小鼠体外T淋巴细胞模型的优化及在中药筛选中的应用

目的 :优化MTT法测定小鼠体外T淋巴细胞的实验条件 ,并对 6种种子类中药的活性进行筛选。方法 :无菌分离小鼠脾脏 ,制备脾淋巴细胞 ,与待测药物预孵 1h后 ,加入刀豆蛋白A刺激剂继续培养 ,总计培养 72h后收获细胞 ,进行MTT染色 ,以酶标仪进行测定。结果 :应用MTT法 ,在 (2～ 3 0 )× 10 9/L范围内细胞密度与A值呈线性正相关 ,优化后的测定条件为细胞悬液中加入 10 μl的ConA ,孵育 72h后再加入 2 0 μl的MTT ,继续孵育 4h ,测定波长为 5 12nm。结果表明 ,这 6种种子类中药对小鼠T淋巴细胞均有一定的抑制作用。结论 :用于进行中药的抑制T淋巴细胞活性的体外筛选。     

三根祛瘤方抗瘤作用研究

目的 :研究三根祛瘤方对人卵巢癌细胞株 HO-8910的体外生长影响。方法 :用三根祛瘤方不同浓度培养液 ,分别培养 HO-8910细胞 2 4小时、48小时、72小时 ,应用 MTT(四甲基偶氮唑蓝 )比色法观察 H O-8910细胞生长情况。结果 :三根祛瘤方对人卵巢癌细胞株 HO-8910的体外生长有抑制作用 ,并呈现出时间和剂量依赖关系 ,最佳抑制浓度为 6 2 .5 m g/m L ,最佳作用时间为 48小时。结论 :三根祛瘤方对人卵巢癌细胞株 HO-8910 [1 ] 的体外增殖有抑制作用     

雷公藤、防己醇提物对淋巴细胞和环氧化酶的影响

目的:探讨雷公藤、防己醇提取物对淋巴细胞和环氧化酶的影响.方法:测定两种药物的醇提物引起小鼠胸腺淋巴细胞和脾脏淋巴细胞增殖的变化,新生小公牛颈动脉内皮细胞的6-keto-PGF1α和小鼠腹腔巨噬细胞的PGE2含量.结果:雷公藤和防己醇提物对小鼠胸腺淋巴细胞和脾脏淋巴细胞的增殖有抑制作用.雷公藤醇提物对环氧化酶-1(COX-1)和环氧化酶-2(COX-2)有不同程度的抑制作用.防己醇提物对COX-1有抑制作用,而对COX-2无抑制作用.结论:两种药物的祛风湿的部分机理可能是由于抑制淋巴细胞增殖和环氧化酶而介导的.     

威灵仙、秦艽、桑寄生醇提物体外对淋巴细胞和环氧酶的影响

目的:探讨威灵仙、秦艽和桑寄生提取物对淋巴细胞和环氧酶的影响.方法:测定小鼠胸腺淋巴细胞和脾脏淋巴细胞增殖的变化,新生小公牛颈动脉内皮细胞的6-keto-PGF1α和小鼠腹腔巨噬细胞的PGE2含量.结果:威灵仙、秦艽和桑寄生对小鼠胸腺淋巴细胞和脾脏淋巴细胞的增殖有抑制作用,三种药物对环氧酶-1(COX-1)和氧化酶-2(COX-2)有不同程度的抑制.结论:三种药物的祛风湿的部分机理可能是由于抑制淋巴细胞增殖和环氧酶而介导的.     

冬虫夏草及中国拟青霉对机体细胞免疫功能的调节作用

本文通过体内、外实验研究表明,冬虫夏草及其人工培养菌丝(中国拟青霉)制剂可提高小鼠血清溶菌酶水平,但对小鼠脾细胞的淋巴细胞转化功能则表现为抑制作用。而且,药物在体外未能回升由强的松龙所致的小鼠脾细胞淋转抑制的作用,也无促进刀豆蛋白A诱导抑制性细胞的作用。这些结果提示,冬虫夏草及其人工培养菌丝主要为促进巨噬细胞的吞噬和杀菌作用,但能抑制T淋巴细胞的功能。     

