人参皂苷Rb_1通过Caveolin-1/eNOS/NO通路抗人脐静脉内皮细胞衰老

目的:观察人参皂苷Rb_1延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)复制性衰老的作用,并探讨Caveolin-1/eNOS/NO通路在其中的作用。方法:建立HUVECs复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVECs衰老;使用不同浓度人参皂苷Rb_1处理衰老细胞后,观察衰老指标SA-β-Gal染色和PAI-1蛋白变化;采用Western blot方法检测各组细胞Caveolin-1、eNOS蛋白的表达;最后使用RNA干扰技术抑制Caveolin-1表达后,检测各组细胞Caveolin-1、eNOS、PAI-1 mRNA和蛋白表达及细胞上清中NO的含量。结果:累计细胞群体倍增殖(CPDL)16的HUVECs可作为复制性衰老模型。与模型组比较,80μmol/L的人参皂苷Rb_1能显著降低SA-β-Gal染色阳性细胞数及PAI-1、Caveolin-1蛋白表达,升高eNOS蛋白表达(P0.05);使用siRNA抑制Caveolin-1表达后,人参皂苷Rb_1对Caveolin-1作用减弱,但其对eNOS mRNA和蛋白表达无明显影响(P0.05),NO含量显著升高,PAI-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:人参皂苷Rb_1可延缓人脐静脉内皮细胞复制性衰老,其机制可能与调控Caveolin-1/eNOS/NO通路有关。     

丹参通络解毒汤联合METTL3对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞血管新生的影响

目的 探讨丹参通络解毒汤联合甲基转移酶样3(METTL3)对缺氧/复氧（H/R）大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）血管新生的影响及可能作用机制。方法 建立H/R损伤CMECs模型,将细胞分为空白组、模型组、沉默组、过表达组、中药+沉默组、中药+过表达组,细胞划痕实验观察CMECs迁移情况,CCK-8法检测CMECs增殖能力,RT-PCR检测CMECs血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达,Western blot检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组CMECs迁移率、细胞活力明显降低,VEGF mRNA和eNOS蛋白表达明显降低（P<0.01）;与模型组比较,沉默组CMECs迁移率、细胞活力明显降低,VEGF mRNA表达明显降低（P<0.05）,过表达组、中药+沉默组、中药+过表达组CMECs迁移率、细胞活力明显增加,VEGF mRNA和eNOS蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与沉默组比较,中药+沉默组CMECs迁移率、细胞活力明显增加,VEGF mRNA和eNOS蛋白表达明显升高（P<0.01）;与过...     

黄连解毒汤含药血清对泡沫细胞ABCA1表达与胆固醇含量的影响

目的:观察黄连解毒汤含药血清对泡沫细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达及胆固醇含量的影响,探讨黄连解毒汤抗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法:SD大鼠给予大、中、小剂量黄连解毒汤灌胃后制备含药血清。用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7巨噬细胞分化为泡沫细胞,将细胞分为空白组、模型组、黄连解毒汤含药血清大剂量组、中剂量组、小剂量组,每组1.5×10^6个细胞,分别加入无血清培养液和不同浓度含药血清干预24 h,总胆固醇及游离胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量,实时荧光定量PCR检测细胞ABCA1 mRNA的表达。结果:与模型组比较,黄连解毒汤含药血清各剂量组泡沫细胞内总胆固醇(TC)含量明显降低(P<0.05或P<0.01),大剂量组游离胆固醇(FC)含量显著下降(P<0.01);含药血清各剂量组ABCA1 mRNA表达均明显升高(P<0.05)。结论:黄连解毒汤上调泡沫细胞ABCA1的转录与表达,促进胆固醇流出,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

