环氧化酶2抑制剂塞来昔布诱导 NB4细胞凋亡的研究

目的：研究环氧化酶2（COX-2）选择性抑制剂塞来昔布对髓性白血病细胞株 NB4凋亡的影响,探讨塞来昔布诱导细胞凋亡的机制。方法RT-PCR 检测不同细胞系中 COX-2 mRNA 表达,MTT 法检测 NB4细胞增殖抑制,DNA Ladder 试验分析NB4细胞 DNA 片段化,流式细胞术检测 NB4细胞 Bcl-2蛋白的表达。结果与未加药处理组相比,不同浓度塞来昔布作用后DNA Ladder 片段随浓度的增加而更为明显。不同用药组25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布组 Bcl-2蛋白表达率分别为（71．69±1．65）％、（34．51±2．53）％和（29．28±2．38）％,与空白对照组 Bcl-2蛋白表达率为85．34±2．89％相比,50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布组 Bcl-2蛋白明显下降（P ＜0．05）。结论COX-2选择性抑制剂塞来昔布通过下调 NB4细胞 Bcl-2蛋白表达致诱导其凋亡。     

塞来昔布联合 PDTC 对人结肠癌细胞 HT-29 的抑制增殖和促凋亡作用及其机制

目的研究塞来昔布联合吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）对人结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及其对COX-2、NF-κB、Caspase-3基因表达的影响,探讨塞来昔布联合用药抗肿瘤的机制。方法用不同浓度的塞来昔布（30、60、120、240μmol／L）（单药组）以及不同浓度塞来昔布联合不同浓度的PDTC（50、100μmol／L）（联合组）分别处理人结肠癌细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞COX-2、NF-κB、Caspase-3表达的变化。结果塞来昔布单药组对结肠癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡作用,其作用随着药物浓度、给药时间的增加而增强（P均〈0．05）;同时检测到COX-2、NF-κBKBmRNA的表达降低（P均〈0．05）,Caspase-3表达升高（P〈0．05）,且具有浓度依赖性;联合组较同一塞来昔布浓度的单药组上述作用更明显（P均〈0．05）。结论塞来昔布单药组和联合组均能抑制人结肠癌细胞的增殖,促进其凋亡;联合组作用强于单药组;其机制可能与COX-2、NF-κB的下调和Caspase-3表达上调有关。     

塞来昔布对神经胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响

目的探讨非甾体类抗炎药(NSAIDs)对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法选用神经胶质瘤细胞U251,分别加入0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L的塞来昔布进行处理。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测U251细胞增殖水平及抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随塞来昔布浓度的增加,神经胶质瘤细胞U251增殖水平明显降低,增值抑制率升高。不同浓度和不同作用时间,塞来昔布对U251细胞增殖抑制率有显著性差异(P<0.05);流式细胞术细胞凋亡率检测显示,80μmol/L塞来昔布处理48 h的U251细胞凋亡率(17.86%)较0μmol/L(11.23%)增高(P<0.05)。结论塞来昔布可抑制人胶质瘤细胞U251的生长和增殖,促进U251的凋亡发生,以80μmol/L为佳。     

地塞米松对人外周血单核细胞核因子-κB活化和肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DXM)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人外周血单核细胞核因子(nuclear factor kappaB,NF-κB)活化和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)产生的影响。方法收集人外周血单核细胞接种于培养板后,分生理盐水对照组、LPS组、LPS DXM1μmol/L组、LPS DXM10μmol/L组。LPS诱导0、0.5、2、6、12、16h后留取细胞及细胞培养上清。采用免疫细胞化学染色法检测细胞NF-κBp65阳性表达率,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中TNF-α的含量。结果LPS诱导0.5h后NF-κB表达开始增加,2h达高峰。2h时TNF-α合成开始增加,6h达高峰。在2、6、12h时,LPS DXM1μmol/L组和10μmol/L组TNF-α含量均比LPS组各相应时间点低(P<0.05或0.01)。在0.5、2、6h时LPS DXM1μmol/L组NF-κB阳性表达率和在2、6h时LPS DXM10μmol/L组NF-κB阳性表达率均比LPS组低(P<0.05或0.01)。LPS DXM1μmol/L和10μmol/L组NF-κB阳性表达率和TNF-α含量在各时间点差异均无统计学意义。结论LPS在体外诱导人外周血单核细胞NF-κB的活化和TNF-α的产生;DXM通过抑制NF-κB的活化和TNF-α的释放而发挥抗炎作用,并且这种抑制效应可能不随剂量的增加而增强。     

