离心管贴壁细胞对人脐血单个核细胞体外培养成功率的影响

背景：在常规的脐血间充质干细胞密度梯度离心分离过程中,离心管壁有大量单个核贴壁细胞,这些早期的贴壁细胞是否与脐血间充质干细胞的体外培养成功率低存在一定的联系呢？ 目的：比较4种方法分离人脐血单个核细胞的体外培养成功率,观察离心管贴壁细胞对人脐血单个核细胞体外培养成功率的影响。 方法：取足月健康顺产新生儿脐血36份,随机分为4组,每组9份,于采集后6 h内分别采用甲基纤维素沉降法(A组)、密度梯度离心分离法(B组)、甲基纤维素联合密度梯度离心分离法(C组)、甲基纤维素联合改良密度梯度离心分离法(D组)分离出单个核细胞,锥虫蓝染色检测细胞活力,用细胞计数板进行细胞计数,调整细胞浓度为1×10⁹ L-1~2×10⁹ L^-1,接种于含体积分数为10%胎牛血清的低糖DMEM培养基中培养和传代,相差显微镜下观察脐血单个核细胞的形态。收集第3代脐血单个核细胞,采用细胞计数板进行计数,计算扩增倍数,采用流式细胞仪鉴定细胞免疫表型。 结果与结论：36份脐血中,成功分离33份脐血单个核细胞,B组有3份分离失败。33份中共22份原代培养中出现大量贴壁细胞,其中A组8份,B组2份,C组5份,D组7份。9份(27%)培养出能融合且可稳定传代的成纤维样细胞,其中A组3份,B组0份,C组1份,D组5份。4组脐血单个核细胞在原代培养5~7 d后均可见数量不等的贴壁细胞,呈梭形成纤维样细胞或(和)圆形巨核样细胞。A组与D组于原代培养三四周可见成纤维样细胞集落形成,细胞形态与骨髓间充质干细胞相似,呈较均一的长梭形,可稳定培养至60~90 d形态无明显变化。流式细胞仪免疫检测,第3代脐血单个核细胞不表达或弱表达CD34、CD45和CD106等造血干细胞和内皮细胞标志,但显著表达CD29、CD105等间充质干细胞表面标志。结果显示离心管贴壁细胞可显著提高脐血单个核细胞的体外培养成功率,而甲基纤维素联合改良的密度梯度离心分离法,可充分回收离心管贴壁细胞,利于脐血单个核细胞的体外扩增和稳定传代。     

人外周血单个核细胞向肝样细胞转化的体外诱导培养方法*

背景：外周血单个核细胞在体外条件下可向肝样细胞转化。 目的：探索体外诱导外周血单个核细胞向肝样细胞分化的培养方法。 方法：采用密度梯度离心法联合贴壁法纯化肝硬化患者外周血单个核细胞,以含巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素3及β-巯基乙醇培养基培养6 d后,诱导组用含肝细胞生长因子,成纤维细胞生长因子4的培养基培养14 d;以未诱导培养的单个核细胞及L02肝脏细胞系为对照。 结果与结论：外周血单个核细胞呈透明圆形、类圆形,用巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素3及 β-巯基乙醇培养基培养6 d后,部分细胞向成纤维样细胞生长,诱导后部分细胞呈多边形,多角形,14 d后细胞形态逐渐接近肝细胞,并表达白蛋白、甲胎蛋白、角蛋白18。说明在一定的诱导条件下,外周血单个核细胞在体外可以向肝样细胞分化。 关键词：肝样细胞;外周血;单个核细胞;诱导;分化;干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.018     

