气管、肺（042001～042049）

40例原发性气管癌治疗结果 云南富源县肺癌发病状况调查 扬中市1991～2000年肺癌发病情况分析 肺癌肿瘤全溶物脉冲自体树突状细胞体外诱生T细胞抗肿瘤反应的研究 非小细胞肺癌中c-myc和p73的表达及意义 肺癌患者外周血循环细胞CEA mRNA的表达 血液中微转移癌细胞对非小细胞肺癌预后的影响 p73基因对人肺腺癌细胞H1299化疗敏感性的影响     

骨骼肌条件培养液对肺癌细胞生长抑制作用的实验研究

背景与目的：恶性肿瘤可转移至机体所有器官,但在骨骼肌中罕见。本实验拟通过研究骨骼肌微环境因素对不同转移潜能肺癌细胞增殖的影响。探讨骨骼肌内转移瘤罕见这一现象的发生机制。方法：原代培养新生Wistar大鼠骨骼肌细胞,用MTT法分析和比较骨骼肌细胞条件性上清液（murine skeletal muscle conditioned medium,MMCM)对不同转移潜能肺癌细胞的体外抑瘤作用,以阿霉素作为MMCM的阳性对照。以金黄地鼠肾细胞株BHK-21作为肺癌细胞的阴性对照。结果：不同转移潜能肺癌细胞,即人肺巨细胞癌低转移株PLA-801C和人肺巨细胞癌高转移株PLA-801D与MMCM共同培养后,PLA-801C细胞在MMCM稀释至50%时其生长增殖即不受明显影响,而PLA-801D细胞的的生长在MMCM稀释至原液的6.25%时仍受显著抑制。而MMCM在各稀释浓度点对BHK-21细胞的生长均无显著抑制作用。结论：新生大鼠骨骼肌细胞上清液可选择性抑制恶性肿瘤细胞增殖;MMCM对人肺巨细胞癌高转移株较低转移株细胞的生长抑制作用更明显。     

一株人肺鳞癌细胞系的建立及其生物学特性

我国肺癌的发病率高，鳞癌为最常见的病理类型。然而目前尚无一套行之有效的治疗方法。因此，通过体外建立稳定的瘤细胞系，并对其进行组织形态、生长、遗传等一系列生物学行为的研究，将为肺鳞癌的临床诊治提供有益的实验资料。国内自1962年何申首次报道了人肺鳞状上皮癌细胞建系工作［‘似后，仅有几例肺鳞庙建系的成功报道「‘］，材料均不全面。本文报告1例肺鳞癌细胞系体外建株的实验条件及其生物学特性。材料和方法一、标本患者男，sl岁，1993年5月16日于上海医科大学附属中山医院胸外科手术。手术标本经病理证实为肺鳞状上皮细胞癌。…     

长春新碱对肺癌细胞粘弹特性的影响

目的 探讨长春新碱对低转移人肺腺癌细胞（ＰＡａ）和高转移人肺巨细胞癌细胞（ＰＧ）粘弹特性的影响及其机理。方法 应用电子显微镜观察细胞超微结构,采用微管吸吮技术定量测定体外培养的肺癌细胞在长春新碱（ＶＣＲ）作用下粘弹特性的变化情况。粘弹性分析采用特殊的三元素标准线性固体模型拟合实验数据。Ｋ１、Ｋ２为弹性元件,μ为粘性元件。结果 肺癌细胞粘弹性系数,在未使用ＶＣＲ前ＰＡａ细胞大于ＰＧ细胞（Ｐ〈０．００     

