猕猴桃根提取物抗肝细胞癌作用及相关机制研究

目的探讨猕猴桃根提取物抗肝细胞癌(HCC)的作用及相关机制。方法选取HCC细胞系HepG2和HUH7,根据猕猴桃根浓度分为0μg/ml(对照组)、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml组。采用噻唑蓝(MTT)和克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验研究细胞的侵袭和转移;Real-time PCR和Western blot检测相关基因和蛋白表达。结果猕猴桃根对HCC增殖的抑制作用存在剂量和时间依赖性。克隆实验发现,与对照组比较,不同浓度猕猴桃根抑制HepG2和HUH7细胞增殖,且随浓度的增加,抑制作用逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果发现,与对照组比较,50μg/ml、100μg/ml猕猴桃根促进细胞由G1期进入S期,抑制DNA复制,促进HepG2和HUH7细胞凋亡,差异均有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果发现,与对照组比较,猕猴桃根显著促进HepG2和HUH7细胞迁移,具有剂量依懒性(P<0.05)。猕猴桃根促进Akt基因和蛋白表达,抑制p-Akt表达,抑制Akt磷酸化比例,促进PTEN基因和蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论猕猴桃根通过p-Akt/PTEN调控HCC细胞增殖、周期停滞及细胞凋亡。     

微小核糖核酸-205靶向调控血管内皮生长因子-A对肝癌细胞的影响

【摘要】 目的 探讨微小核糖核酸（miR）- 205在肝细胞癌（HCC）中的作用及其与肝癌进展的关系，以及miR- 205是否通过靶向血管内皮细胞生长因子（VEGF）- A影响肝癌细胞增殖。方法 采用逆转录- 定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测miR- 205在HCC、相邻正常肝组织和肝癌细胞株HepG2、HuH- 7、SMMC- 7721、BEL- 7402、人正常肝细胞株L02中的表达。RT- qPCR检测转染miR- 205激动剂和空白对照的HepG2和HuH- 7细胞中miR- 205表达。Transwell和溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）法检测转染后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因检测VEGF- A是否为miR- 205直接作用靶标。VEGF- A siRNA敲低分析VEGF- A表达是否为miR- 205调控HCC细胞增殖、迁移和侵袭的关键介质。结果 miR- 205在HCC组织和肝癌细胞株中表达下调。miR- 205过表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。VEGF- A是HCC中miR- 205直接作用靶标，miR- 205通过靶向VEGF- A抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。 结论 miR- 205可通过下调VEGF- A表达抑制HCC生长、迁移和侵袭，这可能是未来HCC治疗的潜在靶点。     

活血化瘀药物对肝癌细胞HepG2的抑制作用及机制

目的观察活血化瘀中药在体外实验条件下对人肝癌细胞HepG2细胞增殖、迁移的影响，对纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）表达的影响，探讨活血化瘀药物对人肝癌细胞HepG2细胞的抑制作用与分子机制。方法培养HepG2细胞，将中药黄芪、复方当归、复方丹参、川芎嗪分别加入体外培养的肝癌细胞株HepG2细胞，应用MTS法检测其对人肝癌细胞HepG2细胞增殖的影响；应用细胞迁移实验观察其对HepG2细胞迁移的影响；应用RT—PCR方法检测对HepG2细胞PAI-1mRNA表达的影响，ELISA法检测对PAI-1表达的影响。结果活血化瘀中药黄芪、当归、丹参、川芎嗪可不同程度地抑制HepG2细胞增殖与迁移，降低HepG2细胞PAI-1mRNA表达、抗原水平，以复方丹参、川芎嗪组作用更为明显。结论活血化瘀中药可有效抑制人肝癌细胞HepG2细胞增殖与迁移，同时抑制PAI-1表达，这可能是其具有抗肿瘤作用的分子机制之一。     