塞来昔布对戊四氮点燃小鼠脑神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察塞来昔布对戊四氮点燃小鼠癫癎发作及脑神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:C57BL/6小鼠30只随机分为对照组、模型组和给药组各10只,给药组予塞来昔布灌胃,对照组和模型组予生理盐水灌胃,模型组和给药组以戊四氮点燃法制备小鼠癫癎模型,通过行为学检测观察塞来昔布对小鼠癫癎发作的影响,免疫组织化学法测定塞来昔布对小鼠脑神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果:模型组小鼠脑组织Bcl-2和Bax蛋白阳性细胞数显著高于对照组(P0.01),Bcl-2/Bax比值显著低于对照组(P0.01);给药组Bax蛋白阳性细胞数显著低于模型组(P0.01),Bcl-2蛋白阳性细胞数及Bcl-2/Bax比值显著高于模型组(P0.01)。结论:塞来昔布能下调戊四氮点燃小鼠脑组织Bax蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达水平,提高Bcl-2/Bax比值。     

去甲斑蝥素通过NF-κB/IκBα途径增强阿霉素的抗骨髓瘤效应

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)联合阿霉素(ADR)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以U266细胞为研究对象,采用NCTD(10 μmol/L)和ADR(0.25 μmol/L)单独或联合处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测核因子-κB P65( NF-κB P65)、磷酸化NF-κB P65( p-NF-κB P65)、NF-κB抑制因子IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白水平,免疫组化法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平.结果 ①NCTD能增强ADR的细胞毒和诱导凋亡作用,二者具有协同作用;②与ADR单药组比较,联合用药组胞核NF-κB P65和胞质p-IκBα的表达量分别由2.08±0.29和0.39±0.07降至0.48±0.08和0.02±0.01,胞质NF-κB P65和IκBα表达无变化;③联合用药组与ADR单药比较,survivin和Bcl-2的表达水平分别由0.31±0.05和0.23±0.05降至0.03±0.02和0.05±0.02,而Bax的表达由0.46±0.06升至0.62±0.08;④ADR组和联合用药组VEGF的阳性率分别为(44.6±4.4)％和(27.0±2.1)％,NCTD增强ADR对VEGF表达的抑制作用.结论 NCTD通过抑制NF-κB/IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2、Bax和VEGF的表达,增强ADR的抗骨髓瘤效应.     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度>40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

miR-27b基因对病毒性心肌炎细胞凋亡的影响研究

目的探讨抑制miR-27b基因表达对病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将40只健康BALB/c小鼠随机分为对照组:小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的柯萨奇病毒B3(CVB3); miR-27b抑制剂组(抑制组):小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的CVB3,次日,通过尾静脉注射miR-27b抑制剂(10μg/10 g); miR-27b NC组(NC组):小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的CVB3,次日,通过尾静脉注射miR-27b NC(10μg/10 g)每组10只。于接种CVB3病毒后第7天,采集血清及心脏组织。肌酸激酶(CK)试剂盒检测血清CK含量; qRT-PCR检测心肌组织miR-27b表达;TUNEL试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、髓过氧化物酶(MPO)试剂盒及细胞内活性氧(ROS)试剂盒分别检测心肌细胞凋亡率、心肌组织SOD活力、MPO活性及ROS含量。Western blotting检测NF-κBp65、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果小鼠感染CVB3后第7天体重减轻率及血清CK活性明显高于对照组小鼠(P 0. 05)。与对照组比较,模型组SOD活力、Bcl-2蛋白表达明显降低,miR-27b mRNA表达、细胞凋亡率、MPO活性、ROS含量及NF-κBp65和Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),与模型组比较,抑制组SOD活力、Bcl-2蛋白表达明显升高,miR-27b mRNA表达、细胞凋亡率、MPO活性、ROS含量及NF-κBp65和Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05)。结论抑制miR-27b基因表达可降低病毒性心肌炎心肌细胞凋亡率及氧化应激反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