银屑病患者骨髓HPP-CFC集落形成及p21基因启动子甲基化的研究

目的：研究银屑病患者骨髓高增殖潜能集落形成细胞（HPP-CFC）集落形成能力及集落细胞p21基因启动子甲基化状态,探讨银屑病患者骨髓造血前体细胞的活性。方法：密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照骨髓单个核细胞,培养于含SCF＋GM-CSF＋IL-3＋IL-6细胞因子组合的甲基纤维素半固体培养基,培养14天时计数HPP-CFC集落,然后收集集落。提取纯化集落细胞DNA,经亚硫酸盐修饰后,采用甲基化特异性PCR（MSP）检测HPP-CFC集落细胞p21基因启动子甲基化状态。结果：（1）在甲基纤维素半固体培养基中,银屑病患者骨髓HPP-CFC集落数显著低于正常对照组,且集落形态较小;（2）正常对照骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率较高,而银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率低于正常对照组。结论：银屑病患者骨髓造血前体细胞活性有异常;银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因甲基化降低可能与其相对较低的HPP-CFC集落形成能力密切相关。     

gp130单抗协同其他造血生长因子对人脐血造血细胞体外集落形成作用

采用甲基纤维素培养体系 ,观察gp130激发型单抗联合其他造血细胞生长因子对脐血单个核细胞半固体集落形成的作用。结果表明 ,gp130激发型单抗具有显著的协同促进造血细胞体外集落形成作用 ,而且明显优于IL 6对上述因子的协同效应。因此 ,gp130激发型单抗具有潜在的体外扩增造血细胞的应用价值。     

TNF-α增强人脐带间充质干细胞条件培养基的体外造血支持功能

 目的：研究肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α, TNF-α）刺激后所得的脐带间充质干细胞条件培养基对脐血CD34+细胞在半固体培养基中集落形成个数及种类的影响。方法：将3~6代人脐带来源间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs）以2×106接种到75cm2培养瓶中,其中刺激组加入TNF-α（10 g/L）,48 h后收集上清作为条件培养基。Real-time PCR检测hUC-MSCs中各类造血因子mRNA的表达量。密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,磁珠分选CD34+细胞,流式细胞术检测细胞纯度后分5组接种到6孔板内：TNF-α刺激hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基;hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基;TNF-α+DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基;完全甲基纤维素培养基;DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基。10 d后显微镜下计数各类集落形成单位（colony-forming unit, CFU）的数目,收集集落形成细胞,流式细胞术检测其表型特征。结果：（1）TNF-α刺激后hUC-MSCs中粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF）和白细胞介素6（interleukin-6, IL-6）mRNA表达上调。（2）两种条件培养组均可见粒系CFU（granulocyte CFU, CFU-G）、巨噬系CFU（macrophage CFU, CFU-M）和粒巨噬系CFU（granulocyte-macrophage CFU, CFU-GM）,但TNF-α刺激组CFU-G和CFU-M的数目约为未刺激组的1.5倍,CFU-GM约为未刺激组的2倍;阳性对照组中除粒系、巨噬系集落外还可见红系集落;而DMEM/F12完全培养基加或不加TNF-α组10 d后均未见集落形成。（3）流式细胞术检测TNF-α刺激组与未刺激组集落细胞表型CD14、CD45和CD11b,未见明显差异。结论：hUC-MSC上清作为条件培养基可在体外促进CD34+细胞分化增殖为髓系细胞,具有造血支持作用,TNF-α刺激后此作用增强。     

人脐血间充质干细胞体外终末分化为神经元样细胞

目的:探讨人脐血间充质干细胞体外培养过程中的终末分化方向.方法:采用密度梯度离心法从人脐血中分离培养间充质干细胞,流式细胞术(FCM)检测细胞表面抗原标记CD29、CD44、CD105、CD34、CD106和HLA-DR;观察人脐血间充质干细胞在体外培养过程中的增殖情况和形态变化,应用RT-PCR和免疫细胞化学方法对P2和P10代人脐血间充质干细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经丝蛋白(NF)的表达情况进行检测.结果:RT-PCR分析证实P10代人脐血间充质干细胞有NSE、NF的mRNA表达,免疫细胞化学检测显示P10代细胞能表达NSE和NF,而P2代人脐血间充质干细胞经RT-PCR和免疫细胞化学检测均无NSE、NF表达.结论:人脐血间充质干细胞在体外培养过程中能终末分化为神经元样细胞.     

