先天性巨结肠血清蛋白质标记物检测

目的检测先天性巨结肠患儿血清蛋白质,筛选特异的蛋白质标记物,构建用于先天性巨结肠早期筛选及诊断的血清蛋白质指纹图谱模型。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enbanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra,SELDI-TOF-MS)技术检测62例血清标本(先天性巨结肠42例,正常对照20例)的蛋白质质谱,并结合生物信息学方法(支持向量机)分析数据。结果筛选出3个m/z位于3221.7、5639.2、6884.2的蛋白质标记物,构建先天性巨结肠早期筛选及诊断模型。经留一法交叉验证,区分先天性巨结肠和正常小儿的血清蛋白质指纹图谱模型的特异性为100%,敏感性为100%。结论SELDI-TOF-MS结合SVM建立先天性巨结肠血清蛋白质指纹图谱模型是早期筛选及诊断先天性巨结肠的一种特异性强、敏感性高的新方法,值得进一步研究和应用。     

儿童节细胞神经母细胞瘤血清特异性蛋白的筛选与鉴定

目的构建更为完善的儿童节细胞神经母细胞瘤(GNB)的早期诊断血清蛋白质指纹图谱模型。方法入选30例GNB术前患儿及30例正常对照儿童,采集血清标本;以弱阳离子交换磁珠芯片(MB-WCX)处理血清,用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选方法检测和分析蛋白m/z峰值,筛选特异性蛋白,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)方法对特异性蛋白进行鉴定。结果 SELDI-TOF-MS质谱筛选GNB术前患儿与正常对照儿童得到m/z峰位于5 920的蛋白标记物,该标记物在GNB术前患儿中高表达(6 180.6±2 328.0),相比正常对照儿童(419.1±493.3),差异有统计学意义(P0.05);经MALDI-TOF/TOF鉴定,该蛋白标记物为类载脂蛋白C-Ⅲ(Apo C-Ⅲ)。结论 m/z峰位于5 920的蛋白标记物考虑为儿童GNB特异性标记物,其有助于儿童GNB的早期诊断。     

基于支持向量机神经母细胞瘤血清蛋白质标记物的检测及临床应用

目的 寻找神经母细胞瘤特异血清蛋白标记物,构建初步诊断模型,并探讨其临床应用价值.方法 收集47例神经母细胞瘤患儿血清标本,30例其它恶性实体肿瘤患儿血清标本以及健康儿童血清标本10例;用ZUCI-Protein Chip Data Analyze System分析软件进行数据处理;经留一法交叉验证,分类器评价模型的预测效果.结果 构建3个模型并筛选出10个蛋白标记物,能够成功区分神经母细胞瘤和健康儿童蛋白质谱的差异,表达模型的敏感性为100%,特异性为100%,区分神经母细胞瘤术前和术后蛋白质潜差异表达模型的敏感性为100%,特异性为100%,区分神经母细胞瘤与其它小儿恶性实体肿瘤血清蛋白质指纹图谱模型的敏感性为88.89%.特异性为100%.结论 用SELDI-TOF-MS及生物信息学技术并结合支持向量机(SVM)初步建立的模型可作为神经母细胞瘤的另一种特异性强、敏感性高的辅助检查手段.     

血清蛋白质标记物在先天性巨结肠患儿中的应用

目的 通过检测先天性巨结肠(HD)患儿血清蛋白质筛选特异的蛋白质标记物,构建用于HD早期筛选及诊断的血清蛋白质指纹图谱模型.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测82例血清标本(HD组42例,其他类型肠梗阻组、健康对照组各20例)的蛋白质质谱,并结合生物信息学方法 (支持向量机)分析数据.结果 1.HD组与健康对照组比较:筛选出3个M/Z位于3 221.7、5 639.2、6 884.2的蛋白质标记物,构建HD早期筛选及诊断模型,3个标记物在HD组低表达,其在HD组和健康对照组的表达强度分别为378.29±273.34、295.65±159.38、444.13±254.06和1 428.18±1 192.61、1 039.60±785.64、1 115.72±680.48,2组比较均有显著性差异(Pa<0.01).经留一法交叉验证,区分HD和健康儿童的血清蛋白质指纹图谱模型的特异性和敏感性均为100%.2.其他类型肠梗阻组与健康对照组比较:在M/Z位于2 694.2、3 520.2位点上均无显著性差异(Pa>0.05).结论 SELDI-TOF-MS结合支持向量机建立HD血清蛋白质指纹图谱模型是早期筛选及诊断HD的一种特异性强、敏感性高的新方法 .     