黄连解毒汤含药血清对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤的影响

目的探讨黄连解毒汤含药血清对Aβ_(25-35)诱导的HT22细胞损伤的影响。方法 HT22细胞随机分为空白组、模型组、多奈哌齐组(0.9 mg/kg)及黄连解毒汤低、高剂量组(2.7、8.1 g/kg),空白组、模型组加入空白血清,给药组加入含药血清1 h后,加入Aβ_(25-35)(40μmol/L)。24 h后,MTT法检测HT22细胞活性,比色法检测SOD、GSH-Px活性及MDA水平,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cyt C、Caspase-3蛋白表达。结果与模型组比较,黄连解毒汤组HT22细胞活性、Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),MDA水平及Cyt C、Caspase-3蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01),并呈剂量依赖性,其中高剂量组SOD、GSH-Px活性也显著升高(P0.01)。结论黄连解毒汤含药血清可减轻Aβ_(25-35)诱导HT22细胞毒性作用,降低细胞凋亡,其作用机制可能与减少氧化应激和线粒体凋亡途径有关。     

不同浓度黄芪提取物对高糖损伤HUVECs的保护机制

目的:研究不同浓度的黄芪提取物对HUVECs损伤的保护机制。方法:将HUVECs细胞分为正常组、高糖组、高渗组等12组分别培养12h、24h、48h,考察HUVECs细胞活力;观察不同浓度黄芪提取物干预后,HUVECs细胞中ET-1、eNOS、p-eNOS的活力以及mRNA和蛋白量的表达情况。结果:MTT检测结果显示高糖组会显著影响HUVECs细胞的活力,随着培养时间的延长,黄芪提取物各组对高糖损伤的保护不断增强(P0.05)。PCR、Western blot法检测结果显示,与正常组相比,高糖组的ET-1表达明显升高(P0.05),eNOS表达量显著降低(P0.05);3种不同浓度的黄芪提取物均能抑制ET-1的表达,增加eNOS表达;Western blot法检测eNOS结果显示高糖、黄芪提取物对eNOS蛋白表达无影响(P0.05)。结论:高糖组能显著抑制HUVECs细胞的活性,黄芪提取物组可不同程度地改善高糖抑制作用(P0.05),且黄芪提取物高浓度组保护作用最强,说明不同浓度的黄芪总黄酮提取物能从调节ET-1、eNOS、p-eNOS表达量方面对高糖损伤的HUVECs产生保护作用。     

黄连解毒汤在体外对大鼠胶质瘤C6细胞增殖的影响

目的:研究黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:分别采用MTT法、流式细胞术、划痕法和Transwell法测定黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,分别采用RT-PCR和Western blot法测定黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞中BCL-2、BAX、Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果:黄连解毒汤100、300、900 mg/L作用大鼠C6胶质瘤细胞24 h或48 h时可显著抑制细胞增殖(P0.01),并呈浓度依赖性(P0.01);黄连解毒汤100、300、900 mg/L作用大鼠C6细胞24 h时的凋亡率均较空白对照组显著升高(P0.01),划痕刻度均较空白对照组显著变宽(P0.01),穿膜细胞数量均较空白对照组显著减少(P0.01),BCL-2 mRNA及蛋白表达显著降低,而BAX和Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.01),并呈浓度依赖性(P0.01)。结论:黄连解毒汤可抑制大鼠胶质瘤C6细胞的增殖、迁移和侵袭,促进C6细胞凋亡,其机制可能与抑制C6细胞BCL-2表达以及促进BAX和Caspase-3表达有关。     

丹参通络解毒汤对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞自噬及血管生成的影响

目的观察丹参通络解毒汤药物血清对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬及血管生成的影响,探讨其作用机制。方法建立CMECs缺氧/复氧损伤模型,将CMECs随机分为空白组、模型组、丹参通络解毒汤药物血清组、3-MA自噬抑制剂组,除空白组外其余各组均置于低糖无血清DMEM培养基中培养,同时置于37℃、94%N2、1%O_2、5%CO_2培养箱中缺氧2 h,换正常DMEM培养基,给氧3 h,再给予相应药物干预。倒置显微镜观察CMECs细胞生长及形态,检测试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin 1、p62及血管内皮生长因子(VEGF)表达,免疫荧光检测CMECs细胞特征性表面标志物蛋白CD34表达。结果与空白组比较,模型组CMECs细胞坏死程度增加,培养液中LDH含量明显增加(P0.01),Beclin1、VEGF蛋白表达明显升高(P0.01,P0.05),p62蛋白表达明显降低(P0.01),CD34蛋白红色荧光明显减弱;与模型组比较,丹参通络解毒汤药物血清组和3-MA自噬抑制剂组CMECs细胞坏死程度减轻,培养液中LDH含量明显减少(P0.01),Beclin 1蛋白表达明显降低(P0.01),p62、VEGF蛋白表达明显升高(P0.01,P0.05),CD34蛋白红色荧光明显增强。结论丹参通络解毒汤能适度抑制缺氧/复氧CMECs细胞自噬,从而促进血管生成,达到保护CMECs细胞的目的。     

