BED-CEIA HIV-1发病捕获酶联法应用的现状和发展趋势

流行病学的队列研究和一些实验室方法都可用于对目标人群艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)新近感染状况的估计,但各种方法在偏倚的控制、价格、技术等方面存在制约其被广泛应用的因素。BED HIV-1发病捕获酶联法(BED HIV-1 Incidence Capture EIA,简称BED-CEIA方法)作为一种可以估计目标人群HIV-1新近感染状况的实验室方法,已在各个国家得到了一定的规模应用。该文主要综述了BED-CEIA方法目前在国内外的应用状况。     

BED HIV-1发病捕获酶免疫测定法检测四川省2006年吸毒哨点HIV新发感染

目的 了解四川省2006年吸毒哨点艾滋病病毒(HIV)新发感染情况,探索BED HIV-1发病捕获酶免疫测定法(BED HIV-1 incidence capture enzyme immunoassay,BED-CEIA)的应用条件,以及引起偏移的因素和解决方法.方法 对2006年四川省吸毒哨点确认阳性的样本进行BED-CEIA方法检测,获得该人群2006年新发感染率.结果 2006年四川省吸毒哨点共计13个,监测吸毒人群3 708人,男女比例5.61∶1,年龄在9～65岁之间,平均年龄30.18岁.HIV-1确认阳性率为12.04%,新近感染率3.19%,其95%可信区间(CI)为(4.12%～2.26%).结论 将BED-CEIA方法应用于以吸毒为主要感染途径的地区,对其新近感染率的计算和估计具有实用性,并可较好地控制偏移,对艾滋病防治政策的制定和调整具有参考作用.     

HIV-1新发感染捕获酶联免疫试验重组抗原的研究

目的构建、表达1型艾滋病病毒(HIV-1)重组蛋白,并尝试用于HIV-1新发感染捕获酶联免疫试验。方法设计、合成1种HIV-1重组蛋白(编号HIV-Ag-R03)的核酸序列,将它与pET30a-trx载体骨架连接、构建重组质粒。将重组质粒转化BL21(DE3)细胞,经异丙基硫代半乳糖苷诱导表达蛋白质。用重组蛋白包被酶标板,检测48份血浆样品(其中HIV-1抗体阳性、HIV阴性各24份),分析蛋白质的抗原性。将HIV-Ag-R03标记辣根过氧化物酶(HRP)后,取代BED捕获酶联免疫试验(BED CEIA)试剂盒中的BED肽及后续组分,比较2种方法检测18份HIV-1阳性样品的结果相关性。结果成功构建了HIV-Ag-R03的重组质粒,核酸序列确认无误。获得了包涵体表达的蛋白质,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析大小与预测值一致。使用包被HIV-Ag-R03的间接酶联免疫试验检测48份1∶101稀释血浆样品,结果HIV-1抗体阳性样品的吸光度(OD)值(1.513±0.991)显著高于HIV阴性样品的OD值(0.022±0.008),差异有统计学意义(t=7.336,P0.01)。用HIV-Ag-R03-HRP取代BED CEIA试剂盒中的BED肽及后续组分,调试HIV-Ag-R03-HRP的最佳稀释度为1∶2 500,18份HIV-1阳性样品的检测结果ODn值与BED CEIA的ODn值相关性好(r=0.939,P0.01)。结论获得了1种具有抗原性的重组蛋白并成功标记HRP,建立了检测HIV-1新发感染的新模式。     

安徽省2011-2012年报告HIV-1新发感染者流行病学特征分析

目的 了解安徽省HIV-1新发感染者情况及患者特征。方法 对2011年7月至2012年6月安徽省艾滋病确证实验室新确证的748例的HIV-1型感染者通过BED检测,评估新发感染情况并分析其患者特征。结果 2011年7月至2012年6月安徽省报告发现的HIV-1感染者新发感染比例为24.6%,在BED确认的新发感染者中,男性、男男同性性行为者以及医院就诊者比例较高。与既往感染患者相比,新近感染者年龄更轻,且男性所占比例以及男男同性性行为者的比例均较高,并伴有更高的CD4细胞数。结论 安徽省HIV-1新发感染者比例较高,男男同性性行为是新发感染的主要危险因素。     

