虎杖苷对脂多糖介导的肺泡上皮细胞线粒体损伤的影响

目的探讨虎杖苷对脂多糖(LPS)介导的肺泡上皮线粒体损伤的影响及可能机制。方法 A549细胞分为4组:对照组为细胞仅接受0.1%DMSO处理7 h;模型组为细胞给予DMSO预处理,1 h后与LPS(5 mg/L)共孵育6 h;治疗组为细胞接受虎杖苷(50μmol/L)预处理,1 h后与LPS(5 mg/L)共孵育6 h;抑制剂组为细胞接受沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)抑制剂(50μmol/L 3-TYP)及虎杖苷50μmol/L预处理,1 h后与LPS(5 mg/L)共孵育6 h。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活性;荧光素-荧光素酶法检测细胞ATP水平;钙黄绿素-氯化钴探针检测线粒体通透性转变孔(mPTP)状态;DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(ROS)水平;荧光探针JC-1检测线粒体膜电位(MMP);Western blotting检测细胞SIRT3表达。应用SPSS 20.0软件进行统计分析。组间比较采用单因素方差分析、LSD两两比较或Tamhane′s T2检验。结果与对照组比较,模型组中SIRT3表达、JC-1红色/绿色荧光、钙黄绿素荧光、ATP水平及细胞活力分别显著下降至(73.3±4.5)%、(54.0±6.5)%、(2 035±217)U、(72.2±4.8)%及(73.7±3.7)%,ROS水平显著增加为(218.0±21.7)%;与模型组比较,治疗组中SIRT3表达、JC-1红色/绿色荧光、钙黄绿素荧光、ATP水平及细胞活力分别显著上升为(86.7±7.6)%、(75.8±7.6)%、(2 571±199)U、(86.7±6.3)%及(83.0±3.6)%,ROS水平显著下降为(180.0±18.1)%;与治疗组比较,抑制剂组中SIRT3表达、JC-1红色/绿色荧光、钙黄绿素荧光、ATP水平及细胞活力分别显著下降为(69.0±7.8)%、(62.8±6.2)%、(2 116±254)U、(72.8±5.8)%及(73.3±4.1)%,ROS水平显著增加为(212.0±18.2)%。结论虎杖苷可以显著改善LPS介导的肺泡上皮线粒体损伤,其机制可能与激活SIRT3有关。     

血管紧张素(1-7)/Mas受体轴通过调控ATP敏感性钾通道对抗高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤

目的研究血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]/Mas受体轴能否通过调控ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)对抗高糖引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。方法应用40 mmol/L葡萄糖(高糖)作用HUVEC 24 h建立糖尿病血管内皮细胞损伤模型,应用蛋白免疫印迹法检测K_(ATP)通道蛋白的表达水平,CCK-8检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞培养液中LDH活性,Hoechst33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量,双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧(ROS)水平,罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP),ELISA检测培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平。结果高糖分别作用HUVEC 1~24 h,从3 h起K_(ATP)通道蛋白的表达水平呈时间依赖性降低,在24 h时K_(ATP)通道蛋白的表达下降最明显。20μmol/L Ang(1-7)和高糖共处理HUVEC 24 h可抑制高糖对K_(ATP)通道蛋白表达的下调。此外,20μmol/L Ang(1-7)共处理或100μmol/L吡拉地尔(K_(ATP)通道开放剂)预处理细胞均能对抗高糖引起的HUVEC损伤,使细胞存活率升高,LDH活性降低,凋亡细胞数量、ROS生成、MMP丢失及IL-1β和TNF-α的分泌减少。10μmol/L A-779(Mas受体拮抗剂)共处理或1 mmol/L格列本脲(K_(ATP)通道阻断剂)预处理均能阻断Ang(1-7)的上述细胞保护作用。结论 Ang(1-7)/Mas受体轴通过调控K_(ATP)通道对抗高糖引起的HUVEC损伤。     