黄连解毒汤含药血清对泡沫细胞ABCA1表达与胆固醇含量的影响

目的:观察黄连解毒汤含药血清对泡沫细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1)表达及胆固醇含量的影响,探讨黄连解毒汤抗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法:SD大鼠给予大、中、小剂量黄连解毒汤灌胃后制备含药血清。用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264. 7巨噬细胞分化为泡沫细胞,将细胞分为空白组、模型组、黄连解毒汤含药血清大剂量组、中剂量组、小剂量组,每组1. 5×10~6个细胞,分别加入无血清培养液和不同浓度含药血清干预24h,总胆固醇及游离胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量,实时荧光定量PCR检测细胞ABCA1 mRNA的表达。结果:与模型组比较,黄连解毒汤含药血清各剂量组泡沫细胞内总胆固醇(TC)含量明显降低(P 0. 05或P 0. 01),大剂量组游离胆固醇(FC)含量显著下降(P 0. 01);含药血清各剂量组ABCA1 mRNA表达均明显升高(P 0. 05)。结论:黄连解毒汤上调泡沫细胞ABCA1的转录与表达,促进胆固醇流出,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠干细胞因子/酪氨酸激酶受体信号通路的影响

目的:探讨黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠干细胞因子/酪氨酸激酶受体(SCF/C-kit)信号通路的影响。方法:将80只健康10周龄雄性Wistar大鼠随机分为模型组、黄连解毒汤组、奥美拉唑组、假手术组、正常组,以上各组再分设4 d组、7 d组,共10组。采用线栓法建立大脑中动脉梗死模型。黄连解毒汤组给予黄连解毒汤(27 mg/ml)混悬液,奥美拉唑组给予奥美拉唑(15 mg/ml)悬浊液,其余组给予1 ml 0.9%氯化钠溶液灌胃,4 d组连续灌胃4 d,7 d组连续灌胃7 d。采用HE染色法观察大鼠胃组织病理形态学变化,并进行病理损伤评分; 采用实时荧光定量检测大鼠胃组织SCF、C-kit mRNA表达水平; 采用Western blot检测大鼠胃组织中SCF、C-kit蛋白表达水平。结果:与正常组、假手术组比较,模型组、黄连解毒汤组、奥美拉唑组大鼠胃黏膜病理评分均明显升高(4、7 d组均P<0.01),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01); 正常组、假手术组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,黄连解毒汤组、奥美拉唑组大鼠胃黏膜病理评分均显著降低(4、7 d组均P<0.01),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与奥美拉唑组比较,黄连解毒汤组大鼠胃黏膜病理评分均明显降低(P<0.05),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠的胃黏膜具有一定的保护作用,其机制可能与黄连解毒汤升高大鼠胃组织SCF、C-kit mRNA及蛋白的表达水平有关。     

点灸、电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦内皮细胞型一氧化氮合酶及血管紧张素ⅡmRNA表达的影响

