尿液NAG总酶及同工酶检测进展

Ｎ－乙酸－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶（ＥＥ３．２．１．３０，Ｎ－ａｃｅｔｙｌ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ，ＮＡＧ）是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，相对分子量约有 １４０ ０００。存在于所有组织中，以前列腺和肾近曲小管溶酶体含量最高。ＮＡＧ有多种同工酶，大多数组织有Ａ和Ｂ型同工酶，少数组织含有微量的Ｉ、Ｓ、Ｐ型同工酶［１］。按等电点由大到小的顺序依次为 Ｂ、 Ｉ、 Ｐ、 Ａ和 Ｓ型同工酶。肾组织有Ａ、Ｂ、Ｉ等３种同工酶，肾组织损伤时主要是尿ＮＡＧ－Ｂ同工酶升高。ＮＡＧ同工酶由２种亚基组成，α和β…     

胃蛋白酶原I,Ⅱ的分离纯化及初步临床应用

用ＤＥＡＥ－５２阴离子交换层析,凝胶过滤高压液相层析（ＨＰＬＣ）,Ｑ－２阴离子交换中压层析从人胃粘膜中提取了胃蛋白酶原Ｉ,Ⅱ,比活分别为１２．５Ｕ／ｍｇ和１９．１Ｕ／ｍｇ得率分别为３１．３５和１０．０％,提取的胃蛋白酶原Ｉ,Ⅱ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分别呈单一区带,分子量分别为２４ｋＤ和３７ｋＤ。潜在的蛋白水解活性的最适ｐＨ都为１．８ＰＧＩ经碱性缓冲液处理后,其水解活性明显变化。而ＰＧⅡ对碱性缓冲液不短     

乙酰胆碱受体的初步纯化及其抗体测定方法的建立

用Ｔｒｉｔｏｎｘ－１００提取，抗人全血清－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱免疫吸附和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤的方法，自人骨骼肌提取得乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲ），ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈一条４４ｋＤ的主带，用此ＡｃｈＲ作包被抗原，建立了检测ＡｃｈＲ－Ａｂ的间接ＥＬＩＳＡ法。若以对照组吸光度均值加２倍标准差为正常上限，则重症肌无力（ＭＧ）患者中，５０％抗ＡｃｈＲ自身抗体（ＡｃｈＲ－Ａｂ）阳性，其他自身免疫病（ＳＬＥ，ＲＡ等）者检出率极低。     

大鼠三叉神经尾侧亚核和脊髓背角浅层内C纤维的主要神经活性物质

本文用免疫荧光双重标记技术对三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）和脊髓背角浅层内ＢａｎｄｅｉｒａｅａＳｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａＩｓｏｌｅｃｔｉｎＢ４（ＢＳＩ－Ｂ４）标记的Ｃ纤维及其终末与Ｐ物质（ＳＰ）能、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）能、谷氨酸（Ｇｌｕ）能和一氧化氮（ＮＯ）能纤维及其终末的分布和相互关系，三叉神经节（ＴＧ）和脊髓背根节（ＤＲＧ）中ＢＳＩ－Ｂ４标记并呈ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、磷酸激活的谷氨酰胺酶（ＰＡＧ，谷氨酸能细胞的特异性标识物）样和ＮＯＳ样阳性的双标细胞进行了定位、定性和定量的系统研究。Ｖｃ和腰髓背角内ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、ＰＡＧ样、ＮＯＳ样阳性纤维和终末及ＢＳＩ－Ｂ４标记的Ｃ纤维及其终末分布的主要重叠区域是Ⅱ层外带（Ⅱｏ）。ＴＧ和ＤＲＧ内可见ＢＳＩ－Ｂ４标记并呈ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、ＰＡＧ样或ＮＯＳ样阳性的双标细胞，其中ＰＡＧ／ＢＳＩ－Ｂ４双标细胞的数量最多。此结果提示Ｃ纤维主要含Ｇｌｕ，Ｇｌｕ是初级传入最主要的神经活性物质。此外还有一些Ｃ纤维含ＳＰ、ＣＧＲＰ和ＮＯ。     