阿托伐他汀对同型半胱氨酸诱导的心肌细胞MEK/ERK通路及心肌线粒体损伤的影响

目的探讨阿托伐他汀对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的心肌细胞H9c2丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路及心肌线粒体损伤的影响。方法细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测不同浓度Hcy对H9c2细胞存活率的影响,筛选Hcy诱导浓度和时间。将诱导后的H9c2细胞分为模型组、5μmol/L阿托伐他汀组、10μmol/L阿托伐他汀组和15μmol/L阿托伐他汀组,另取正常H9c2细胞为对照组。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;JC-1法检测各组细胞线粒体膜电位的变化;DCFH-DA法检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)含量;Western blot检测各组细胞MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平。结果与对照组相比,2μmol/L Hcy可显著降低H9c2细胞存活率(P0.05),本研究使用2μmol/L Hcy处理24 h诱导H9c2细胞。与对照组相比,模型组H9c2细胞凋亡率、ROS水平、MDA含量显著升高(P0.05),线粒体膜电位、SOD、CAT含量及MEK1/2、ERK1/2磷酸化水平显著降低(P0.05);与模型组相比,5μmol/L阿托伐他汀组、10μmol/L阿托伐他汀组和15μmol/L阿托伐他汀组H9c2细胞凋亡率、ROS水平、MDA含量依次降低(P0.05),线粒体膜电位、SOD、CAT含量及MEK1/2、ERK1/2磷酸化水平依次升高(P0.05)。结论阿托伐他汀可能通过激活MEK/ERK通路降低Hcy诱导的H9c2细胞氧化应激反应,减轻心肌线粒体损伤。     

葡萄内脂对PC12神经细胞损伤的保护作用研究

目的探讨葡萄内脂对过氧化氢(H2O2)诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养PC12细胞,建立PC12细胞过氧化氢损伤模型。将处于对数生长期的PC12细胞分为正常对照组、模型组、阳性对照组、5μmol/L葡萄内脂组、25μmol/L葡萄内脂组、50μmol/L葡萄内脂组。采用不同浓度(5μm/L,25μm/L和50μm/L)葡萄内脂对PC12细胞进行干预,通过测定细胞存活率、细胞上清液中乳酸脱氢酶水平和细胞内氧化活性物质(ROS)水平评价干预效果。结果模型组PC12细胞存活率显著低于正常对照组及阳性对照组; 25μmol/L、和50μmol/L葡萄内脂组PC12细胞存活率(与阳性对照组相当)显著高于模型组,随着葡萄内脂浓度的增加,H2O2诱导损伤的PC12细胞的存活率呈升高趋势,组间比较差异有统计学意义(P 0. 05)。模型组PC12细胞上清液乳酸脱氢酶水平明显高于正常组及阳性对照组,5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L葡萄内脂组细胞上清液乳酸脱氢酶水平(与阳性对照组相当)均显著低于模型组,且随着葡萄内脂浓度的增加,乳酸脱氢酶水平呈降低趋势,组间比较差异有统计学意义(P 0. 05)。模型组PC12细胞ROS水平显著高于正常对照组及阳性对照组,5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L葡萄内脂组PC12细胞ROS水平(与阳性对照组相当)均显著低于模型组,且随着葡萄内脂浓度的增加,ROS水平呈降低趋势,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论葡萄内脂对H2O2诱导损伤的PC12神经细胞具有明显的保护作用,可能与其能维持细胞膜的完整性、发挥抗氧化作用有关。     