野生仙人掌多糖对小鼠特异性免疫功能的调节作用

目的:观察野生仙人掌多糖(ODPs)对小鼠特异性(体液及细胞)免疫功能的调节作用。方法:采用环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,检测ODPs对血清溶血素IgMI、gG含量、脾淋巴细胞增殖反应和外周血T淋巴细胞亚群比例的影响;检测分离纯化的ODPs主要组分ODP-I对体外培养的淋巴细胞增殖作用。结果:ODPs能显著增强免疫抑制小鼠血清溶血素IgMI、gG的生成;显著增强免疫抑制小鼠T、B淋巴细胞的增殖能力,且均使之恢复至正常水平;显著降低免疫抑制小鼠CD4+T细胞亚群比例,从而显著降低CD4+/CD8+T细胞比值,使之接近正常水平,且均有剂量关系。ODP-I可极显著促进小鼠脾淋巴细胞自然增殖,协同有丝分裂原ConA或LPS诱导T、B淋巴细胞的增殖。结论:ODPs对免疫抑制小鼠特异性免疫功能具有调节作用,对体外淋巴细胞具有增殖作用,是一种良好的免疫调节剂。     

散结片对人肝癌细胞和荷瘤鼠免疫细胞影响的实验研究

目的 :探讨散结片抑瘤机制。方法 :以不同浓度的散结片醇提物和水提物分别处理人肝癌 SMMC- 772 1细胞 ,以 MTT法测提取物对其线粒体代谢活性的影响 ;腹腔注射含水提物 10 m g/ m l· d的水溶液 ,测其对小鼠移植性实体瘤的抑制作用及对小鼠 T、B淋巴细胞比率和腹腔吞噬细胞活性的影响。结果 :1散结片醇提物对人肝癌细胞的抑制作用随浓度提高而增加。 2水提物对人肝癌细胞作用不明显。但能明显抑制小鼠 S- 180实体瘤 ,并明显提高 T、B淋巴细胞比率。 3水提物可明显提高小鼠腹腔吞噬细胞活性。结论 :散结片醇提物能降低体外培养的人肝癌细胞线粒体代谢活性 ;水提物能提高小鼠 T、B淋巴细胞比率和腹腔吞噬细胞活性 ;对小鼠移植性实体瘤有很强的抑制作用。     

黄芪糖蛋白、雷公藤甲素、雷帕霉素和氢化考的松体外免疫抑制作用的比较研究

目的:比较黄芪糖蛋白与雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松的体外免疫抑制作用。方法:不同浓度黄芪糖蛋白、雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松作用于小鼠脾细胞,MTT法测定4种药物对ConA、LPS诱导的淋巴细胞增殖的影响,流式细胞仪测定4种药物对脾细胞培养上清液中细胞因子IFN-γ、IL-6含量的影响。结果:4种药物对体外培养的脾细胞增殖均表现出显著的抑制活性(P<0.05),药效强度依次为雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松、黄芪糖蛋白。但黄芪糖蛋白主要表现为对T细胞的抑制作用。黄芪糖蛋白促进淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-6,而其它3种药物却抑制IFN-γ、IL-6的分泌(P<0.05)。结论:黄芪糖蛋白对于淋巴细胞体外增殖的抑制作用不同于雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松,推测其具有独特的作用机制。     

落地生根的水提取物对小鼠的免疫抑制作用

体内体外试验研究了落地生根(Kalan-choe pinnata)叶的水提取物对小鼠的免疫调节作用,以及对非特异性和特异性免疫反应的抑制作用。 ①体外试验探讨落地生根对T细胞促有丝分裂反应的抑制作用的直接影响:取正常脾细胞在不同浓度的落地生根叶提取物存在下,与Con A培养48小时,然后以~3H-胸     

祛银颗粒对角质形成细胞生长因子诱导的HaCaT细胞增殖及分泌TNF-α的影响

目的 探寻中药组方祛银颗粒治疗银屑病的作用机制.方法 体外培养HaCaT细胞,以10 ng/mL的KGF刺激HaCaT细胞增殖的方法建立银屑病的细胞模型.用祛银颗粒不同浓度含药血清干预细胞,倒置显微镜下观察药物作用后的细胞生长状态,ELISA法检测细胞分泌TNF-α的影响,流式细胞仪检测药物血清对细胞增殖、细胞周期的影响.结果 48 h祛银颗粒低、中、高剂量组药物与模型组比较,对细胞均有抑制作用（P＜0.05）;祛银颗粒中、高剂量组抑制作用与维A酸组差异无统计学意义（P＞0.05）.流式细胞仪检测显示：在细胞合成S期,祛银颗粒高剂量组同期细胞数量较模型组减少（P＜0.05）,与维A酸组相近（P＞0.05）.祛银颗粒高剂量组与模型组比较,分泌的TNF-a降低（P＜0.05）.结论 祛银颗粒含药血清具有抑制KGF诱导的HaCaT细胞增殖的作用,并可抑制细胞分泌INF-α,提示抑制表皮增殖和抑制细胞产生炎症因子可能是祛银颗粒发挥治疗银屑病的作用机制之一.     