肾母细胞瘤血清蛋白质标记物检测与分期模型构建研究

目的筛选出肾母细胞瘤患儿特异性血清蛋白质标记物，建立肾母细胞瘤临床分期模型与CT分期进行对照分析，并评价其临床应用价值。方法应用SELDI-TOF-MS技术检测80例血清标本（术前肾母细胞瘤30例，其他恶性肿瘤30例，正常儿童20例），用ZUCI-Protein Chip Data Analyze System分析软件进行数据处理，结合支持向量机（support vector machine，SVM）建立肾母细胞瘤临床分期模型。结果筛选出2个m／z位于4153．9和3257．6的蛋白质标记物，区分肾母细胞瘤Ⅲ和Ⅳ期与肾母细胞瘤Ⅰ和Ⅱ期蛋白质谱差异表达模型的敏感性为100％，特异性为93。8％；区分肾母细胞瘤与正常儿童、腹腔实体肿瘤及肾脏其他恶性肿瘤的特异性是100％，敏感性是100％、80．0％、100％；临床分期模型可以特异性地将各期区分开来，其特异性及敏感性均为100％；通过肾母细胞瘤早期诊断模型中的2个m／z（6984．4，6455．5）血清标记物进行分析得出肾母细胞瘤各期情况如下：Ⅳ期相对于Ⅲ期低表达；Ⅲ期相对于Ⅱ期低表达；Ⅱ期相对于Ⅰ期低表达；Ⅰ期相对于正常儿童低表达；后者相对高表达；临床分期越晚，m／z强度就越低表达。蛋白芯片分期准确性与病理一致，达到100％，在分期定性问题上优于CT（Ⅰ期100％，Ⅱ期85．0％，Ⅲ期85．0％，Ⅳ期75．0％）。结论用SELDI-TOF-MS结合SVM建立的肾母细胞瘤临床分期模型可弥补CT在肾母细胞瘤分期定性问题匕的不足。     

胆道闭锁和淤胆型肝炎患儿血清蛋白质指纹图谱比较

目的 比较胆道闭锁与淤胆型肝炎患儿血清蛋白质指纹图谱,以发现二者的差异蛋白质分子.方法 收集60日龄前就诊、经手术证实为胆道闭锁和经过治疗、随访排除胆道闭锁的其他淤胆型婴儿肝炎患儿各21例的血清,采用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)为检测介质,经表面加强激光解离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)测定,得到蛋白质指纹图谱,并运用BioMarker Wizard 软件分析比较.结果 在质荷比(m/z)1 500～30 000,检测出的25个蛋白峰中,强度变异系数15%;比较二者血清蛋白质指纹图谱,发现质荷比为8 677的蛋白质峰在胆道闭锁患儿组下调(P＜0.05).该蛋白质的减少可能在胆道闭锁的形成中起到一定作用,可能是胆道闭锁的蛋白质分子标志.根据发现的差异蛋白的分子质量及等电点,在Swiss蛋白质数据库中检索,发现与载脂蛋白AⅡ非常接近.结论 SELDI-TOF-MS是一种快速、简便和高通量的分析方法,重复性好,与主要针对大分子质量的双相电泳研究在技术上形成互补,能直接筛选出胆道闭锁与淤胆型肝炎患儿的血清蛋白质指纹图谱中的差异蛋白质分子,可望用于胆道闭锁的早期鉴别诊断.     