内质网应激-自噬肝癌SMMC-7721细胞模型的复制及金刚藤的干预

背景内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)-自噬是肝癌细胞一种自我保护性机制.内质网(endoplasmic reticulum, ER)应激诱导剂二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)能诱导肝癌细胞ERS-自噬.课题组前期研究证实金刚藤具有抑制肝癌细胞的作用,那么肝癌细胞ERS-自噬是否影响金刚藤抑制肝癌细胞的作用尚不清楚.目的探讨ERS-自噬肝癌SMMC-7721细胞模型的复制及金刚藤的干预.方法ERS-自噬肝癌SMMC-7721细胞模型的复制:采用不同剂量的DTT(50、200、500μmol/L)处理SMMC-7721细胞24 h,设DTT 0μmol/L组为control组,透射电镜观察各模型组细胞自噬小体,运用western blot法测定各组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubuleassociated protein 1 light chain 3-Ⅱ, LC3-Ⅱ)蛋白的表达.金刚藤对ERS-自噬肝癌SMMC-7721细胞存活率的影响:将SMM C-7721细胞分为空白组(control组)、金刚藤组(JGT组)、DTT+JGT组, control、JGT组分别给予空白血清、金刚藤含药血清处理, DTT+JGT组予DTT构建的ERS模型后给予金刚藤含药血清处理,采用CCK-8法检测细胞的存活率.结果 DTT(50、200、500μmol/L)组细胞的细胞质内均可见自噬小体,随着DTT浓度的增加,自噬小体数量逐渐增加, DTT 500μmol/L组可见大量自噬小体;各模型组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达:与control组比较,DTT(50、200、500μmol/L)组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达均显著升高(P均0.05);与DTT 200μmol/L组比较, 500μmol/L组LC3-Ⅱ蛋白的表达显著升高(P0.05).金刚藤对ERS-自噬肝癌细胞模型存活率的影响:JGT、DTT+JGT组细胞存活率均显著低于control组(P均0.05); JGT组细胞存活率显著低于DTT+JGT组(P 0.05).结论 DTT可诱导肝癌SMMC-7721细胞ERS-自噬;金刚藤可抑制SMMC-7721细胞的存活率, DTT诱导的ERS-自噬可抵抗金刚藤抑制SMMC-7721细胞的存活率.     

坏死性凋亡与活性氧的相互作用介导高糖引起的H9c2心肌细胞损伤

目的探讨坏死性凋亡(Nec)与活性氧(ROS)之间的相互作用能否介导高糖引起的H9c2心肌细胞损伤。方法应用蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测心肌细胞RIP3蛋白的表达水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜摄片测定线粒体膜电位(MMP);2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色荧光显微镜摄片检测心肌细胞内ROS水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜摄片测定凋亡细胞的数量。结果应用高糖(HG,35 mmol/L葡萄糖)分别处理H9c2细胞0~24 h,其中3、6、9、12和24 h均能明显地上调RIP3蛋白的表达水平,24 h时RIP3蛋白表达上调最为明显。应用100μmol/L Nec的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1)共处理心肌细胞可对抗高糖引起的RIP3蛋白表达的上调作用。此外,100μmol/L Nec-1能显著地抑制高糖引起的细胞毒性、线粒体损伤及氧化应激,使细胞存活率升高,MMP丢失及ROS生成减少。1 000μmol/L ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)预处理心肌细胞60 min,可明显地抑制高糖对心肌细胞RIP3蛋白表达的上调作用;此外,高糖诱导的细胞凋亡和细胞毒性作用,经NAC预处理后均能得到显著的抑制。结论 Nec与ROS之间的相互作用介导高糖对心肌细胞的损伤。     

网膜素改善氧化应激对人动脉血管平滑肌细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的抑制作用

目的研究网膜素对氧化应激作用下的人主动脉平滑肌细胞胶原Ⅰ、Ⅳ表达的影响。方法将人主动脉平滑肌细胞系培养,细胞密度到达90%以上后,随机分为5组:对照组、氧化应激组、网膜素组、细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂组和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂组。其中,对照组不增加任何处理,氧化应激组加入叔丁基氢过氧化物(t-BHP,87.1μmol/L),网膜素组(87.1μmol/L t-BHP+600μg/L网膜素)、ERK抑制剂组、p38MAPK抑制剂组为在网膜素组基础上分别加入ERK抑制剂(PD98059,60μmol/L)和p38MAPK抑制剂(SB203580,100μmol/L),应用Western blot法检测细胞中胶原Ⅰ、Ⅳ表达量。结果应用MTT法,筛选t-BHP最佳作用浓度为87.1μmol/L;与对照组相比,氧化应激组人动脉平滑肌细胞内Ⅰ、Ⅳ型胶原表达显著下降(P0.01);与氧化应激组比较,网膜素组Ⅰ、Ⅳ型胶原表达显著升高(P0.01);与网膜素组比较,ERK抑制剂组和p38MAPK抑制剂组Ⅰ、Ⅳ型胶原表达均显著下降(P0.05)。结论网膜素能改善氧化应激对人动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达抑制的作用,可能通过此机制促进动脉粥样硬化斑块的稳定,ERK/p38MAPK途径可能参与网膜素的信号传导。     

