先天性巨结肠血清蛋白质标记物检测

目的检测先天性巨结肠患儿血清蛋白质,筛选特异的蛋白质标记物,构建用于先天性巨结肠早期筛选及诊断的血清蛋白质指纹图谱模型。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enbanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra,SELDI-TOF-MS)技术检测62例血清标本(先天性巨结肠42例,正常对照20例)的蛋白质质谱,并结合生物信息学方法(支持向量机)分析数据。结果筛选出3个m/z位于3221.7、5639.2、6884.2的蛋白质标记物,构建先天性巨结肠早期筛选及诊断模型。经留一法交叉验证,区分先天性巨结肠和正常小儿的血清蛋白质指纹图谱模型的特异性为100%,敏感性为100%。结论SELDI-TOF-MS结合SVM建立先天性巨结肠血清蛋白质指纹图谱模型是早期筛选及诊断先天性巨结肠的一种特异性强、敏感性高的新方法,值得进一步研究和应用。     

胆道闭锁血清蛋白质标记物的检测

目的 寻找特异性诊断胆道闭锁的血清蛋白标记物.方法 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测28例血清标本(胆道闭锁7例,先天性胆总管囊肿7例,婴肝综合征3例,正常对照11例)的蛋白质质谱表达,结合生物信息学方法(SVM)分析数据.结果 筛选出m/z位于3403、2108、2111、2131、2823的5个蛋白质标记物区分肝胆疾病和正常对照小儿的血清蛋白指纹图谱模型,敏感性94.1%,特异性81.8%;筛选出m/z位于3403蛋白质标记物区分胆道闭锁和正常对照小儿的血清蛋白指纹图谱模型,敏感性100%,特异性100%;筛选出m/z位于3403、4796的2个蛋白质标记物区分胆道闭锁和其他肝胆疾病的血清蛋白指纹图谱模型,敏感性71.4%,特异性80.0%.结论 应用SELDI-TOF-MS结合SVM构建的胆道闭锁血清蛋白指纹图谱模型为胆道闭锁的早期诊断方法开拓了新方向,值得进一步研究.     

儿童节细胞神经母细胞瘤血清特异性蛋白的筛选与鉴定

目的构建更为完善的儿童节细胞神经母细胞瘤(GNB)的早期诊断血清蛋白质指纹图谱模型。方法入选30例GNB术前患儿及30例正常对照儿童,采集血清标本;以弱阳离子交换磁珠芯片(MB-WCX)处理血清,用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选方法检测和分析蛋白m/z峰值,筛选特异性蛋白,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)方法对特异性蛋白进行鉴定。结果 SELDI-TOF-MS质谱筛选GNB术前患儿与正常对照儿童得到m/z峰位于5 920的蛋白标记物,该标记物在GNB术前患儿中高表达(6 180.6±2 328.0),相比正常对照儿童(419.1±493.3),差异有统计学意义(P0.05);经MALDI-TOF/TOF鉴定,该蛋白标记物为类载脂蛋白C-Ⅲ(Apo C-Ⅲ)。结论 m/z峰位于5 920的蛋白标记物考虑为儿童GNB特异性标记物,其有助于儿童GNB的早期诊断。     

基于支持向量机神经母细胞瘤血清蛋白质标记物的检测及临床应用

目的 寻找神经母细胞瘤特异血清蛋白标记物,构建初步诊断模型,并探讨其临床应用价值.方法 收集47例神经母细胞瘤患儿血清标本,30例其它恶性实体肿瘤患儿血清标本以及健康儿童血清标本10例;用ZUCI-Protein Chip Data Analyze System分析软件进行数据处理;经留一法交叉验证,分类器评价模型的预测效果.结果 构建3个模型并筛选出10个蛋白标记物,能够成功区分神经母细胞瘤和健康儿童蛋白质谱的差异,表达模型的敏感性为100%,特异性为100%,区分神经母细胞瘤术前和术后蛋白质潜差异表达模型的敏感性为100%,特异性为100%,区分神经母细胞瘤与其它小儿恶性实体肿瘤血清蛋白质指纹图谱模型的敏感性为88.89%.特异性为100%.结论 用SELDI-TOF-MS及生物信息学技术并结合支持向量机(SVM)初步建立的模型可作为神经母细胞瘤的另一种特异性强、敏感性高的辅助检查手段.     

