类细菌样念珠菌变异株对普通抗细菌药物敏感性观察

目的 了解念珠菌发生类细菌样变异前后对普通抗细菌药物的敏感性是否发生了改变.方法 采用常规MH药敏试验方法,观察ATCC10231白色念珠菌标准菌株和其自发变异后得到的类细菌样念珠菌变异株,9002.9白色念珠菌标准菌株及其经抗真菌药物诱导形成的类细菌样念珠菌变异株,临床分离的类细菌样念珠菌变异株及变异株返祖后得到的念珠菌株,共11株菌对普通抗细菌药物头孢哌酮/舒巴坦、头孢西丁、亚胺培南、环丙沙星、红霉素、万古霉素、庆大霉素、氯霉素、四环素的敏感性.结果 两株白色念珠菌标准菌株、临床分离类细菌样变异株返祖后的念珠菌株对普通抗细菌药物无抑菌圈;而不同条件下得到的类细菌样念珠菌变异株则对以上普通抗细菌药物有一定的敏感性.结论 白色念珠菌发生类细菌样变异后,对普通抗细菌药物的敏感性发生了改变,变异前对普通抗细菌药物不敏感,但发生类细菌样变异后对普通抗菌药物均有一定的敏感性,其抗菌谱与普通细菌基本一致.     

念珠菌类细菌样变异株生物学性状及遗传学特征研究

目的 了解念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状的改变情况,并通过其遗传学特征研究从分子水平揭示这种变异发生的机理。方法实验室研究中,利用不同的营养条件及生长环境、不同的唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌株进行诱导使其变异; 临床研究中,从抗真菌治疗效果不佳患者的阴道分泌物、痰液、胸腔积液、胃液等标本中分离念珠菌变异株,并对以上变异株的形态特点、核结构、生化反应、耐药性、菌体组分、遗传学特征等进行研究。结果 菌体形态:念珠菌极易发生类细菌样变异,变异株菌体可呈G⁺球菌状、G⁺杆菌状、G⁺长丝状、G^-球菌状、G^-杆菌状等; 核结构:电镜透射扫描证实念珠菌变异株失去真核细胞固有的核结构而呈原核生物样改变; 生化反应:在所观察的20项生化试验中有 5项不同; 药敏试验:念珠菌发生变异后对原本敏感的抗真菌药物完全耐药,而对原本耐药的普通抗细菌药物敏感,且耐药谱与普通细菌耐药谱相同; 菌体组分改变:经质谱仪鉴定念珠菌变异株和变异菌返祖株菌体组分有明显不同; 真菌最保守基因表达:采取PCR技术对变异株进行真核生物最保守基因16S sRNA检测发现,念珠菌发生类细菌样变异后仍表达真核生物保守基因,由此可证明具有原核细胞生物学特性的念珠菌类细菌样变异株是源于具有真核细胞的念珠菌。结论 念珠菌极易发生类细菌样变异,变异株各种生物学特性与原核生物酷似。电镜观察具有明确亲缘关系的念珠菌标准菌株、念珠菌类细菌样变异株、变异菌返祖株在核物质存在形式上确有质的改变,此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。     

酵母样真菌微量鉴定系统的实验评价及质量控制

对双重指示的酵母样真菌微量鉴定系统进行方法学评价,生化结果稳定性均>96%,批内与天间重复性经X~2检验确定为随机变异(p>0.05).白色念珠菌、热带念珠菌、高里念珠菌的生化反应机率与Vitek AMS 鉴定概率间的相关系数分别为0.9729、0.9603、0.9291;22株酵母样真菌生化反应与Vitek AMS 60型分析仪之间的结果符合率为89.5%。初步提出了临床常见的酵母样真菌微量鉴定标准并对各种影响因素的质量控制进行探讨。     

变异念珠菌常见菌落和菌体形态

目的 研究白色念珠菌变异后菌落及菌体形态的变化特征.方法 用唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌进行实验室诱导得到不同的变异株;不同培养环境下获得白色念珠菌自发变异株.从抗真菌药物治疗效果不佳的临床念珠菌感染患者标本中分离培养的念珠菌变异株.将以上变异株进行培养,革兰染色,镜下观察菌体形态.结果 氟康唑诱导变异株菌落呈黏液状,革兰染色为阳性长杆状;伊曲康唑诱导的变异株菌落呈水滴状,革兰染色为阴性球杆状;酮康唑诱导的变异株菌落呈灰白色,革兰染色为阳性葡萄状;白色念珠菌自发变异株和临床分离念珠菌变异株菌落多产红色、黄色等色素形态为革兰阳性球菌状、革兰阴性杆状,也可呈白色毛绒状、淡粉色粉末样菌落,革兰染色为阳性念珠菌.结论 常用抗真菌药物、生长微环境改变、体内某些因素极易诱发念珠菌发生变异,变异后念珠菌无论菌落和菌体可发生类细菌样改变,因此,容易造成实验室在诊断念珠菌感染时的误诊和漏诊.     