过表达迁移侵袭抑制蛋白基因对人巨细胞病毒转染U87细胞特性影响

目的探讨过表达迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因对人巨细胞病毒(HCMV)感染的神经胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法采用过表达的MIIP基因慢病毒转染HCMV感染的U87细胞,通过Western-blot检测其转染效率,并将细胞分为为实验组(U87+HCMV/MIIP)、对照组(U87+HCMV/CMV4)和空白组(U87+HCMV)。采用CCK-8检测过表达的MIIP基因对HCMV转染的U87细胞增殖情况的作用;采用Transwell迁移实验检测对细胞迁移情况的影响;采用Transwell体外侵袭实验检测对细胞侵袭能力的影响。结果实验组细胞的MIIP蛋白表达量与对照组和空白组比较,明显上调(P<0.05);细胞的增殖能力与对照组和空白组比较,明显降低(P<0.05);细胞的侵袭力与对照组和空白组比较,明显减弱,且细胞数显著下调(P<0.05);迁移能力与对照组和空白组比较,显著降低(P<0.05)。结论 HCMV感染的U87细胞在MIIP基因过表达后增殖、侵袭及迁移能力均受抑制。     

Notch信号通路参与肝癌细胞侵袭迁移临床机制研究

目的探讨Notch信号通路参与肝癌细胞侵袭迁移的临床机制。方法体外培养肝癌细胞系SMMC-7721、MHCC97H及健康细胞状态正常非肿瘤干细胞系HL-7702。应用Transwell小室、BCA蛋白定量法评估并检测Notch信号通路表达情况。结果肝癌组织当中的Notch阳性表达同肝癌分期、静脉癌栓等呈正相关(P<0.05);正常非肿瘤肝细胞系与不同肝癌细胞系迁移侵袭能力比较,差异有显著统计学意义(P<0.05);γ-分泌酶抑制剂(DAPT)、NS-398(高活性COX-2抑制剂)对肝癌细胞的迁移侵袭能力有显著影响(P<0.05)。结论肝癌细胞迁移侵袭过程当中,Notch信号通路有重要影响,作用机制同Snail及COX-2表达存在联系。     

丹参酮ⅡA对小鼠肺爆震伤导致的脑损伤的保护作用

 目的 探讨丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对小鼠肺爆震伤导致的脑损伤的保护作用。方法 建立小鼠肺爆震伤致脑损伤模型。将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(Sham)、肺爆震伤组(Blast)和Tan ⅡA干预组,每组10只。冲击伤后48 h采集标本,通过HE和ROS染色观察脑组织病理改变,Western blot检测脑损伤标志物Tau和S100β,炎性相关因子IL-1β、TNF-α和IL-10,氧化应激相关因子SOD-1、IRE-α和MDA5,以及PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt和NF-κB的表达情况。结果 蛋白结果显示,与Sham组相比,Blast组S100β升高到(31.5±4.19),其他相关促进因子均升高,而通路上NF-κB升高到(12.25±1.92),PI3K和Akt的磷酸化分别升高到(4.36±0.41)和(27.00±0.09),而与Blast组相比,Tan ⅡA组S100β降低到(0.21±0.09),Tan ⅡA恢复了冲击波导致的相关因子改变,NF-κB降低到(0.32±0.02),PI3K和Akt的磷酸化分别降低到(0.47±0.01)和(0.18±0.04),上述差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 Tan ⅡA对肺爆震伤导致的脑损伤具有保护作用,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路来实现的。     

异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及JAK2/STAT3通路的影响

 目的 探讨异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法 采用MTT法测定不同浓度的异丙酚对胶质瘤U87细胞和人正常星型胶质细胞HEB生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外迁移能力的影响,蛋白印迹法(WB)测定10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果 与对照组相比,5、10、25、50、100 μM异丙酚均能显著抑制胶质瘤U87细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05),后续选择2、5、10 μM异丙酚进行实验。与对照组相比,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理后,侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验说明,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理48 h后,迁移能力分别降低了(19.69±2.67)%、(41.41±3.28)%、(59.75±2.91)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。且胶质瘤U87细胞中JAK2蛋白磷酸化水平、STAT3蛋白磷酸化水平明显下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 异丙酚可能通过下调JAK2/STAT3信号传导通路相关蛋白表达,抑制胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移能力。     