人脐血间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞

目的从人脐血中分离单个核细胞(MNCs)、体外培养扩增间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性和定向诱导能力。方法无菌条件下采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞。用DMEM/F12培养基进行纯化和扩增培养,分别向神经元样细胞诱导,获取MSCs,显微镜下观察它的形态、尼氏体染色;取扩增2、5、7代的MSCs,免疫细胞化学法检测nestin表达和神经元样细胞特异性标记。结果诱导扩增后的MSCs尼氏体染色阳性,第2、5、7代MSCs的nestin的阳性表达率分别为(51.2±3.2)%、(34.6±2.7)%、(11.3±3.3)%;神经元特异性烯醇化酶(NSE)在原代细胞无表达,而在2、5、7代MSC的阳性表达率分别为(11.4±2.3)%、(21.78±3.1)%、(40.7±3.4)%。结论人脐血MSCs具有神经干/祖细胞的特性,在一定条件下能向神经元样细胞分化。     

IL-6和IL-11对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响

目的： 探讨白细胞介素－6(IL-6)和白细胞介素－11(IL-11)对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞及其产生血小板的影响。方法: 采用免疫磁珠法(MACS)分选8例健康产妇足月顺产的胎儿脐血中CD34+细胞，以含血小板生成素（TPO 50 μg/L）、白细胞介素-3（IL-3 10 μg/L）、干细胞因子（SCF 50 μg/L）的无血清培养基作为对照组，分别添加10 μg/L IL-6、IL-11、IL-6+IL-11作为实验组，培养14 d后观察结果。利用细胞计数仪检测单个核细胞数；流式细胞仪计数培养体系中的CD41+细胞和血小板；用倒置显微镜观察培养体系中的细胞生长情况；用显微镜和流式细胞仪观察凝血酶诱导后的血小板凝集情况。结果: 各实验组单个核细胞数与对照组无明显区别（P>0.05），而CD41+细胞和血小板数量明显多于对照组(P<0.05)。培养第14 d后倒置显微镜下可见实验组中血小板样颗粒物明显多于对照组，而且经凝血酶诱导后有明显血小板凝集。结论: IL-6和IL-11可诱导脐血中CD34+细胞分化为巨核细胞并产生功能性血小板。     

脐血来源的CD29~+细胞神经转分化的研究

目的:脐血中分离CD29+细胞并诱导其转化为神经元样细胞,为神经损伤与修复提供种子细胞来源。方法:免疫磁珠法分离出脐血CD29+细胞,体外培养扩增。取2代细胞以BDNF、GDNF、PDGF为诱导因子对其进行神经诱导分化。观察细胞形态、生长情况,流式细胞仪检测细胞周期、表型及HLA相关抗原。诱导后免疫组织化学染色法检测Nestin、NSE、NF、GFAP表达。Western Blot检测β-tubulin、Tau的表达。结果:细胞贴壁生长,呈长梭形,细胞表型为CD29+、CD44+、CD166+。在诱导后,细胞逐渐增大并伸出明显突起。免疫组织化学染色结果显示,Nestin、NSE、NF、GFAP表达阳性。Western Blot显示了相应蛋白的表达。结论:脐血CD29+细胞在体外可以向神经元样细胞转化,有望成为异体修复神经损伤的种子细胞来源。     

人脐血间充质干细胞培养及其生物学特性的研究

目的建立人脐血间充质干细胞体外分离培养的最佳条件,并观察其生物学特性。方法在无菌条件下抽取人脐血,用密度梯度离心的方法获得脐血单个核细胞,接种含10%胎牛血清的IMDM培养基中。对单个核细胞行贴壁培养后,进行细胞形态学观察,细胞生长、细胞周期分析及细胞凋亡检测,免疫细胞化学鉴定。结果采用Percoll(1.073g/ml)分离的脐血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)大小较为均匀,呈梭形或星形的上皮样细胞,传代培养后的细胞体积较大,成纤维样细胞逐渐增多。细胞生长曲线测定表明接种后第5d细胞进入指数增生期,至第9d进入平台期;流式细胞术证明G2+S期细胞为14.8%;免疫细胞化学染色结果表明42.0%细胞为CD45阳性。结论体外分离培养脐血间充质干细胞生长稳定,可作为组织工程的种子细胞。     