甲状腺转录因子-1在肺癌细胞核中表达的定量研究

目的: 观察甲状腺转录因子-1 (TTF-1) 在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞、肺癌以及淋巴结转移癌癌细胞胞核中的表达, 从量化角度探讨其在肺癌发生及其转移过程中的意义。方法: 石蜡包埋切片, 应用免疫组织化学SP法及LeicaQ500MC图像分析系统,对TTF- 1表达强度进行定量分析。结果: 胚胎肺泡上皮细胞胞核TTF 1阳性单位(PU) 值小于正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞胞核TTF- 1的PU值, 差异具有极显著性(P<0 .001); 不同类型肺癌癌细胞胞核TTF 1的PU值均小于胚胎肺泡上皮细胞和正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞胞核TTF -1的PU值, 且差异具有极显著性(P<0. 001); 肺腺癌和肺小细胞癌癌细胞胞核TTF 1的PU值均大于肺鳞癌和肺大细胞癌癌细胞胞核TTF 1的PU值, 且差异均具有极显著性(P<0 .001); 肺鳞癌癌细胞胞核TTF 1的PU值大于肺大细胞癌癌细胞胞核TTF- 1的PU值, 差异具有极显著性(P<0. 001)。肺腺癌、肺鳞癌和肺大细胞癌淋巴结转移灶中癌细胞胞核TTF 1的PU值均大于其癌原发灶癌细胞胞核TTF 1的PU值, 差异具有显著性(P<0 .001, P<0 .001,P<0. 05); 肺小细胞癌淋巴结转移灶癌细胞胞核与其原发灶癌细胞胞核TTF 1的PU值基本相同, 差异无显著性(P>0 .05)。有淋巴结转移的肺癌癌细胞胞核TTF 1的PU值大于无淋巴结转移     

nm23-H1基因对肺癌细胞株恶性表型的逆转作用

目的：通过稳定、高效的基因转染方法将nm23-H1基因导入nm23-H1基因缺失的人肺大细胞癌细胞株L9981,探讨nm23-H1基因是否具有逆转肺癌恶性表型的功能。方法：利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将nm23-H1基因导入L9981细胞株;利用细胞生长曲线、克隆形成率、Boyden小室法等方法研究转染前后细胞体外增殖、黏附、侵袭、转移能力的改变。结果：转染后的L9981细胞株中有nm23-H1基因mRNA和蛋白的阳性表达;转染后细胞株体外增殖速度减慢,克隆形成率降低,黏附性以及侵袭性均降低。结论：nm23-H1基因对肺癌细胞株L9981的体外生长、侵袭、转移具有负调控作用,表明nm23-H1基因具有逆转肺大细胞癌恶性转移表型的能力,为应用nm23-H1基因治疗肺癌提供了客观依据。     

nm23-H1基因对肺癌细胞株恶性表型的逆转作用

目的:通过稳定、高效的基因转染方法将nm23-H1基因导入nm23-H1基因缺失的人肺大细胞癌细胞株L9981,探讨nm23-H1基因是否具有逆转肺癌恶性表型的功能。方法:利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将nm23-H1基因导入L9981细胞株;利用细胞生长曲线、克隆形成率、Boyden小室法等方法研究转染前后细胞体外增殖、黏附、侵袭、转移能力的改变。结果:转染后的L9981细胞株中有nm23-H1基因mRNA和蛋白的阳性表达;转染后细胞株体外增殖速度减慢,克隆形成率降低,黏附性以及侵袭性均降低。结论:nm23-H1基因对肺癌细胞株L9981的体外生长、侵袭、转移具有负调控作用,表明nm23-H1基因具有逆转肺大细胞癌恶性转移表型的能力,为应用nm23-H1基因治疗肺癌提供了客观依据。     

人肺癌不同转移潜能细胞株的建立及其特性分析

目的:建立人肺癌不同转移潜能细胞株,并对其转移特性进行初步研究,为肺癌转移机制的研究提供模型. 方法:采用有限稀释单细胞克隆培养的方法,从已建立的人肺癌高转移细胞株SPC-A-1sci中分离出的不同单克隆细胞,通过体外损伤愈合、迁移与侵袭实验,体内皮下移植瘤自发性转移实验,比较分离出的不同细胞株之间以及与亲代高转移细胞株SPC-A-1sci之间运动、迁移、侵袭及转移能力的差异. 结果:从SPC-A-1sci细胞株中成功分离出3株单克隆细胞(命名为SPC-A-1sci-C5、SPC-A-1sci-F3、SPC-A-1sci-C2),均具有特异性形态学特征;与亲代高转移细胞株SPC-A-1sci相比,SPC-A-1sci-C5细胞株的体外侵袭能力明显增强,其他2株细胞的体外侵袭能力则明显降低;3株单克隆细胞在细胞形态和体外侵袭能力方面存在明显差异,SPC-A-1sci-C5的体外侵袭能力明显高于其他2株细胞.体内皮下移植瘤自发性转移试验显示,SPC-A-1sci-C5细胞不仅转移发生时间较早,而且肺转移程度(包括转移灶数量及大小)亦较其他2株细胞增多.结论:成功建立了具有相同遗传背景、不同转移潜能的3株人肺癌细胞,为肺癌转移的进一步研究提供了理想模型.     