雌激素的抗衰老作用及其机制研究

目的 探讨雌激素抗人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老的作用及其机制.方法 用60 μmol/L过氧化氢(H2O2)作用HUVEC 72 h产生诱导型细胞衰老模型,观察17β-雌二醇(E2)对内皮细胞衰老的干预作用.实验分空白组、H2O2刺激组、H202 E2组及H2O2 E2 ICI 182780组.用β-半乳糖苷酶染色检测细胞的衰老,同时检测细胞线粒体细胞色素C氧化酶的活性,检测细胞内ATP水平及活性氧(ROS)水平,透射电镜观察线粒体结构变化.结果 H2O2刺激组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例增加,细胞衰老明显,同时线粒体细胞色素c氧化酶的活性下降,ATP水平下降,ROS水平增加,线粒体结构受损;而H2O2 E2组能明显减轻上述各种变化;H2O2 E2 ICI 182780组能明显阻断E2的各种保护作用.结论 E2具有抗血管内皮细胞衰老的作用,其作用机制是通过保护线粒体而实现的.     

硫化氢通过抑制ROS-TLR4通路对抗高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应

目的探讨外源性硫化氢(H2S)能否通过抑制活性氧(ROS)-Toll样受体4(TLR4)通路对抗高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应。方法应用细胞计数盒(CCK-8)检测细胞存活率,用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA检测细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞数量,Western blot测定TLR4和Cleaved Caspase 3蛋白的表达水平,双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内ROS水平,罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(MMP)。结果应用35 mmol/L葡萄糖(高糖)作用H9c2心肌细胞24 h能上调TLR4的表达水平。在高糖作用前,应用1000μmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理60 min或400μmol/L硫氢化钠(Na HS)预处理30 min能明显减轻高糖对TLR4蛋白表达的上调作用。高糖作用心肌细胞24 h可引起心肌细胞损伤和炎症反应,使细胞存活率降低,LDH活性、凋亡细胞数量、Cleaved Caspase 3蛋白的表达、ROS生成、MMP丢失及IL-1β和TNF-α的分泌增加;400μmol/L Na HS预处理心肌细胞30 min后再予高糖作用24 h或30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和高糖共处理心肌细胞24 h能显著拮抗高糖引起的上述损伤和炎症反应。结论外源性H2S可通过抑制ROS-TLR4通路对抗高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应。     

黄芪甲苷对阿霉素诱导的HL-1细胞凋亡的抑制作用及机制研究

目的 探讨黄芪甲苷（astragaloside IV,ASIV）对阿霉素诱导HL-1细胞凋亡的影响及机制,为进一步研发治疗阿霉素诱导心肌损伤的新药提供可靠的实验依据。方法 将HL-1心肌细胞分为正常对照组（Control组）、模型组（Model组）、1μmol/L ASIV、2μmol/L ASIV及4μmol/L ASIV组等5组。用5.2μmol/L的DOX溶液放入细胞培养箱中培养12 h制备心肌细胞损伤模型后,以1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L的ASIV溶液加入细胞损伤模型中,再放入细胞培养箱中培养12 h。CCK8法确定阿霉素造模药物浓度,流式细胞术确定浓度阿霉素造模时间,荧光染色法检测不同浓度ASIV对阿霉素诱导的HL-1心肌细胞凋亡、线粒体膜电位水平及ROS水平;分光光度检测法检测ASIV对阿霉素诱导的HL-1心肌细胞上清NO含量。结果 5.2μmol/L的DOX培养12 h诱导HL-1心肌细胞凋亡模型。与Model组相比,2μmol/L和4μmol/L ASIV组细胞凋亡明显减少（P<0.01）,NO含量显著增加（P<0.01）;ASIV各剂量组...     