尿液中α-淀粉酶的提纯及性质研究

为了制备淀粉酶测定的参考品，从正常人尿液中提取了α－淀粉酶（Ａｍｙ）并对其特性进行了研究。该提制品淀粉酶的经活性达８４．３ｋＵ／ｇ蛋白，几乎不含其它杂酶（测不到ＡＬＴ、ＳＡＴ、ＬＤ、ＣＫ、ＧＧＴ、ＣｈＥ、ＡＬＰ活性浓度）。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电脉显示一条Ａｍｙ区带。其催化特性和人血清Ａｍｙ非常相似，用亚乙基封闭的Ｇ７－ＰＮＰ（ＥＰＳ）作底物，偶联多功能α－葡萄糖苷酶测定其米氏常数为０．１８９ｍｍ     

N—甲基天冬氨酸受体拮抗剂AP—5在海马对兔P3波电位的 …

目的 推测Ｎ－甲基天冬氨酸受体（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－ａｓｐａｒａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＮＭＤＡＲ）的兴奋性突触后电位（ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ ｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ,ＥＰＳＰ）活动对兔Ｐ３波的作用。方法 采用ＮＭＤＡＲ竞争性拮抗剂ＡＰ－５（３．１２５,６．２５,１２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）在海马ＣＡ１,ＣＡ３微量注入,观察Ｐ３波电位变化。     

再生障碍性贫血患者细胞免疫功能与造血细胞因子的研究

目的：进一步探讨再生障碍性贫血（再障）的免疫发病机制，阐明细胞免疫、造血细胞因子在再障患者中发生变化的基础与临床意义。方法：用单抗试剂盒，采用改良ＡＰＡＡＰ法及酶联免疫试剂盒，采用ＥＬＩＳＡ法对３８例再障患者及２０名正常人外周血Ｔ细胞亚群，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达以及外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）培养上清诱生Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平进行测定。结果：再障患者外周血ＣＤ４细胞减低、ＣＤ８细胞增高、ＣＤ４／ＣＤ８降低或倒置，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达率增高。再障患者ＰＢＭＮＣ培养上清中Ｇ－ＣＳＦ阳性率减低，ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平增高。相关分析发现Ｇ－ＣＳＦ与ＣＤ４细胞及ＣＤ４／ＣＤ８呈正相关，而与ＩＦＮα呈负相关；ＩＬ－６与白细胞数及ＣＤ４细胞呈负相关；ＴＮＦα与ＣＤ８细胞呈正相关而与ＣＤ４／ＣＤ８呈负相关；ＩＬ－８与ＣＤ８细胞及ＨＬＡ－ＤＲ呈正相关。结论：细胞免疫功能异常及细胞因子网络失调在再障发病中起一定的作用。     

caspase 3在细胞因子调节急性白血病细胞凋亡中的变化

目的 研究ｃａｓｐａｓｅ３在粒细胞集落刺激因子（Ｃ－ＣＳＦ）和粒巨洚细胞集落因子（ＧＭ－ＣＳＦ）调节白血病细胞系ＮＢ４细胞凋亡过程中的变化及其意义。方法 利用细胞这、流式细胞仪分析及ＤＮＡ片段化比率测定,检测Ｇ－ＣＳＦ及ＤＭ－ＣＳＦ对ＮＢ４细胞凋亡的影响,应用荧光分光光度法检测ｃａｓｐａｓｅ３活性变化,并利用ＡＥ－ＤＥＶＤ－ＣＲＯ进行ｃａｓｐａｓｅ３抑制试验。结果 Ｇ－ＣＳＦ能诱导ＮＢ４细胞凋亡,     

胆固醇酯转运蛋白的提纯和鉴定

目的建立一种新的分离纯化人血清胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）的方法,为制备ＣＥＴＰ单克隆抗体和ＣＥＴＰ浓度测定提供物质基础。方法制备无脂血清,用ＢｕｔｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ、ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００三步柱层析分离、纯化ＣＥＴＰ。结果纯化ＣＥＴＰ经ＳＤＳＰＡＧＥ电泳鉴定呈单一区带,分子量６５０００,蛋白质含量０３２５ｍｇ／ｍｌ,与国外和作者研制ＣＥＴＰ单抗的免疫斑点试验呈特异性反应,与纯化脂蛋白（ａ）、载脂蛋白（Ａｐｏ）Ａ１、ＡｐｏＢ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、Ｃ３、Ｃ４抗体无免疫反应。结论经三步柱层析获得了纯化ＣＥＴＰ,得率约２５％,活性每小时３０ｎｍｏｌ／μｇ。     

