视黄酸通过RARα对缺氧缺血性脑损伤后神经元凋亡的影响

目的 探讨视黄酸通过视黄酸核受体α（RARα）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后神经元凋亡的影响。 方法 采用维生素A缺乏饲料和维生素A正常的普通饲料分别构建视黄酸缺乏（RAD）和视黄酸正常(RAN)新生SD模型大鼠,随机选取24只RAD新生模型鼠作为RAD组,选取48只RAN新生模型鼠随机分为RAN组和假手术组,每组24只。RAN组和RAD组采用经典Rice法进行分离结扎左侧颈总动脉建立HIBD模型,假手术组只做颈部皮肤切开缝合。分别于术后第3天和第7天,采用TUNEL法检测脑皮质神经元凋亡情况,于术后第7、14、21和28天进行神经功能缺损评估。体外分离培养原代神经元,建立缺氧缺糖损伤(OGD)模型,将原代神经元细胞分为对照组、OGD组、视黄酸OGD组,采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot法检测各组RARα、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（Caspase-8）的mRNA及蛋白表达水平。采用RARα基因小干扰RNA重组腺病毒（Ad-si RARα）感染原代神经元,将原代神经元分为沉默组和阴性对照组,检测RARα、GDNF、Caspase-8的mRNA和蛋白表达水平。 结果 ①RAD组和RAN组大鼠在缺氧缺血后第3天到第7天,皮质凋亡神经元数量逐渐增加,且RAD组神经元凋亡数量明显多于RAN组;RAD组大鼠各时间点的神经功能损伤评分均高于RAN组(P<0.05)。②视黄酸OGD组神经元的RARα、GDNF mRNA表达水平［(1.49±0.05)、(0.61±0.02)］均高于OGD组［（0.51±0.04）、（0.21±0.02）］,Caspase-8的mRNA表达水平显著低于OGD组［(1.13±0.09) vs （1.79±0.11）］,且组间差异均有统计学意义（P<0.01）;各组神经元的蛋白表达水平与mRNA表达水平基本一致。③沉默组神经元的RARα、GDNF mRNA表达水平均低于阴性对照组［RARα(1.07±0.12) vs （2.33±0.08）,P<0.01］;GDNF［(0.11±0.01) vs （0.13±0.01）,P<0.05］,沉默组神经元的Caspase-8 mRNA表达水平较阴性对照组高［(2.92±0.20) vs （2.40±0.18）,P<0.01］;各组蛋白表达水平与mRNA表达水平基本一致。 结论 视黄酸可通过RARα上调GDNF表达,下调Caspase-8的表达,进而抑制HIBD后神经元的凋亡。     

MDL28170对缺氧缺血新生鼠大脑神经细胞凋亡的影响

目的:探讨卡配因抑制剂-3(MDL28170)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)神经细胞凋亡的影响。方法:建立新生SD大鼠HIBD模型,治疗组于缺养缺血后即刻、2 h、4 h腹腔内注射MDL28170,对照组及手术组同时予生理盐水。缺氧缺血后24 h用免疫组化方法观察大脑皮质及海马CA1区Caspase-3蛋白表达、TUNEL法检测细胞凋亡,观察组织病理改变并计算海马神经元死亡数,透射电镜观察细胞超微结构。结果:缺氧缺血后24 h缺血侧大脑皮质及海马CA1区Caspase-3和TUNEL阳性细胞数较对照组明显增加,透射电镜证实有凋亡细胞;MDL28170可减少阳性细胞数量,抑制神经元死亡,差异有显著性(P<0.05)。结论:MDL28170可通过抑制神经凋亡而对新生大鼠HIBD具有一定保护作用。     