二氮嗪介导的延迟预处理对未成熟心肌的保护机制研究

目的研究二氮嗪(DZX)介导的延迟预处理对缺血缺氧环境中未成熟心肌的保护作用机制。方法分离培养新生鼠心肌细胞随机分为:①缺氧组;②DZX组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L的DZX的培养液15 min;③DZX+PDTC组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L DZX和500μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的培养液15 min;④对照组。前3组细胞在缺氧模型中培养16 h,对照组一直有氧培养。采用Hoechst染色、Annexin V/PI流式检测凋亡细胞,Western Blot检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达。结果①流式检测示DZX组较缺氧组细胞凋亡明显降低(P<0.01),Hoechst染色心肌凋亡细胞也减少;②与DZX组比较,加入PDTC后,流式检测显示细胞凋亡显著增多(P<0.01),Hoechst染色心肌细胞凋亡增多,Western blot检测显示Bcl-2表达减少,Bax表达增加。结论线粒体钾通道开放剂二氮嗪介导的延迟预处理对心肌有明显的保护作用;位于下游的NF-κB通过调控促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用。     

冬凌草甲素诱导多发性骨髓瘤U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡实验研究

目的 探究冬凌草甲素对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞培养和处理方法,采用0、10、20、30、40、50μmol/L的冬凌草甲素处理MM相关U266细胞、RPMI8226细胞48 h。采用MTT法测定U266细胞、RPMI8226细胞的增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI染色试剂盒检测U266细胞、RPMI8226细胞凋亡情况,并采用蛋白质印迹法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的增加,U266细胞、RPMI8226细胞的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的升高,促凋亡蛋白Bax表达量逐渐升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草甲素具有抑制MM细胞增殖和诱导细胞凋亡的潜力,其作用机制可能与促进Bax表达,抑制Bcl-2表达,改变细胞Bcl-2/Bax比例,调节细胞凋亡有关。     

左旋含羞草碱下调Bcl-2的表达并促进FaDu细胞凋亡的研究

目的探讨左旋含羞草碱对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞Bcl-2、Bax等表达的影响及促进细胞凋亡的可能机制。方法培养和传代FaDu细胞,不同浓度左旋含羞草碱作用后观察细胞生长状况;流式细胞仪检测左旋含羞草碱与柠檬酸铁铵(FAC)对FaDu细胞凋亡的影响;CCK8法检测左旋含羞草碱与FAC干预后FaDu细胞的增殖活性;Westernblot法检测左旋含羞草碱处理FaDu细胞后Bcl-2、Bax、Bak、Bik、Bid等凋亡相关蛋白的表达。结果不同浓度的左旋含羞草碱作用于FaDu细胞后细胞的生长受到抑制;左旋含羞草碱200μmol/L组FaDu细胞凋亡最显著,左旋含羞草碱200μmol/L+FAC 50μmol/L组和左旋含羞草碱200μmol/L+FAC 100μmol/L组与对照组比较,细胞凋亡率无统计学差异(t分别=2.64、2.13,P均>0.05)。FAC 50μmol/L组和FAC 100μmol/L组FaDu细胞凋亡率均低于对照组(t分别=3.61、3.98,P均<0.05)。对FaDu细胞增殖活性的抑制作用由强到弱依次为左旋含羞草碱200μmol/L组、左旋含羞草碱200μmol/L+FAC 50μmol/L组、左旋含羞草碱200μmol/L+FAC 100μmol/L组;随着左旋含羞草碱浓度的增加,FaDu细胞Bcl-2蛋白的表达降低,Bax、Bak、Bik、Bid等蛋白的表达增高。结论200μmol/L左旋含羞草碱抑制FaDu细胞生长,促进细胞凋亡,是通过干扰肿瘤细胞铁代谢,激活Bcl-2家族蛋白发挥重要调控作用的线粒体通路实现的。     