Shh、Gli1和p-Akt在食管癌中的表达及临床意义

目的观测SHh信号通路关键冈子Shh、Gli1和PI3K/Akt信号通路的关键因子p-Akt在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达情况,探讨上述因子的表达与ESCC各临床病理特征的关系和意义。方法采用免疫组织化学EnVision法检测108例手术治疗的ESCC组织及相应的癌旁正常食管黏膜标本Shh、Gli1和p-Akt的表达情况。结果在108例ESCC组织中Shh、Gli1和p-Akt的阳性表达率分别为70.1%(76/108)、76.9%(83/108)和65.7%(71/108)108例癌旁正常食管黏膜中Shh、Gli1和p-Akt的阳性表达率分别为13.9%(15/108)、13%(14/108)和15.7%(17/108)。ESCC组织中Shh、Gli1和p-Akt的阳性表达率显著高于相应的癌旁正常食管黏膜的表达(P<0.05);Shh、Gli1和p-Akt表达与肿瘤是否有淋巴结转移密切相关(P<0.05),ESCC中Shh的表达与Gli1的表达成正相关(r1=0.750,P<0.01),Gli1表达与p-Akt表达呈正相关(r2=0.621,P<0.01)。结论 ESCC中SHh通路和PI3K/Akt通路是普遍激活的,Gli1与p-Akt可作为预测转移潜能和预后状况的有价值的指标,联合抑制SHh通路和PI3K/Akt通路对于治疗食管癌可能更有效。     

丹参酮ⅡA对肺爆震伤小鼠保护作用及其机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA对肺爆震伤小鼠保护作用及其可能的机制。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、爆震伤组及爆震伤+丹参酮ⅡA组,每组各10只。爆震伤后48 h收集小鼠肺组织标本。采用HE染色、免疫组化和蛋白印迹技术检测丹参酮ⅡA对肺爆震伤的保护作用。结果爆震伤+丹参酮ⅡA组肺重/体质量及湿重/干重比值显著低于爆震伤组,差异有统计学意义(P<0.05)。爆震伤+丹参酮ⅡA组伊文思蓝渗漏量明显少于爆震伤组,差异有统计学意义(P<0.05)。与爆震伤组相比,爆震伤+丹参酮ⅡA组白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、CD44及CD163阳性炎症细胞数量、肺组织p-PI3K及p-Akt蛋白表达均显著降低,IL-10、肺组织p-FoxO1蛋白表达均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA对肺爆震伤的保护作用可能与其抗炎活性有关,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/FoxO1信号通路实现。     

VEGF/PTEN及下游信号通路在侵袭性垂体瘤中的表达及其临床意义

 目的 探讨侵袭性垂体瘤中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)与人第10号染色体缺失的磷酸酶 (gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten, PTEN)表达水平及其下游信号通路的变化的临床意义。方法 收集医院神经外科手术后垂体瘤标本62例(侵袭组32例,非侵袭组30例)和60例正常垂体组织标本(对照组)。通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测比较VEGF、PTEN、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phosphate-Serine/threonine Kinase, p-Akt)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(phosphate-mitogen-activated protein kinase, p-MAPK)在垂体瘤和正常垂体组织之间的表达差异。结果 垂体瘤标本中VEGF的表达水平显著高于对照组(P<0.05),在侵袭组(3.61±0.16)中的表达高于非侵袭组(2.06±0.13),差异有统计学意义(t=10.60, P<0.05),而PTEN在垂体瘤标本中的表达显著低于对照组(P<0.05),尤其在侵袭组(0.42±0.10)中的表达显著降低(t=6.31, P<0.05)。垂体瘤标本中p-Akt和p-MAPK水平显著高于对照组(P<0.05),且侵袭组(p-Akt 3.90±0.14; p-MAPK 2.52±0.11)明显高于非侵袭组(p-Akt 2.27±0.11; p-MAPK 1.89±0.05)(p-Akt,t=12.95, P<0.05; p-MAPK t=7.29, P<0.05)。结论 侵袭性垂体瘤中VEGF、p-Akt及p-MAPK水平明显增高,而PTEN表达水平显著降低,提示上述变化可能与垂体瘤的侵袭性相关,其可能为诊断并治疗侵袭性垂体瘤靶点的选择提供新方向。     