脑缺血预处理后Caspase-8蛋白的表达与神经元的保护作用

目的探讨脑缺血预处理后凋亡相关基因 Caspase- 8蛋白表达与神经元保护作用的关系. 方法雄性 Wistar大鼠 70只,随机分为对照组( 10只)、预处理组( 10只)、缺血预处理组( 25只)和缺血组( 25只).四血管阻断法复制全脑缺血模型,尼氏和 TUNEL染色法观察脑皮质及海马 CA1区神经元数和凋亡细胞数,免疫组化方法检测 Caspase- 8蛋白在缺血预处理后表达变化情况. 结果①缺血 7 d时,缺血预处理组皮质及海马 CA1区神经元数无显著变化 [( 268± 8.5)个 /视野 ],缺血组神经元数则显著减少 [(135.0± 5.6)个 /视野 ].②缺血预处理组 Caspase- 8蛋白缺血 12 h表达升高 [( 125.6± 9.0)个 /视野 ], 24 h达高峰 [( 167.0± 8.1)个 /视野 ]; 缺血组 caspase- 8蛋白缺血 6 h表达升高 [( 154.2± 18.4)个 /视野 ], 12 h达高峰 [( 222.8± 17.1)个 /视野 ];各对应时点缺血组 Caspase- 8蛋白阳性表达细胞较缺血预处理组明显增多.③缺血预处理组和缺血组均在缺血 12 h皮质及海马 CA1区凋亡细胞数开始增多 [( 15.5± 2.1), (39.8± 3.9)个 /视野 ],缺血 48 h凋亡细胞数达高峰 [( 68.3± 13.6), (328.4± 24.0)个 /视野 ],但缺血组凋亡细胞数较缺血预处理组显著增多. 结论全脑缺血可能通过诱导 Caspase- 8蛋白的表达增多,启动细胞凋亡,导致缺血后神经元凋亡的发生.缺血预处理延缓并降低缺血后 Caspase- 8蛋白表达并减少细胞凋亡的发生可能是其神经元保护作用机制之一.     

脑缺血预处理后Caspase-8蛋白的表达与神经元的保护作用

目的：探讨脑缺血预处理后凋亡相关基因Caspase-8蛋白表达与神经元保护作用的关系。方法：雄性Wistar大鼠70只，随机分为对照组（10只)、预处理组(10只)、缺血预处理组(25只)和缺血组(25只)。四血管阻断法复制全脑缺血模型，尼氏和TUNEL染色法观察脑皮质及海马CA1区神经元数和凋亡细胞数，免疫组化方法检测Caspase-8蛋白在缺血预处理后表达变化情况。结果：①缺血7d时，缺血预处理组皮质及海马CA1区神经元数无显著变化[(2.68&;#177;8．5)个／视野]，缺血组神经元数则显著减少[（135.0&;#177;5.6）个／视野]。②缺血预处理组Caspase-8蛋白缺血12h表达升高[(125.6&;#177;9.0)个／视野]，24h达高峰[(167.0&;#177;8.1)个／视野]：缺血组(caspase-8蛋白缺血6h表达升高[(154．2&;#177;18.4)个／视野]，12h达高峰[（222.8&;#177;17.1)个／视野]：各对应时点缺血组Caspase-8蛋白阳性表达细胞较缺血预处理组明显增多。③缺血预处理组和缺血组均在缺血12h皮质及海马CA1区凋亡细胞数开始增多[(15．5&;#177;2．1)，（39.8&;#177;3．9)个／视野]，缺血48h凋亡细胞数达高峰[(68.3&;#177;13.6），(328.4&;#177;24．0)个／视野]，但缺血组凋亡细胞数较缺血预处理组显著增多。结论：全脑缺血可能通过诱导Caspase-8蛋白的表达增多，启动细胞凋亡，导致缺血后神经元凋亡的发生，缺血预处理延缓并降低缺血后Caspase-8蛋白表达并减少细胞凋亡的发生可能是其神经元保护作用机制之一。     