用基于重组抗原的捕获酶联免疫试验检测HIV-1新发感染

目的探讨基于重组抗原的捕获酶联免疫试验(RCEIA)检测HIV-1新发感染的可行性。方法使用来自队列研究的HIV-1抗体阳转系列样品,包括来自40名HIV-1感染者的140份血浆样品,用RCEIA试验检测,获得吸光度(OD)值和标准化吸光度(ODn)值。作折线图观察ODn值与阳转时间的关系;用SPSS 22.0软件作ROC曲线,获得RCEIA试验的临界值(cutoff值)与平均新发感染期(MDRI);作散点图比较RCEIA试验与BED HIV-1捕获酶联免疫试验(BED试验)检测结果的相关性。结果 14板RCEIA试验的检测结果显示,校准品和3份阳性对照OD值的变异系数为7.0%～8.9%,阳性对照ODn值的变异系数为3.1%～7.7%。针对HIV-1阳转系列样品,反映特异性IgG占总IgG比例的RCEIA试验的ODn值随阳转时间的推移呈上升趋势,但存在个体差异。初步得到RCEIA试验的最佳cutoff值为0.8,平均新发感染期为197天,假新发感染比例与BED试验的差异无统计学意义(P=1.000)。RCEIA试验与BED试验检测结果 ODn值的相关性较好(r=0.907)。结论基于重组抗原的RCEIA操作稳定性好,可以在群体水平区分HIV-1新发感染与长期感染,其最佳cutoff值及用于HIV-1新发感染率估算的技术参数(平均新发感染期和假新发感染率)有待通过增加样品量进一步测算。     

新建HIV-1新发感染快速检测方法与ELISA法的比较研究

目的初步评价艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)新发感染快速检测方法,在横断面现场调查人群样本中的应用能力,并分析抗病毒治疗对该方法的影响。方法应用该研究前期构建的金标银染免疫渗滤快速检测方法(简称快速检测法),检测2014年江西省国家级哨点新报告的HIV-1感染者和抗病毒治疗者的样本。将新发感染判定的结果与限制性抗原亲和力方法(LAg Avidity EIA,简称LAg法)、BED捕获酶免疫法(BED CEIA,简称BED法)进行一致性和相关性比较,进一步分析三种方法检测抗病毒治疗者样本的差异。结果纳入研究的新发感染者样本共122份,快速检测法与LAg法、BED法判定新发感染结果的一致率分别为94.26%和88.52%。快速检测法检测探针灰度值与LAg法和BED法的ODn值具有较高的相关性。R2分别为0.947 5与0.923 4。经配对卡方检验分析,快速检测法判定新发感染的比例显著低于BED法(P0.001),而与LAg法差异无统计学意义(P=0.257)。纳入研究的抗病毒治疗者的样本共117份,快速检测法对其误判为近期的比率为16.24%(19/117),而BED方法和LAg方法的误判比率分别为16.24%(19/117)、14.53%(17/117)。另外,快速检测法对所有样本常规HIV抗体检测结果均正确。结论金标银染免疫渗滤快速检测方法检测HIV-1新发感染具有良好的准确性和实际应用性。但抗病毒治疗对快速检测法影响较大,应在横断面人群调查时删除抗病毒治疗样本。     

凉山州2011-2015年哨点监测孕产妇HIV-1感染率及新发感染率结果分析北大核心

目的在凉山州孕产妇人群中开展1型艾滋病病毒（HIV-1）新发感染检测,并估算该人群的HIV-1感染率和新发感染率,了解凉山州2011-2015年孕产妇人群HIV-1感染状况及防控策略探讨。方法用BED捕获酶免疫技术检测2011-2015年3个孕产妇哨点采集的HIV确证阳性样本,计算HIV-1在该人群中的感染率,并估算新发感染率,采用χ^2检验进行统计分析。结果 2011-2015年共对5486例血样进行HIV-1抗体筛查,确证阳性243例,HIV-1感染率4.43%;新发感染24例,新发感染率1.13%[95%可信区间（CI）：0.68~1.59]。χ^2趋势检验得到各年度新发感染率差异无统计学意义（χ^2=2.235,P=0.135）。结论 2011-2015年,凉山州孕产妇HIV-1感染率及新发感染率均处于较高水平,需进一步加强孕产妇人群的行为干预和监测工作。     

