体外原代培养人视网膜色素上皮细胞

目的：探讨建立体外原代培养人类视网膜色素上皮细胞(RPE)技术。为研究溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)对培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖的作用。方法：取自愿贡献的意外事故成年眼球，用2．5g／L胰酶消化获取人RPE细胞、150mL／L胎牛血清的DMEM培养液培养，细胞接近融合状态时进行传代培养。取自愿贡献的眼球并游离其视网膜色素上皮细胞，用DMEM加100mL／L血清及MEM氨基酸和庆大霉素，进行细胞传代培养。用溶血磷脂酸、转移因子β2(TGF—β2)及LPA TGF—β2进行视网膜色素上皮细胞增殖试验，用细胞染色法进行细胞计数，提取视网膜色素上皮细胞DNA，用Spectrophotometer进行DNA定量测定。结果：RPE原代细胞镜下为圆形，大小不一，内含较多的色素颗粒，胞核无法辨认。原代细胞培养贴壁后3d增殖速度明显加快，至4～5d即可基本融合，细胞浆内色素颗粒则随传代次数增多而逐渐减少。第3代培养的视网膜色素上皮细胞膜表面可见微绒毛，细胞质内细胞器丰富，线粒体量多，体积较小，内外膜分界清晰，嵴较短。色素颗粒散在分布于胞浆内，多数细胞质内数量较少呈高电子密度包含物。LPA对原代培养的视网膜色素上皮细胞增殖有促进作用。含有和／或缺乏10mL／L小牛血清的两种LPA(10μmol／L)均明显刺激视网膜色素上皮细胞增殖，但这种细胞的增殖被TGF-β2所抑制，LPA(10μmol／L)引起视网膜的色素上皮细胞DNA合成增加是正常对照组的两倍。     

IL-1β和TNF-α对培养的人视网膜色素上皮细胞的影响

目的：观察白介素1β（IL－1β）和α肿瘤坏死因子（TNF－α）对培养的人视网膜色素上皮细胞（RPE）生长的影响，了解在增生性玻璃体视网膜病变（PVR）中炎前因子的调控机制。方法；通过MTT比色实验和^3H-TdR掺入实验，检测IL－1β和／或TNF－α对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响。结果：IL－1β和／或TNF－α（0.02-20ng/ml0可促进培养的RPE增殖，呈剂量和时间依赖性，DNA合成也明显增加。结论：炎前因子IL－1β和／或TNF－α可能促进PVR中细胞的增殖。     

TGF-β1对RPE细胞bcl-2/Fas mRNA和Caspase-3表达的影响

目的观察转化生长因子-β1（transforming grawthfactor-β1，TGF-β1）诱导人视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）凋亡的作用机制。方法使用逆转录多聚酶链反应检测不同浓度TGF-β1作用下的人RPE细胞中凋亡相关基因bel-2和Fas mRNA的表达。使用Western-Blot蛋白印迹法检测不同浓度TGF-β1处理过的PRE细胞中Caspase-3蛋白的表达。结果逆转录多聚酶链反应正示，随着TGF-β1岛浓度的增高，人RPE细胞中bcl-2mRNA表达降低，Fas mRNA的表达逐渐增高；Western-Blot结果显示。随着TGF-β1浓度的增高，Caspase-3蛋白表达逐渐增高。结论TGF-β1可上调RPE细胞表面Fas基因的表达，从而激活Caspase-3的活性而诱导RPE细胞凋亡，Caspase-3在RPE细胞凋亡过程中起着非常重要的作用。[眼科新进展2006；26（3）：194-197]     

细胞因子对培养的人视网膜色素上皮细胞胶原合成的影响

目的 观察转化生长因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)和干扰素γ(interferon-gamma,IFN-γ)对人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPE)胶原合成的影响。 方法 用³Ｈ-脯氨酸掺入、免疫细胞化学及分子杂交技术观察TGF-β和IFN-γ分别及联合作用下培养的人RPE胶原合成活性。 结果 TGF-β在10 ng/ml浓度使RPE对³Ｈ-脯氨酸的摄取增加130.87％,并增强Ⅳ、Ⅰ和Ⅲ型胶原荧光染色和mRNA表达。IFN-γ在10 000 U/ml浓度抑制54.72％的脯氨酸摄取,并减弱Ⅳ型胶原染色和3种胶原的mRNA表达。 结论 TGF-β和IFN-γ对RPE的胶原合成分别具有正向及负向调控作用,IFN-γ可能用于抑制RPE胶原合成。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 245-248)     