念珠菌类细菌样变异株基因特征初步研究

目的在对念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状研究的基础上,进一步探讨念珠菌类细菌样变异株基因特征。方法在低温、营养缺乏条件下诱导白色念珠菌标准菌株使其变异;用不同浓度梯度的氟康唑等临床常用抗真菌药物诱导白色念珠菌标准菌株变异。采用煮沸法制备真菌基因模板,采用细菌保守基因16SRNA序列引物和真菌保守基因18SRNA序列引物分别扩增16SRNA和18SRNA序列,琼脂糖凝胶电泳,观察并记录结果。同时将细菌保守基因16S RNA扩增片段进行测序,所得序列进行BLAST比对分析。结果念珠菌类细菌样变异株16SRNA序列均扩增阳性,而白色念珠菌标准株未出现相应的扩增条带。念珠菌类细菌样变异株18SRNA序列扩增除2号菌株有微弱的条带外,其余变异株均未扩增出目的条带,而白色念珠菌标准株则出现相应的扩增条带,表明念珠菌类细菌样变异株基因组中18S RNA序列所占比例不多或是因多次传代遗失。念珠菌类细菌样变异株16SRNA扩增片段经纯化后进行DNA序列测定,BLAST进行比对分析,发现念珠菌类细菌样变异株序列与数据库中细菌序列有较高的相似性。结论念珠菌类细菌样变异株基因组含有细菌保守基因及少量真菌保守基因,具有原核生物学性状的念珠菌类细菌样变异株是源于真核生物的念珠菌。此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。     

临床分离类细菌样变异念珠菌的实验室诊断

目的 探索临床分离类细菌样变异念珠茼的实验室诊断方法.方法 对类细菌样变异念珠菌感染的可疑病人标本采取合适的培养基分离、传代恢复、动物体内恢复返祖、必要时进行真菌基因鉴定.结果 临床分离的类细茼样变异念珠菌绝大多数能在合适条件下恢复成典型的念珠菌.少数难恢复的变异株,可通过真菌基因检测进行鉴定.结论 对于慢性念珠菌感染、不合理抗真菌治疗病人临床标本分离出的菌体形态酷似细菌但用传统方法无法进行鉴定的菌株,应考虑为念珠菌变异株,并对其返祖后进行鉴定.从而避免或减少念珠菌因形态变异造成的漏诊或误诊.     

类细菌样念珠菌变异株真菌保守基因检测

目的 揭示念珠菌类细菌样变异株的分子基础及其相应的生物学特性的分子基础.方法 采用常规PCR方法,对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、两株不同来源的白色念珠菌标准菌株及源自于这两株念珠菌标准菌株的类细菌样念珠菌变异株进行真菌最保守18S rRNA基因的检测.结果 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌无真菌基因表达;两株念珠菌标准菌株真菌基因为强表达;源自于念珠菌标准菌株的类细菌样念珠菌变异株真菌基因呈极弱表达.结论 念珠菌发生类细菌样变后,虽然生物学性状呈类细菌样改变,但仍部分表达真菌最保守基因.此结果也进一步证实了具有原核生物特性的类细菌样念珠菌变异株是源自于具有真核细胞特性的念珠菌.     