HIV-1新发感染快速检测方法的建立与初步评价

目的建立用于I型艾滋病病毒(HIV-1)新发感染检测的斑点金免疫渗滤快速检测方法,并研究其可行性及适用性。方法以特定浓度的HIV-1多亚型重组gp41抗原作为探针,包被硝酸纤维素膜,胶体金标记的抗人IgG作为显色试剂,建立新发感染的快速检测方法。比较该方法与BED捕获酶联法、限制性抗原亲和力方法的一致性。结果采用已知阳转时间的样本用于快速检测方法的建立,检测5例已知感染时间的样本的结果全部正确。分别用3种方法检测90例样本,快速检测方法与BED方法的符合率为88.9%(80/90),与亲和力方法的符合率为94.4%(85/90),快速检测方法与这两种方法检测结果差异均无统计学意义(P0.05)。结论斑点金免疫渗滤法检测HIV-1新发感染具有快速、简便、经济、直观的特点,可节省检测时间和成本,提高检测效率,具有良好的适用性。     

提高对HIV-1急性感染和HIV-2诊断能力的检测策略北大核心

针对多年使用的艾滋病病毒(HIV)检测策略存在的问题,以及目前的检测技术研发和应用状况,美国疾病控制和预防中心在2014年6月提出了新的HIV检测策略,联合使用HIV抗原和抗体检测试剂、能够区分HIV-1和HIV-2抗体的诊断试剂以及HIV-1核酸定性诊断试剂,提高对HIV-1急性感染和HIV-2的检出效能,同时减少需要随访的不确定结果,缩短等待时间。文章对这个检测策略进行了全面介绍,并提出制定适合我国的HIV检测策略的建议。     

HIV-1耐药性产生机制及检测方法

HIV-1耐药性的产生是导致艾滋病(AIDS)抗病毒治疗失败的重要原因，目前HIV-1耐药性产生机制及检测方法已成为HIV／AIDS研究领域的热点之一。随着高效抗逆转录病毒联合疗法(highly active antiretroviral therapy，HAART)在我国的展开，对HIV-1耐药株进行监测以指导临床用药及预防耐药株的迅速上升和扩散日显其重要性。本文将对HIV-1耐药性产生机制及当前国际上应用的耐药性检测方法进行综述。     

提高对HIV-1急性感染和HIV-2诊断能力的检测策略

针对多年使用的艾滋病病毒(HIV)检测策略存在的问题,以及目前的检测技术研发和应用状况,美国疾病控制和预防中心在2014年6月提出了新的HIV检测策略,联合使用HIV抗原和抗体检测试剂、能够区分HIV-1和HIV-2抗体的诊断试剂以及HIV-1核酸定性诊断试剂,提高对HIV-1急性感染和HIV-2的检出效能,同时减少需要随访的不确定结果,缩短等待时间。文章对这个检测策略进行了全面介绍,并提出制定适合我国的HIV检测策略的建议。     

哈尔滨市2013-2015年男男性行为者HIV-1新发感染情况分析北大核心CSCD

目的了解哈尔滨市男男性行为者（MSM）艾滋病病毒（HIV）感染情况,估算及分析该人群中的HIV-1新发感染率及其影响因素。方法 2013-2015年开展四轮横断面调查,对2 531名MSM进行行为学调查及生物学检测。对HIV-1阳性的样本,进行BED HIV-1IgG捕获酶免疫法（BED-CEIA）检测,以此估算该人群的HIV-1新发感染率。结果 2013-2015年,四轮调查中HIV感染率分别为9.6%、16.8%、14.7%及17.3%。2013年、2014年HIV-1年平均新发感染率为4.6%[95%可信区间（CI）：2.5%~6.8%],2014年9-11月、2015年4-6月新发感染率分别为9.2%（95%CI：4.8%~13.6%）,6.2%（95%CI：2.4%~9.9%）。HIV-1新发感染的影响因素分析显示,性角色为被插入方[比值比（OR）=5.105,95%CI：2.626~9.925]和既作为插入方与又作为被插入方（OR=2.454,95%CI：1.306~4.613）的危险性显著高于插入方;现患梅毒者感染HIV-1的危险性（OR=4.006,95%CI：2.320~6.915）高于未患梅毒者;最近一年进行过HIV检测（OR=0.532,95%CI：0.327~0.868）是HIV-1新发感染的保护性因素。结论哈尔滨市MSM中,HIV感染率及新发感染率均较高,HIV感染的危险因素广泛存在,但在MSM中开展艾滋病知识的宣传教育、咨询及检测,对于遏制艾滋病的发展是有积极意义的。     