尿酶对碘造影剂肾毒性的早期评估

前瞻性观察１６例肾功能正常患者造影前、造影后２４，４８ｈ肾功能动态变化。造影后２４ｈ血尿素氮（ＢＵＮ）、血清肌酐（ＳＣｒ）无显著变化（Ｐ＞０．０５）、尿谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）、Ｎ－乙酰基－β－Ｄ氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）较造影前显著增高（Ｐ＜０．０１）。造影后４８ｈＢＵＮ，ＳＣｒ显著增高（Ｐ＜０．０ｌ），尿γ－ＧＴ，ＮＡＧ，ＬＤＨ显著恢复（Ｐ＜０．０５）；但仍明显高于造影前，差异有显著性（分别Ｐ＜０．０１，０．０１，０．０５）。提示在肾功能正常患者泛影葡胺对肾小管损害呈一过性，尿γ－ＧＴ是评估碘造影剂肾毒性亚临床期敏感指标     

人重组sIL—6R的纯化与鉴定

采用免疫吸附亲和层析，将抗ｓＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体交联于ＣＮＢｒ活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ。收集ｓＩＬ－６Ｒ转基因细胞的培养上清。经预处理后上亲和柱，获得高纯度的ｓＩＬ－６Ｒ重组蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳后出现一条区带，分子量为５５ｋＤ。     

醛缩酶同工酶琼脂糖电泳测定法

建立分离血清醛缩酶同工酶的方法。利用不连续缓冲体系琼脂糖凝胶电泳进行分离，ＡＬＤ－ＧＬＡＰＤ酶偶联反应与ＰＭＳ－四唑盐递氢呈色系统来显示酶活性区带。２０名健康成人血清醛缩酶同工酶电泳，结果显示两条清晰的酶活性区带ＡＬＤ－Ａ和ＡＬＤ－Ｂ；同时，实验条件的研究也显示：在ｐＨ８．２、终末反应物浓度ＦＤＰ７ｍｍｏｌ／Ｌ、ＮＡＤ５ｍｇ／Ｌ和ＧＬＡＰＤ３Ｕ／Ｌ时区带显色最佳。该方法简便、可靠、对临床肝癌及肝硬化的诊断有一定的辅助价值。     

白血病和骨髓增生异常综合征患者红细胞酶及同工酶谱的改变

目的：调查白血病和骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者红细胞酶和同工酶谱改变的患病率，并研究其临床意义。方法：采用ＩＣＳＨ介绍的方法及ＰＡＧＥ电泳测定红细胞酶活性及ＰＫ和ＡＤＡ同工酶，采用ＦＰＬＣ系统纯化ＡＤＡ同工酶，分析酶蛋白的生化性质。结果：患病率：在２２９例白血病和ＭＤＳ患者中，Ｇ６ＰＤ缺乏为４３．１％，ＰＫ缺乏为２７．８％。ＭＤＳ患者中的酶缺乏患病率：ＰＫ缺乏为５０．０％，Ｇ６ＰＤ缺乏为４８．０％，ＰＮＰ缺乏为３９．１％；酶过多患病率：ＡＤＡ过多为６９．６％，ＥＮＯＬ过多为４０．０％，ＡＬＤ过多为３０．４％。慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）的ＰＫ活性增高，而ＰＫ同工酶型均正常。急性白血病患者采用抗肿瘤抗生素后Ｇ６ＰＤ和６ＰＧＤ活性减低（Ｐ＜０．０５）。ＭＤＳ红细胞酶缺陷显著多于ＡＤＡ２同工酶表达见于ＡＭＬ（Ｍ４和Ｍ５）的单个核细胞及慢性粒－单核细胞白血病（ＣＭＭＬ）的红细胞，但ＡＬＬ不表达（Ｐ＜０．００１）。ＡＤＡ同工酶纯化分析示正常结构。结论：红细胞酶的检测可作为ＣＭＬ的预后参数，作为急性白血病抗肿瘤药物耐药预示指标，有助于ＭＤＳ－ＲＡ和再障、ＣＭＬ与ＣＭＭＬ的鉴别诊断。     