急性淋巴细胞白血病患儿血清蛋白质指纹图谱模型建立及应用评价

目的 应用SELDI-TOF-MS技术构建ALL患儿、对照组AML患儿及正常儿童血清蛋白质指纹图谱,寻找血清差异表达蛋白并建立初步模型,分析其在ALL诊断中作用.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测98例血清标本(ALL 46例,AML 32例,正常儿童20例)的蛋白质质谱,并...     

应用蛋白质芯片技术筛选急性淋巴细胞白血病患儿血清标志物的研究

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)急性期、缓解期(CR)患儿血清蛋白质谱的变化,旨在筛选可用于ALL早期诊断、病情变化监测及预后判断的蛋白质标志物。方法应用蛋白质芯片CM10及表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获得ALL、正常健康儿童血清蛋白表达指纹图谱,并用Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System5.0软件对数据进行分析,建立诊断模型。结果通过检测、分析发现,ALL组与正常对照组比较有显著差异(P<0.05)的蛋白质峰有14个,并获得质荷比(M/Z)为2770.43、7576.2和5288.68的蛋白质在ALL患儿血清蛋白质谱中波峰强度明显升高;进一步利用这3个蛋白质建成的诊断模型,可将ALL与正常儿童正确分组,其正确分组率分别为93%(25/27)和90%(19/21)。ALL完全缓解后血清蛋白质谱中,原高表达的蛋白质明显下调。结论SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术是一种快速、简单易行、用量少和高通量分析方法,能够直接检测出ALL患者血清中特异的蛋白标志物,其对于ALL的早期诊断具有一定的临床意义。     

血清大分子碱性磷酸酶测定对新生儿阻塞性黄疸早期诊断价值的研究

目的　探讨血清大分子碱性磷酸酶 (HMAP)在新生儿胆道闭锁、新生儿肝炎中的差异性 ,以寻找新的对阻塞性黄疸早期诊断有鉴别意义的实验室指标。方法　阻塞性黄疸患儿 3 1例 ,其中胆道闭锁 15例 ,新生儿肝炎 16例 ;非阻塞性黄疸和健康儿各 3 0例作对照。全部标本各取血清1ml,储存于 -80℃冰箱内备检。采用患儿血清中提纯的HMAP做抗原 ,制备特异性单克隆抗体 ,以硝酸纤维素膜片为固相 ,用此特异性单克隆抗体建立测定血清中HMAP的免疫催化方法。同时测定患儿血清碱性磷酸酶总活性 (TALP)和γ 谷氨酰转肽酶 (γ GT) ,并做肝胆B超和肝胆核素扫描检查。所得数据做统计学处理 ,分析比较不同测定值的敏感性与特异性。结果　 15例胆道闭锁患儿血清HMAP阳性 14例 ,阳性率为 93 3 % ;16例新生儿肝炎患儿血清HMAP阳性 2例 ,阳性率为 12 5% ,两组比较 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 0 5)。在临床资料的统计学处理中 ,两组仅大便颜色差异有显著性 ,其余均无统计学意义。胆道闭锁组和新生儿肝炎组血生化的TALP、γ GT和肝胆核素扫描结果差异均有显著性 ,但其敏感性与特异性分别为 80 0 %、73 3 %、86 7%和 62 5%、68 8%、62 5% ,明显低于HMAP的敏感性 ( 93 3 % )和特异性 ( 87 5% )。结论　血清HMAP在新生儿阻塞     

