.05）.2株细胞的pro-caspase-3蛋白表达减少,而cleaved-caspase-3蛋白表达增加（P值均＜0.05）.结论 硼替佐米可抑制胰腺癌细胞BxPC3、SW1990的增殖、诱导凋亡,对BxPC3细胞的作用高于对SW1990细胞,其机制可能与激活线粒体内源性凋亡途径及survivin参与的肿瘤耐药相关.     

硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响

目的: 观察硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响.方法: 不同浓度梯度(12.5-200 nmol/L)的硼替佐米作用于HCT8细胞后, 用MTT检测细胞增殖抑制作用; 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h后, 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率; Western blot检测E-cadherin、β-catenin、cyclinD1和NF-κB表达.结果: 硼替佐米对HCT8细胞的增殖抑制作用有时间和浓度的依赖性. 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h诱导细胞的凋亡, 凋亡率为12.3%,显著高于对照组( P<0.05), 上调了E-cadherin和β-catenin蛋白的表达, 下降了NF-κB和cyclinD1蛋白的表达.结论: 硼替佐米可以抑制HCT8细胞的增殖,诱导细胞凋亡. 抑制NF-κB通路的激活有可能为其作用机制之一; 并有可能增加细胞之间的黏附, 降低肿瘤的远处转移.     

硼替佐米联合二硫化二砷诱导慢性粒细胞白血病细胞凋亡机制研究

目的:探讨硼替佐米(bortezomib)与二硫化二砷(As2S2)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562和对伊马替尼耐药的同源细胞株K562R的增殖抑制、诱导凋亡及其作用机制。方法:应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)增殖抑制实验、瑞氏染色细胞形态观察法、膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)流式细胞仪检测硼替佐米和As2S2单独或联合作用于CML细胞株的增殖抑制和凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测药物对Bcr-Abl蛋白以及凋亡相关蛋白的影响;反转录PCR(RT-PCR)检测Bcr-Abl mRNA的表达。结果:硼替佐米联合As2S2能有效抑制CML细胞增殖,6nmol/L硼替佐米和3μmol/L As2S2联合作用于K562细胞48h,细胞生长抑制率达(76.4±3.9)%以上,坏死和凋亡细胞比例达54.0%,与单药作用(硼替佐米13.9%;As2S2 8.2%)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。药物联合作用通过线粒体途径协同诱导CML细胞凋亡,并使K562和K562R细胞的Bcr-Abl蛋白表达和蛋白磷酸化水平下降。结论:硼替佐米联合As2S2有效抑制K562细胞增殖和诱导凋亡,提高浓度后对K562R细胞也产生类似的作用,有增殖抑制和诱导凋亡作用,两者联合应用可能具有克服伊马替尼耐药的作用。     

硼替佐米联合三氧化二砷诱导急性髓性白血病细胞凋亡的体内外实验研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米单用及其与三氧化二砷(As2O3)联合作用,在体内外对急性髓性白血病HL60细胞的凋亡诱导作用。方法:MTT法检测细胞增殖抑制;Hoechst33342染色形态学观察证实细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;建立移植瘤小鼠模型观察体内抑瘤作用,健康小鼠处理后观察毒副作用。结果:硼替佐米单用时对HL60细胞有明显的增殖抑制作用及凋亡诱导作用,As2O3与硼替佐米联合应用后对细胞的凋亡诱导明显增强。体内研究显示As2O3或硼替佐米单用均对小鼠HL60移植瘤生长有一定的抑制作用,二者联合应用能明显促进肿瘤体积缩小,但是毒副作用无明显增加。结论:硼替佐米单用在体内外均能抑制HL60细胞增殖,诱导凋亡,与As2O3联合应用后在体内外对HL60细胞增殖抑制与诱导凋亡作用均增强,但毒副作用无明显相加效应。     