成对关联刺激对脑梗死大鼠突触可塑性和神经元凋亡及脑源性神经营养因子的影响

目的 观察成对关联刺激（PAS）对缺血性脑梗死大鼠缺血半暗带皮质突触超微结构、神经元凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。 方法 健康雄性Sprague-Dawley大鼠45只,随机分为三组：假手术组、手术对照组及PAS组,每组15只。手术对照组和PAS组采用线栓法行右侧MCAO造模,假手术组行同样操作,但不栓塞大脑中动脉。造模成功后24 h,PAS组给予0.05 Hz、共90对脉冲的PAS干预,持续30 min,每天1次,连续28 d（周围神经电刺激强度为6 mA,波宽200 μs;经颅磁刺激强度120%RMT）,手术对照组及假手术组大鼠正常饲养但不给予任何干预。术后28 d取大鼠脑组织,采用透射电镜观察缺血半暗带皮质突触超微结构的变化、TUNEL法检测缺血半暗带皮质神经元凋亡情况、实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测缺血半暗带皮质BDNF mRNA表达水平。 结果 ①术后28 d,与假手术组相比,手术对照组和PAS组突触界面曲率、突触活性区长度及突触后膜致密物质厚度减小（P<0.05）;与手术对照组相比,PAS组突触界面曲率、突触活性区长度及突触后膜致密物质厚度增加（P<0.05）。②术后28 d,与假手术组相比,手术对照组和PAS组皮质神经元凋亡比率明显增加（P<0.05）;PAS组皮质神经元凋亡比率明显低于手术对照组（P<0.05）。③术后28 d,PAS组BDNF mRNA表达水平明显高于假手术组及手术对照组（P<0.05）,手术对照组BDNF mRNA表达水平显著低于假手术组（P<0.05）。 结论 PAS可调节缺血性脑梗死大鼠神经可塑性、抑制神经元凋亡,而上调缺血半暗带皮质BDNF mRNA的表达水平可能是其作用机制之一。     

米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱天冬酶12表达的影响

目的：探讨米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带半胱天冬酶12（Caspase-12）表达的影响。方法：用大脑中动脉栓塞法建立大脑局灶性缺血再灌注模型。36只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组（Sham组）,缺血再灌注组（IR组）和米诺环素干预组（Minocycline组）,每组12只。采用DNA原位末端缺口标记法（TUNEL）检测神经元凋亡,免疫组织化学法检测组织Caspase-12蛋白的表达,反转录-聚合酶反应法（RT-PCR）检测Caspase-12mRNA表达水平。结果：与Sham组相比,IR组缺血半暗带凋亡神经元数增加（P〈0.05）,Caspase-12表达增加（P〈0.05）;米诺环素处理后显著缓解凋亡细胞数的增加,抑制Caspase-12的表达（P〈0.05）,但仍高于Sham组（P〈0.05）。结论：抑制Caspase-12介导的Caspase介导的级联反应凋亡途径的激活是米诺环素缺血再灌注损伤细胞凋亡的机制之一。     

Smac／DIABLO在大鼠缺血皮质的变化及意义

目的：观察大鼠缺血区皮质Smac／DIABLO的动态变化,探讨smac／DIABL0在缺血后神经元凋亡过程中的可能作用机制。方法：SD大鼠130只,随机分为对照组50只和模型组80只,采用RTPCR、免疫组化和Western blot方法分别从mRNA和蛋白水平测定2组大鼠缺血区皮质在脑缺血后不同时间点Smae／DIABLO的表达变化。结果：smac／DIABLO基因转录水平和蛋白表达的改变呈时间依赖性。RTPCR显示模型组大鼠在脑缺血后3h就有明显的smac／DIABL0mRNA表达上调,持续至24h后逐渐下降,48h时恢复至缺血前水平;免疫组化和Westernblot显示在脑缺血后3hsmac／DIABLO蛋白表达增加,6h蛋白表达至高峰（P〈0．01）,48h基本恢复至缺血前水平。Smac／DIABLOmRNA转录水平改变提前于Smac／DIABLO蛋白表达。结论：Smac／DIABLO可能在脑缺血后神经细胞凋亡过程中起重要作用。     