TGF-β对体外培养人胚视网膜色素上皮细胞的影响

目的 研究转化生长因子-β（TGF-β）对体外培养人胚视网膜色素上皮（RPE）细胞的影响，从细胞生物学水平和分子生物学水平探讨近视眼的发病机制。方法 外源性TGF-β刺激人RPE细胞后，通过绘制生长曲线、MTT法检测细胞活性及观察透射电镜研究其细胞自身的生长情况；采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定其分泌HGF、bFGF和TGF-β的量；采用RT-PCR法检测其细胞表达HGF的情况，从而分析外源性TGF-β对体外培养的RPE细胞的影响。结果不同质量浓度的TGF-β均可抑制人胚RPE细胞的生长，随时间的延长作用更加明显；TGF-β可使RPE细胞超微结构发生变化；ELISA结果显示TGF-β对其他两种因子的分泌均有抑制作用，但对自身有促进作用，为正反馈调节；同时可明显抑制RPE细胞内HGF的表达。结论 TGF-β可影响RPE细胞增生、改变超微结构及抑制HGF的表达。     

多西环素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞移行的抑制作用

目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂多西环素对体外培养并经转化生长因子（TGF）-β1刺激的人视网膜色素上皮（RPE）细胞迁移的影响。方法对3～6代培养的人RPE细胞,用不同浓度（0．01、0,10、1．00、10．00μg／L）TGF-β1处理36h,采用明胶酶谱分析法检测人RPE细胞上清液中明胶酶的活性,采用Boyden室迁移测定法评估RPE细胞经TGF-β1刺激后的迁移情况。结果TGF-β1能促进人RPE细胞中基质金属蛋白酶一2的分泌,并具有浓度依赖性。在无多西环素的环境下,TGF-β1刺激RPE细胞后,能明显促进RPE细胞迁移,迁移的RPE细胞数约增加27％,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。在多西环素的环境中,TGF-β1刺激人RPE细胞后迁移受到明显抑制,随着多西环素浓度的增加,RPE细胞穿透微小多孔膜发生迁移的细胞数相应减少,迁移的RPE细胞数约减少50％～70％,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论多西环素能抑制TGF-β1作用所致的RPE细胞迁移,TGF-β1介导的基质金属蛋白酶-2活性的增加在RPE细胞的迁移中起重要作用。     

转化生长因子β1及其I型受体在实验性脉络膜新生血管中的表达与意义

目的探讨激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管（CNV）形成过程中转化生长因子β1（TGF-β1）及其I型受体（TβRI）表达变化趋势及其作用。设计实验性研究。研究对象5组30只雄性BN大鼠。方法BN大鼠单眼视网膜氪激光光凝，诱导CNV形成。分别在光凝后3天，1、2、3、4周摘除眼球，应用免疫组织化学及原位杂交技术检测CNV形成过程中Ⅷ因子相关抗原（FVIIR：Ag）、TGF．β1、T13RI和TGF-β1mRNA的表达及变化。主要指标FⅧR：Ag、TGF-β1、TGF-βmRNA和TβRI。结果：FⅧR：Ag免疫组织化学结果显示，光凝后l周开始形成CNV，3-4周达到高峰。正常BN大鼠TGF-β1、TβRI在视网膜神经节细胞、内核层部分细胞、视网膜色素上皮层表达；TGF-β1mRNA在视网膜神经节细胞、视网膜色素上皮层表达。视网膜光凝后3天～4周，损伤区内FⅧR：Ag阳性染色密度逐渐增加（P〈0．05）；TGF-β1、TGF-β1mRNA和TβRI阳性染色密度逐渐下降（P〈0．05）；三者与FⅧR：Ag阳性染色密度负相关（r=0．87、-0．87、-0．80，P〈0．05）；TGF-β1和TβRI阳性染色密度正相关（r=O．84，P〈O．05）。结论光凝区内TGF-β1合成、分泌不足可能是CNV形成和增殖的主要原因之一；TGF-β1在受体水平表现出调节作用，存在由TβRI介导的生物学效应。TβRI表达低下，信号转导减弱，可能也是CNV形成和增殖的一个重要因素。（眼科，2006，15：262—266．）     