急性淋巴细胞白血病患儿血清蛋白质指纹图谱模型建立及应用评价

目的 应用SELDI-TOF-MS技术构建ALL患儿、对照组AML患儿及正常儿童血清蛋白质指纹图谱,寻找血清差异表达蛋白并建立初步模型,分析其在ALL诊断中作用.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测98例血清标本(ALL 46例,AML 32例,正常儿童20例)的蛋白质质谱,并...     

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱筛选急性特发性血小板减少性紫癜患儿血清生物标志物

目的 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS) 技术结合蛋白芯片检测并筛选急性血小板减少性紫癜(AITP)早期诊断、病情变化监测及判断预后的血清蛋白质标志物,建立AITP诊断模型,并验证在血清蛋白质组水平,创立AITP的分子诊断新方法.方法 应用SELDI-TOF-MS检测结合在蛋白质芯片上的血清蛋白质,获得35例AITP、35例健康对照者血清蛋白表达指纹图谱,并用Biomarker Wizard软件对数据进行分析,建立人工神经网络诊断模型.结果 在分子质量/电荷比值(质荷比,M/E)为2 000～20 000,AITP组与健康对照组之间差异有统计学意义(P<0.01)的蛋白质峰有29个,其中高表达的蛋白质峰7个,低表达的蛋白质峰22个,从分析的结果看最有意义的蛋白质为质荷比为4 109.23、5 521.35 的蛋白质,可以将其作为AITP的血清生物标志物;在蛋白质库中搜索与上述M/E值相对应的蛋白质,M/E为4 109.23的标志物是核蛋白体large subunit,M/E为 5 521.35 的标志物在蛋白质库中未发现.应用其血清标志物进入人工神经网络组合的诊断模型,将AITP组与健康儿童准确分组,敏感度为95%,特异度为90%.结论 1.M/E比为4 109.23、5 521.35 的蛋白质组合的诊断模型能将AITP与健康儿童完全准确地分开,提示该蛋白质可能是AITP的血清生物标志物;其中M/E为5 521.35的蛋白质可能是新的蛋白质.2.SELDI-TOF-MS技术是寻找疾病相关性蛋白质的有效工具.     

应用蛋白质芯片技术筛选急性淋巴细胞白血病患儿血清标志物的研究

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)急性期、缓解期(CR)患儿血清蛋白质谱的变化,旨在筛选可用于ALL早期诊断、病情变化监测及预后判断的蛋白质标志物。方法应用蛋白质芯片CM10及表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获得ALL、正常健康儿童血清蛋白表达指纹图谱,并用Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System5.0软件对数据进行分析,建立诊断模型。结果通过检测、分析发现,ALL组与正常对照组比较有显著差异(P<0.05)的蛋白质峰有14个,并获得质荷比(M/Z)为2770.43、7576.2和5288.68的蛋白质在ALL患儿血清蛋白质谱中波峰强度明显升高;进一步利用这3个蛋白质建成的诊断模型,可将ALL与正常儿童正确分组,其正确分组率分别为93%(25/27)和90%(19/21)。ALL完全缓解后血清蛋白质谱中,原高表达的蛋白质明显下调。结论SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术是一种快速、简单易行、用量少和高通量分析方法,能够直接检测出ALL患者血清中特异的蛋白标志物,其对于ALL的早期诊断具有一定的临床意义。     