黄芩苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的p38MAPK途径研究

目的研究黄芩苷对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及其对p38MAPK信号通路的影响。方法以不同浓度的黄芩苷与人肝癌HepG2细胞共同培养24、48、72 h后,采用MTT法测定细胞增殖抑制率;通过活细胞计数,检测不同浓度黄芩苷处理后细胞活力的变化;采用western blotting方法检测黄芩苷处理72 h后HepG2细胞p38和p-p38蛋白的表达变化。结果黄芩苷对HepG2细胞生长有抑制作用,并随药物作用时间的延长和药物浓度的增加,其抑制效果越明显;通过对活细胞计数发现黄芩苷对HepG2细胞生长有抑制作用,随黄芩苷浓度的增加,细胞存活率下降,细胞增殖速度明显减缓;在黄芩苷处理72 h后p38蛋白表达兀明显变化,而p-p38蛋白表达上调且随黄芩苷浓度升高蛋白表达升高。结论黄芩苷可能通过激活p38MAPK信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

ADAM-17抑制剂TNF484对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

  目的 探讨ADAM-17抑制剂TNF484对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 选用肝癌HepG2细胞株和Bel7402细胞作为研究对象,分为TNF484抑制组及空白对照组,利用MTT法检测TNF 484对两种肝癌细胞株增殖影响,用PCR法检测TNF 484对肝癌细胞ADAM-17表达的影响,利用迁移分析及细胞侵袭实验分析TNF 484对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 TNF484可以显著抑制肿瘤细胞生长,呈剂量依赖性,100 μM 时对HepG2和Bel7402细胞株增殖抑制作用最大,抑制率分别为(80±5.6)%和(85±5.8)%;10 μM作用72 h,HepG2和BEL7402细胞株的空白对照组及抑制组的细胞分数分别为(80.92%±6.10%、55.60%±4.21%)、(82.62%±6.15%、59.8%±4.27%),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);同时10 μM TNF484作用 72 h后HepG2及BEL-7402细胞株中ADAM-17RNA表达水平降低,抑制率分别为(45±3.1)%及(48±3.3)%。 结论 ADAM-17抑制剂TNF484对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭有明显抑制作用,ADAM-17可能是HCC基因治疗的有效靶目标。     

miR-19a-3p靶向调控CCND1基因介导FrA-1/IL-6/Stat3信号通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制

 目的 探究miR-19a-3p靶向CCND1基因介导FrA-1/IL-6/Stat3通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制。方法 癌细胞分组转染(空白组、阴性对照组、miR-19a-3p mimic组、siRNA-CCND1组、miR-19a-3p mimic + siRNA-CCND1组)。分别应用qRT-PCR、Western blot、MTT、划痕实验和Transwell侵袭实验检测相关基因mRNA和蛋白表达及细胞生物学行为变化趋势。结果 人乳腺癌组织和细胞中CCND1和Fra-1的表达明显上升,而miR-19a-3p明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,另外3组的miR-19a-3p、CCND1、FrA-1表达水平均上调(P<0.05),miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组中上调更为明显(P<0.05)。各组细胞在24 h时无明显差异。48 h和96 h各组细胞增殖能力均提高。空白组与阴性对照组细胞增殖能力相比无明显差异。另外3组的细胞增殖能力均明显增强,差异有统计学意义(P<0.05),但miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组中细胞增殖变化趋势较弱,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,另外3组细胞迁移、侵袭能力均减弱,差异有统计学意义(P<0.05),且miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组迁移、侵袭能力最弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-19a-3p在乳腺癌中呈下降趋势,上调miR-19a-3p可有效抑制CCND1基因表达和FrA-1/IL-6/Stat3通路激活,从而降低乳腺癌细胞侵袭转移。     