目的:观察点灸、电针对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃肠运动和内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)、血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)mRNA表达的影响,探讨点灸、电针治疗DGP的效应差异及作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、点灸组、电针组,每组10只。采用腹腔注射2%链脲佐菌素配合高脂高糖饮食建立DGP大鼠模型。点灸组和电针组选取"足三里""三阴交""梁门"穴,点灸组于0、10、20min对穴位进行点灸,电针组电针20min,每日治疗1次,治疗15d。检测各组大鼠血糖、胃排空率和小肠推进率,ELISA法检测血浆内皮素1(ET-1)含量,Real-time PCR法检测胃窦部组织eNOS mRNA、ATⅡmRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组血糖明显升高(P0.01);与模型组比较,点灸组和电针组血糖明显降低(P0.05)。与空白组比较,模型组胃排空率及小肠推进率显著降低(P0.01),血浆ET-1含量显著升高(P0.01),胃窦部eNOS mRNA表达显著降低、ATⅡmRNA表达显著升高(P0.01)。与模型组比较,点灸组与电针组胃排空率及小肠推进率显著升高,血浆ET-1含量显著降低,胃窦部eNOS mRNA表达显著升高、ATⅡmRNA表达显著降低(P0.05)。点灸组与电针组之间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:点灸与电针均可有效促进DGP大鼠胃肠运动,改善胃排空迟缓症状,两种疗法疗效相当,其作用机制可能与升高胃窦部eNOS mRNA表达、降低ATⅡmRNA表达有关。     

加减温经汤对妇科寒凝血瘀证大鼠Rho/ROCK信号通路相关因子表达的影响

目的观察加减温经汤对妇科寒凝血瘀证大鼠Rho/ROCK信号通路相关因子表达的影响,探讨其调节微血管的作用机制。方法实验大鼠随机分为空白组、模型组、BQ123组和温经汤组,冰水浴法建立妇科寒凝血瘀证大鼠模型,检测大鼠全血血液流变学相关指标,ELISA检测血清和卵巢组织内皮素(ET)-1和一氧化氮(NO)含量,RT-qPCR和Western blot分别检测卵巢组织Rho/ROCK信号通路关键因子RhoA、ROCK1、MLCKm RNA和蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠全血血液流变学相关指标均明显升高(P0.01,P0.05),血清和卵巢组织ET-1含量明显升高,NO含量明显降低(P0.01),卵巢组织RhoA、ROCK1、MLCK mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,BQ123组和温经汤组大鼠血清和卵巢组织ET-1含量明显降低,NO含量明显升高(P0.01,P0.05),卵巢组织RhoA、ROCK1、MLCKm RNA和蛋白表达明显降低(P0.01)。结论加减温经汤通过抑制Rho/ROCK信号通路相关因子的过度激活,改善卵巢子宫组织微血管调节的失衡,从而治疗妇科寒凝血瘀证。     

黄连解毒汤对Aβ25-35诱导的HT22细胞NF-κB活化及炎症因子水平的影响

目的:探讨黄连解毒汤对β-淀粉样蛋白25-35(β-amyloid protein 25-35,Aβ_(25-35))诱导的HT22细胞核转录因子-κB(NF-κB)活化及炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:培养HT22细胞,HT22细胞分为空白组、模型组、多奈哌齐组(0.000 9 g·kg-1)和黄连解毒汤低、高剂量组(2.7,8.1 g·kg-1),空白组、模型组加入空白血清,各药物组分别加入含药血清1 h后,模型组和各药物组细胞分别加入Aβ_(25-35)(40μmol·L-1),24 h后运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-NF-κB p65表达水平;免疫荧光法检测分析各组NF-κB p65核移位情况;用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白含量及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测IL-1β,IL-6,TNF-αmRNA的表达情况。结果:与空白组比较,模型组的IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白分泌及其mRNA表达增多,NF-κB活化水平增高(P0.05);与模型组比较,黄连解毒汤低、高剂量组及多奈哌齐组的炎性因子及mRNA表达量均减低(P0.05),并且能抑制NF-κB活化。结论:黄连解毒汤可降低Aβ_(25-35)诱导HT22细胞炎症反应,从而减轻Aβ_(25-35)神经毒性作用,作用机制可能与抑制NF-κB活化有关。     