硼替佐米对高三尖杉酯碱耐药细胞株K562的作用及其机制

目的:探究硼替佐米对高三尖杉酯碱耐药细胞株K562(K562/HHT)的作用及其机制。方法:采用浓度梯度增加法建立K562/HHT细胞;CCK-8法检测不同浓度硼替佐米分别作用K562和K562/HHT细胞24 h、48 h后对细胞增殖抑制的作用;流式细胞术分别检测硼替佐米单独或联合高三尖杉酯碱作用于K562/HHT细胞48 h后的细胞凋亡;Western blotting技术检测硼替佐米单独或联合高三尖杉酯碱作用K562/HHT细胞48 h后BCL-2、P170蛋白表达的变化。结果:成功建立K562/HHT细胞,24 h耐药倍数为678.31倍,48 h耐药倍数为787.31倍。硼替佐米对K562/HHT细胞的增殖抑制呈浓度、时间依赖性(P0.05);低浓度硼替佐米能够逆转K562/HHT的耐药性,24 h逆转倍数为2.89倍,48 h逆转倍数为3.85倍。低浓度硼替佐米联合高三尖杉酯碱能够增加K562/HHT的凋亡;低浓度硼替佐米能够抑制K562/HHT细胞P170蛋白的表达,但不影响BCL-2的表达。结论:低浓度硼替佐米可以逆转K562/HHT细胞对高三尖杉酯碱的耐药,增加K562/HHT的化疗敏感性,其机制可能与下调耐药蛋白P170相关。     

硼替佐米抑制PI3K/Akt通路增强胃癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性

目的:研究硼替佐米对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响, 探讨PI3K/Akt通路在TRAIL诱导凋亡中的作用.方法:不同浓度的TRAIL和/或硼替佐米作用于人胃癌细胞系MGC803细胞, MTT法检测细胞存活率, 流式细胞术PI染色检测细胞凋亡.Western blot法检测caspase裂解及p-Akt表达水平的变化.结果:50 nmol/L硼替佐米预处理细胞2 h, 之后予100 μg/L TRAIL继续作用24 h, 细胞存活率明显低于TRAIL单独处理组(35.1%±2.7% vs71.0%±4.3%, P <0.01); 细胞凋亡率明显高于TRAIL单药组(31.3%±2.0% vs 8.2%±0.8%,P <0.01). 20 nmol/L硼替佐米预处理未能增强细胞对TRAIL的敏感性. 进一步研究发现,TRAIL可活化PI3K/Akt通路, 硼替佐米预处理可阻止PI3K/Akt通路的活化, 进而增强细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性.结论:硼替佐米通过抑制TRAIL诱导的PI3K/Ak t通路活化, 增强胃癌MGC803细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性.     

溶酶体抑制剂氯喹增加非小细胞肺癌细胞对硼替佐米的敏感性

目的 探讨溶酶体抑制剂氯喹对非小细胞肺癌细胞对硼替佐米的敏感性的影响.方法 体外培养人非小细胞肺癌H157细胞,利用四甲基偶氮唑蓝方法检测硼替佐米以及联合氯喹对细胞存活率的影响,利用流式细胞术和Western blot检测细胞凋亡的变化.结果 不同浓度硼替佐米可以引起H157细胞存活率的明显下降,同时增加细胞凋亡率,诱导细胞发生明显的凋亡.联合溶酶体抑制剂氯喹可以进一步增加硼替佐米引起的细胞存活率的下降,提高H157细胞对硼替佐米的敏感性;流式细胞术和Western blot结果显示,联合应用可以进一步增加细胞的凋亡率和凋亡的发生.结论 联合溶酶体抑制剂氯喹可以增加非小细胞肺癌细胞对硼替佐米的敏感性,联合用药可能提高肺癌的治疗效果.     

亚砷酸联合硼替佐米对肝癌细胞系BEL-7402的作用

目的:探索亚砷酸(As2O3)对BEL-7402的作用,研究其与硼替佐米联合的化疗效果.方法:As2O3不同浓度及作用时间处理细胞,或与硼替佐米联合作用,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测增殖,流式AnnexinⅤ-PI双染法检测凋亡,Westernblot及EMSA法检测NF-κB活性.结果:细胞形态及生长抑制率随亚砷酸作用时间及浓度变化而变化,呈时间和浓度依赖性,细胞凋亡率随时间增加而提高(3-48h:5.23%±0.55%,5.24%±0.28%,4.92%±0.91%,4.73%±0.83%,17.54%±1.49%),双药联合作用时,NF-κB活性受到抑制,细胞凋亡率也提升(24h:8.41%±0.78%).结论:As2O3对BEL-7402有明显抑制作用;联合硼替佐米作用,可以增强肿瘤细胞对药物的敏感性,提高肿瘤治疗的效果.     