卡巴胆碱对人视网膜色素上皮细胞D407自分泌TGF-β2的调控

目的:研究卡巴胆碱对人视网膜色素上皮细胞株D407表达及分泌转化生长因子β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)的影响。方法:常规培养D407细胞,分为实验组,加入卡巴胆碱10-8~10-4mol/L;空白组:不加药物。处理后2,4,8,16,24,48h采用ELISA法检测上清液中TGF-β2的含量,分析时效与量效关系;采用细胞免疫化学法检测卡巴胆碱孵育24h后D407细胞TGF-β2蛋白质的表达,运用图像分析软件Image-ProPlus6.0行半定量分析。统计学方法采用单因素方差分析。结果:空白组细胞上清液中TGF-β2含量于培养4h后开始上升,24h达586.9±28.5ng/L,各时间点比较有统计学意义(F=86.59,P<0.01)。实验组细胞上清液中TGF-β2含量较空白组增加,随孵育时间的延长该效应逐渐明显,各浓度(10-8~10-4mol/L)组内比较均有统计学意义(F=65.21,183.52,237.07,250.08,344.40;P<0.01);各干预时间点(2,4,8,16,24,48h)实验组细胞上清液中TGF-β2含量随卡巴胆碱浓度升高逐渐增加,组内比较均有统计学意义(F=191.19,293.32,444.26,473.21,315.83,329.08;P<0.01)。孵育24h后实验组D407细胞TGF-β2蛋白质的表达较空白组增高(F=26.11,P<0.01)。结论:卡巴胆碱可促进人视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β2。     

全反视黄酸对培养的人视网膜色素上皮细胞的影响

目的观察全反视黄酸（all-trans retinoic acid,ATRA）对培养的视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epitheli-um,RPE）的形态、增殖以及对RPE细胞中转化生长因子-β2（transforming growth factor-β2,TGF-β2）表达的影响,并探讨ATRA与近视的关系。方法RPE传代至第3代后以1×10^5/孔的密度接种于96孔板或以1×10^6的浓度接种于250ml培养瓶,以10%FBS的F12培养液培养48h后转为0.5%FBS的F12培养液,12h后培养液转换为F12和1nM/ml、5nM/ml、10nM/ml、20nM/ml、30nM/ml的ATRA。以未加ATRA组作对照。48h后观察RPE细胞形态,并以MTT法测定其增殖情况,以流式细胞技术检测其细胞凋亡情况,以免疫组化方法检测RPE细胞TGF-β2表达,并以酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA）方法测定其上清液的TGF-β2浓度。结果不同浓度的ATRA对RPE细胞的形态、增殖有不同的影响。〈10nM/ml的ATRA对RPE细胞的增殖无影响,细胞形态正常,MTT法显示在这些浓度下ATRA对RPE的增殖影响差异无显著性（P〉0.05）;10nM/ml、20nM/ml、30nM/ml的ATRA抑制RPE的增殖,MTT法显示ATRA对RPE有明显的抑制作用（P值分别为P〈0.05,P〈0.01,P〈0.001）,该效应呈剂量依赖性反应。RPE细胞增大变平,突起减少,部分裂解,活力减弱。流式细胞技术检测提示,10nM/ml、20nM/ml、30nM/ml浓度下细胞凋亡率分别为14.58%、19.95%和21.69%。免疫组化方法检测提示,当RPE的ATRA浓度大于10nM/ml时,TGF-β2的表达随浓度增高而增加。ELISA结果显示,ATRA浓度〉10nM/ml时,RPE分泌TGF-β2的浓度增加。结论1nM/ml、5nM/ml的ATRA可维持培养的人RPE的生长,≥10nM/ml引起RPE的增殖抑制,并可诱导RPE的凋亡。10nM/ml及以上的ATRA引起的RPE病理性改变为理解近视眼的RPE改变提供了一条思路,≥10nM/ml的ATRA诱导RPE的TGF-β2表达增加可能导致TGF-β2拮抗碱性成纤维细胞生长因子的作用增强,使后者抑制近视发生的作用减弱而促进近视的发展。     