洛伐他汀联合塞来昔布对宫颈癌Caveolin-1的表达及下游信号分子的影响及意义分析

目的探讨洛伐他汀联合塞来昔布对宫颈癌Caveolin-1的表达及下游信号分子的影响。方法分别将不同水平的塞来昔布、洛伐他汀联合塞来昔布与Hela细胞体外共孵育,采用MTT法分别检测其对HeLa细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测塞来昔布、洛伐他汀联合塞来昔布对HeLa细胞凋亡的影响。同时采用蛋白免疫印迹(Western-blot)检测Caveolin-1及下游信号分子磷酸化的转录活化因子3(p-STAT3)和p-Akt的蛋白表达情况。结果 HeLa细胞经过不同水平的塞来昔布、洛伐他汀联合塞来昔布处理24h后,塞来昔布的IC50值为50μM,洛伐他汀联合塞来昔布的IC50值为30μM;塞来昔布、洛伐他汀联合塞来昔布均能抑制HeLa细胞的增殖,诱导HeLa细胞的凋亡,且呈剂量和时间依赖性,洛伐他汀联合塞来昔布作用更显著;塞来昔布与HeLa细胞共孵育24h后,Caveolin-1的蛋白表达轻微上调,而洛伐他汀联合塞来昔布能够显著增加Caveolin-1的表达;塞来昔布能抑制p-STAT3和p-Akt的表达,而洛伐他汀联合塞来昔布共同处理HeLa细胞后,p-STAT3和p-Akt的表达进一步下降。结论洛伐他汀联合塞来昔布能够显著抑制HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡,同时上调宫颈癌Caveolin-1的表达,从而抑制下游信号分子的激活。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用及相关机制

目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)联合TNF-α对宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDTC、TNF-α及两者联合作用对HeLa细胞生长抑制率的影响;采用光镜及DAPI法观察细胞形态学变化及凋亡情况;Westernblot法检测HeLa细胞A20和caspase-3蛋白的表达。结果 PDTC(50,100μmol/L)或TNF-α(30,60,120mg/L)可明显抑制细胞的增殖;低浓度PDTC(25μmol/L)不影响细胞增殖,但与TNF-α联合应用与单用TNF-α比较,细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01);光镜与DAPI染色结果显示,不同浓度药物组的细胞均有明显的细胞凋亡特征,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01);PDTC(25μmol/L)与TNF-α(60mg/L)联合用药与单用TNF-α(60mg/L)或PDTC(50μmol/L)比较,胞质A20蛋白表达无明显变化,但caspase-3蛋白的表达明显增加(P<0.05)。结论 PDTC可增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,其机制可能与PDTC抑制TNF-α诱导的核转录因子NF-κB的活性,最终上调凋亡蛋白caspase-3表达有关。     

小白菊内酯通过NF-κB信号通路对LPS诱导的气道上皮细胞IL-8分泌水平影响的研究

目的探究小白菊内酯(PTL)对脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞IL-8的分泌水平影响以及具体的作用机制。方法 CCK8法检测0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的LPS对气道上皮细胞的毒性作用,RT-q PCR和Western blot检测不同浓度LPS对IL-8表达水平的影响。添加0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L PTL后,CCK8法检测细胞活性变化; RT-q PCR和Western blot检测白介素8(IL-8)表达水平的变化; Western blot检测PTL对NF-κB p65和IκBα蛋白表达水平的影响。结果 LPS呈时间和浓度依赖性抑制气道上皮细胞活性; LPS呈时间依赖性促进IL-8表达水平;添加LPS能够使IκB表达下调,NF-κB p65表达上调。添加适当浓度的PTL能够缓解LPS对细胞的毒性影响,使IL-8表达下调,具有浓度依赖性;并且促使IκB下调,NF-κB p65上调。结论小白菊内酯能够通过NF-κB信号通路抑制气道上皮细胞炎症因子IL-8的分泌水平。     