MiR-199a对缺氧/复氧诱导的大鼠脑皮层神经元细胞活力及凋亡的影响

目的:探讨miR-199a对缺氧/复氧诱导的大鼠脑皮层神经元细胞活力及凋亡的影响。方法:在体外培养大鼠脑皮层神经元细胞,采用缺氧/复氧的方式处理细胞建立细胞损伤模型并记作Model组;将正常培养的细胞作为对照(Con)组。分别将空载体、miR-199a mimic转染至大鼠脑皮层神经元细胞,建立缺氧/复氧细胞损伤模型,分别记作Model+NC组或Model+miR-199a mimic组。将miR199a mimic转染至大鼠脑皮层神经元细胞后加入PI3K-AKT信号通路抑制剂LY294002处理,随后建立缺氧/复氧细胞损伤模型,记作Model+miR-199a mimic+LY294002组。采用反转录PCR法检测miR-199a的表达量,应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,采用MTT法检测细胞活力,采用蛋白质印迹法检测cleaved-caspase3、pro-caspase3、p-PI3K、p-AKT蛋白表达量。结果:与Con组比较,Model组miR-199a的表达水平、细胞活力、S期细胞比例及pro-caspase3、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平均显著降低,G_(0)~G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率及cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著提高,差异均有统计学意义(均P<0.001)。与Model+NC组比较,Model+miR-199a mimic组细胞活力、S期细胞比例及pro-caspase3、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平均显著提高,G_(0)~G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率及cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.001)。与Model+miR-199a mimic组比较,Model+miR-199a mimic+LY294002组细胞活力、S期细胞比例及procaspase3蛋白表达水平均显著降低,G_(0)~G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率及cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MiR-199a过表达可改善缺氧/复氧诱导的大鼠脑皮层神经元细胞活力并抑制细胞凋亡,从而减轻细胞损伤;这些生物学效应可能是通过激活PI3K-AKT信号通路产生的。     

羟丁酸钠对缺氧缺血后新生大鼠海马神经元损伤和生长发育的影响：与量效时效的关联性

目的：观察不同剂量羟丁酸钠对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后不同时间脑海马CAl区神经元损伤和大鼠生长发育的影响。方法：实验于2002-08／2003-04在江苏省麻醉医学研究所进行。取新生后7dSD大鼠150只，随机分为5组，每组30只：假手术组、缺氧缺血组、羟丁酸钠50，100，200mg/kg组，每组分缺氧后1，3，24，72和168 h 5个时间点，每个时间点6只。除假手术组外，其余各组制备缺氧缺血性脑损伤动物模型，羟丁酸钠各剂量组于缺氧缺血性脑损伤后即刻腹腔注射羟丁酸钠50，100，200mg/kg，每8小时1次，共计给药7d，缺氧缺血组腹腔注射生理盐水20ml/kg。各组在缺氧完成后1，3，24，72和168h取脑切片作苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞病理改变，细胞凋亡原位缺口末端标记染色计算脑海马CA1区中的凋亡阳性细胞表达数目，并观察新生大鼠体质量增长情况。结果：经补充后150只大鼠进入结果分析。①体质量增长率：缺氧缺血组大鼠在缺血缺氧后72，168h时明显低于假手术组（P〈0．01）。羟丁酸钠50，100mg/kg组新生大鼠在72，168h时明显高于缺氧缺血组（P〈0．01），且羟丁酸钠100mg/kg组明显高于羟丁酸钠50mgkg组（P〈0．01）。羟丁酸钠200mg/kg，kg组大鼠各时间点体质量增长率与缺氧缺血组无明显差异（P〉0．05）。②光镜下苏木精-伊红染色结果：缺氧缺血组脑海马CA1区，锥体细胞排列紊乱，锥体细胞减少，羟丁酸钠50，100mg/kg组锥体细胞病理改变明显减轻。③原位缺口末端标记染色凋亡阳性细胞数目：缺氧缺血组缺血缺氧后3h时明显高于假手术组（t=28．7,P〈0．01），24h时达到高峰，染色最强，其后逐渐减弱，但在168h时仍明显高于假手术组（t=12．8,P〈0．01）。羟丁酸钠50mg／kg组在缺氧缺血3，24，72h时明显低于缺氧缺血组（P〈0．05，0．01），168h时与缺氧缺血组无明显差异。羟丁酸钠100mg/kg组在缺氧缺血3，24，72，168h时明显低于缺氧缺血组（P〈0．01），在缺氧缺血168h时明显低于羟丁酸钠50mg／kg组（t=4．45，P〈0．01），其余各时间点无明显差异。羟丁酸钠200mg/kg组凋亡阳性细胞数目无明显变化。结论：①腹腔注射50，100mg/kg的羟丁酸钠时缺氧缺血大鼠的体质量增长明显加快，苏木精-伊红染色也显示海马CA1区锥体神经元的病理形态学改变减轻，提示羟丁酸钠通过对脑缺血缺氧的保护作用，促进了新生大鼠的生长发育。②腹腔注50，100mg/kg射羟丁酸钠可使缺氧缺血3h后凋亡阳性细胞数目明显减少，尤以100mg/kg的作用明显，说明羟丁酸钠能够抑制神经元凋亡的发生，对缺氧缺血性脑损伤的保护作用，与作用时间及用药剂量相关。     