锌离子螯合剂对脂多糖诱导的小胶质细胞中细胞因子表达的影响

目的研究锌离子螯合剂四吡啶甲基乙二胺(TPEN)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞中细胞因子表达的影响及机制。方法体外培养小鼠小胶质瘤细胞系小胶质细胞后分为对照组、LPS组(100 ng/ml LPS,30 min或4h)、TPEN+LPS组(25μmol/L TPEN,1 h+LPS,30 min或4 h)、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059+LPS组(PD98059+LPS组,25μmol/L PD98059,30 min+LPS,4 h),采用实时定量PCR法分析细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达,Western blot法检测pERK1/2蛋白的表达。结果与对照组比较,LPS组pERK1/2蛋白表达和IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与LPS组比较,TPEN+LPS组pERK1/2蛋白表达和IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),而PD98059+LPS组IL-1β、IL一6、TNF-αmRNA表达明显降低(P<0.01)。结论 TPEN可能通过减少pERK1/2表达来抑制LPS诱导的细胞因子的大量释放。     

刺五加皂甙B对心肌线粒体ATP敏感性钾通道的作用

研究刺五加皂甙B(Sb)对心肌线粒体ATP敏感性钾通道 (mitoKATP)的作用。用酶解法获取兔心室肌细胞 ,分为对照组、0 .1mmol/LSb组、0 .5mmol/LSb组、1mmol/LSb组、格列本脲组和格列本脲 +1mmol/LSb组。用罗丹明 (Rhodamine 12 3)染色 ,激光扫描共聚焦显微镜 (多光子模式 )观察线粒体荧光强度变化。结果 :①观察 15min对照组线粒体荧光强度无明显变化。② 0 .1,0 .5和 1mmol/LSb组均可见用药后线粒体荧光强度明显增加 ,分别增加 10 .3%± 6 .78%、18.4 %± 5 .5 1%和 2 4 .1%± 7.6 4 % ,荧光强度的增加以前 5min为主。③ 3μmol/L格列本脲不影响线粒体荧光强度 ,但可以阻断Sb对线粒体荧光强度的作用。结论 :Sb对mitoKATP有开放作用。     

睾酮对衰老心肌细胞的干预作用及其机制

目的探讨不同剂量睾酮对衰老心肌细胞的干预作用及其可能机制。方法将心肌细胞随机分为正常组、衰老组、1μmol/L睾酮组、100 nmol/L睾酮组、10 nmol/L睾酮组,检测各组心肌细胞周期分布,去磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(RB)表达,细胞内活性氧水平以及细胞线粒体DNA突变率。结果衰老组心肌细胞G_0/G_1期比例较正常组明显升高,而1μmol/L睾酮组、100 nmol/L睾酮组、10 nmol/L睾酮组G_0/G_1期比例较衰老组明显降低(P<0.05)。除10 nmol/L睾酮组对RB表达无明显影响外,睾酮干预可下调去磷酸化RB表达,降低细胞内活性氧水平,降低线粒体DNA突变率(P<0.05,P<0.01)。结论睾酮可抑制小鼠心肌细胞衰老,这一作用部分是通过下调去磷酸化RB表达,降低细胞内活性氧水平,降低线粒体DNA突变率来实现的。     

