RASSF1A基因启动子区甲基化与膀胱移行细胞癌

目的探讨RASSF1A(RAS association domain family1A)基因启动子甲基化与膀胱移行细胞癌发生、发展的关系.方法用甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)方法检测正常膀胱组织,BTCC组织中RASSF1A基因启动子CPG岛甲基化状态.结果在正常膀胱组织中RASSF1A基因启动子未发生甲基化,在BTCC组织中RASSF1A基因启动子甲基化频率为60.9%(14/23),两组间表达差异有显著性意义(P＜0.05).结论RASSF1A基因启动子在BTCC组织中发生异常甲基化导致RASSF1A基因失活从而引起肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关.     

RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌中转录表达的研究

目的探讨RASSF1A(RAS association domain fanaly1A)基因mRNA表达水平与膀胱移行细胞癌发生、发展的关系.方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测37例膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell Carcinoma,BTCC)组织和8例正常膀胱组织中RASSFlA基因mRNA表达水平.结果RASSF1A mRNA在8份正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中的表达率为35.1%(13/37),且表达量低于正常膀胱组织,两组间表达差异有显著性(P＜0.05),但在各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无显著性(P＞0.05).结论RASSF1A mRNA表达缺失或下调,参与了肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关.     

COX-2和PCNA在膀胱移行细胞癌中表达的意义及其相关性研究

目的探讨COX-2和PCNA在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达及临床意义。方法采用免疫组化S-P法,检测61例BTCC和10例正常膀胱组织中COX-2和PCNA的表达。结果COX-2和PCNA在正常膀胱移行细胞中不表达,在BTCC中阳性率分别为75．41％（46／61）,70．49％（43／61）,两种基因在正常膀胱移行细胞和BTCC中的表达之间差异有统计学意义（P〈0．01）;两种基因的阳性表达水平与BTCC中的病理分级、临床分期有关（P〈0．01）;PCNA在BTCC的表达水平与BTCC的复发率有关（P〈0．05）,两种基因在BTCC中的表达水平之间呈正相关（rs=0．546,P〈0．01）。结论COX-2和PCNA异常表达在BTCC发生、发展、转移、复发等过程中起着重要作用。联合检测能更好地判断BTCC的预后和制定合理治疗方案。     

RASSF1A蛋白表达与膀胱移行细胞癌发生、发展的关系

目的探讨RASSF1A(RAS association domain family1A)蛋白表达水平与膀胱移行细胞癌发生、发展的关系.方法应用免疫印迹技术(western-blot)检测10例正常膀胱组织和23例膀胱移行细胞癌(Badder transitional cell carcinoma,BTCC)组织中RASSF1A蛋白表达水平.结果RASSF1A蛋白在正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中表达率为30.4%(7/23),且表达量低于正常膀胱组织,两组间表达差异有显著性意义(P＜0.05),但各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无显著性意义(P＞0.05).结论RASSF1A蛋白表达缺失或下调可能与膀胱移行细胞癌的发生有关,而与肿瘤的进展可能无关.     

GSTP1和RASSF1A在前列腺癌组织中的甲基化检测及其表达研究

目的：研究前列腺癌和前列腺增生组织中GSTP1和RASSF1A基因的甲基化差异及其蛋白表达情况,探讨GSTP1和RASSF1A基因甲基化作为前列腺癌早期诊断的价值,并揭示该基因甲基化与前列腺癌的发生发展的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法检测GSTP1和RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态,并运用免疫组化SP染色法检测前列腺癌组织中GSTP1和RASSF1A基因的蛋白表达情况。结果：前列腺癌组织中GSTP1和RASSF1A基因甲基化检出率均明显高于前列腺增生组织,差异均有统计学意义（GSTP1：76.00%vs3.33%,P〈0.001;RASSF1A：68.00%vs16.67%,P〈0.001）。在前列腺癌中,GSTP1和RASSF1A蛋白阳性表达均明显低于前列腺增生组织,差异均有统计学意义（GSTP1：20.00%vs76.67%,P〈0.001;RASSF1A：38.00%vs90.00%,P〈0.001）。结论：GSTP1和RASSF1A基因异常甲基化可导致靶基因的蛋白表达降低,促进前列腺癌的发生发展。因此,GSTP1和RASSF1A基因在前列腺癌的发生、发展中起到重要作用,检测GSTP1和RASSF1A基因的甲基化有望成为前列腺癌早期诊断的分子标志物。     