卡巴胆碱对人视网膜色素上皮细胞转化生长因子β_2表达的调控

目的研究卡巴胆碱对人视网膜色素上皮（RPE）细胞株D407表达转化生长因子β2（TGF-β2）的调控,进而阐明胆碱能药物在近视眼巩膜重塑中的作用。方法常规培养D407细胞,药物干预前换用无血清培养基培养24h。将传代细胞分为实验组和空白组,实验组分别加入1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L卡巴胆碱,空白组不加药物。于处理后2、4、8、16、24、48h分别采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Westernblot法检测细胞中TGF-β2mRNA及TGF-β2蛋白的表达,分析时效与量效关系。结果空白组细胞TGF-β2mRNA、蛋白质表达水平恒定。实验组D407细胞中TGF-β2mRNA的表达随卡巴胆碱作用时间的延长而逐渐升高,差异有统计学意义（F=4455.148,P〈0.01）;且随卡巴胆碱浓度的升高逐渐增加,各组的总体比较差异有统计学意义（F=1102.240,P〈0.01）。卡巴胆碱浓度与干预时间对TGF-β2mRNA表达的影响存在交互作用（F=249.609,P〈0.01）。实验组D407细胞中TGF-β2蛋白的表达随时间延长而逐渐升高,各时间点的总体比较差异有统计学意义（F=2619.21,P〈0.01）,不同浓度卡巴胆碱组TGF-β2蛋白的表达总体比较差异有统计学意义（F=2918.62,P〈0.01）,卡巴胆碱浓度与干预时相TGF-β2蛋白表达的影响存在交互作用（F=186.02,P〈0.01）。结论 RPE细胞可表达TGF-β2,卡巴胆碱可以浓度和时间依赖的方式调控RPE细胞中TGF-β2的表达。     

转化生长因子β1对牛角膜内皮细胞DNA合成的影响

目的：研究外源性转化生长因子β1(transforming growth factor，TGF-β1)对牛角膜内皮细胞(bovine corneal emdothelial cells，BCECs)增殖过程的影响。方法：在体外培养的牛角膜内皮细胞经不同浓度(0．10、1．00、10．00、100．00μg／L)TGF-β1处理后，用流式细胞术测量分析细胞周期，用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测TGF-β1对角膜内皮细胞增殖功能以及DNA合成的影响。结果：一定浓度(0．10、1．00、10．00μg／L)的TGF-β1对角膜内皮细胞有明显的促增殖作用，并呈剂量依赖性。但在较高浓度(100．00μg／L)时对内皮细胞表现出一定的抑制作用。结论：一定浓度外源性的TGF-β1与其受体结合后可以促进牛角膜内皮细胞DNA的合成，可以参与角膜内皮细胞的损伤修复再生过程。     

溶血磷脂酸对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 :探讨建立体外原代培养人类视网膜色素上皮细胞 (RPE)方法。方法 :取自愿者贡献的意外事故成年眼球 ,用 0 .2 5 %胰酶消化获取人RPE细胞、置 15 %胎牛血清的DMEM培养液中培养 ,细胞接近融合状态时进行传代培养。用溶血磷脂酸 (lysophosphatidicacid ,LPA)观察RPE增殖的影响。结果 :RPE原代细胞镜下为圆形 ,大小不一 ,内含较多的色素颗粒 ,胞核无法辨认。原代细胞培养贴壁后第 3天增殖速度明显加快 ,至 4～ 5d即可基本融合 ,细胞浆内色素颗粒则随传代次数增多而逐渐减少。第 3代培养的视网膜色素上皮细胞膜表面可见微绒毛 ,细胞质内细胞器丰富 ,线粒体量多 ,体积较小 ,内外膜分界清晰 ,嵴较短。色素颗粒散在分布于胞浆内 ,多数细胞质内含量较少 ,呈高电子密度包含物。LPA对原代培养的视网膜色素上皮细胞增殖有促进作用。结论 :LPA可促进人类RPE细胞体外培养的增殖 ,第 3代培养的视网膜色素上皮细胞可保留原代细胞的生物学特性     

转化生长因子-β1对人视网膜色素上皮细胞热休克蛋白47及血管内皮生长因子表达的影响

人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生、迁移、合成细胞外基质是促进增生性玻璃体视网膜疾病(PVD)发生和发展的主要原因之一[1-3].血管内皮生长因子(VEGF)可诱导入RPE细胞增生、迁移;转化生长因子-β1(TGF-β1)可诱导入RPE细胞迁移及合成细胞外基质;均在PVD形成过程中发挥着重要作用[2-4].但目前,有关其作用机制尚不明确.RPE细胞热休克蛋白47(HSP47)是一种胶原特异的分子伴侣,对胶原成熟有一定影响[5].我们通过观察TGF-β1对人RPE细胞HSP47及VEGF合成的影响,以进一步探讨TGF-β1在PVD发病机制中的作用.现将结果报道如下.     