人脐血来源神经元样细胞的分离与鉴定

目的 探讨人脐血单个核细胞(MNCs)体外培养后的神经元特有分子表达和形态特征。方法 密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,部分接种于培养瓶内,部分细胞接种在6孔培养板内。倒置显微镜下观察培养细胞形态变化。RT-PCR方法检测MNCs培养前后神经细胞标志物nestin、NF-M及MAF2 mRNA的表达,培养14d后行免疫细胞化学鉴定。结果 培养前脐血MNCs胞体小呈圆形,神经干,前体细胞特异性抗体nestin阳性细胞、神经元特异性抗体MAP2和NF-M阳性细胞散在分布,阳性率分别为1．5％、3．4％和2．5％。培养14d后,倒置显微镜下可见一些有多个粗长突起的细胞群,相邻细胞突起连成网状;免疫细胞化学检测MAP2、NF-M染色阳性细胞成片状分布,阳性率分别为27．6％和21．7％。RT-PCR检测脐血单个核细胞nestin、NF-M及MAP2基因表达呈阳性,培养14d后上述基因表达上调。结论 脐血细胞中可能沉寂有神经(干)前体细胞,经体外培养后能分化为具有一定形态的类神经细胞。     

骨髓基质细胞体外诱导分化成神经元和胶质细胞

目的　探索骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells,BMSC)体外诱导分化为神经元和神经胶质细胞的可行性 ,为BMSC在神经科学领域内的应用奠定基础。方法　以成年犬BMSC为实验对象 ,利用碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、表皮生长因子 (EGF)、维甲酸 (RA)、脑源性神经营养因子 (BDNF)、胶质细胞系来源神经营养因子 (GDNF)等作为增殖及分化诱导因子 ,进行增殖培养、分化诱导 ;免疫组化法进行细胞性质鉴定。结果　加入bFGF、EGF增殖培养 72h可见细胞分裂相 (成纤维细胞样细胞 )。加入RA、BDNF、GDNF诱导 3d ,部分细胞有NSE、GFAP成分表达 ;第 10d可见有神经元、神经胶质形态样细胞形成 ,经细胞成分 (NSE、GFAP)鉴定证实为神经元、神经胶质细胞。结论　BMSC在体外培养条件下 ,经过bFGF、EGF、RA、BDNF、GDNF等因子的“程序性”作用 ,可以分化成神经元和神经胶质细胞     

bFGF对胚胎神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的影响

本研究观察了碱性成纤维生长因子对胚胎神经干细胞生长和分化的影响。从孕 12 d大鼠胚胎神经管分离神经干细胞 ,进行体外培养 ,分为碱性成纤维生长因子组及对照组。培养过程中观察神经干细胞的生长 ,于培养第 3、5、10 d用免疫组化方法检测培养细胞神经元特异烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达 ,以观察神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的状况。碱性成纤维生长因子可明显地促进培养细胞的生长和分化。免疫组化细胞计数显示 ,培养第 3 d,特异烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数均明显增加 ;培养第 5 d,特异烯醇化酶阳性细胞数是对照组的 1.9倍 ,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数为对照组的 1.6倍 ,前者表达增加明显 ;培养第 10 d,两者的阳性细胞数仍高于对照组 ,但增加不明显。不同培养时间的胞体最长突起长度也均高于对照组 ;胞体直径及表面积随培养时间延长而增大。说明 ,碱性成纤维生长因子既能促进胚胎神经干细胞的生长 ,也可促使其分化为神经元及神经胶质细胞 ,尤以神经元为明显     