低温致奴卡菌R-S变异株生物学性状的研究

目的了解和研究低温所致奴卡菌R-S变异株生物学性状的改变情况。方法将从住院患者痰液、血液、胸腔积液分离获得的5株奴卡菌置4℃冰箱放置40-60d,诱导其变异,对诱导所得到R-S变异株进行培养、形态染色、生化反应、药敏试验等生物学性状观察。结果 5株奴卡菌在4℃低温下放置40-60d均发生变异,变异株菌落发生R-S变异,由干燥、白色粉末样菌落变为黄色较湿润的光滑型菌落;菌体形态由G＋长丝状、分枝状变为G＋球杆状,抗酸染色失去原有的部分抗酸性而呈抗酸染色阴性,除此之外,生化反应、药敏试验也发生明显改变。结论低温下奴卡菌容易发生变异,这种变异不仅仅是表形变异,变异株的其他生物学性状也随之发生改变。     

贵阳地区慢性呼吸道感染125株病原性真菌的生物学与基因分析

目的探讨贵阳地区引起慢性呼吸道感染的常见病原性真菌种类及其分布。方法采集104例慢性支气管炎与慢性肺炎患者的下呼吸道分泌物标本,接种CHROM培养基25℃培养48~72 h。对分离的真菌进行常规形态或/和生化反应以及ITS序列和25S rDNAⅠ型内含子序列的检测与鉴定。结果共分离真菌125株,含酵母菌99株(79.2%)和霉菌26株(20.8%),其中白色念珠菌60株。取42株酵母菌和霉菌作ITS鉴定,与生物学鉴定的符合率为81%。19株白色念珠菌经25S rDNAⅠ型内含子鉴定,分别为基因A型9株(47.4%)、B型6株(31.6%)、C型4株(21.0%)。结论贵阳地区慢性呼吸道感染常见真菌为酵母菌,主要是白色念珠菌基因A型。检测ITS序列和25S rDNAⅠ型内含子序列,有助于真菌感染的快速基因诊断和提高菌种鉴定的准确率。     

肉桂醛体外诱导白色念珠菌耐药的实验

目的:观察肉桂醛体外诱导白色念珠菌耐药性的反应情况。方法:实验于2005-02/12在赣南医学院病原生物学教研室完成。①参照美国国家临床实验室标准化委员会推荐的M27-A方案中的微量液基释法测定肉桂醛和氟康唑对原始白色念珠菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。②采用多步诱导法,观察在含梯度浓度(1～50倍最低抑菌浓度)肉桂醛培养基上连续转种的白色念珠菌的最低抑菌浓度值变化情况,以氟康唑作为阳性对照,同时设空白对照和溶媒对照。③将敏感性下降的诱导株在无药培养基上连续转种10次后,检测其最低抑菌浓度值。④测定肉桂醛对氟康唑敏感性下降诱导株的最低抑菌浓度值。结果:①肉桂醛和氟康唑对原始白色念珠菌的最低抑菌浓度值分别为:0.014mg/L和2.0mg/L;肉桂醛对原始白色念珠菌的最低杀菌浓度值为0.056mg/L,氟康唑在本实验的最高浓度为64mg/L,未发现有杀菌作用。②在多步诱导培养过程中,肉桂醛组的最低抑菌浓度值始终保持不变,未诱导出对肉桂醛耐药的白色念珠菌菌株,菌株转种至含10倍最低抑菌浓度肉桂醛的培养基时,即停止生长,而在含50倍最低抑菌浓度氟康唑的培养基上菌株仍能生长。氟康唑诱导组菌株在培养过程中,其最低抑菌浓度值逐渐升高,转种至含50倍最低抑菌浓度氟康唑的培养基时,其最低抑菌浓度值(命名为FR株)是其亲株的12倍。③FR在无药培养基上连续转种10次后得到FR’,氟康唑在FR’的最低抑菌浓度值为20.16mg/L,与FR相比,差异无显著性(P>0.05)。④肉桂醛对FR的最低抑菌浓度值为0.014mg/L,与其相应的原始菌株相同。结论:肉桂醛不易产生耐药性,且对氟康唑敏感性下降的诱导株仍敏感。     