基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠患儿诊断中的应用

目的建立蛋白质芯片技术检测血清蛋白质指纹图谱的方法，探讨基于人工神经网络（ANN）的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠（HD）患儿诊断中的应用价值。方法应用蛋白质指纹图谱分析仪测定HD患儿64例、巨结肠类缘病患儿25例和健康儿童23例血清标本的蛋白质指纹图谱，并结合ANN方法进行数据分析。112例标本随机分成训练组66例（HD40例，巨结肠类缘病14例，健康儿童12例）和盲法测试组46例（HD24例，巨结肠类缘病11例，健康儿童11例）。利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型，对46例未知血清进行检测，并与X线影像学检查结果进行比较。结果筛选出质荷比（m／z）位于7211．6和2864．8的蛋白质标志物2个。在HD组表达强度分别为6．15&#177;2．21和2．78&#177;1．21，巨结肠类缘病组表达强度分别为12．82&#177;7．56和4．86&#177;0．91（Pa〈0．01）。筛选出m／z位于6884．2和5639．2的蛋白质标志物2个。HD组表达强度分别为4．09&#177;1．78和15．57&#177;8．87，健康对照组表达强度分别为8．31&#177;3．07和30．31&#177;6．18（P〈0．01）。应用该方法对HD患儿进行诊断的准确率、敏感度和特异度分别为89．13％（41／46例）、87．50％（21／24例）和90．91％（20／22例），明显高于x线影像学检查68．8％（77／112例）、82．8％（53／64例）和50．0％（24／48例）。结论在HD患儿的诊断中，利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型较传统方法有更高的敏感性和特异性。     

胆道闭锁和淤胆型肝炎患儿血清蛋白质指纹图谱比较

目的 比较胆道闭锁与淤胆型肝炎患儿血清蛋白质指纹图谱,以发现二者的差异蛋白质分子.方法 收集60日龄前就诊、经手术证实为胆道闭锁和经过治疗、随访排除胆道闭锁的其他淤胆型婴儿肝炎患儿各21例的血清,采用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)为检测介质,经表面加强激光解离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)测定,得到蛋白质指纹图谱,并运用BioMarker Wizard 软件分析比较.结果 在质荷比(m/z)1 500～30 000,检测出的25个蛋白峰中,强度变异系数15%;比较二者血清蛋白质指纹图谱,发现质荷比为8 677的蛋白质峰在胆道闭锁患儿组下调(P＜0.05).该蛋白质的减少可能在胆道闭锁的形成中起到一定作用,可能是胆道闭锁的蛋白质分子标志.根据发现的差异蛋白的分子质量及等电点,在Swiss蛋白质数据库中检索,发现与载脂蛋白AⅡ非常接近.结论 SELDI-TOF-MS是一种快速、简便和高通量的分析方法,重复性好,与主要针对大分子质量的双相电泳研究在技术上形成互补,能直接筛选出胆道闭锁与淤胆型肝炎患儿的血清蛋白质指纹图谱中的差异蛋白质分子,可望用于胆道闭锁的早期鉴别诊断.     

儿童肝母细胞瘤潜在标志物载脂蛋白A-I的筛选及鉴定

目的筛选并鉴定出小儿肝母细胞瘤(HB)血清生物学标记物,以助HB的早期诊断。方法使用弱阳离子磁珠技术处理30例HB患儿、20例全身炎症反应综合征(SIRS)患儿和20例正常儿童的血清样品,利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)平台筛选出肿瘤组和正常组的差异性蛋白。SDS-PAGE纯化分离出目标蛋白质后,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定出目标蛋白质的氨基酸序列,并通过Swiss Prot数据库查找与之匹配的蛋白质。最后使用Real-time PCR和ELISA技术验证该蛋白质的表达情况。结果 SELDI-TOF-MS筛选并排除炎症因子干扰后,发现HB组和正常组存在质合比为9 348 Da的差异性蛋白质,在HB组的表达较低(P0.05)。经鉴定此蛋白为载脂蛋白A-I(Apo A-I)。Real-time PCR和ELISA验证Apo A-I基因和蛋白在HB组均低表达,在正常组高表达。结论 Apo A-I可作为HB非炎症性蛋白质标记物,对其早期诊断有意义。