膀胱移行细胞癌组织中Survivin、Bcl-2、p53的表达及临床意义

目的探讨膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中Survivin、Bel-2、p53的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学链酶卵白素-过氧化物酶复合物（sP）方法，检测78例BTCC组织中Survivin、Bel-2、p53的表达，并与15例正常膀胱黏膜组织进行对照研究。结果78例BTCC组织中，Survivin的阳性率为65．4%，Bel-2阳性率为55．1%，p53阳性率为48．7％，而正常膀胱黏膜组织中未见Survivin、p53阳性表达。Survivin、Bcl_2表达与BTCC的病理分级和临床分期显著相关（P〈0．05）。根据Spearman相关分析表明Survivin与Bcl-2、p53表达呈正相关（P〈0．05）。结论Survivin和Bcl-2的高表达提示膀胱癌预后不良，Sttrvivin在BTCC组织中的表达与Bcl-2、p53的异常表达密切相关。     

维生素E对氯化镍染毒大鼠肺组织p15基因甲基化过程的影响

[目的]探讨维生素E（VE）对氯化镍染毒大鼠肺组织p15基因甲基化过程的影响。[方法]以0．1、0．2、0．4和0．8mg／mL氯化镍灌胃染毒大鼠,并设立对照组（生理盐水）和拮抗组（0．8mg／mL氯化镍＋5mg／mL VE）,持续6周。染毒结束后处死大鼠,制备肺组织匀浆,采用分光光度法,测定谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平的变化;以荧光定量PCR法检测肺组织中抑癌基因p15的表达水平;以甲基化PCR法检测p15启动子甲基化状态;以Western-blot检测DNA甲基转移酶1（DNMT1）和蛋氨酸腺苷转移酶2A（MAT2A）的表达水平。[结果]随着氯化镍染毒剂量的增加,MDA含量显著升高,GSH含量显著下降（P〈0．01）;与相同剂量染毒组相比,拮抗组大鼠肺组织中MDA含量降低,GSH含量升高（P〈0．05）;对照组大鼠肺组织p15启动子为非甲基化状态,染毒组大鼠肺组织p15启动子甲基化和非甲基化条带均有表达;各染毒组p15mRNA表达量与对照组相比均显著性降低（P〈0．01）,使用抗氧化剂VE后p15mRNA表达量与相同剂量染毒组相比显著性增高（P〈0．05）;随着染镍剂量的增高,DNMT1和MAT2A表达量显著性升高,与对照组相比,最高剂量染镍组DNMT1和MAT2A的表达量分别增高了1．52倍和1．49倍。使用拮抗剂VE后,与相同剂量染镍组相比DNMT1和MAT2A的表达量分别降低了10％和29％;双变量相关分析显示大鼠肺组织中GSH含量与DNMT1和MAT2A蛋白表达水平呈负相关关系,相关系数分别为r=-0．889（P=0．018）和r=-0．821（P=0．044）。[结论]维生素E可能通过影响GSH在氯化镍染毒大鼠肺组织中的含量而影响p15基因的甲基化过程。     

DAPK基因启动子区过甲基化与颈段食管癌的关系

目的探讨死亡相关蛋白激酶基因启动子区过甲基化与颈段食管癌的关系。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）法和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法分析颈段食管部正常黏膜、颈段食管癌及相应癌旁组织中DAPK基因启动子区过甲基化及其mRNA表达状况。结果42例颈段食管癌组织中,有27例（64．3％）DAPK基因启动子区过甲基化,其在各病理分级和T分级之间差异无统计学意义（P〉0．05）,而在N分级之间差异有统计学意义（P〈0．05）。25例癌旁组织中,有6例过甲基化,且均为颈段食管癌组织中有过甲基化的病例。颈段食管部正常组织、非甲基化的颈段食管癌组织和癌旁组织中均有DAPKmRNA表达。结论颈段食管癌中DAPK基因启动子区过甲基化与mRNA失表达有关,可能是颈段食管癌发生、发展的原因之一。     