ALK5抑制剂对转化生长因子-β1（TGF-β1）致视网膜色素上皮细胞纤维化的干预作用

目的　探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1，TGF-β1）对人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞向成纤维细胞转化的影响，及活化素受体样激酶5（activated receptor kinase 5，ALK5）抑制剂（SB-431542）对这一影响的干预作用。方法　体外培养人RPE细胞，随机分为对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1+SB-431542处理组、SB-431542处理组。对照组不做任何处理，其余三组分别用10 μg·L^-1 TGF-β1、10 μg·L^-1 TGF-β1+30 μmol·L^-1 SB-431542、30 μmol·L^-1 SB-431542处理细胞24 h。MTT法检测各组RPE细胞增殖率；划痕实验观察各组处理后0 h、12 h、24 h RPE细胞迁移情况；免疫荧光法检测各组细胞ALK5蛋白的分布和表达；Western blot法检测各组ALK5、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ，ColⅠ）以及纤维粘连素（fibronectin，FN）蛋白的表达。结果　与对照组相比，TGF-β1作用于RPE细胞24 h后，可改变RPE细胞表型，使其呈成纤维细胞样外观，并明显促进RPE细胞增殖和迁移。10.0 g·L^-1 TGF-β1作用24 h后RPE细胞增殖率为对照组的（1.33±0.08）倍，30 μmol·L^-1 SB-431542作用24 h后RPE细胞增殖率为10.0 g·L^-1 TGF-β1处理组的（67.77±6.78）%。经TGF-β1作用24 h后RPE细胞内ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白的表达显著上调，分别是对照组的（3.69±0.37）倍、（1.76±0.05）倍、（2.58±0.18）倍、（1.86±0.11）倍、（1.74±0.08）倍；SB-431542可逆转TGF-β1诱导的ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白表达上调，分别是TGF-β1处理组的（67.73±5.15）%、（71.71±3.50）%、（79.87±0.05）%、（63.59±3.16）%、（83.07±2.31）%，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　TGF-β1可促进RPE细胞增殖、迁移，向成纤维细胞转化，并能显著上调RPE细胞内ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白的表达；SB-431542可通过抑制TGF-β1的作用而抑制RPE细胞的纤维化。     

TGF—β2干预的缺氧状态下补肾活血剂对Muller细胞及谷氨酰胺合成酶活性的影响

目的观察在缺氧和（或）转化生长因子-β2（TGF—β2）干预条件对体外培养的Muller细胞活力以及谷氨酰胺合成酶（GS）的影响。方法用出生7d的SD大鼠体外培养视网膜Muller细胞，将第2代细胞在含20％胎牛血清的DMEM中培养24h后，换用无血清的DMEM孵育24h。分组为：空白血清对照组（20％正常SD大鼠血清的DMEM）；TGF—β2组（20％正常SD大鼠血清的DMEM及终质量浓度为150ng／L的TGF—β2）；模拟缺氧组（20％正常SD大鼠血清的DMEM及终浓度1．0mmol／L的连二亚硫酸钠）；TGF—β2＋缺氧组（20％正常SD大鼠血清的DMEM液、终浓度1．0mmol／L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng／L的TGF—β2）；中药血清组（20％中药SD大鼠血清的DMEM）；中药血清＋TGF—β2＋缺氧组（20％中药SD大鼠血清的DMEM、终浓度1．0mmol／L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng／L的TGF—β2）。以透射电镜观察视网膜Muller细胞超微结构、以490型酶标仪测定细胞外液乳酸脱氢酶（LDH）释放量及GS活性。结果在缺氧条件下Muller细胞的超微结构发生明显的改变，如：细胞核变形，固缩；细胞器破坏；微绒毛内糖原明显增多。与正常对照组比较，TGF-β2干预组、缺氧组、TGF-β2＋缺氧组的LDH释放量均明显增加（P〈0．05），缺氧组、TGF—β2＋缺氧组的GS活性均明显下降（P〈0．01）；与缺氧组比较，TGF-β2＋缺氧组的LDH释放量明显增加、GS活性明显下降（P〈0．05、P〈0．01）。补肾活血中药血清能降低24h及48h时正常以及TGF—β2与缺氧同时存在条件下LDH的释放量（P〈0．05），增强12h时正常条件下以及12h和24h时TGF-β2与缺氧同时存在条件下GS的活性（P〈0．05、P〈0．01）。结论TGF—β2可加重缺氧条件下Muller细胞活力与GS活性的降低；补肾活血中药含药血清能增强视网膜Muller细胞活力及GS活性。     