吴茱萸碱诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的实验研究

目的 探讨吴茱萸碱诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的不同机制。方法 应用MTT法检测吴茱萸碱对PC-3细胞生长的抑制作用,Western blot法检测吴茱萸碱诱导PC-3细胞凋亡的信号通路。结果 吴茱萸碱（≥1μmol/L）明显抑制PC-3细胞生长,吴茱萸碱作用24 h后,caspase蛋白酶凋亡通路被激活,caspase-3和caspase-9的表达增加,同时bcl-2蛋白表达减少而bax蛋白表达增加。结论 吴茱萸碱对前列腺癌PC-3细胞主要是通过激活caspase通路及下调bcl-2表达和增加bax表达等信号通路诱导细胞凋亡。     

二苯乙烯苷通过核因子κB信号通路抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的 研究二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用,探讨二苯乙烯苷是否通过核因子κB信号通路调节凋亡相关基因的表达来抑制细胞凋亡.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、过氧化氢组和二苯乙烯苷组,采用显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测核因子κB p65、IκB、bcl-2蛋白的表达.结果 过氧化氢能显著抑制内皮细胞增殖,增加细胞凋亡率;并增加核因子κB p65蛋白的表达,降低bcl-2和IκB蛋白的表达.二苯乙烯苷预处理后显著增加氧化损伤内皮细胞的增殖率,并降低细胞凋亡率;与过氧化氢组相比,二苯乙烯苷组核因子κB p65蛋白的表达显著降低,bcl-2和IκB蛋白的表达显著升高(P<0.01).结论 二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与其抑制核因子κB/ IκB信号通路并上调bcl-2蛋白的表达有关.     

甘草甜素对人食管癌细胞ECA109的影响及机制

目的探讨甘草甜素对人食管癌细胞ECA109增殖、周期和凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用甘草甜素处理的人食管癌细胞株ECA109细胞设定为实验组,甘草甜素未处理的细胞设定为对照组。采用CCK8法检测甘草甜素对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的周期与凋亡情况,并用RT-PCR与Western印迹检测细胞中bax,bcl-2及p53 mRNA和蛋白表达水平。结果随着甘草甜素处理时间的延长和处理浓度的增加,甘草甜素对食管癌细胞增殖的抑制作用逐渐增加,具有时间剂量依赖性。流式细胞仪检测提示甘草甜素能够诱导细胞的凋亡,实验组的细胞凋亡比例显著高于对照组(P<0.05)。同时甘草甜素能够将细胞阻滞在G1期,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。甘草甜素处理后,细胞中bax,p53 mRNA与蛋白的表达水平明显增加(P<0.05),而bcl-2 mRNA与蛋白的表达明显降低(P<0.05),并且bax/bcl-2的比值增加(P<0.05)。结论甘草甜素能够延长细胞G1期时间而抑制细胞增殖,促进细胞的凋亡,其机制可能与调控bax,bcl-2及p53多种凋亡相关基因的表达有关。     

钯配合物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用及机制

目的 探讨钯配合物(PBIPS)对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制作用及其机制.方法 MTT法检测PBIPS对MCF-7的细胞毒性,荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术(FCM)检测MCF-7细胞的凋亡率;Western-blotting检测不同浓度PBIPS作用48 h凋亡蛋白survivin 、caspase-3及bcl-2和bax的表达情况.结果 PBIPS可以时间和剂量依赖性地抑制MCF-7细胞的生长;与对照组比较,PBIPS不同浓度剂量组AO/EB荧光染色出现典型的凋亡形态学改变;FCM检测表明MCF-7细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P＜0.01),且呈时间剂量依赖性;Western blotting显示与对照组相比,各实验组PBIPS可显著下调MCF-7细胞survivin和bcl-2的表达(P＜0.01),而caspase-3和bax的表达显著增加(P＜0.01).结论 PBIPS能明显诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与改变凋亡相关基因survivin、bcl-2、caspase-3及bax的表达有关.     