人脐带血内皮祖细胞与血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子共培养及其增殖和迁移能力

背景：目前组织工程心脏瓣膜再内皮化种子细胞主要来源于成熟内皮细胞,内皮祖细胞作为内皮细胞的前体细胞越来越受到人们的关注。 目的：分离和扩增人脐带血内皮祖细胞,观测其体外生物学特性。 方法：密度梯度离心法分离新鲜的脐血中单个核细胞,在含血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的培养液中培养扩增,通过形态学、免疫荧光和流式细胞仪等对贴壁细胞进行鉴定;并与脐静脉内皮细胞进行增殖和迁移能力比较。 结果与结论：随着培养和诱导时间延长,贴壁细胞形态发生明显的改变,从小圆形变成梭形,逐渐分化成典型成熟内皮细胞的鹅卵石样形态,并可形成特征性的克隆;体外诱导7 d后90%以上贴壁细胞呈Dil-ac-LDL和FITC-UEA-I双阳性;贴壁细胞流式细胞仪分析显示：培养7 d的细胞VEGFR-2、CD34和CD133表达分别占(77.4±4.9)%、(52.4±6.6)%和(19.4±2.1)%,培养28 d的细胞VEGFR-2和CD34表达分别占(81.1±7.4)%和(7.6±3.1)%,而未检测到CD133表达;人内皮祖细胞增殖和迁移能力明显高于人脐静脉内皮细胞(P < 0.05),并且细胞数量可扩增达10⁹ L^-1。结果显示用密度梯度离心法和贴壁筛选法,可从人脐带血分离、纯化内皮祖细胞;内皮祖细胞可诱导分化为内皮细胞,增殖和迁移能力都很强。     

Engraftment of human T-cell acute lymphoblastic leukemia in immunodeficient NOD/SCID mice which have been preconditioned by injection of human cord blood

Childhood T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is one of the most common childhood cancers. Study of leukemia biology, as well as preclinical testing of potential therapeutic regimens directed at T-ALL, has been impeded by the lack of an efficient in vivo model of primary leukemia. We have reported elsewhere some observations that human cord blood conditioned medium enhances leukemia colony formation in vitro and preconditioning of sublethally irradiated nonobese diabetic/ severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mice with cord blood mononuclear cells (MNCs) facilitates the subsequent engraftment of primary T-ALL cells in these mice. Here we characterize in greater detail this in vivo xenograft model of human leukemia in NOD/SCID mice. Consistent with the thesis that cord blood facilitates engraftment, the engraftment of human leukemia can be shown to increase with increasing number of cord blood MNCs injected. In addition, we documented the expression of chemokine receptor CXCR4 by primary T-ALL from patients and found that the presence of these receptors did not result in the transmigration of T-ALL cells induced by stromal cell-derived factor-1alpha. Finally, we show that in this xenograft system T-ALL cells recovered from engrafted bone marrow are characterized by upregulated expression of interleukin 2 receptor gamma chain, suggesting that cord blood preconditioning may function in part to increase T-ALL responsiveness to growth factor(s).     

维甲酸、音猬因子对大鼠脊髓神经干细胞向运动神经元样细胞分化的影响

目的:分离大鼠胚胎的脊髓神经干细胞进行体外培养,探讨维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)诱导其向运动神经元样细胞分化. 方法:应用无血清培养技术分离培养脊髓神经干细胞,通过5-溴-2-脱氧尿苷标记、免疫荧光显色检测细胞增殖、分化情况;培养液分组添加Shh、 RA或Shh+RA,观察神经干细胞向运动神经元样细胞的分化情况. 结果:大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞,分化后可表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原;诱导分化后结果显示Shh组未检测到胆碱乙酰转移酶阳性细胞,RA组为20.63%, Shh+RA组为66.84%,其差异具统计学意义.结论:从大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞,Shh、 RA可不同程度地诱导脊髓神经干细胞分化为运动神经元样细胞.     