针刺调节Ghrelin对高血压大鼠血管内皮损伤保护机制研究

摘要：目的:观察针刺"足三里"对自发性高血压大鼠（SHR）主动脉胃促生长素（Ghrelin）、内皮素-1（ET-1）及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达的影响,探讨针刺保护自发性高血压大鼠血管内皮损伤作用机制。方法:选用雄性SHR大鼠30只,随机数字表法分为模型组（10只）、针刺组（10只）和非经非穴组（10只）,Wistar-kyoto（WKY）大鼠（10只）作为空白组。针刺组针刺双侧"足三里"穴治疗,非经非穴组针刺鼠尾作为对照,空白组与模型组捆绑不做任何处理。治疗结束后,取血清及主动脉;ELISA检测血清Ghrelin和ET-1含量变化,荧光定量PCR检测大鼠胸主动脉Ghrelin受体（GHSR）和eNOS mRNA表达,用Western blot检测大鼠胸主动脉eNOS、GHSR蛋白含量表达。结果:与空白组相比,模型组、非经非穴组大鼠血清Ghrelin含量显著降低,大鼠胸主动脉GHSR、eNOS蛋白含量显著降低,大鼠胸主动脉GHSR、eNOS mRNA表达显著降低,血清ET-1含量升高（P <0.05）;与模型组相比,针刺组血清Ghrelin、eNOS含量表达升高、胸主动脉GHSR、eNOS蛋白表达升高,胸主动脉GHSR、eNOS mRNA表达升高,血清ET-1含量降低（P <0.05）。结论:针刺足三里可通过改善血清及主动脉Ghrelin、eNOS及ET-1表达,改善血管内皮损伤,起到血管保护作用。     

健脾消癌方对结肠癌TGF-β/lncRNA-ATB/miR-200a信号通路的影响

目的:观察健脾消癌方对结肠癌SW620细胞中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/长链非编码RNA-ATB(long noncoding RNA ATB,lncRNA-ATB)/微小RNA 200a(microRNA 200a,miR-200a)信号通路的影响,探讨健脾消癌方抑制结直肠癌转移的可能作用机制。方法:10%,15%,20%健脾消癌方含药血清处理TGF-β诱导后SW620细胞,实时定量荧光聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)检测lncRNA-ATB,miR-200a,E盒结合锌指蛋白(Zinc finger E-box-binding homeobox 1,ZEB1)mRNA的表达水平,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测ZEB1蛋白表达水平。结果:与空白组比较,TGF-β诱导组lncRNA-ATB,ZEB1 mRNA相对表达量升高,miR-200a mRNA相对表达量下降(P0.01);与TGF-β诱导组比较,健脾消癌方低剂量组lncRNA-ATB,ZEB1 mRNA相对表达量降低,miR-200a相对表达量升高(P0.05);与TGF-β诱导组比较,健脾消癌方中、高剂量组lncRNA-ATB,ZEB1 mRNA相对表达量显著降低,miR-200a相对表达量升高(P0.01)。与空白组比较,TGF-β诱导组的ZEB1蛋白相对表达量升高(P0.05);与TGF-β诱导组比较,健脾消癌方低剂量组ZEB1蛋白相对表达量稍降低,差异无统计学意义,健脾消癌方中、高剂量组ZEB1蛋白相对表达量显著降低(P0.01)。结论:健脾消癌方可能通过抑制SW620细胞TGF-β诱导的lncRNA-ATB的表达,增加miR-200a的表达,降低ZEB1表达来抑制结肠癌的转移。     

黄连解毒汤对自发性高血压大鼠血压和炎症因子的影响

目的:观察黄连解毒汤对自发性高血压大鼠(SHR)血压和炎症因子的影响,探讨黄连解毒汤治疗高血压的机制。方法:雄性12周龄SHR 24只随机分为黄连解毒汤组、模型对照组和卡托普利组3组,治疗6周,检测治疗前后的血压变化,测定血清中超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、6酮前列环素(6-K-PG)、NO、内皮素-1(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)、同型半胱氨酸(Hcy)和单核细胞趋化因子(MCP-1)变化,并以同龄Wistar Kyoto(WKY)大鼠8只做空白对照组。结果:SHR血压呈进行性增高,血清中hs-CRP、ET-1、vWF、Hcy和MCP-1升高,NO和6-K-PG降低(P<0.05,P<0.01),黄连解毒汤可控制SHR血压,降低hs-CRP、ET-1、vWF、Hcy和MCP-1,增加NO和6-K-PG(P<0.05,P<0.01)。结论:黄连解毒汤可通过调节炎症因子水平,控制SHR高血压的发展。     