MSP法检测膀胱移行细胞癌PTEN启动子甲基化的实验研究

目的:探讨甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌PTEN基因启动子甲基化的方法及意义。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌组织(48例)和正常膀胱组织(15例)PTEN基因启动子甲基化状态。结果:膀胱癌组织中PTEN启动子甲基化率为47.9%(23/48),而在15例正常膀胱组织中其启动子未发生甲基化,两组间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:MSP法检测膀胱移行细胞癌PTEN基因启动子甲基化可行。     

PTEN异常表达及甲基化与膀胱移行细胞癌的关系

目的:探讨PTEN基因mRNA异常表达及其启动子甲基化与膀胱移行细胞癌的关系。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测膀胱移行细胞癌组织48例和正常对照15例PTEN基因mRNA的表达水平和应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测启动子的甲基化。结果:PTEN基因mRNA在膀胱癌患者的表达在48例中有27例,而正常对照全部有表达;正常对照全部未检测到PTEN基因启动子甲基化,而膀胱癌患者启动子甲基化有23例。结论:PTEN基因mRNA表达缺失可能与启动子甲基化有关,在膀胱移行细胞癌的发生、发展及转移过程中起重要作用。     

自噬基因Beclin 1与膀胱癌发生发展及其预后相关性分析

目的探讨自噬基因Beclin 1在膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中的表达和其在膀胱癌发生发展中的作用及预后的相关性。方法免疫组化EnVision法检测58例BTCC组织和20例正常膀胱组织中Beclin 1的表达,分析其与BTCC的分级、分期、侵袭及转移等生物学行为的关系,并对BTCC患者进行随访以期了解Beclin 1对患者生存率的影响。结果 Beclin 1在58例BTCC组织中阳性表达率明显低于正常膀胱黏膜组织中的表达（χ2=9.24,P〈0.01）。Beclin 1的表达与病理分级、TNM分期、生长方式、淋巴结转移有关（P〈0.05）。Beclin 1表达阳性患者的5年生存率明显优于Be-clin 1表达阴性的患者（P〈0.01）。Cox回归多因素分析表明Beclin 1表达是与患者5年生存率相关的独立预后因素（P〈0.05）。结论 Beclin 1在BTCC组织中表达下调,并可以作为BTCC预测发生发展和判断预后的生物学标志物。     

多发性骨髓瘤中RASSF2A基因甲基化分析研究

目的 检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中RASSF2A基因启动子区甲基化程度及其mRNA表达水平,分析甲基化在MM进展中的调控机制.方法 通过甲基化特异性PCR(MSP)分别检测30例MM患者与30例正常对照组外周血中RASSF2A基因启动子甲基化水平,通过荧光定量PCR检测RASSF2A m...     

甲状腺乳头状癌miR－34b基因表达及其启动子区甲基化的临床意义研究

目的：探讨miR－34b基因表达及其启动子区甲基化（MSP）在甲状腺乳头状癌（PTC）中的临床意义。方法：收集2008年10月一2013年1月本院治疗的42例甲状腺乳头状癌患者癌组织标本（实验组）和42例甲状腺腺瘤患者瘤旁组织标本（对照组）,检测两组miR－34bmRNA表达（实时定量PCR法）及miR－34b基因启动子区甲基化（甲基化特异性PCR法）,并对结果进行分析。结果：实验组miR－34bmRNA相对平均表达量（O．84±0．04）,miR－34b基因启动子甲基化阳性率71．4％,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;实验组中不同性别、年龄、肿瘤直径、分期和包膜浸润之间,甲基化阳性率比较差异无统计学意义（P〉0.05）;而存在淋巴结转移甲基化率（88．5％）显著高于不存在淋巴结转移（43．8％）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：miR－34b基因表达及其启动子区甲基化与PTC发生发展具有密切关系,建议临床深人研究。     