高转移性人肺腺癌细胞株SPC-A-1BM的建立及其特性分析

目的:建立高转移性人肺腺癌细胞株SPC-A-1BM及其免疫缺陷小鼠转移动物模型。方法:将人肺腺癌细胞株SPC-A-1经免疫缺陷小鼠血道或肺原位接种后形成转移,在放射性核素示踪下找到骨转移病灶,然后切除病变骨组织进行体外培养获得转移性肺癌细胞,用这些癌细胞重复以上循环10次,获得高转移肺癌细胞。采用荧光定量PCR方法检测亲代细胞和高转移细胞的基因表达。结果:获得以骨转移为主,肺、肾上腺、淋巴结等多脏器转移的人肺腺癌转移细胞株(SPC-A-1BM)及其免疫缺陷小鼠动物模型。定量PCR检测显示SPC-A-1BM的上皮生长因子受体(EGFR/HER)家族、血管内皮生长因子(VEGF)家族和3个抗凋亡蛋白的基因较原代细胞均有不同程度的变化。结论:SPC-A-1BM是以骨转移为主的高转移性人肺腺癌细胞株,该细胞株及其转移动物模型为肺癌转移的生物学研究提供了一个良好的技术平台。     

RhoC及其调节因子RhoGDIβ和RhoGDIγ在肺癌细胞系中的表达

目的:研究ras同系物(ras homologue,Rho)C蛋白及其调节蛋白Rho二磷酸鸟苷解离抑制因子(Rho guanosine diphosphate dissociation inhibitor, RhoGDI)-β和-γ在肺癌细胞中的表达情况.方法:应用Western印迹法和RT-PCR检测人正常支气管上皮细胞和不同人肺癌细胞系中RhoC、RhoGDIβ和RhoGDIγ蛋白及mRNA的表达.结果:RhoC、RhoGDIβ和RhoGDIγ的蛋白及mRNA在人肺腺癌细胞系、人肺巨细胞癌细胞系(高和低侵袭力亚型)和人支气管上皮细胞系中均有表达.3种肺癌细胞系中RhoC、RhoGDIβ和RhoGDIγ的表达均明显高于人支气管上皮细胞系.高侵袭力人肺巨细胞癌细胞系BE1中RhoC和RhoGDIγ的表达均明显高于低侵袭力人肺巨细胞癌细胞系LH7.低侵袭力人肺巨细胞癌细胞系LH7中RhoGDIβ的表达高于高侵袭力人肺巨细胞癌细胞系BE1.结论:高侵袭力人肺巨细胞癌细胞BE1中RhoC和RhoGDIγ的表达较高,低侵袭力人肺巨细胞癌细胞系LH7中RhoGDIβ的表达较高.     

体外培养癌细胞株建株后的保种传代经验探讨

1982年因课题需要,我院进行了人癌细胞的建株工作.我省个旧市是全国肺癌高发区,在省卫生厅的资助下,我们选择了肺癌为建株目标.经过一年多10余次对肺癌手术切除癌组织的精心培养,终于在1982年从一名个旧女工肺癌患者手术切除癌组织中,成功建立了我省第一株人肺腺癌(GLC-82)细胞株,该成果1983年获卫生部科技成果乙等奖、云南省科技成果二等奖.18年来,人肺腺癌(GLC-82)细胞株在体外培养传代已达500代以上,基本做到无霉菌及细菌污染,经检测也未发现支原体污染.我们相继建立了肺泡癌细胞侏(HSS-84)等癌细胞株,经过10多年癌细胞建株及体外培养保种传代工作,从实验技能方面总结出一些经验,在本文中提出与同行共同探讨相互学习.     