健脾消癌方抑制结肠癌增殖的作用机制

目的:观察健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21),第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)表达的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:10%,15%,20%健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-21,PTEN mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,健脾消癌方低剂量组miR-21 mRNA相对表达量降低,PTEN mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;健脾消癌方中剂量组miR-21mRNA相对表达明显降低,PTEN mRNA相对表达明显升高(P0.05);健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量显著降低,PTEN mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量明显降低,PTEN mRNA相对表达量明显升高(P0.05)。与空白组比较,健脾消癌方中、低剂量组PTEN蛋白相对表达量升高,差异无统计学意义;与空白组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显上升(P0.05);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显升高(P0.05)。结论:健脾消癌方可能通过降低miR-21的表达,上调miR-21靶基因PTEN蛋白表达抑制结肠癌的增殖。     

葛根芩连汤含药血清通过miR-146b/SIRT1信号通路改善HepG_2细胞胰岛素抵抗的研究

目的:探讨葛根芩连汤含药血清改善HepG_2细胞胰岛素抵抗的机制。方法:建立胰岛素抵抗HepG_2细胞模型,用葛根芩连汤含药血清、吡格列酮干预,并设空白对照组和模型组。比色法检测细胞糖原合成能力,实时定量PCR检测miR-146b的表达,Western blot和实时定量PCR检测SIRT1/FoxO1通路中相关蛋白及mRNA的表达。结果:葛根芩连汤含药血清能逆转胰岛素抵抗HepG_2细胞的糖原合成能力下降(P0.01)。与对照组比较,模型组miR-146b表达显著升高(P0.01),葛根芩连汤含药血清能显著抑制miR-146b的表达(P0.01)。Western blot显示,与空白对照组比较,模型组SIRT1、PPARγ蛋白表达显著降低,acetyl-FoxO1蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01);与模型组比较,葛根芩连汤含药血清组SIRT1、PPARγ蛋白表达显著升高,acetyl-FoxO1蛋白表达显著降低(P0.05或P0.01)。过表达的miR-146b能抑制SIRT1蛋白的表达,沉默miR-146b能增强SIRT1蛋白的表达(P0.05或P0.01)。结论:葛根芩连汤含药血清能改善棕榈酸诱导的HepG_2胰岛素抵抗模型,其机制与调控miR-146b/SIRT1信号通路有关。     

当归芍药散含药血清对ET-1诱导的HSC-T6细胞内p-MLCⅡ，MLCⅡ蛋白表达的影响

目的:探究内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对大鼠肝星状细胞HSC-T6内磷酸化肌球蛋白轻链Ⅱ(phosphorylated myosin light chainⅡ,p-MLCⅡ),肌球蛋白轻链Ⅱ(myosin light chainⅡ,MLCⅡ)蛋白表达的影响及当归芍药散(Danggui Shaoyao San)含药血清对其的干预作用。方法:将HSC-T6细胞种板后,各组每孔加入DMEM和终体积分数分别为2. 5%,5%,10%,15%,20%的空白大鼠血清,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定HSC-T6细胞的活力,筛选出适合的大鼠血清浓度范围;将细胞分为空白血清组(5%,10%,15%)和当归芍药散含药血清组(5%,10%,15%),酶联免疫吸附测定(ELISA)检测基础状态下细胞培养上清液中ET-1的含量;细胞分为空白血清组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测基础状态下细胞培养上清液中ET-1 mRNA的水平;将细胞分为空白血清组(10%),模型组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),Y-27632抑制剂组(100μmol·L~(-1)),除空白血清组外,其余各组均加入10 nmol·L~(-1)ET-1诱导HSC-T6细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ET-1诱导的HSC-T6细胞中p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。结果:选用血清浓度为5%,10%,15%作为含药血清浓度。与空白血清组比较,当归芍药散含药血清组明显降低基础状态下ET-1含量,ET-1 mRNA相对含量(P 0. 05,P 0. 01)。与空白血清组比较,模型组细胞内p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);与模型组比较,当归芍药散含药血清各剂量组及Y-27632抑制剂组均可明显下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01)。结论:当归芍药散含药血清可能通过下调ET-1的含量,抑制ET-1的自分泌,从而下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。     