组织激肽释放酶对酸敏感离子通道1a介导的大鼠酸中毒神经元氧化应激的影响

目的探讨组织激肽释放酶（TK）对酸中毒损伤神经元的保护作用及对酸敏感离子通道1a（ASIC1a）介导的氧化应激反应的影响。方法取原代培养8～10 d的新生SD大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组,酸中毒组（pH=6.0的细胞外液处理4 h）,TK（100 nmol/L）、缓激肽B2受体（B2R）激动剂（缓激肽,100 nmol/L）、ASIC1a阻断剂（狼蛛毒素,100 ng/ml）及B2R拮抗剂（HOE140）预处理组。TK、B2R激动剂、ASIC1a阻断剂预处理组在给予酸性液处理前,先给予相应药物预处理30 min;B2R拮抗剂预处理组,在TK干预前30 min,给予HOE140（500 nmol/L）,30 min后给予酸性液处理。采用活细胞计数试剂盒（CCK-8）测定各组神经元的存活率。应用不同的荧光探针标记细胞内活性氧（ROS）,一氧化氮（NO）,线粒体膜电位（MMP）以及细胞内游离Ca2＋,采用荧光酶标仪测定上述各组细胞内各荧光物质的相对强度,计算各物质的相对含量。结果①正常对照组,TK、ASIC1a阻断剂及B2R激动剂预处理组的神经元存活率分别为（96.6±2.6）%、（79.7±5.9）%、（74.2±4.6）%、（77.7±5.0）%,与酸中毒组的（59.0±6.0）%比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。B2R拮抗剂预处理组为（64.6±3.8）%,与TK预处理组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。②与正常对照组比较,酸中毒组细胞内ROS、NO及游离Ca2＋水平显著增高（P〈0.01）,MMP水平显著下降（P〈0.01）;与酸中毒组比较,TK、ASIC1a阻断剂及B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO及Ca2＋水平显著下降,MMP水平显著增高（P〈0.01或P〈0.05）;而与TK预处理组比较,B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO含量,游离Ca2＋水平明显增高,MMP水平明显下降,P〈0.01。结论在酸性环境下,ASIC1a激活介导了神经元内氧化应激反应,诱导神经元损伤;TK通过B2R能够减轻ASIC1a介导的氧化应激性损伤。     

重组人纽兰格林对心力衰竭大鼠线粒体功能的影响

目的观察重组人纽兰格林(neuregulin,NRG)对心力衰竭(HF)大鼠线粒体功能的影响,并探讨其机制。方法雄性Wister大鼠40只,结扎大鼠左冠状动脉建立缺血性HF模型。4周后,建模成功的24只大鼠随机分为NRG组[NRG 10μg/(kg·d)],AG825组[AG825 50μg/(kg·d)]及HF组,各组8只,另6只大鼠作为假手术组(Sham组)。各组干预10 d,于实验结束时提取左心室梗死区外心肌线粒体,测定线粒体膜电位(MMP)、呼吸控制率(RCR)及组织ATP酶活性,同时测定活性氧水平及谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)mRNA水平。结果与Sham组比较,HF组大鼠线粒体功能受损,MMP下降、RCR及ATP酶活性降低,活性氧生成增加,GSHPX mRNA表达减少。与HF组比较,NRG组大鼠MMP增高,线粒体RCR改善,ATP酶活性增多,活性氧生成减少,GSHPXmRNA表达增加,而AG825组RCR、MMP和ATP酶活性均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 NRG明显改善衰竭大鼠线粒体功能,NRG对衰竭心肌线粒体功能的保护作用,可能与其抗氧化应激作用有关。     

Localizing extracellular signal–regulated kinase (ERK) in pharmacological preconditioning's trigger pathway

Acetylcholine (ACh) and opioid receptor agonists trigger the preconditioned phenotype through sequential activation of the epidermal growth factor (EGF) receptor, phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-K), Akt, and nitric oxide synthase (NOS), and opening of mitochondrial (mito) K(ATP) channels with the generation of reactive oxygen species (ROS). Although extracellular signal-regulated kinase (ERK) has recently been reported to be part of this pathway, its location has not been determined. To address this issue, we administered a 5-min pulse of ACh (550 microM) prior to 30 min of ischemia in isolated rabbit hearts. It reduced infarction from 30.4 +/- 2.2% of the risk zone in control hearts to 12.3 +/- 2.8% and co-administration of the MEK, and, therefore, downstream ERK inhibitor U0126 abolished protection (29.1 +/- 4.6% infarction) con.rming ERK's involvement. MitoK(ATP) opening was monitored in adult rabbit cardiomyocytes by measuring ROS production with MitoTracker Red. ROS production was increased by each of three G protein-coupled agonists: ACh (250 microM), bradykinin (BK) (500 nM), and the delta-opioid agonist DADLE (20 nM). Co-incubation with the MEK inhibitors U0126 (500 nM) or PD 98059 (10 microM) blocked the increased ROS production seen with all three agonists. Direct activation of its receptor by EGF increased ROS production and PD 98059 blocked that increase, thus placing ERK downstream of the EGF receptor. Desferoxamine (DFO) which opens mitoK(ATP) through direct activation of NOS also increased ROS. PD 98059 could not block DFO-induced ROS production, placing ERK upstream of NOS. In isolated hearts, ACh caused phosphorylation of both Akt and ERK. U0126 blocked phosphorylation of ERK but not of Akt. The PI3-K inhibitor wortmannin blocked both. Together these data indicate that ERK is located between Akt and NOS.     