基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠患儿诊断中的应用

目的建立蛋白质芯片技术检测血清蛋白质指纹图谱的方法，探讨基于人工神经网络（ANN）的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠（HD）患儿诊断中的应用价值。方法应用蛋白质指纹图谱分析仪测定HD患儿64例、巨结肠类缘病患儿25例和健康儿童23例血清标本的蛋白质指纹图谱，并结合ANN方法进行数据分析。112例标本随机分成训练组66例（HD40例，巨结肠类缘病14例，健康儿童12例）和盲法测试组46例（HD24例，巨结肠类缘病11例，健康儿童11例）。利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型，对46例未知血清进行检测，并与X线影像学检查结果进行比较。结果筛选出质荷比（m／z）位于7211．6和2864．8的蛋白质标志物2个。在HD组表达强度分别为6．15&#177;2．21和2．78&#177;1．21，巨结肠类缘病组表达强度分别为12．82&#177;7．56和4．86&#177;0．91（Pa〈0．01）。筛选出m／z位于6884．2和5639．2的蛋白质标志物2个。HD组表达强度分别为4．09&#177;1．78和15．57&#177;8．87，健康对照组表达强度分别为8．31&#177;3．07和30．31&#177;6．18（P〈0．01）。应用该方法对HD患儿进行诊断的准确率、敏感度和特异度分别为89．13％（41／46例）、87．50％（21／24例）和90．91％（20／22例），明显高于x线影像学检查68．8％（77／112例）、82．8％（53／64例）和50．0％（24／48例）。结论在HD患儿的诊断中，利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型较传统方法有更高的敏感性和特异性。     

婴儿胆汁淤积症142例病因及常见临床诊断方法评价

目的　分析婴儿胆汁淤积症病因构成,探讨常用临床诊断方法在诊断婴儿胆道闭锁（BA）中价值。方法　选择2012-01-01-2016-11-30福建医科大学附属第一医院儿科住院治疗的142例婴儿胆汁淤积症患儿为研究对象,回顾分析其临床表现、实验室检查、影像学检查及诊断。结果　99例（69.7%）明确诊断,其最常见病因依次为BA、巨细胞病毒感染、Citrin蛋白缺乏;37例（26.1%）诊断为特发性婴儿肝炎,6例（4.2%）病因未明;BA组排陶土样便例数高于非胆道闭锁（NBA）组,血γ-GT明显高于NBA组（P均＜0.01）。以排陶土样便为评判标准诊断BA敏感度、特异度及准确度分别为86.8%、63.4%及69.8%,γ-GT≥300 U/L为评判分界点诊断BA灵敏度、特异度及准确度分别为65.2%、91.8%、83.3%。81.2%BA患儿胆囊窝未探及胆囊声像或胆囊体积小,NBA组仅13.8%（P＜0.01）,以胆囊窝未探及胆囊声像或胆囊体积小为评判标准诊断BA敏感度、特异度及准确度分别为68.8%、90.8%及84.9%。95.0%BA患儿未见胆囊显影或肠道没有放射性浓聚,5.0%为延迟胆囊显影或肠道有放射性浓聚,NBA组50.0%未见胆囊显影或肠道没有放射性浓聚,50.0%为延迟胆囊显影或肠道有放射性浓聚,两组间比较差异有统计学意义（P＜0.01）;以放射性核素肝胆显像未见胆囊显影或肠道没有放射性浓聚为评判标准诊断BA敏感度、特异度及准确度分别为95%、50%及68.0%。结论　婴儿胆汁淤积症常见病因为BA、特发性肝炎、巨细胞病毒感染、Citrin蛋白缺乏等;如出现排陶土样便、肝肋下≥3 cm,血γ-GT≥300 U/L,腹部超声胆囊窝未探及胆囊声像或胆囊大小形态异常,核素显像未见胆囊显影或肠道没有放射性浓聚,需高度怀疑婴儿胆道闭锁。     

Comparison technetium of Tc-99m disofenin cholescintigraphy with ultrasonography in the differentiation of biliary atresia from other forms of neonatal jaundice

Technetium Tc-99m disofenin cholescintigraphy (CS) and ultrasonography (US) are two major clinical methods used in differentiating biliary atresia (BA) from neonatal jaundice. To compare the diagnostic utility of these two modalities, 66 patients with neonatal cholestasis (15 BA, 3 choledochal cyst (CC), 32 neonatal hepatitis, 13 prolonged jaundice, 2 total parenteral nutrition, and 1 sepsis) underwent Tc-99m disofenin CS and US. The diagnostic sensitivity, specificity, and accuracy of CS in differentiating BA from other forms of neonatal jaundice was 100%, 87.5%, and 90.5%, respectively, and for US 86.7%, 77.1%, and 79.4%, respectively. Tc-99m disofenin CS after premedication with phenobarbital and cholestyramine is a convenient and reliable method of differentiating BA from neonatal hepatitis, with a diagnostic accuracy superior to that of US. However, US is the initial imaging procedure of choice in patients presenting with jaundice to rule out anatomic anomalies such as CC.     