舒林酸诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的研究

目的 探讨舒林酸诱导人胃癌BGC-823细胞株凋亡的作用及其机制。方法将舒林酸作用于人胃癌BGC-823细胞，并设置不同的作用浓度和作用时间，应用流式细胞术、TUNEL法检测胃癌细胞的凋亡率；免疫组化（S-P）法检测凋亡基因蛋白bcl-2、Sru—vivin的表达以及环氧合酶-2（COX-2）蛋白的表达情况。结果 流式细胞仪检测出凋亡峰；其凋亡检测率及TUNEL法检测的细胞凋亡率均高于对照组（P〈0.05）；免疫组化结果显示凋亡基因蛋白bcl-2、survivin等在胃癌细胞表达下降，COX-2蛋白的表达阳性率也显著低于对照组，均呈时间和剂量依赖性（P〈O.05）。结论舒林酸可诱导胃癌BGC-823细胞凋亡，其机制与抑制凋亡抑制基因bcl-2和survivin的表达及下凋COX-2蛋白的表达有关。     

鹅脱氧胆酸衍生物HS-1200对肝肿瘤细胞株凋亡及增殖的影响

目的探讨鹅脱氧胆酸衍生物HS-1200诱导肝肿瘤细胞株凋亡及抑制增殖的作用及机制。方法分别用40、60及80p-M的HS-1200作用于肝肿瘤细胞株BEL7402，于作用后12、24及36h采用MTT检测细胞活性，流式细胞术、DNA梯状条带、荧光显微镜检测细胞凋亡，Western—blot法检测bcl-2、bax、细胞色素C及caspase-3的表达。结果HS-1200可有效地抑制BEL7402生长，其作用随药物浓度提高和作用时间延长而增强，呈一定的剂量、时间依赖性；FCM结果表明，随作用浓度和作用时间延长，凋亡率显著增加，有显著性差异（P〈0．05）；Ho-echst33258染色结果显示细胞呈凋亡形态学改变，凝胶电泳显示典型的凋亡梯形条带，Westernblot结果显示为HS-1200可提升bax、细胞色素C及caspase-3的表达，降低bcl-2的蛋白表达水平。结论HS-1200对BEL7402有显著的抑制增殖及诱导凋亡的作用，其机理可能为提升bax、细胞色素C及caspase-3的表达，降低bcl-2的表达；HS-1200可能是一种有效的治疗肝癌的化疗药物。     

蟾毒灵诱导入肝癌细胞HepG2凋亡的作用及机制

目的:探讨蟾毒灵对人肝癌细胞系HepG2的凋亡诱导作用及其相关机制.方法:采用Annexin V-FITC/PI标记方法,观察蟾毒灵对HepG2细胞的凋亡诱导效应;用Western blot方法检测蟾毒灵对细胞凋亡相关蛋白及信号通路的影响.结果:①蟾毒灵能够诱导HepG2细胞凋亡.②蟾毒灵能够上调bax蛋白并下调bcl-2蛋白的表达水平.③蟾毒灵作用于HepG2细胞后,能够抑制PKB/Akt蛋白的磷酸化但促进JNK1/2的磷酸化.结论:蟾毒灵能够诱导HepG2细胞凋亡,该作用可能与其改变凋亡相关蛋白的表达水平和增殖相关信号通路的活化状态有关.     

三乙酰白藜芦醇对非小细胞肺癌A549细胞增殖及STAT3凋亡通路的影响

目的 研究三乙酰白藜芦醇(TRES)对非小细胞肺癌A549细胞增殖及信号转导与转录激活因子3 (STAT3)凋亡通路的影响.方法 采用MTS法检测TRES对A549细胞抗增殖活性,流式细胞术检测TRES对A549细胞凋亡作用,Western blot法检测STAT3凋亡通路蛋白表达以及STAT3细胞核转移情况.结果 TRES可以随剂量和处理时间的增加抑制A549细胞的增殖,而且可以诱导A549细胞的凋亡.TRES降低了A549细胞中p-STAT3以及STAT3凋亡通路中抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1的表达,而且抑制了p-STAT3在A549细胞中由细胞质向细胞核的转移.结论 TRES可以抑制A549细胞的增殖,可以通过影响STAT3通路诱导A549细胞的凋亡.     