辛伐他汀对老年COPD大鼠肺泡上皮细胞凋亡的干预作用

目的：探讨辛伐他汀对老年COPD大鼠肺泡上皮细胞凋亡干预作用。方法39只老年Wistar大鼠随机分为正常组（A组）、COPD模型组（B组）及辛伐他汀干预组（C组）,每组各13只。B、C组采用熏香烟联合气道内滴入脂多糖法建立大鼠COPD模型,在造模2周后C组给予辛伐他汀（2.5 mg/kg）灌胃6周,A、B组给予同等量生理盐水灌胃。8周后处死大鼠,并观察大鼠肺组织病理变化,检测肺泡上皮细胞凋亡及凋亡相关因子半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS） mRNA表达,并计算凋亡指数。结果与A组相比, B组和C组凋亡指数、Caspase-3及iNOS mRNA表达增加（P均＜0.01）,eNOS mRNA表达降低（P＜0.01）;与B组相比,C组凋亡指数、Caspase-3及iNOS mRNA表达降低（P均＜0.01）,eNOS mRNA表达增加（P＜0.01）。各组间肺泡上皮细胞凋亡指数与Caspase-3及iNOS mRNA表达呈正相关（P＜0.05）,与eNOS mRNA表达呈负相关（P＜0.05）。各组间Caspase-3 mRNA与iNOS mRNA表达呈正相关（P＜0.05）,与eNOS mRNA表达呈负相关（P＜0.01）。结论辛伐他汀通过增加肺组织eNOS基因表达,抑制iNOS及Caspase-3基因表达,抑制了老年COPD大鼠肺泡上皮细胞凋亡。     

缺氧缺血性脑损伤后血管内皮细胞生长因子的表达及检测的意义

目的　检测血管内皮细胞生长因子 (VEGF)mRNA在缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后的表达及意义。方法　将 4 8只新生 7日龄Wistar大鼠随机分为对照组和HIBD组 ,各分为 4个时点 (HIBD后 3h、12h、2 4h和 3d) ,采用RT PCR方法检测VEGFmRNA在HIBD后海马组织中不同时点的表达变化。结果　VEGF各异构体中以VEGF16 4基因表达为主。VEGFmRNA在对照组即有表达 ,HIBD组较对照组比较表达明显增加 (P <0 0 5 )。HIBD组内各时点表达值比较差异有显著意义 (F =30 185 ,P<0 0 5 ) ,3h时表达开始升高 ,12h后表达进一步增加 ,2 4h达高峰 ,3d时表达明显下降。结论　HIBD后VEGF表达增加 ,提示VEGF可能在HIBD后的自身保护性反应中发挥着重要作用。     