H2O2及PTEN在肽类生长因子活化Akt激酶中的作用

目的研究H2O2、PTEN与肽类生长因子(胰岛素等)在调控Akt激酶活性中的作用及其相互关系。方法Western Blot检测对照小鼠胚胎成纤维细胞PTEN / MEFs和PTEN基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞PTEN-/-MEFs中PTEN蛋白表达的差异。用胰岛素及NADPH氧化酶(NOX)抑制剂——DPI作用PTEN / M EFs和PTEN-/-MEFs细胞,Western Blot检测Akt激酶蛋白磷酸化水平的变化。将细胞接种于96孔板,加入胰岛素及DPI,96h后MTT法检测细胞增殖的变化。结果在对照PTEN / MEFs细胞内,加入胰岛素(100mU/ml)15min后Akt激酶磷酸化水平明显上调,加入10μmol/LDPI处理30min后,Akt激酶磷酸化恢复到基础水平,在PTEN-/-MEFs细胞中未观察到上述变化。经胰岛素作用后PTEN / MEFs细胞增殖加快(P<0.05),加入DPI作用后可减缓细胞的增殖(P<0.05),胰岛素和DPI同时作用对其增殖无明显影响(P>0.05);各种处理因素对PTEN-/-MEFs细胞增殖均无明显影响(P均>0.05)。结论肽类生长因子可以通过磷酸化激活Akt激酶,这一过程依赖于H2O2的产生和抑癌基因PTEN的存在。     

微小核糖核酸-7调控表皮细胞生长因子受体对肝癌细胞增殖和转移的影响

【摘要】 目的 探讨微小核糖核酸（miR）-7是否通过靶向调控表皮细胞生长因子受体（EGFR）对人肝癌细胞侵袭和增殖产生影响。方法 传代培养HepG2人肝癌细胞,脂质体转染miR-7后使其表达上调或下调。荧光定量聚合酶链反应检测转染效率。蛋白印迹法检测miR-7上调或下调后肝癌细胞EGFR表达变化。溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）法检测miR-7上调或下调后肝癌细胞增殖能力。划痕试验检测miR-7上调或下调后肝癌细胞迁移能力。结果 脂质体转染HepG2人肝癌细胞可控制miR-7表达,miR-7表达与肝癌细胞EGFR表达呈负相关。miR-7表达上调时,肝癌细胞增殖和迁移变慢;反之,miR-7表达下调时,肝癌细胞增殖和迁移变快。结论 miR-7靶向调节EGFR表达,其表达与肝癌细胞增殖和迁移呈负相关。miR-7可能是未来肝癌治疗新策略的潜在靶点。     

人重组蛋白DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力作用

目的探讨DKK1通过靶基因调节Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力的作用。方法培养并鉴定口腔鳞癌干细胞,并将细胞分为3组,分别为空白对照组(A组),未转染siRNA;阴性对照组(B组),转染Stealth~(TM) RNAi的阴性对照;DKK1 RNAi组(C组),转染DKK1 Stealth~(TM) Select RNAi。利用实时定量PCR(RT-PCR)检测3组的转染效率及口腔鳞癌干细胞中Wnt3a、Pitx2、Oct4 mRNA的表达情况。运用划痕实验和Transwell侵袭实验检测DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移和侵袭的影响。结果流式细胞仪检测CD44及CD133表达量分别为88.0%及92.8%,提示所培养细胞为口腔鳞癌干细胞。瞬时转染后,应用RT-PCR检测提示,C组Wnt3a、Pitx2及Oct4 mRNA表达量较A组分别下降59.8%、70.7%和66.0%(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,A、B、C组24 h的划痕愈合率分别为(54.32%±3.21%)、(49.46%±3.75%)和(14.13%±1.96%),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,A、B、C组中穿透细胞膜的细胞数目分别为(115.6±14.3)个、(131.2±19.5)个和(37.3±6.8)个,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DKK1可以通过抑制Wnt3a,从而调控Wnt/β-catenin信号通路,进而抑制口腔鳞癌的转移及侵袭。     