过山枫抑制T细胞增殖及诱导T细胞凋亡活性部位的研究

目的:通过体外T淋巴细胞增殖实验筛选过山枫抗炎作用的活性部位;对确定的活性部位进一步探讨对T淋巴细胞凋亡的影响。方法:对过山枫乙醇提取物进行分离提取,采用体外小鼠脾淋巴细胞增殖实验,检测过山枫不同提取部位对小鼠脾细胞增殖的影响,从中筛选出对小鼠脾细胞增殖有抑制作用的活性部位。采用流式细胞技术观察活性部位对小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响。结果:过山枫不同极性部位及从过山枫乙酸乙酯部位(GSF-A)分离得到3个组分对体外培养的T淋巴细胞增殖均有不同程度的抑制作用;GSF-A 3个活性部位对T淋巴细胞凋亡有显著促进作用。结论:过山枫不同极性部位均具有抗炎活性,且GSF-A的活性显著;从GSF-A部位中分离得到的3个部位均具有抗炎活性;过山枫对T淋巴细胞增殖的抑制及诱导凋亡的作用一致,提示诱导凋亡是过山枫抑制T淋巴细胞增殖的机制之一。     

白藜芦醇对于异抗原刺激下大鼠T淋巴细胞活化增殖的影响

目的 研究白藜芦醇(RSV)对于异抗原刺激下大鼠T淋巴细胞活化增殖的影响.方法 建立SD-Wistar大鼠腹腔异位心脏移植模型急性排斥反应模型,分离受体脾脏淋巴细胞与成年供体系SD大鼠心肌细胞体外混合培养,分别给予不同剂量RSV与CSA干预,观察RSV与CSA对体外混合培养下T淋巴细胞增殖的影响;通过ELISA法检测两者对细胞因子IL-2的影响.结果 RSV可以抑制共培养细胞中T淋巴细胞增殖,减低培养上清中IL-2活性,作用强弱表现出明显的剂量依赖性,与CSA有协同性.结论 RSV在体外淋巴细胞培养中表现免疫抑制作用.     

人参炔醇抑制实验性迟发型超敏反应

目的:考察人参炔醇(PAN)对实验性迟发型超敏反应的影响及可能作用途径。方法:应用2,4-二硝基氯苯(DNCB)造成小鼠变态反应性接触性皮炎(ACD)模型,考察PAN诱导相给药对耳廓肿胀的影响,并进行病理组织学检查;MTT法检测PAN对ConA诱导的T淋巴细胞增殖的影响。ELISA方法检测ConA刺激的脾细胞培养上清IFN-γ水平。结果:PAN10 mg.kg-1诱导相给药可明显抑制小鼠耳肿胀;病理组织学结果显示PAN可减轻模型小鼠局部水肿及血管扩张,减少淋巴细胞浸润;PAN对ConA诱导的T细胞增殖有明显的抑制作用,而对静息状态的脾细胞未观察到显著影响;PAN10μmol.L-1起明显抑制体外ConA刺激脾细胞的IFN-γ分泌,且作用在早期(6 h)即已呈现。结论:PAN对实验性迟发型超敏反应有显著的抑制作用,该作用可能与抑制T细胞增殖和IFN-γ的分泌有关。     

何首乌蒽醌苷对小鼠细胞免疫功能的影响

目的:研究何首乌蒽醌苷(AGPMT)体外对小鼠细胞免疫功能的影响。方法:将小鼠淋巴细胞或巨噬细胞与不同浓度的AGPMT共培养,用XTT法测T、B淋巴细胞的增殖能力、对MLR的影响及对MitC所致淋巴细胞增殖抑制的拮抗作用;用中性红染色法观察AGPMT对巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性、小鼠脾细胞分泌TNF活性的影响。结果:AGPMT在体外可明显促进小鼠T、B淋巴细胞的增殖,增强巨噬细胞吞噬中性红的能力,提高NK细胞活性及分泌TNF活性,并可促进MLR,拮抗MitC所致淋巴细胞增殖的抑制作用。结论:AGPMT具有免疫增强作用。     