Improvement in accuracy of gamma-glutamyl transferase for differential diagnosis of biliary atresia by correlation with age

In order to determine the accuracy of serum gamma-glutamyl transferase (GGT) as a test for biliary atresia, we reviewed the charts of 29 infants with cholestatic jaundice less than one year of age. All patients underwent liver biopsy or laparotomy with cholangiogram to establish neonatal hepatitis (NH) or extrahepatic biliary atresia (EHBA). We also gathered information from 176 patients from published studies. Sensitivity, specificity, and likelihood ratios (LR) were calculated with 95% confidence interval (95% CI). GGT levels of the EHBA group were higher than those from the NH group. For diagnosis of EHBA at a cut-off level >250 U/L, sensitivity was 83.3% (95% CI, 55.2- 95.3%); specificity, 70.6% (95 CI, 46.9-86.7%); and negative LR, <2.0. When we added data from other studies considering age (<4 weeks, 4-8 weeks, and >8 weeks), GGT performance increased, especially for the first age group: with cut-off of 150 U/L, sensitivity was 91.7%; specificity, 88%; and positive LR, 7.8. Thus, for improving reliability of GGT levels for EHBA diagnosis, they need to be correlated to infant age.     

肝功能检查在婴儿肝炎综合征和先天性胆道闭锁的鉴别诊断中的价值

目的：该文采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）对肝功能检查中常用的7项血清学指标进行分析,探讨常用的肝功能检查在婴儿肝炎综合征（infantile hepatitis syndrome,IHS）和先天性胆道闭锁（biliary atresia,BA）中的鉴别诊断价值。方法：分别检测IHS组（n=103）和BA组（n=60）的丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、γ-谷氨酰基转移酶（γ-GT）、碱性磷酸酶（ALP）、血清总胆红素（TB）、结合胆红素（CB）和血清白蛋白（ALB）等7个生化指标,应用ROC曲线进行分析,评价上述各指标的敏感性和特异性,阳性预测值和阴性预测值,并得到最佳临界值。对γ-GT,TB 和CB采用联合试验,提高诊断效率。结果：与IHS组相比,BA组的ALT、AST、γ-GT、TB 和CB水平显著升高（PCB>TB>AST;CB的阴性预测值最高,TB次之。CB的阴性似然比最低;CB的Youden指数最高,γ-GT和TB次之。γ-GT、TB及CB经平行试验,敏感性和阴性预测值均提高至100%;经系列试验,特异性提高至90.4%,阳性预测值提高至87.5%。结论：γ-GT、TB和CB水平对BA有一定诊断价值,平行试验阳性者更需积极做影像学检查。［中国当代儿科杂志,2009,11（12）：953-956］     

胆道闭锁母源性微嵌合体的荧光原位杂交分析

目的 探讨胆道闭锁与母源性微嵌合体的相关性。方法 随机选取2010年1月至2010年8月经手术和病理活检的12例胆道闭锁和8例婴儿肝炎综合征、2例胆总管扩张症的男性肝脏组织石蜡切片中,采用荧光原位杂交染色体计数探针,标记细胞中的X、Y染色体,计数细胞核中2条X染色体的母体细胞。结果 在12例胆道闭锁肝脏组织切片中均可发现母体细胞,在10例对照组肝脏组织切片中也可发现母体细胞;在肝脏组织切片的30个可读视野中,母体细胞的数量分别是11±2.59和1.8±1.69(P＜0.01),差异有显著统计学意义。结论 胆道闭锁等男性患儿肝脏组织中均可发现数量不等的母源性微嵌合体;肝脏组织中母源性微嵌合体的数量,胆道闭锁显著高于其他肝病患儿;母源性微嵌合体可能与胆道闭锁的发病机制相关。