心肌肌钙蛋白T（TNT ）的纯化及性质分析

ＴＮＴ是存在于肌肉组织的一种调节蛋白，具有结合原肌球蛋白的功能，心肌ＴＮＴ的表达特异，因此，骨骼肌和心肌ＴＮＴ异构体蛋白结构差异显著，用免疫学方法不难将心肌与骨骼肌的ＴＮＴ分开，ＴＮＴ测定在心脏缺血性疾病诊断中有较大价值。通过盐析、阴离子交换交换层析及聚焦色谱法得到纯度较高ＴＮＴ，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳分析为一条蛋白区带，带电点为７．３５，分子量３７．４ＫＤ。纯化心肌ＴＮＴ，为研究ＴＮＴ     

自发性夜间胃碱化对十二指肠溃疡病的诊断价值

探讨自发性夜间胃碱化对十二指肠溃疡病的诊断价值。方法对３２例内镜诊断的活动性十二指肠球溃疡（ＤＵ），２１例胃食管反流性疾病〔有反酸、烧心和（或）胸痛等症状，内镜下为０～２级食管炎，食管下段动态２４ｈｐＨ检查积分＞１５．６〕，２３例功能性消化不良患者（有上腹部不适、胀满、上腹痛等症状，内镜下仅为红白相间等慢性炎症表现，食管下段动态２４ｈｐＨ检查积分＜１５．６）和１１例无上消化道症状的健康对照者的２４ｈ胃底（ＬＥＳ下５ｃｍ）和食管下段（ＬＥＳ上５ｃｍ）动态ｐＨ进行了研究。分析了夜间８ｈ（２３ｐｍ～７ａｍ）时间窗内自发性夜间胃碱化（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｎｏｃｔｕｒ－ｎａｌｇａｓｔｒｉｃａｌｋａｌｉｎｉｚａｔｉｏｎ，ＳＮＡ）现象（ｐＨ＞４，时间大于５ｍｉｎ的ｐＨ升高）。结果①ＤＵ组夜间ＳＮＡ阳性率较对照组、ＦＤ和ＧＥＲＤ组明显低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．００１）。②对照组的ＳＮＡ阳性率与ＦＤ和ＧＥＲＤ组比较无显著性差别。③ＳＮＡ诊断ＤＵ的特异性和敏感性分别为８１．８％和８４．３％。结论本文结果说明自发性夜间胃碱化缺乏既是球溃疡发病的重要机制之一，亦可作为诊断球溃疡病的一个重要参考指标。     

范可尼贫血互补群 Ｄ２ 基因突变与卵巢上皮癌患者行 新辅助化疗疗效及预后的相关性

摘要：目的 分析范可尼贫血互补群 Ｄ２（ｆａｎｃｏｎｉ ａｎｅｍｉａ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ２，ＦＡＮＣＤ２）突变与卵巢上皮癌（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｏｖａｒ ｉａｎ ｃａｎｃｅｒ，ＥＯＣ）患者行新辅助化疗（ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，ＮＡＣＴ）后的疗效及预后的相关性。方法 选取２０１７ 年４ 月至 ２０１９ 年 ４ 月兵器工业五二一医院收治的 １８４ 例 ＥＯＣ 患者为研究对象，取穿刺活检组织并提取 ＤＮＡ，采用实时荧光定量 ＰＣＲ 检测患者 ＦＡＮＣＤ２ 基因的突变情况，分析 ＦＡＮＣＤ２ 基因突变与 ＥＯＣ 患者临床病理参数的相关性；进一步分析 ＦＡＮＣＤ２ 突变 与 ＮＡＣＴ 治疗４ 周后的疗效及预后的关系。结果 实时荧光定量 ＰＣＲ 结果表明，ＦＡＮＣＤ２ 基因突变率为４２．３９％。ＦＡＮＣＤ２ 突 变型与野生型 ＥＯＣ 患者的肿瘤病灶直径、ＥＣＯＧ 评分、分化程度和病理分型比较的差异具有统计学意义（Ｐ 值分别为 ０．０２４， ０．０３７，＜０．００１，０．００２）。ＦＡＮＣＤ２ 突变型 ＥＯＣ 患者的疾病控制率（ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒａｔｅ，ＤＣＲ）显著低于 ＦＡＮＣＤ２ 野生型 ＥＯＣ 患者 （６６．６７％ ｖｓ ８３．９６％，χ２ ＝ ７．５０６，Ｐ＝ ０．００６）。１８４ 例 ＥＯＣ 患者的总体生存率为 ６５．２２％，ＦＡＮＣＤ２ 突变型 ＥＯＣ 患者的 ２ 年生存 率显著低于 ＦＡＮＣＤ２ 野生型（３２．０７％ ｖｓ ４２．３１％，ｌｏｇ ｒａｎｋ χ２ ＝ ４．１５２，Ｐ＝ ０．０４２）。Ｃｏｘ 风险比例模型多因素显示，分化程度和病 理分型是 ＦＡＮＣＤ２ 突变的独立影响因素（Ｐ＜０．０５）。运用 Ｋａｐｌａｎ Ｍｅｉｅｒ 法对患者进行单因素生存分析发现，肿瘤大小（Ｐ ＝ ０．０３１）、肿瘤病理分型（Ｐ＜０．００１）、分化程度（Ｐ＜０．００１）、突变型 ＦＡＮＣＤ２ 的表达（Ｐ＝ ０．０４２）与患者的总生存期密切相关。Ｃｏｘ 风险比例模型多因素分析显示，肿瘤病理分型、分化程度和 ＦＡＮＣＤ２ 突变是 ＥＯＣ 患者预后的独立影响因素（Ｐ 值分别为０．０１４， ０．０３５，０．０３６）。结论 ＦＡＮＣＤ２ 基因突变与 ＥＯＣ 患者 ＮＡＣＴ 疗效相关，肿瘤病理分型、分化程度、ＦＡＮＣＤ２ 突变是 ＥＯＣ 患者预 后的独立影响因素。     