膀胱尿路上皮癌uPA和tPA表达及临床病理意义

目的研究膀胱尿路上皮癌和癌旁正常移行上皮组织中尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）和组织型纤溶酶原激活剂（tPA）表达水平及其临床病理意义。方法45例膀胱尿路上皮癌和10例癌旁正常膀胱移行上皮组织标本常规制作石蜡包埋切片，uPA和tPA染色方法为EnVision免疫组化法。结果膀胱尿路上皮癌uPA表达阳性率（60．0％）明显高于癌旁正常膀胱移行上皮组织（20．O％，X2=5．25，P=0．022），但tPA则相反（42．2％vs90．9％，）（X2=7．47，P=0．006）。病理分级0－I级、临床分期Tis－T1及初发病例uPA表达阳性率明显低于病理分级Ⅱ－Ⅲ级、临床分期Ⅱ－Ⅳ及复发病例（P〈0．05或P〈0．01）；病理分级0－I级、临床分期Tis—T1及单发病例tPA表达阳性率明显高于病理分级Ⅱ－Ⅲ级、临床分期Ⅱ－Ⅳ及多发病例（P〈0．05或P〈0．01）。膀胱尿路上皮癌中uPA表达与tPA表达呈高度不一致性（X2=4．39，P〈0．05）。结论uPA和tPA可能是反映膀胱尿路上皮癌发生、进展、侵袭潜能及预后的重要生物学标记物。     

贵州兴仁县燃煤型砷中毒患者p16基因甲基化研究

目的了解抑癌基因p16启动子区CPG岛在燃煤型砷中毒患者中甲基化的情况和意义。方法分别采集燃煤型砷中毒患者与正常人群外周血标本各51例和52例,采用酚一氯仿法提取DNA。紫外分光光度法测定DNA的含量,将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因的特异引物,进行巢式PCR扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果燃煤型砷中毒患者与正常对照p16基因启动子区CPG岛甲基化检出率分别为94．1％（48／51）和71．1％（37／52）,两者间差异有统计学意义。结论p16启动子区CPG岛甲基化与燃煤型砷中毒有关联。     

配对盒家族基因1甲基化状态与宫颈组织病变的相关性研究

目的：探讨定量测定配对盒家族基因1（PAX1）甲基化状态与宫颈组织病变的相关关系。方法：收集正常宫颈组织20例、宫颈上皮内瘤变CINI组织50例、CINII组织50例、CINIII组织50例和宫颈癌组织50例。采用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation specific PCR,MSP）分析宫颈病变组织中PAX1基因启动子区甲基化状态,结合定量PCR（real time-PCR）检测PAX1mRNA表达情况行综合分析。结果：宫颈癌组织中PAX1基因启动子甲基化率达94%（47/50）,CINI组织中PAX1基因启动子甲基化率达40%（20/50）,CINII 52%（26/50）,CINIII 84%（42/50）,而正常对照组织均无甲基化状态（P〈0.05）。不同临床分期的宫颈癌组织PAX1甲基化率也不尽相同（P〉0.05）,病理组织学分化程度不同,PAX1甲基化率不同,呈负向相关性（P〈0.05）。50例甲基化的宫颈癌组织中有PAX1mR N A表达,随着临床分期升级,PAX1mR N A表达增加,有统计学意义（P〈0.05）;而不同组织分化程度的PAX1mR N A表达量差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：DNA修复因子PAX1甲基化状态可能与子宫颈癌的病因学发生存在相关关系,在临床筛查和宫颈癌的早期诊断中可能具有潜在的应用价值。     