硼替佐米对小鼠骨髓树突状细胞的免疫调节作用及其机制探讨

目的探讨硼替佐米对小鼠骨髓树突状细胞(DC)的免疫调节作用及其机制。方法体外在粒—巨噬细胞集落刺激因子和IL-4条件下,采用2、10、50 nmol/L硼替佐米处理骨髓DC,CCK-8法检测硼替佐米对DC的抑制率,流式细胞术检测协同共刺激分子CD40、CD80、CD86及MHCⅡ类抗原表达,ELISA法检测DC培养上清中TNF-α、IL-12的水平。将经过不同浓度硼替佐米处理后的DC与异基因小鼠脾细胞共育,3H-胸腺嘧啶核苷掺入法检测硼替佐米处理后DC对异基因淋巴细胞增殖的影响,同时检测混合淋巴反应体系培养上清中IL-2、IFN-γ和TNF-α表达。电泳迁移率分析法检测经过不同浓度硼替佐米预处理的DC的NF-κB入核活性。结果经过不同浓度硼替佐米处理的DC在LPS刺激后,CD40、CD80、CD86及MHCⅡ类抗原表达下调,呈现明显的剂量依赖性;培养上清中TNF-α、IL-12水平明显降低,亦呈现剂量依赖性(P均<0.05)。DC在经不同浓度硼替佐米处理后,其激活异基因淋巴细胞增殖的能力随着硼替佐米浓度的增高而逐渐减弱,异基因淋巴细胞分泌TNF-α和INF-γ量逐渐减少,而IL-2的水平并无明显变化。经过硼替佐米预处理的未成熟DC在LPS刺激条件下NF-κB入核量减少,并且呈现出浓度依赖性(P均<0.05)。结论硼替佐米可能通过抑制NF-κB的入核活性导致小鼠DC成熟受到抑制,继而抗原递呈能力下调,激活同种异基因淋巴细胞增殖的能力减弱。     

白藜芦醇对BGC-823胃癌细胞株增殖抑制作用的体外研究

目的研究白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞增殖抑制的影响及其可能的机制。方法体外培养胃癌BGC-823细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测白藜芦醇对BGC-823细胞的增殖抑制情况,采用RT-PCR方法检测BGC-823细胞中bax和bcl-2 mRNA的表达情况及蛋白免疫印迹(Western blotting)方法检测BGC-823细胞中bax和bcl-2蛋白表达情况。结果白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞的增殖有明显的抑制作用,并且在一定浓度范围内,随着浓度的增加,抑制作用逐渐加强;白藜芦醇能明显上调BGC-823细胞中bax蛋白的表达,下调细胞中bcl-2蛋白的表达,并且使BGC-823细胞中bax mRNA的表达增强,bcl-2 mRNA的表达降低。结论白藜芦醇能够抑制胃癌细胞BGC-823的增殖,其抑制机制可能与白藜芦醇增强胃癌BGC-823细胞中bax的表达及降低bcl-2的表达有关。     

蒺藜皂苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响

目的 探讨蒺藜皂苷(STT)对体外培养的卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及机制.方法 选择对数生长的卵巢癌细胞株SKOV3分为空白对照组,实验组加STr.采用MTr法检测细胞活性,流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3肿瘤细胞凋亡率及细胞周期变化;应用免疫组化检测SKOV3 Bcl-2和Bax蛋白表达变化.结果 与对照组相比,实验组对卵巢癌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P＜0.05).细胞周期分析显示,实验组使卵巢癌细胞的S期细胞比例减小,G1期细胞比例增大(P＜0.05).STr能够降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),增加Bax蛋白表达(P＜0.01).结论 STT能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,其机制可能与细胞周期发生停滞有关,并通过影响细胞周期及下调Bcl-2蛋白和增加Bax蛋白的表达而诱导细胞凋亡.     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米对胃癌SGC7901细胞的抗肿瘤作用及其机制

目的:研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米对胃癌SGC7901细胞凋亡及细胞周期分布的影响,并进一步探讨其作用机制.方法:1-500 nmol/L的硼替佐米作用于人胃癌SGC7901细胞24-48 h,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术PI染色检测细胞凋亡.Western blot检测多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)和casp...