辛伐他汀对新生鼠脑缺氧缺血后海马区一氧化氮合酶的影响

目的探讨新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后海马区各型一氧化氮合酶(NOS)活性的变化及辛伐他汀对其的调节作用。方法选用7日龄SD大鼠,随机分组、建立新生大鼠HIBD模型后,于不同时间点剥取脑海马,测定各型NOS的变化并比较各组之间的差别。结果HIBD后生理盐水组诱导型NOS(iNOS)活力水平于12h时始显著增高,48h达高峰,7d时接近假手术组水平(P>0.05),12h、24h、48h、72h时胞二磷胆碱组、辛伐他汀组明显低于生理盐水组,72h时,辛伐他汀组显著低于胞二磷胆碱组(P<0.01)。生理盐水组结构型NOS(cNOS)水平于0h即显著升高,然后逐渐下降,72h时接近假手术组水平,而胞二磷胆碱组、辛伐他汀组仍继续增高,48h达高峰,但辛伐他汀组升高更显著。结论各型NOS均参与了HIBD的发病过程,辛伐他汀和胞二磷胆碱对新生大鼠HIBD的保护作用与其调节NOS有关,且辛伐他汀的作用更强。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤TLR4表达及与细胞凋亡的关系

目的通过检测TLR4在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）中表达变化,并与凋亡情况对比,研究TLR4在新生儿缺氧缺血性脑损伤发病机制中的作用,为临床的进一步研究提供客观的实验依据。 方法选取80只7 d龄新生健康大鼠,随机分为实验组和对照组各40只。TUNEL法检测脑组织细胞凋亡状况,免疫组化SP法检测TLR4表达变化。 结果细胞凋亡缺氧缺血术后6 h阳性率上升,至24 h达到高峰,72 h和7 d表达下降。TlR4实验组于缺氧缺血6 h即出现阳性表达,12 h表达到峰值,24 h无明显变化,72 h和7 d表达下降。实验组与对照组在各时间点比较差异均有统计学意义（P<0.05）。TLR4与细胞凋亡呈正相关（r=0.452）。 结论新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织中TLR4高表达,可能促进细胞凋亡发生,在脑损害的形成过程中起到了重要的作用。       

神经节苷脂-1 与康复训练对缺血缺氧性脑损伤大鼠神经功能的影响

目的探讨神经节苷脂-1(GM1)和康复训练对大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)后功能恢复的影响及可能机制。方法48只Sprague-Dawley 幼鼠建立HIBD模型,分为对照组、GM1 组、康复训练(R)组、GM1+康复训练(GM1+R)组及假手术组。各组大鼠采用悬吊试验、斜坡试验和水迷宫试验进行评定。免疫组化法检测海马、额叶皮质神经元活化型caspase-3 表达。结果各组间悬吊试验、斜坡试验结果有非常高度显著性差异(P<0.001),从高到低依次为假手术组、GM1+R组、R组、GM1 组和对照组(P<0.05)。各组间寻找平台潜伏期有非常显著性差异(P<0.01),对照组和GM1 组较假手术组长(P<0.05)。GM1 组和R组的海马、额叶皮质活化型caspase-3 水平与假手术组有显著性差异(P<0.05),GM1 组、R组及GM1+R组海马活化型caspase-3 与对照组有显著性差异(P<0.05),R组和GM1+R组额叶皮质活化型caspase-3 与对照组有显著性差异(P<0.05)。海马、额皮质活化型caspase-3 的表达与悬吊试验、斜坡试验结果正相关(P<0.05),与水迷宫试验无明显相关(P>0.05)。结论早期康复训练及应用GM1 对HIBD神经功能恢复有一定疗效,联合应用存在协同效应。其机制可能与神经元末梢突触后存在大量活化型caspase-3 有关。     