通脉降浊煎剂含药血清对泡沫细胞胆固醇流出率的影响

目的研究通脉降浊煎剂含药血清(TDMS)对泡沫细胞胆固醇流出率的影响及可能机制。方法采用50mg/L ox-LDL诱导巨噬细胞48h,建立巨噬细胞源泡沫细胞模型,添加TDMS,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞),ox-LDL组(50mg/L ox-LDL),β-环糊精(β-CD)组(50mg/L ox-LDL+10mmol/Lβ-CD),正常血清(CS)组(50mg/L ox-LDL+等体积正常血清),TDMS组(50mg/L oxLDL+5%TDMS)。检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和细胞胆固醇流出率;采用Western blot方法检测细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达;Real-time PCR方法检测细胞内ABCA1、miR-33a、miR-33bmRNA表达。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和胆固醇流出率均增加(P0.05,P0.01),ABCA1mRNA和蛋白表达水平降低(P0.01),miR-33a和miR-33bmRNA表达水平均升高(P0.01)。与ox-LDL组比较,β-CD组与TDMS组细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量均下降,胆固醇流出率增大(P0.05,P0.01),ABCA1mRNA和蛋白表达水平升高(P0.01),细胞内miR-33a和miR-33bmRNA表达水平均降低(P0.01)。结论 TDMS通过调节miR-33a/b和ABCA1表达,从而提高胆固醇流出率,降低泡沫细胞内胆固醇含量。     

血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠骨髓源内皮祖细胞衰老及p53、SIRT1蛋白表达的影响

目的观察血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠骨髓源内皮祖细胞(EPCs)衰老及对p53、SIRT1蛋白表达的影响,探讨其抗衰老的作用机制。方法体外培养EPCs,加入100 nmol/L AngⅡ诱导细胞衰老,建立EPCs衰老模型,随机分为正常组、模型组、miR-34a抑制剂组、血府逐瘀汤5%药物血清组、血府逐瘀汤10%药物血清组、血府逐瘀汤15%药物血清组。β-半乳糖苷酶染色法检测内皮祖细胞衰老,Western blot检测EPCs中p53蛋白、SIRT1蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组EPCs衰老数量明显增多(P0.01),p53蛋白表达量明显升高(P0.01),SIRT1蛋白表达量明显降低(P0.01);与模型组比较,miR-34a抑制剂组和5%、10%、15%药物血清组EPCs衰老数量显著减少(P0.01),miR-34a抑制剂组和10%、15%药物血清组p53蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01),miR-34a抑制剂组和10%、15%药物血清组SIRT1蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01);与miR-34a抑制剂组比较,5%、10%、15%药物血清组EPCs衰老数量显著增多(P0.05,P0.01),p53蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01),SIRT1蛋白表达明显下降(P0.01);与5%药物血清组比较,10%、15%药物血清组EPCs衰老数量明显减少(P0.01),p53蛋白表达显著降低(P0.01),SIRT1蛋白表达显著升高(P0.01);与10%药物血清组比较,15%药物血清组EPCs衰老数量明显减少(P0.01),p53蛋白表达差异不明显,SIRT1蛋白表达明显升高(P0.01)。结论血府逐瘀汤能延缓EPCs的衰老,可明显降低衰老EPCs中p53蛋白的表达,显著增加衰老EPCs中SIRT1蛋白的表达,其中以15%药物血清组效果最佳。