中药复合多糖体内外抗肿瘤活性实验研究

目的:研究中药复合多糖的体内外抗肿瘤活性及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:灌胃给予H22荷瘤小鼠不同剂量复合多糖,观察其对小鼠肿瘤生长及体内白细胞数、脾指数、脾脏T淋巴细胞、B淋巴细胞增殖等免疫指标影响,并采用MTT法测定复合多糖对体外培养的Hela细胞增殖的影响。结果:复合多糖可抑制荷瘤小鼠体内H22肿瘤的生长,显著提高荷瘤小鼠的脾指数、白细胞数,促进脾内T、B淋巴细胞的增殖,对Hela细胞的增殖有明显抑制作用。结论:复合多糖可抑制肿瘤生长和提高荷瘤机体的免疫功能。     

垂盆草小麦黄素苷体外对正常小鼠淋巴细胞增殖的影响

目的:观察垂盆草小麦黄素苷对小鼠脾脏T、B淋巴细胞转化增殖的影响.方法:采用小鼠脾细胞3H-TdR掺入法,用刀豆球蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)刺激,测定掺入细胞DNA中3H-TdR的放射性相对数量(cpm).结果:小麦黄素苷100,10,1μg/mL(终浓度)对T淋巴细胞的cpm数有非常显著的抑制作用(均P＜0.001);小麦黄素苷100μg/mL对B淋巴细胞的cpm数有非常显著的抑制作用(P＜0.01).结论:垂盆草小麦黄素苷能明显抑制正常小鼠脾脏T、B淋巴细胞增殖.     

黄芩苷对不同刺激剂诱导的小鼠T淋巴细胞体外活化的影响

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂(PDB)诱导小鼠淋巴细胞活化,利用流式细胞术分别结合双色免疫荧光单克隆抗体染色技术检测CD3 T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分子的表达。结果黄芩苷(10、20、30 mg/L)能明显抑制Con A或PDB诱导T细胞活化分子CD69和CD25的表达,且呈浓度依赖性。结论黄芩苷能够明显抑制多克隆刺激剂Con A或PDB诱导的T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。提示黄芩苷在T细胞活化过程的信号转导中有抑制作用,从而可以通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

艾乃吉Ⅰ号抗艾滋病的实验研究

目的:观察艾乃吉Ⅰ号促进免疫功能及体外抑制HIV作用。方法:采用腹腔注射环孢酶素法建立免疫抑制模型小鼠,给药两周后取血,流式细胞仪上检测外周血淋巴细胞亚群;采用CPE法测定HIV对MT-4细胞的感染性滴度,MMT法测定药物对MT-4细胞的半数毒性浓度,CPE法测定药物的抗病毒活性,计算治疗指数。结果:艾乃吉Ⅰ号对提高免疫抑制小鼠CD3T细胞百分率和CD4T细胞百分率有一定作用,其中低剂量组与模型组比较CD4T细胞百分率的提高较为明显(P<0.05);在MT-4细胞/HIV-1ⅢB和实验系统,艾乃吉Ⅰ号抑制病毒复制的治疗指数是2.6。结论:艾乃吉Ⅰ号具有一定的促进免疫功能恢复及体外抑制HIV作用。     

猫人参注射液对两种肝癌细胞及正常肝细胞的体外作用观察

目的:观察猫人参注射液体外对两种肝癌细胞株及正常肝细胞增殖的影响。方法:将人肝癌BEL-7402细胞株、小鼠肝癌H22细胞株和人正常肝细胞L-02细胞株进行体外培养,采用MTT法测定不同浓度、不同时间猫人参注射液的体外抑制作用。结果:猫人参注射液对人肝癌BEL-7402细胞和小鼠肝癌H22细胞具有较强抑制作用,对L-02细胞在较低浓度下抑制作用不明显。结论:猫人参注射液在体外对人肝癌BEL-7402细胞和小鼠肝癌H22细胞具有较强的抑制作用,而在较低浓度下对于L-02细胞则无明显抑制作用。     

刺五加中紫丁香苷的提取分离及抗肿瘤作用研究

目的 研究紫丁香苷的体内外抗肿瘤作用.方法 应用MTT法观察紫丁香苷对体外培养的4种人癌细胞的抑制作用,构建S_(180)实体瘤小鼠模型研究紫丁香苷的体内抗肿瘤作用.结果 紫丁香苷对体外培养的4种人癌细胞有一定的抑制作用,并且能抑制小鼠S_(180)实体瘤.结论 紫丁香苷具有一定的体内外抗肿瘤活性.