不同剂量美金胺对HIBD新生大鼠的脑保护作用及机制分析

目的 探讨不同剂量美金胺对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的脑保护作用及机制。方法 144只新生大鼠随机分为六组,假手术组大鼠仅将颈部皮肤切开,分离右侧颈总动脉,不进行结扎及缺氧处理。其余五组建立缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型。药物组四组分别腹腔注射不同剂量美金胺(13 mg/kg、26 mg/kg、39 mg/kg、52 mg/kg),模型对照组分别腹腔注射等量生理盐水。分析六组新生大鼠皮质、纹状体、海马及丘脑的脑损伤评分;六组新生大鼠皮质、海马区(海马CA1、海马CA3及齿状回)、纹状体及皮质下蛋白的TUNEL阳性细胞计数;六组新生大鼠皮质、海马区(海马CA1、海马CA3及齿状回)、纹状体及皮质下蛋白的Caspase-3阳性细胞计数;比较六组新生大鼠的神经功能及六组新生大鼠的缺氧缺血处理后的12 h、48 h、72 h的胶质细胞源性营养因子(GDNF)蛋白表达水平。结果 假手术组大鼠不同脑区域损伤评分、TUNEL及Caspase-3阳性细胞计数相比,差异均无统计学意义(P> 0. 05);在其余五组新生大鼠中,皮质、纹状体、海马及丘脑区域脑损伤评分比较差异均有统计学意义(P <0. 05),模型对照组、药物1组、药物2组、药物3组及药物4组的TUNEL阳性细胞计数均明显高于假手术组,表明造模成功。在海马CA1、皮质下蛋白中的的TUNEL阳性细胞计数差异有统计学意义,在海马CA3、齿状回及皮质下蛋白中的Caspase-3阳性细胞计数差异有统计学意义(P <0. 05),以上比较顺序均为模型对照组>药物1组>药物2组>药物3组>药物4组;六组新生大鼠的神经功能比较差异有统计学意义(P <0. 05),术后12 h、48 h、72 h时,六组新生大鼠的GDNF蛋白表达水平具有统计学意义,神经功能及GDNF蛋白表达水平顺序均为模型对照组<药物1组<药物2组<药物3组<药物4组<假手术组,以上各项指标中除药物3组与药物4组间比较差异无统计学意义(P> 0. 05)外,其余组间比较差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 随着美金胺剂量的增加,其对HIBD新生大鼠的脑保护作用逐渐增加,最佳剂量为39 mg/kg,可能美金胺可提高HIBD大鼠的GDNF蛋白表达水平有关。     

Volatile anesthetic preconditioning attenuates myocardial apoptosis in rabbits after regional ischemia and reperfusion via Akt signaling and modulation of Bcl-2 family proteins

We tested whether isoflurane preconditioning inhibits cardiomyocyte apoptosis and evaluated the role of the phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K)/Akt pathway in anesthetic preconditioning and determined whether PI3K/Akt signaling modulates the expression of pro- and antiapoptotic proteins in anesthetic preconditioning. Six-month-old New Zealand rabbits subjected to 40 min of myocardial ischemia followed by 180 min of reperfusion were assigned to the following groups: ischemia-reperfusion (I/R), isoflurane preconditioning and isoflurane plus PI3K inhibitors, wortmannin and 2-(4-morpholinyl)-8-phenyl-4H-l-benzopyran-4-one (LY294002) (0.6 and 0.3 mg/kg i.v., respectively). Sham-operated, wortmannin+I/R, wortmannin+sham, LY294002+I/R, and LY294002+sham groups were also included. Infarct size was assessed by triphenyltetrazolium chloride staining. Apoptosis was evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling and activated caspase-3 assays. Akt phosphorylation, Bax, Bcl-2, Bad, and phosphorylated Bad (phospho-Bad) expression was assessed by immunoblotting. Isoflurane preconditioning reduced infarct size compared with the I/R group: 22+/-4 versus 41+/-5% (p<0.05). The percentage of apoptotic cells decreased in the isoflurane group (3.8+/-1.2%) compared with the I/R group (12.4+/-1.6%; p<0.05). These results were also confirmed by the activated caspase-3 assay. Wortmannin and LY294002 inhibited the effects of isoflurane. Myocardial infarction increased to 44+/-3 and 45+/-2% and the percentage of apoptotic cells was 11.9+/-2.1 and 11.7+/-3.3%, respectively. Akt phosphorylation and Bcl-2 and phospho-Bad expression increased after isoflurane preconditioning, whereas Bax expression decreased. These effects were inhibited by wortmannin and LY294002. The data indicate that isoflurane preconditioning reduces infarct size and myocardial apoptosis after I/R. Activation of PI3K and modulation of the expression of pro- and antiapoptotic proteins may play a role in isoflurane-induced myocardial protection.     