膀胱尿路上皮癌中PTEN甲基化与PI3K/Akt信号通路的关系

目的探讨膀胱尿路上皮癌中PTEN基因启动子甲基化与PI3K/Akt信号传导通路的关系。方法应用甲基化特异性PCR MSP、Western Blot方法,检测41例膀胱尿路上皮癌和18例正常膀胱组织中PTEN基因启动子甲基化状态,并进一步分析其与PI3K/Akt信号转导通路的相关性。结果膀胱尿路上皮癌中PTEN基因启动子甲基化率为53.66%(22/41),明显高于正常膀胱组织的0%(0/18),2组间差异有统计学意义(P0.01);在41例膀胱尿路上皮癌组织中,PTEN甲基化阳性组P-Akt的相对表达量为(1.86±0.13),显著高于阴性组(0.92±0.11),二者差异有统计学意义(P0.05),而2组间Akt的相对表达量则无明显差异。结论膀胱尿路上皮癌中PTEN基因启动子存在高甲基化状态,且与PI3K/Akt信号转导通路蛋白表达呈正相关。     

肝细胞癌患者血浆中PTEN基因启动子甲基化的检测及临床意义

目的检测肝细胞癌患者血浆中PTEN基因启动子的甲基化状态，探讨它与该肿瘤相关临床特征间的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链（MSP）技术，检测40例肝细胞癌患者血浆中PTEN基因启动子的甲基化状态。结果在肝细胞癌患者血浆中，PTEN启动子甲基化率为32．5％（13／40），而在正常健康人的血浆中未检测到其启动子的甲基化（0／10）（P〈0．01）；且PTEN启动子甲基化率在不同大小肿瘤间差异也有统计学意义（P〈0．05）。结论PTEN基因启动子的异常甲基化可能在肝细胞癌的发生及进展过程中起着重要作用，并对该肿瘤的生物学行为产生较大影响；血浆中PTEN基因甲基化的检测有助于肝细胞癌的诊断和预后判断。     

Survivin和bcl-2在膀胱移行细胞癌中表达及其相关性研究

目的探讨凋亡抑制基因Survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及与bcl-2蛋白表达的相关性。方法应用免疫组织链酶卵白素-过氧化物酶复合物（SP）方法，检测40例膀胱移行细胞癌组织标本中Survivin、bcl-2蛋白的表达，并与15例正常膀胱粘膜移行细胞进行对照研究。结果40例膀胱移行细胞癌中，Survivin蛋白的阳性表达率为58．14％，而正常膀胱粘膜组织中未见Survivin蛋白阳性表达（P〈0．01）。Survivin蛋白表达与膀胱移行细胞癌的WHO肿瘤分级有相关性。根据Spearman相关分析表明Survivin与bcl-2蛋白表达正相关（P〈0．01）。结论Survivin基因可通过抑制膀胱移行细胞癌细胞凋亡，对膀胱移行细胞癌的发生发展起重要作用。Survivin的表达与膀胱癌组织中bcl-2蛋白的异常表达密切相关。     

肝癌患者血浆RASSF1A及p16基因异常甲基化检测

目的探讨血浆RASSF1A基因(Ras association domain family 1 gene)和p16基因的启动子区异常甲基化与原发性肝癌关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)法,对100例原发性肝癌(HCC)患者、30例乙肝患者、30例肝硬化患者和30名健康体检者血浆中RASSF1A和p16基因的启动子区异常甲基化状况进行检测。结果 HCC患者血浆RASSF1A和p16基因异常甲基化检出率分别为38.0%(38/100)和65.0%(65/100),而乙肝患者、肝硬化患者和健康体检者均未检出,与HCC组比较,差异均有统计学意义(P=0.000);Logistic回归分析发现,患者年龄、性别、血浆甲胎蛋白(AFP)、HBsAg、p16基因(RASSF1A基因)甲基化状况等与血浆中RASSF1A基因(p16基因)异常甲基化检测结果无关(P0.05)。结论原发性肝癌患者血浆DNA中可检测到RASSF1A基因和p16基因的甲基化;RASSF1A基因和p16基因的甲基化检测对肝癌筛查有重要意义。