三维立体培养中H460细胞MMP-2、MMP-9的表达

目的：建立肺癌细胞的三维立体培养模型,测定肺癌细胞在三维立体培养中的基质金属蛋白酶（MMPs）的表达,研究MMPs在肺癌侵袭与转移中的作用。方法：采用非小细胞肺癌H460细胞系建立肺癌细胞三维立体培养模型,观察癌细胞的生长,同时设置平面培养对照组,用明胶酶谱法测定两组不同时间点MMP-2、MMP-9。结果：H460细胞在立体胶原内生长良好,分泌有MMP-2、MMP-9,且分泌量多于平面培养组。结论：三维立体培养肺癌细胞能清晰地表达MMPs,是研究MMPs在癌细胞的侵袭与转移作用机制的一种可行方法。     

nm23-H1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株生物学行为的影响及作用机理

背景与目的nm23-H1基因已被证明是一个肿瘤转移抑制基因,但其相关作用机理仍不明确。本研究通过比较nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981生物学行为的变化,探讨nm23-H1基因影响人高转移大细胞肺癌细胞株生物学行为的可能机理。方法应用细胞体外增殖活性检测(MTT法)和体外侵袭力检测(改良Boyden小室法)技术分别检测nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1肺癌细胞株体外增殖活性和侵袭力的变化;同时加入PKC特异抑制剂Calphostin C作用后,再次观察三株细胞株抑制剂作用前后细胞侵袭力、增殖力的变化。结果nm23-H1基因缺失的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981和L9981-pLXSN体外侵袭力和增殖活性明显高于转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1肺癌细胞株(P<0.001);L9981和L9981-pLXSN细胞间体外侵袭力和增殖活性则无统计学差异(P>0.05)。用PKC抑制剂Calphostin C处理L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1肺癌细胞株后,细胞体外侵袭力和增殖活性下降(P<0.001),而转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1细胞体外侵袭力和增殖活性仍低于L9981和L9981-pLXSN(P<0.001),L9981和L9981-pLXSN细胞间则无统计学差异(P>0.05)。结论nm23-H1基因可明显抑制L9981肺癌细胞株的细胞增殖力和侵袭力。nm23-H1基因对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的生物学行为的影响可能与其抑制PKC信号传导有关。     

Src蛋白在肺癌细胞增殖浸润中的作用

背景与目的 Src蛋白在肿瘤的发生、发展和转移中具有重要作用。本研究旨在探讨Src蛋白在肺癌细胞中的表达活化情况及其对肺癌细胞增殖浸润的影响。方法采用Western blot和免疫沉淀法检测Src蛋白在肺癌细胞株中的表达和磷酸化情况;M法检测抑制Src酪氨酸激酶活化对肺癌细胞体外增殖的影响;Boyden chamber法检测抑制Src酪氨酸激酶活化对肺癌细胞体外侵袭浸润的影响。结果本实验选用的肺癌细胞都存在pp60src的表达,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株Src蛋白的自主磷酸化水平(SrcpY418)明显增高,而人小细胞肺癌细胞株SBC5中几乎检测不到SrcpY418。抑制Src酪氨酸激酶活化对肺癌细胞体外增殖呈现出不同的反应,亚微摩尔Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞体外增殖表现出剂量依赖性抑制作用(P<0.05);而1M Src酪氨酸激酶抑制剂对H226、PC14PE6和RERFLCOK细胞增殖没有明显的抑制作用。Src酪氨酸激酶抑制剂对肺癌细胞体外侵袭浸润呈现明显的剂量依赖性抑制作用(P<0.05)。结论 Src蛋白的活化,而不是过度表达,在NSCLC细胞体外增殖和浸润中发挥着重要作用。     

三维立体培养中H460细胞MMP-2、MMP-9的表达

目的:建立肺癌细胞的三维立体培养模型,测定肺癌细胞在三维立体培养中的基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,研究MMPs在肺癌侵袭与转移中的作用.方法:采用非小细胞肺癌H460细胞系建立肺癌细胞三维立体培养模型,观察癌细胞的生长,同时设置平面培养对照组,用明胶酶谱法测定两组不同时间点MMP-2、MMP-9.结果:H460细胞在立体胶原内生长良好,分泌有MMP-2、MMP-9,且分泌量多于平面培养组.结论:三维立体培养肺癌细胞能清晰地表达MMPs,是研究MMPs在癌细胞的侵袭与转移作用机制的一种可行方法.     