TGF-β2刺激人Tenon囊成纤维细胞增殖,表达CTGF和合成Fn

目的:研究转化生长因子(TGF-β2)和结缔组织生长因子(CTGF)在滤过泡瘢痕化中的作用。方法:用不同浓度的TGF-β2刺激HTF,然后用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测CTGF和Fn的表达,用MTT法检测细胞的增殖。结果:TGF-β22μg/L到5μg/L范围有剂量依赖性地促进HTF的细胞增殖,CTGF的表达和Fn的合成的趋势(P<0.01),但0.5μg/L,1μg/L与正常对照组对细胞的增殖作用差别无显著性,5μg/L与10μg/L增强细胞的增殖作用也无显著性差异(P>0.05)。结论:TGF-β2能够明显地促进HTF细胞增殖,并增强其下游介质(CTGF)的表达和合成细胞外基质-纤维连接蛋白(fibronetin,Fn)。     

转化生长因子β与后发性白内障

白内障囊外摘除术后，由于组织修复反应，房水中活性转化生长因子β（TGF-β）增加，致使残留的晶状体上皮细胞移行，分化和细胞外基质的沉积从而引起上皮-间质转化，导致后囊膜混浊形成后发性白内障（PCO）。当抗TGF-β抗体或一些蛋白竞争性拮抗TGF-β活性时可以阻止后发性白内障的发生。本文就TGF-β在PCO中发挥的作用机制进行综述以指导临床上开发防治PCO的特效低毒药物。     

糖基化终末产物对牛视网膜毛细血管周细胞增殖及转化生长因子-β表达的影响

目的 研究糖基化终产物（AGEs）对体外培养的牛视网膜毛细血管周细胞的增殖、细胞周期和转化生长因子β（TGF-β）表达的影响。 方法 分别应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测周细胞的增殖、流式细胞术分析细胞周期、免疫荧光染色法观察TGF-β蛋白的表达。 结果 AGEs能抑制体外培养的牛视网膜毛细血管周细胞的增殖；并可使细胞周期阻滞于S期，凋亡细胞数显著增多（P<0.01）；能促进周细胞TGF-β蛋白的表达。 结论 AGEs可通过抑制周细胞增殖，促进周细胞的凋亡而导致周细胞数量的减少；并可能促进周细胞分泌TGF-β而进一步加速糖尿病视网膜病变。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 20-23)     

慢病毒介导的TGFβ-R2shRNA抑制人LECs细胞TGFβ—R2的表达

目的：观察转化生长因子β-R2特异性短发夹 RNA （ shRNA ）对人晶状体上皮细胞TGFβ-R2表达的影响。 方法：根据小干扰RNA （ siRNA ）的设计原则,针对转化生长因子β-受体2基因序列特征构建特异性 shRNA （ RNAi ）载体,与TGFβ-R2过表达载体共转染293 T细胞,经Western blot筛选出有效RNAi载体后,进行扩增、纯化、滴度测定,并转染培养的人LECs , qPCR 检测TGFβ-R2 siRNA慢病毒载体对TGFβ-R2 mRNA表达的影响。 结果：经Western blot 筛选,TGFβ-R2/GV115RNAi＃1对目的基因的表达敲减效果最明显,慢病毒包装,滴度为8E＋8 TU/mL,感染人LECs细胞后,对TGFβ-R2基因有显著的敲减效果,达到78．1％（P＜0．05）。 结论：TGFβ-R2 RNAi载体构建成功,并且能抑制人晶状体上皮细胞TGFβ-R2 mRNA的表达。     

转化生长因子-β2对体外培养的小鼠视网膜干细胞的诱导分化作用

目的研究转化生长因子（TGF）-β₂是否能促进体外培养的鼠视网膜干细胞的分化及其作用的强弱。方法小鼠胚胎在解剖显微镜下分离视网膜干细胞并进行培养，传代，nestin和chx-10免疫荧光鉴定；将第六代细胞进行诱导分化，并进行抗胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、抗opsin、抗b-tubulin、抗蛋白激酶C（PKC）免疫荧光染色，鉴定终末细胞。结果培养细胞经TGF-β₂诱导可向成熟细胞分化, 免疫荧光检测显示分化细胞的数量较胎牛血清诱导的分化细胞数量多。结论TGF-β₂能诱导视网膜干细胞分化为视网膜细胞；其诱导分化作用强于单独的血清诱导。(中华眼底病杂志, 2007, 23: 104-107)