脑脉通联合溶栓对血栓栓塞性脑缺血大鼠神经细胞凋亡的影响

目的比较脑脉通联合不同时间窗溶栓治疗对脑缺血大鼠神经细胞凋亡的阻抑作用及其对相关调控基因的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、尿激酶溶栓组(简称溶栓组)、脑脉通组、脑脉通 尿激酶溶栓组(简称联合组)。自体血栓结合线栓阻塞大鼠大脑中动脉制备血栓栓塞性脑缺血动物模型。大鼠分别于缺血后3、6、9 h经导管由区域动脉进行溶栓。动脉给药后24 h,观察大鼠脑组织神经细胞凋亡变化；测定细胞凋亡相关基因蛋白bax、caspase-3和bcl-2表达变化。结果各模型组大鼠TUNEL阳性细胞均较假手术组增多、bax和caspase-3表达增强、bcl-2表达下调；与模型组比较,各用药组大鼠TUNEL阳性细胞数减少,溶栓组、联合组各时间点bax和caspase-3表达减弱、bcl-2表达上调；各组6 h和9 h较其3 h TUNEL阳性细胞数增加、bax和caspase-3表达增强、bcl-2表达下调；除脑脉通组外各组9 h较6 h组TUNEL阳性细胞数增多、bax和caspase-3表达增强,bcl-2减弱；联合组较单一用药组TUNEL阳性细胞数减少、6 h和9 h组bax及caspase-3表达减弱、bcl-2增强。结论脑缺血损伤可引起促凋亡基因表达上调和抑凋亡基因表达下调,神经细胞凋亡发生,该变化随缺血时间延长而显著；脑脉通及溶栓治疗均可阻抑脑缺血神经细胞凋亡,但以二者联合用药的效果尤为理想,通过下调促凋亡基因bax和caspase-3表达、上调抑凋亡基因bcl-2的表达对神经细胞凋亡发挥阻抑作用。     

缺氧缺血性脑损伤鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1的表达及其意义

目的研究新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)mRNA的表达及其意义.方法将112只新生7 d Wistar大鼠随机分为假手术对照组以及HIBD后3、8、24 h以及3、6和14 d组,每组16只.其中8只应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测病变侧脑皮质caspase1 mRNA的表达情况;另外8只进行脑组织苏木素-伊红(HE)染色,在光镜下观察脑组织病理变化.结果假手术对照组中有少量caspase-1 mRNA表达,HIBD 24 h组其表达水平开始增加(与假手术对照组比较P<0.01),6 d达高峰(与其余各组比较P均<0.01),14 d时其表达下降,但仍高于假手术对照组(P<0.01).组织病理学检查发现,HIBD后24 h～6 d神经元大量变性、坏死、丢失,同时胶质细胞显著增生.结论 HIBD后caspase-1 mRNA的表达增加,其变化规律与光镜观察到的脑损伤进展时间完全吻合,提示caspase-1可能参与了新生鼠HIBD的病理损伤过程.     

大黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠水通道蛋白1表达的影响

目的探讨大黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠水通道蛋白1(AQP-1)表达的影响。方法成年雄性SD大鼠120只,体质量200～230g。大鼠分为6组:空白对照组、假手术组、模型组、大黄素低剂量预处理组、大黄素中剂量预处理组、大黄素高剂量预处理组,每组各20只。采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症大鼠模型,假手术组探查取出盲肠后还纳腹腔。各组按取材时间不同又分为造模后3、6、12、24小时4个时相点,每个时相点5只大鼠。分别用实时荧光多聚酶链反应(PCR)和蛋白免疫电泳(western-blot)法检测肺组织水通道蛋白1信使RNA(AQP-1mRNA)和蛋白的表达。结果各组3小时AQP-1表达差异无统计学意义,造模后6小时AQP-1逐渐降低,12小时达最低。大黄素中、高剂量预处理组12小时AQP-1均显著高于同剂量其他时间点(P0.01),且两组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论脓毒症可造成大鼠AQP-1表达明显降低,早期预防性使用中高剂量大黄素可明显提高AQP-1的表达,从而有效减轻脓毒症大鼠肺水肿的程度。