槲皮素减轻高糖条件下人肾小球内皮细胞损伤的实验研究

目的研究槲皮素减轻高糖条件下人肾小球内皮细胞(HRGEC)损伤的作用及其机制。方法培养HRGEC并分为对照组、高糖组、10μmol/L槲皮素组、100μmol/L槲皮素组,后3组进行高糖处理,10μmol/L及100μmol/L槲皮素组分别给予10μmol/L及100μmol/L槲皮素处理。检测细胞活力、细胞凋亡、凋亡基因mRNA表达量、氧化应激指标含量、PI3K/AKT通路分子蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组的细胞活力、Bcl-2的mRNA表达量、SOD及GPx的含量、p-PI3K及p-AKT的蛋白表达量降低,细胞凋亡率、Bax及Caspase-3的mRNA表达量、MDA的含量增加(P<0.05);与高糖组比较,10μmol/L及100μmol/L槲皮素组的细胞活力、Bcl-2的mRNA表达量、SOD及GPx的含量、p-PI3K及p-AKT的蛋白表达量增加,细胞凋亡率、Bax及Caspase-3的mRNA表达量、MDA的含量降低(P<0.05)且100μmol/L槲皮素组的上述变化较10μmol/L槲皮素组更为显著(P<0.05)。结论槲皮素能够减轻高糖条件下HRGEC的损伤,且这一作用与激活PI3K/AKT通路有关。     

贝那鲁肽对高糖诱导的胰岛 β细胞功能障碍和凋亡的影响及机制研究

目的　探讨贝那鲁肽对高糖诱导的胰岛 β细胞功能障碍和凋亡的影响以及相关机制。方法　将 INS-1胰岛 β细胞随机分为对照组、高糖组、贝那鲁肽处理组、 MG-132预处理组和 ISO-1预处理组,对照组给予 5.5mmol/L葡萄糖处理,高糖组给予 30 mmol/L葡萄糖处理,贝那鲁肽处理组在高糖组的基础上给予 1 nmol/L贝那鲁肽处理, MG-132预处理组和 ISO-1预处理组分别在高糖的基础上给予 20 μmol/L MG-132和 50 μmol/L ISO-1预处理。培养 24h后噻唑蓝（ MTT）比色法评估细胞的活力,酶联免疫吸附法（ ELISA）检测 INS-1胰岛 β细胞胰岛素和巨噬细胞迁移抑制因子（ MIF）的分泌, Western blot检测凋亡相关蛋白（ Bax和 cleaved caspase 3）和 NF-κB通路相关蛋白（ p-IκB,IκB和 NF-κBp65）的表达。结果　与对照组相比,高糖组胰岛 β细胞的存活率（ t=4.949,P＜ 0.01）、胰岛素的分泌（ t=3.168, 4.273,均 P＜ 0.05）和 IκB的表达（ t=3.062,P＜ 0.05）明显降低,凋亡相关蛋白（ Bax和 cleaved caspase 3）的表达（ t=2.923, 3.141,均 P＜ 0.05）、p-IκB和 NF-κB p65表达（ t=3.544, 4.658,均 P＜ 0.01）以及 MIF分泌（ t=3.024,P＜ 0.05）明显增加 .与高糖组相比,贝那鲁肽处理组可逆转高糖组上述指标的变化（ t=2.415 ~ 4.290,均 P＜ 0.05）,差异均有统计学意义。进一步给予 NF-κB抑制剂 MG-132和 MIF抑制剂 ISO-1预处理后,与高糖组相比, MG-132预处理组和 ISO-1预处理组均可改善高糖诱导的 INS-1胰岛 β细胞胰岛素分泌功能（ t=2.515 ~ 6.867,均 P＜ 0.05）,还可降低凋亡相关蛋白 Bax（t=4.022,     