双重血浆吸附联合血浆置换治疗慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者临床疗效研究*

目的 探讨应用双重血浆吸附联合血浆置换治疗慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者的疗效。方法 2016年9月～2017年10月本院感染病科收治的60例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者被随机分为对照组30例和观察组30例,在综合治疗的基础上分别接受血浆置换和双重血浆吸附联合血浆置换治疗,观察12周。结果 在治疗12周末,观察组凝血酶原时间活动度为(75.3±2.8)%,血清白蛋白水平为(37.0±3.0)g/L和血清总胆红素为(180.2±93.0)μmol/L,与对照组【分别为(60.2±2.1)%、(33.6±2.5)g/L和(232.0±98.3)μmol/L,P＜0.05]比,差异显著;观察组外周血血红蛋白和血小板计数分别为(103.2±22.1)g/L和(80.2±5.9)×10⁹/L,血钾、钠和氯分别为(3.7±0.8)mmol/L、(137.1±5.0)mmol/L和(99.0±7.2)mmol/L,血肌酐水平为(73.2±14.8)μmol/L,与对照组比,无显著差异【分别为(102.6±15.3)g/L、(75.5±6.0)×10⁹/L、(3.7±0.5)mmol/L、(137.5±8.0)mmol/L、(99.1±5.7)mmol/L和(73.5±15.5)μmol/L,P＜0.05】;在治疗12周末,观察组病死率为16.7%,显著低于对照组的33.3%(P＜0.05)。结论 使用双重血浆吸附联合血浆置换治疗慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者能够降低近期病死率,其远期效果值得观察。     

帕金森病患者认知障碍与血浆同型半胱氨酸水平的相关性研究

目的研究帕金森病(PD)患者认知障碍与血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平的关系。方法选择PD患者90例.其中认知功能正常43例(认知正常组).伴认知功能障碍47例(认知障碍组)及健康体检者40例(对照组),比较3组血浆Hcy、叶酸、维生素B_(12)水平。结果认知正常组和认知障碍组患者血浆Hcy水平明显高于对照组[(1 5.70±4.38)μmol/L vs(1 6.20±5.53)μmol/L vs(1 3.51±3.59)μmol/L,P<0.05]。结论 Hcy水平可能与PD认知障碍无关。     

Metformin decreases intracellular production of reactive oxygen species in aortic endothelial cells

Beyond its antidiabetic activity justifying its use in the treatment of the type 2 diabetes, metformin (MET [dimethylguanidine, Glucophage]) has been shown to exhibit antioxidant properties in vitro, which could contribute to limit the deleterious vascular complications of diabetes. We investigated whether MET, at the pharmacological level of 10 -5 mol/L, was able to modulate intracellular production of reactive oxygen species (ROS) both in quiescent bovine aortic endothelial cells (BAECs) and in BAECs stimulated by a short incubation with high levels of glucose (30 mmol/L, 2 hours) or angiotensin II (10 -7 mol/L, 1 hour). Intracellular ROS production was measured by fluorescence of the DCF (2,7-dichlorodihydrofluorescein) probe. Our results showed that MET was able to reduce the intracellular production of ROS in both nonstimulated BAECs (-20%, P < .05) and BAEC stimulated by high levels of glucose or angiotensin II (-28% and -72%, respectively, P < .01). Experiments performed in the presence of the nicotinamide adenine dinucleotide phosphate [NAD(P)H] oxidase inhibitor apocynin or the respiratory mitochondrial chain inhibitor rotenone indicated that MET exerted its effect partly through an inhibition of the formation of ROS produced mainly by NAD(P)H oxidase and also, to a lesser extent, by the respiratory mitochondrial chain.     