205例儿童急性淋巴细胞白血病疗效分析

报告２０５例小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ），诱导缓解期采用强烈ＣＯＤＰ＋Ｌ－ＡＳＰ和ＣＯＡＰ＋Ｌ－ＡＳＰ方案，联合大剂量氨甲喋呤（ＨＤ－ＭＴＸ）及头颅放疗（１８Ｇｙ）进行庇护所预防。使５年无病生存率（ＥＦＳ）达到７４．４％，中枢神经系统白血病复发率降至１．５％，睾丸白血病复发率降至３．４％。治疗效果表明：早期强烈化疗及有效的庇护所预防是减少骨髓及髓外复发，提高ＥＦＳ的关键。     

尿中半乳糖苷酶活力的连续监测法

本文报道用新色原氯硝基苯基Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基半乳糖苷（ＣＮＰ－ＧＡＬ）连续监测法测定尿ＧＡＬ。此法不需尿样空白，有很高的精度，批内、批间的ＣＶ≤６．６８％。尿ＧＡＬ的最适ＰＨ４．４－５．０，最佳呈色反应ＰＨ４．６－５．０，在４００秒观察期内吸光度亦化与时间成正比例。     

ABC—ELISA法检测血小板相关IgG及临床应用

用国产ＢＡＳ试剂建立ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法，用于检测ＰＡＩｇＧ。本法灵敏度较ＰｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ高８倍，因而用血量少。共检测健康献血员３０例（正常对照），特发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）８８例及继发性血小板减少（ＳＴＰ）３１例。正常上限为７．３ｎｇ／１０＾６Ｐｌｔ，各型ＩＴＰ ＰＡＩｇＧ显增高，与正常组比较，差异显（Ｐ〈０．００１），而ＳＴＰ组则无差异（Ｐ〉０．０５），急性型阳性率为１００％，慢     

三种血浆D-二聚体检测方法在血栓性疾病诊断中的应用

目的评价三种检测血浆Ｄ－二聚体方法诊断血栓性疾病的临床应用价值。方法用胶乳凝集试验（ＬＡＴ）、酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和胶体金免疫渗透试验（ＧＩＡ）检测血浆Ｄ－二聚体含量并比较其结果。结果三种检测血浆Ｄ－二聚体方法对血栓性疾病诊断的灵敏度和阴性预测值均大于９０％，ＬＡＴ、ＥＬＩＳＡ和ＧＩＡ在正常人中的假阳性率分别为２３．３３％、１０．８７％、６．０６％。Ｄ－二聚体和纤维蛋白（原）降解产物（ＦＤＰ）同时检测可使弥漫性血管内凝血（ＤＩＣ）诊断的特异性和灵敏度达１００％。结论当临界值（ｃｕｔ－ｏｆ值）不同时，三种方法在正常人中的假阳性率和对血栓性疾病诊断的灵敏度、特异性、阳性和阴性预测值有差别。ＧＩＡ具有ＥＬＩＳＡ的定量和ＬＡＴ的简便、快速的优点，非常适合于临床对血栓性疾病的实验诊断。