ELISA检测HIV感染者尿液标本中抗HIV—1抗体结果分析

目的 利用尿液标本检测抗HIV-1抗体。方法 通过ELISA方法检测50例抗HIV-1抗体阳性感染者及100例抗HIV-1抗体阴性对照组尿液中抗HIV-1抗。结果 显示在50例HIV感染者中有49例尿液抗HIV-1抗体阳性,1例阴性;对照组中尿液中均未检测出抗HIV-1抗体,以血液标本为标准,检测尿液抗HIV-1抗体的灵敏性为98.0%,特异性为100%,尿液标本与血液标本检测的一致性达99.3%。结论 本实验提示在采集血液标本不便的情况下。可通过尿液抗HIV-1抗体的检测对高危人群的HIV感染情况进行监测和筛查。     

ELISA检测HIV感染者尿液标本中抗HIV-1抗体结果分析

目的利用尿液标本检测抗HIV-1抗体.方法通过ELISA方法检测50例抗HIV-1抗体阳性感染者及100例抗HIV-1抗体阴性对照组尿液中抗HIV-1抗体.结果显示在50例HIV感染者中有49例尿液抗HIV-1抗体阳性,1例阴性;对照组中尿液中均未检测出抗HIV-1抗体,以血液标本为标准,检测尿液抗HIV-1抗体的灵敏性为98.0%,特异性为100%.尿液标本与血液标本检测的一致性达99.3%.结论本实验提示在采集血液标本不便的情况下,可通过尿液抗HIV-1抗体的检测对高危人群的HIV感染情况进行监测和筛查.     

基于二代测序技术建立覆盖我国主要流行亚型的HIV-1近全长基因组测序方法北大核心CSCD

目的 基于二代测序技术建立一种适合我国主要流行亚型的HIV-1近全长基因组扩增和测序方法,并优化建立标准检测流程,为HIV-1的全基因组序列鉴定和相关系统进化分析等应用提供重要技术手段。方法 基于我国HIV-1主要流行亚型设计扩增引物,通过扩增两段交叉重叠的基因序列获得HIV-1近全长基因组。并通过使用不同反转录试剂与扩增试剂以及尝试不同反应体系和反应条件,分析对HIV-1近全长基因组扩增的效果以及进行二代测序所获序列质量的影响。结果 本研究基于二代测序技术建立的HIV-1近全长基因组扩增和测序方法可成功扩增我国主要HIV-1流行亚型CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC、B、CRF55_01B,进行二代测序所获基因组序列的平均比对率为95.18%(89.74%~99.16%),平均覆盖率为94.96%(83.58%~99.98%),平均测序深度为5323.10×(3026.68×~6790.57×)。进一步分析不同亚型毒株每个基因位点的测序深度覆盖图,发现CRF08_BC亚型与CRF105_0108亚型的毒株测序深度分布均匀,均高于6000×,其他亚型的毒株样本在6672~8196 bp之间有部分基因位点的测序深度较低。优化和建立的标准检测流程可成功扩增病毒载量大于104copies/mL的样本并获得准确的近全长基因组序列。结论 本研究基于二代测序技术建立了一种HIV-1近全长基因组扩增与测序方法,该方法可成功扩增我国主要流行亚型毒株,为我国应用HIV-1基因组序列开展艾滋病精准防控工作提供了重要技术支撑。     

献血者HIV一次筛查与两次筛查对比分析

正《血站技术操作规程(2012版)》献血者血液人类免疫缺陷病毒(HIV)检测采用2个不同生产厂家的酶联免疫法(ELISA)试剂检测HIV-1和HIV-2抗体或联合检测HIV-1和HIV-2抗原和抗体,而新版(2015版)血液检测策略采用2遍血清学方法和1遍核酸检测或1遍血清学方法和1遍核酸检测。多年来我国血站采用2遍ELISA,为此本文分析献血者血液HIV筛查ELISA 1次筛查方法     