CUL3对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制

目的 探讨泛素连接酶Cullin3(CUL3)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法基于TCGA数据库分析CUL3在胃癌和癌旁组织中的表达及其与临床预后的关系。采用CUL3 shRNA和空载慢病毒转染HGC-27和BGC-823细胞，构建CUL3敲低胃癌细胞系组(shCUL3组)与空载慢病毒转染组(空载组)。采用CCK-8法、克隆形成实验、EdU染色、划痕实验和Transwell实验检测两组的增殖、迁移和侵袭能力；采用Western blotting检测两组上皮-间质转化(EMT)相关蛋白和PI3K/Akt/GSK3β通路蛋白的表达情况；应用PI3K激动剂740 Y-P后检测shCUL3组细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 TCGA数据库中CUL3在胃癌中呈高表达，且与胃癌患者预后不良明显相关。CCK-8、克隆形成实验和EdU染色结果显示，与空载组比较，shCUL3组胃癌细胞增殖能力受到抑制(P<0.05)，且CUL3 shRNA可明显抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。与空载组比较，shCUL3组E-cadherin蛋白表达升高，波形蛋白、β-caten...     

食管癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及机制研究

目的 探讨食管癌KYSE410细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制.方法 超速离心法分离食管癌KYSE410细胞培养上清中的外泌体;采用透射电镜及Western blotting观察所获得的外泌体的形态及其标志物;共聚焦显微镜观察KYSE410、KYSE510和YES2细胞摄取荧光染料标记的KYSE410外泌体;采用Transwell小室实验分析3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力以及KYSE410外泌体对3种食管癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blotting检测Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化.结果 透射电镜下观察KYSE410外泌体具有膜结构,直径分布在30～100nm;3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力从大到小依次为KYSE410、KYSE510、YES2;KYSE410外泌体能够促进KYSE410、KYSE510、YES2细胞迁移及侵袭能力并增强3种食管癌细胞中β-catenin和p-Akt的表达.结论 来源于高迁移及侵袭能力的食管癌KYSE410细胞的外泌体能够促进自身和低迁移及侵袭能力的食管癌KYSE510、YES2细胞的迁移和侵袭,并且可能通过激活Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路发挥上述作用.     

丹参酮ⅡA对小鼠压力超负荷诱导 心肌损伤保护作用研究

目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对小鼠压力负荷性心肌损伤保护作用。方法选取30只雄性C57BL/6小鼠为研究对象,将所有小鼠随机分成对照组、模型组及TanⅡA组,每组各10只。采用升主动脉缩窄构建小鼠压力负荷心肌损伤模型,术后TanⅡA组给予TanⅡA,连续3周,第4周处死所有小鼠,收集标本。测量小鼠心脏重量和心脏重量指数,酶联免疫吸附法和蛋白印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠心脏重量和心脏重量指数显著增加,白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,IL-10、Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA组小鼠心脏重量和心脏重量指数显著降低,IL-1β、TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,IL-10、Bcl-2表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TanⅡA处理对小鼠压力负荷性心肌损伤有保护作用,其作用机制可能通过调节炎症反应和凋亡实现。     

Wortmannin抑制PDK信号通路对人甲状腺滤泡癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的 利用特异性PI3K抑制剂wortmannin抑制P13K信号通路,研究其对人甲状腺滤泡癌细胞CGTHW-1迁移和侵袭能力的影响,并初步探索其作用机制.方法 培养CGTHW-1细胞,用MTT法筛选wortmannin最佳作用浓度及时间.将细胞分为实验组和对照组(分别在血清饥饿和含血清两种条件下培养).对照组细胞未给予任何处理,实验组细胞用wortmannin进行处理.通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别观察wortmannin对细胞迁移及侵袭能力的影响.利用FITC标记的鬼笔环肽进行微丝免疫荧光染色,观察在wortmannin作用下细胞的形态学变化.免疫细胞化学SP法及半定量RT-PCR法检测wortmannin对细胞Racl蛋白、mRNA表达的影响.结果 在含血清培养液培养条件下,经wortmannin处理后,划痕伤口愈合速度减慢,CGTHW-1细胞侵袭至小室下层细胞数(13.8±3.03个)明显低于对照组(41.6±6.95个,P<0.01);wortmannin显著降低Racl蛋白及mRNA的表达(P<0.05).而在血清饥饿条件下,两组细胞迁移均受抑制,侵袭细胞数组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 wortmannin能有效抑制人甲状腺癌细胞迁移侵袭,其作用机制可能是通过抑制PI3K下游分子Racl,从而引起细胞骨架重构.PI3K及Racl可能成为抑制甲状腺癌转移的关键性分子.