逆癌酮诱导人肺癌细胞凋亡的体外研究

目的:研究逆癌酮诱导A549人肺腺癌细胞系和PLA-801D人肺巨细胞癌细胞系凋亡及其抗癌作用机理.方法:应用体外细胞培养技术,以逆癌酮作用于肺癌细胞,绘制生长曲线,作克隆形成实验,观察其对细胞增殖的影响,并进行光镜和流式细胞术的观察和分析.结果:应用逆癌酮后细胞生长明显受抑,克隆形成能力降低,流式细胞分析表明,应用逆癌酮后,肺癌细胞凋亡指数显著增加(P＜0.01),细胞被阻滞于G0/G1期(P＜0.01),其bax、Fas的表达被上调;bcl-2的表达被下调(P＜0.01);c-myc、TGFβR 1的表达也被上调(P＜0.01).结论:逆癌酮对A549细胞和PLA-801D细胞有明显的细胞毒,并通过上调bax、Fas的表达,下调bcl-2的表达诱导细胞凋亡.     

转移性癌细胞的不同转移潜能亚群与细胞电泳速度、粘附、运动反侵袭性间相互的关系

肿瘤转移的发展是多阶段的、复杂的，具有高度选择性的过程。具有转移能力的癌细胞其细胞电泳率、粘附性、运动性和侵袭性等均在转移过程中，与危主组织的相互作用中起重要作用。因此对这些因素与转移关系的研究十分重要。本文总结了我组近几年来利用2个具有转移潜能的细胞系及所分离出的克隆株研究的结果，综合报道如下：2个转移性癌细胞系：即人鼻咽癌细胞系CNE－ZZ为低分化鳞状上皮细胞癌，是一株中等淋巴结转移率（57％）的癌细胞系；另一株为小鼠肺腺癌细胞系LA795，是一株高转移（100％）的癌细胞系。从这2个细胞系中各分离出10个…     

体外培养癌细胞株建株后的保种传代经验探讨

１９８２年因课题需要 ,我院进行了人癌细胞的建株工作。我省个旧市是全国肺癌高发区 ,在省卫生厅的资助下 ,我们选择了肺癌为建株目标。经过一年多１０余次对肺癌手术切除癌组织的精心培养 ,终于在１９８２年从一名个旧女工肺癌患者手术切除癌组织中 ,成功建立了我省第一株人肺腺癌（ＧＬＣ ８２）细胞株 ,该成果１９８３年获卫生部科技成果乙等奖、云南省科技成果二等奖。１８年来 ,人肺腺癌（ＧＬＣ ８２）细胞株在体外培养传代已达５００代以上 ,基本做到无霉菌及细菌污染 ,经检测也未发现支原体污染。我们相继建立了肺泡癌细胞侏（ＨＳ…     

九种体外培养细胞系裸小鼠移植的研究

1969年 Rygaard 等首次将人结肠癌成功地在裸小鼠传代移植。此后,各种人癌手术标本、培养细胞及其它动物肿瘤在裸鼠移植成功的报道不断涌现,使之成为肿瘤研究的十分有价值的工具。我们从85年起,将人低分化鼻咽癌上皮细胞系移植于裸小鼠,建立了人低分化鼻咽癌裸鼠移植模型,同时又将其它数种人癌细胞系相继移植于裸小鼠,进行了人癌转移机制的初步研究。此外还应外单位要求接种了三种人及大鼠的培养细胞到裸小鼠,作可移植性鉴定。现就三年多来所做的九种培养细胞系裸鼠移植的实验研究报告如下。     

系统生物学方法筛选人肺巨细胞癌细胞株转移相关miRNA的研究

目的:探讨人低转移肺巨细胞癌细胞株95C和人高转移肺巨细胞癌细胞株95D中微小RNA(microRNA,miR-NA)的差异性表达,分析差异表达miRNA在肺癌细胞转移调控网络中的作用.方法:常规培养95C和95D,分别提取总RNA并进行质检;应用微阵列芯片检测miRNAs的表达,并对其表达谱进行差异性分析;从系统生物学角度,应用生物信息学的研究方法,分析肺癌转移可能相关的异常表达miRNA与相应靶基因.结果:两者miRNA表达存在显著差异,与95C细胞相比,在95D中上调＞1.5倍的miRNA有36条,下调＞1.5倍的miRNA有19条;12条差异表达miR-NA及1 046个预测靶基因构成了肺癌转移相关调控网络.结论:获得了人低转移肺巨细胞癌细胞株95C和人高转移肺巨细胞癌细胞株95D的差异miRNA表达谱,初步构建了一个由差异miRNA及其靶基因组成的复杂肺癌转移相关调控网络,分析发现部分miRNA为调控网络的关键节点.