广东省2016-2021年四类哨点监测人群HIV-1亚型分布及变化

目的 研究2016-2021年广东省MSM、性病门诊男性就诊者（STD）、吸毒者（DUS）、暗娼（FSW）四类哨点监测人群HIV-1亚型分布及变化情况,探讨哨点监测同时开展分子流行病学监测的可行性。方法 运用巢式PCR扩增HIV-1 pol区基因片段,鉴定基因亚型,并比较不同年份的HIV-1亚型变化。结果 共计纳入分析814人。HIV-1主要流行亚型为CRF07＿BC(43.2%,352/814)、CRF01＿AE(27.5%,224/814)和CRF55＿01B(14.9%,121/814),其他亚型占14.4%(117/814),其中CRF01＿AE总体呈下降趋势,从2016年的33.9%下降到2021年的16.7%（χ2趋势=4.579,P=0.032）;CRF07＿BC和CRF55＿01B在2016至2021年的趋势变化差异无统计学意义,但其构成比出现增加;存在一定比例CRF01＿AE和CRF07＿BC的新型重组毒株。结论 2016-2021年广东省四类哨点监测人群HIV-1亚型分布以CRF07＿BC、CRF01＿AE和CRF55＿01B为主,亚型复杂多样。CRF01＿AE亚型...     

四川省2010-2014年新报告的HIV感染者中新发感染情况分析

目的了解四川省近年新报告1型艾滋病病毒(HIV-1)感染病例中,新发感染病例的流行特征及相关影响因素。方法收集2010-2014年各年第一季度,在四川省所有确证实验室检测确证为阳性的新报告病例的血清样本和相关信息,用BED发病捕获酶联免疫法(BED-CEIA)对血清样本进行检测,并根据社会人口学特征对新报告HIV病例及BED阳性病例分组并计算构成比,分析相关影响因素。结果 2010-2014年各年第一季度,四川省新报告病例9445例,新发感染病例(BED阳性)2222人,阳性率为23.53%。各年分别为1702、1403、1761、2011和2568例,BED阳性率分别为22.80%(388人)、23.88%(335人)、22.71%(400人)、22.53%(453人)和25.20%(646人)。各年新报告病例均主要为男性,汉族和彝族为主,教育程度为初中或以下为主。近年来,50岁人群新报告病例比例呈现上升趋势,传播途径从2010年的注射毒品(48.11%)和性传播(46.83%)并行,到2014年以性传播为主(73.64%)。多因素Logistic回归分析显示,年龄(20岁年龄组)、民族(彝族)和传播途径(男男性行为)均是新发感染的影响因素。结论四川省青年、老年人群、彝族以及男男性行为人群中,HIV感染状况十分严峻,且存在快速传播危险,应加大防控力度。     

HIV和结核病:再论监测

Elizabeth Talbot及其同事在本刊本期发表的论文中，介绍了OraQuick HIV-1／2测定法，这是一种旨在利用齿龈分泌物快速检测HIV的试剂盒，也能用于检测痰标本的HIV状况。其敏感性和特异性均不及血液标本，但其特异性仍超过98％。作者建议可以利用痰标本监测结核病人的HIV流行情     

我国首例HIV-2感染者的确认

目的 HIV-2抗体的确认。方法 用多种血清学检测方法测定一份可疑HIV-2抗体,并用HIV-2特异性免疫印迹试剂盒确认。结果 从一个科特迪瓦回国人员采集的血液标本经FAGT(GBC,HIV-1 2)和ELISA(Vironostica,HIV-1 2)检测为HIV抗体阳性,使用HIV-1 2免疫印迹试验(WB)证实该血清含有HIV-2特异性抗体,其中LiaTekⅢWB出现HIV-1 p24和HIV-2的gp105、gp35 3条反应条带,HIV Blot 2.2WB出现HIV-1 p24和HIV-2 gp36 2条反应带,继续用HIV-2特异性的HIV-2 Blot 1.2试剂盒检测,出现gp125、gp80、P68、p56、gp36、p26和p16条带,而HIV-1感染者血清仅出现p26反应带,因此,确认检出HIV-2抗体阳性者。结论 发现我国首例HIV-2病毒感染者。