调控A20对NF-κB表达及Jurkat细胞的影响

目的:探讨在急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药Jurkat细胞株中,调控A20对NF-κB表达以及Jurkat细胞生物学特性的影响。方法:CCRF CEM和Jurkat细胞中分别加入100、10、1、0.1、0.01和0.001μmol/L地塞米松(DEX),培养24、48和72 h,应用CCK-8检测细胞增殖抑制的变化。构建A20质粒,设计并合成A20-siRNA,分别通过脂质体转染Jurkat细胞,CCK-8检测不同浓度DEX处理组、不同浓度DEX联合A20质粒和A20-siRNA处理组的Jurkat细胞增殖率。应用RT-qPCR检测NF-κB的m RNA表达水平,Western bolt检测蛋白表达水平,采用流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡。结果:不同浓度地塞米松(DEX)对CCRF CEM细胞生长的抑制作用呈显著的时间依赖性(r=0.984,P0.05)和浓度依赖性(r=0.966,P0.05);CCRF CEM细胞在24 h时,IC50接近1μmol/L,Jurkat细胞在1μmol/L和10μmol/L开始出现较大差异。由于1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞增殖率无明显变化,故选取1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞为对照组。检测显示A20质粒转染联合不同浓度DEX处理组细胞增殖率较DEX组及A20-siRNA联合DEX组低(P0.05)。A20质粒转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达明显低于对照组(P0.05),细胞凋亡率较对照组明显增高(P0.05);A20-siRNA转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05),A20-siRNA组细胞的凋亡率与对照组无明显改变(P0.05)。结论:Jurkat细胞对DEX耐药,A20过表达联合DEX可增加对DEX耐药细胞的敏感性,降低Jurkat细胞增殖率;下调Jurkat细胞中NF-κB的表达水平,促进Jurkat细胞的凋亡。     

海带硫酸多糖对人宫颈癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨海带硫酸多糖(LPS)对人宫颈癌细胞株HeLa的体外生长、凋亡及细胞周期的影响。方法:以不同浓度的LPS处理HeLacell,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖情况,细胞染色法观察细胞凋亡的形态,用流式细胞仪记录细胞周期改变、bcl-2及NF-κBp65基因表达情况。结果:LPS使细胞增殖能力下降,细胞出现凋亡的形态学改变,细胞周期受到阻滞,bcl-2蛋白与NF-κBp65的表达随着LPS浓度的增加与作用时间的延长而降低。结论:LPS明显抑制人宫颈癌细胞株的生长,并通过影响bcl-2、NF-κBp65基因蛋白的表达促进宫颈癌细胞凋亡。     

微小RNA-146a在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中的表达

目的 观察脂多糖(LPS)诱导对NR8383肺泡巨噬细胞微小RNA-146a(miRNA-146a)表达的影响.方法 将体外培养的肺泡巨噬细胞株NR8383分成LPS刺激组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,培养6 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测细胞miRNA-146a的表达.结果 LPS刺激组细胞培养上清液中TNF-α含量(ng/L)较PBS对照组明显升高(650.26±40.53比6.23±1.76,P<0.01),细胞miRNA-146a表达水平较PBS对照组上调了约(5.33±0.81)倍(P<0.01).结论 LPS刺激后,miRNA-146a在NR8383细胞中表达增高,其可能参与了NR8383肺泡巨噬细胞的炎症反应调控.     

雌激素相关受体α对脂多糖诱导的内皮细胞凋亡及连接蛋白降解的影响

目的:探讨雌激素相关受体α（ERRα）对脂多糖（LPS）诱导的内皮细胞凋亡及连接蛋白降解的影响。方法:体外培养ERRα敲低的稳转细胞株,并通过LPS处理,将细胞分为四组：正常对照组（Ctr组）;shERRα敲低组（shERRα组）;正常细胞+LPS处理组（LPS组）：六孔板中的细胞用无血清的培养基饥饿培养12 h后,用20 μg/mL LPS处理12 h;shERRα+LPS组：ERRα敲低的细胞按LPS组处理。使用ROS荧光试剂盒检测细胞内ROS的水平;利用TUNEL、AnnexinV-FITC和PI双染检测细胞凋亡情况;细胞荧光检测连接蛋白ZO-1在细胞膜表达情况,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Smac、细胞色素c和连接蛋白ZO-1,Occludin、JAM-A及E-Ca在分子水平的表达情况。结果:与Ctr组及shERRα组相比,LPS组ROS水平增加,细胞凋亡率增加（TUNEL检测为16.44±2.55,流式细胞术检测结果为23.56±2.22）,促凋亡蛋白Bax、Smac及细胞色素c表达量增高,而抗凋亡蛋白Bcl-2和紧密连接蛋白表达量降低,细胞荧光结果显示连接蛋白ZO-1在包膜发生降解,网状结构断裂。而与LPS组相比,在shERRα+LPS组中,抑制ERRα的表达加剧上诉细胞损伤。结论:ERRα能够通过负性调节肺微血管内皮细胞内的细胞凋亡,影响肺微血管内皮的功能,从而调控脓毒症诱导的急性肺损伤。