三氧化二砷与白藜芦醇联用对急性早幼粒细胞性白血病NB4细胞存活率的影响

目的 观察三氧化二砷(ATO)与白藜芦醇(Res)联用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞存活率的影响,并探讨其作用机制.方法 采用不同剂量的ATO[0(对照)、0.1875、0.3750、0.7500、1.1250、1.5000、2.2500、3.0000、5.0000 μmol/L]、Res[0(对照)、1.5625、3.1250、6.2500、12.5000、18.7500、25.0000、37.5000、50.0000 μmol/L]孵育NB4细胞.应用四氮唑盐比色法(MTT)检测不同处理组的细胞存活率,计算ATO和Res对NB4细胞的半数抑制浓度(IC50).根据IC50,设置联合用药比例分别为1.5∶18、.5∶25、.5∶35,并根据药物联合指数计算公式,分别计算出联合用药在不同抑制效应(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9)时的联合指数,判断ATO与Res在不同抑制效应时各自所需药物浓度之间的相互作用.应用DCFH-DA荧光探针检测对照组、ATO(1.5000 μmol/L)加药组、Res(25.0000 μmol/L)加药组、联合用药组(0.9000 μmol/L ATO+12.5000 μmol/L Res)NB4细胞活性氧(ROS)水平,每组各检测10份样品.结果 ①ATO(≥0.7500 μmol/L)加药组NB4细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05),呈剂量依赖性的量效关系,IC50为(1.78±0.11)μmol/L.②Res(≥18.7500 μmol/L)加药组NB4细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05),呈剂量依赖性的量效关系,IC50为(18.71±0.18)μmol/L.③ATO和Res联合应用对NB4细胞存活抑制效应呈现拮抗作用.④Res加药组NB4细胞内ROS水平(1670.55±13.97)明显低于对照组(2345.88±14.48,P＜0.05).ATO加药组NB4细胞内ROS水平(3092.42±94.84)明显高于对照组(P＜0.05).联合用药组NB4细胞内ROS水平(1860.27±15.99)明显低于ATO加药组(P＜0.05).结论 ATO、Res均可致NB4细胞存活率下降,而两者联合应用时表现为拮抗效应,ROS可能参与了这种拮抗作用.

Abstract：

Objective To investigated the effects of combined arsenic trioxide(ATO) and resveratrol(Res)on the viability of NB4 human leukemia cells. Methods NB4 human leukemia cell was used in this experiment.Cells were cultured in ATO (0,0.1875,0.3750,0.7500, 1.1250, 1.5000,2.2500,3.0000,5.0000 μmol/L) and Res (0, 1.5625,3.1250,6.2500, 12.5000, 18.7500,25.0000,37.5000,50.0000 μmol/L). Cell viabilities were measured by MTT in different treatment groups. Half inhibitory concentration(IC50) was calculated. The ratio of concentration of ATO and Res 1.5∶ 18,1.5∶ 25,1.5∶ 35 was added to cells, and the combination index(CI) was calculated. The level of ROS in control, ATO( 1.5000 μmol/L), Res(25.0000 μmol/L) and ATO(0.9000 μmol/L) + Res( 12.5000μmol/L) groups was measured by chemiluminescence assay. Results ①ATO( ≥0.7500 μmol/L) reduced the viability of NB4 cells in a concentration-dependent manner(P ＜ 0.05 ), and IC50 was (1.78 ± 0.11 )μmol/L. ②)Res (≥18.7500 μ mol/L) dose-dependently decreased the viability of NB4 cells (P ＜ 0.05 ), and IC50 was ( 18.71 ±0.18)μ mol/L. ③Combination of ATO and Res showed an antagonistic effect on NB4 cells viability. ④The ROS in Res group( 1670.55 ± 13.97) was significantly lower than that in control group(2345.88 ± 14.48,P ＜ 0.05). The ROS in ATO group (3092.42 ± 94.84) was significantly higher than that in control group(P ＜ 0.05). The ROS in ATO + Res group (1860.27 ± 15.99) was significantly lower than that in ATO group(P ＜ 0.05). Conclusions NB4 cell survival rate can be decreased by ATO and Res. The combination of arsenic trioxide and Res presents an antagonistic effect on NB4 cell viability, in part by reducing intracellular ROS formation.