Enhancement of Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity of Neonatal Cells by Interleukin-2 (IL-2) and IL-12

Newborn infants are more susceptible to infections due in part to deficiencies in the cytotoxic functions of their lymphocytes. We investigated the ability of interleukin-2 (IL-2) and IL-12 to enhance the cytotoxicity of neonatal (cord blood) and adult mononuclear cells (MNCs) in both natural killer (NK) cell and antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) assays. The cytotoxic activity of cord blood MNCs was less than 50% that of adult MNCs in most assays prior to exposure to cytokines. Incubation with IL-2 (100 U/ml) or IL-12 (1 ng/ml) for 18 h increased the NK cell activity (using K562 target cells) of both cord blood and adult MNCs, and the combination of IL-2 and IL-12 increased cord blood cytotoxicity threefold, making the cytotoxicity of cord blood cells equivalent to that of adult cells treated with the same cytokines. In ADCC assays with chicken erythrocyte targets, the combination of IL-2 and IL-12 increased the cytotoxicities of both cord blood and adult MNCs, with greater enhancement again seen with cord blood cells. In assays with NK cell-resistant CEM cells coated with human immunodeficiency virus (HIV) gp120 antigen in the presence of hyperimmune anti-HIV immunoglobulin, ADCC of cord blood MNCs was about 50% that of adult MNCs; ADCC of cord blood MNCs increased two- to threefold with the addition of IL-2 and IL-12, whereas ADCC of adult MNCs did not increase. Incubation of cord blood cells, but not adult cells, with IL-2 or IL-12 for 1 week increased the percentage of CD16⁺/CD56⁺ cells two- to fivefold and enhanced ADCC activity. Thus, IL-2 and IL-12 greatly enhance both the NK cell and ADCC activities of neonatal MNCs and increase the number of NK cells in longer-term culture.     

茶多酚对2型糖尿病患者外周血早期内皮祖细胞衰老及氧自由基损伤的影响

目的:通过体外诱导培养2型糖尿病(T2DM)患者外周血早期内皮祖细胞(earlyEPC),观察茶多酚(TP)对其衰老和氧自由基损伤的影响。方法:分别采集20例T2DM患者及15例正常对照人群外周血各20ml,获取单个核细胞后,在包被有纤维连接蛋白(FN)的培养板中加入含有血管内皮生长因子(VEGF)等的M199培养基,诱导earlyEPC分化,于第6天加入不同浓度TP干预24h后,测定earlyEPC衰老情况及丙二醛(MDA)含量。结果:两组样本分别给予TP(1mg/L、10mg/L、100mg/L)干预后,earlyEPC的衰老细胞明显减少(P<0.01),MDA含量明显降低(P<0.05),但TP对实验组earlyEPC的衰老和MDA改善情况不如对照组明显(P<0.05);100mg/L的TP对T2DM患者MDA的改善效果不明显(P>0.05)。结论:适宜浓度TP能够不同程度改善T2DM患者earlyEPC的衰老及氧自由基损伤。     

兔外周血两种内皮祖细胞的分离培养和鉴定

目的研究新西兰大白兔外周血两种内皮祖细胞(EPC和EOC)的分离培养和鉴定。方法由兔耳中央动脉采集外周血,以密度梯度离心法分离单个核细胞(MNC),置于EGM-2培养基中培养。用DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取试验和FITC标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-1)结合试验,检测flk-1表达的免疫荧光法和检测CD34、Ⅷ因子表达的免疫组化染色法,以及体外血管形成试验对EPC/EOC进行鉴定。结果从新西兰大白兔外周血MNC中可成功地培养出EPC和EOC。培养第7天的EPC和第16天的EOC均能吞噬ac-LDL并与凝集素UEA-1相结合,同时均可表达CD34、flk-1和Ⅷ因子相关抗原。EOC在matrigel凝胶上可形成血管腔样的结构。结论用密度梯度离心法从兔外周血中分离的MNC在一定的培养条件下,能分化成为EPC和EOC,为后续的实验研究提供了细胞来源。