肉桂醛体外诱导白色念珠菌耐药的实验

目的：观察肉桂醛体外诱导白色念珠菌耐药性的反应情况。方法：实验于2005-02／12在赣南医学院病原生物学教研室完成。①参照美国国家临床实验室标准化委员会推荐的M27-A方案中的微量液基释法测定肉桂醛和氟康唑对原始白色念珠菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。②采用多步诱导法，观察在禽梯度浓度（1～50倍最低抑菌浓度）肉桂醛培养基上连续转种的白色念珠菌的最低抑菌浓度值变化情况，以氟康唑作为阳性对照，同时设空白对照和溶媒对照。③将敏感性下降的诱导株在无药培养基上连续转种10次后，检测其最低抑菌浓度值。④测定肉桂醛对氟康唑敏感性下降诱导株的最低抑菌浓度值。结果：①肉桂醛和氟康唑对原始白色念珠菌的最低抑菌浓度值分别为：0．014mg／L和2．0mg／L；肉桂醛对原始白色念珠菌的最低杀菌浓度值为0．056mg／L，氟康唑在本实验的最高浓度为64n&;#183;g／L，未发现有杀菌作用。②在多步诱导培养过程中，肉桂醛组的最低抑菌浓度值始终保持不变，未诱导出对肉桂醛耐药的白色念珠菌菌株，菌株转种至含10倍最低抑菌浓度肉桂醛的培养基时，即停止生长，而在含50倍最低抑菌浓度氟康唑的培养基上菌株仍能生长。氟康唑诱导组菌株在培养过程中，其最低抑菌浓度值逐渐升高，转种至含50倍最低抑菌浓度氟康唑的培养基时，其最低抑菌浓度值（命名为FR株）是其亲株的12倍。③FR在无药培养基上连续转种10次后得到FR’，氟康唑在FR’的最低抑菌浓度值为20．16mg／L，与FR相比，差异无显著性（P〉0．05）。④肉桂醛对FR的最低抑菌浓度值为0．014mg／L，与其相应的原始菌株相同。结论：肉桂醛不易产生耐药性，且对氟康唑敏感性下降的诱导株仍敏感。     

肠杆菌科细菌生化鉴定系统的研制及评价

目的 研制肠杆菌科细菌生化鉴定系统并对其性能进行评价。方法 将自行研究的生化基质置聚苯乙烯条中脱水制干组合成鉴定条，辅以细菌编码技术对13株标准菌株、56株质控菌株和127株临床菌株进行鉴定，并与AP120E和微量生化管方法鉴定结果进行比较。结果该系统鉴定13株标准菌株和56株质控菌株的准确率达98．5％，与AP120E同时鉴定127株临床菌株符合率达96．8％（P〉0．05），与微量生化管方法比较，生化反应结果的符合率达97％（P〉0．05）。结论 该系统能准确、快速、简单、经济地鉴定肠杆菌科细菌。     

科玛嘉念珠菌显色培养基在酵母菌鉴定中的应用评价

目的评价科玛嘉念珠菌显色培养基在酵母菌鉴定中的应用。方法用科玛嘉念珠菌显色培养基和Vitek32-YBC卡鉴定52株酵母菌。结果52株酵母菌中,科玛嘉显色基鉴定出33株白色念珠菌,13株热带念珠菌,2株光滑念珠菌,4株其他念珠菌。YBC卡鉴定出32株白色念珠菌,12株热带念珠菌。结论显色法需时短,价格适中,可鉴定92%左右的致病酵母菌。YBC卡鉴定菌种较显色法多,但鉴定时间长,价格高。     

科玛嘉念珠菌显色培养基在酵母菌鉴定中的应用评价

目的 评价科玛嘉念珠菌显色培养基在酵母菌鉴定中的应用。方法 用科玛嘉念珠菌显色培养基和Vitek32-YBC卡鉴定52株酵母菌。结果 52株酵母菌中,科玛嘉显色基鉴定出33株白色念珠菌,13株热带念不折不扣 菌,2株光滑念珠菌,4株其他念珠菌,YBC鉴定出32株白色念珠菌,12株热带念珠菌,结论 显色法需时短,价格适中,可鉴定92%左右的致病酵母菌,YBC卡鉴定菌种较显色法多,但鉴定时间长,价格高。     

HIV感染者口腔念珠菌检出率及菌种分布

目的:检测人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者口腔念珠菌的驻菌情况.方法:取82例HIV感染者口腔含漱液并以形态学、酵母菌鉴定系统及45℃生长试验等方法进行分型鉴定,计算不同念珠菌的检出率.结果:82例HIV感染者中60例可培养出念珠菌,检出率73.17%.其中白色念珠菌42例(51.22%),非白色念珠菌48例(58.54%).共分离出211株念珠菌,其中光滑念珠菌103株(48.82%),白色念珠菌95株(45.02%),热带念珠菌4株(1.90%),近平滑念珠菌4株(1.90%),菌膜念珠菌2株(0.95%),其他3株(1.42%).29例患者检出单一菌株(12例为白色念珠菌,15例为光滑念珠菌,1例为热带念珠菌,1例为近平滑念珠菌),占51.7%;31例检出多种菌株(30例为2种菌株,1例为3种菌株),占48.3%.结论:HIV感染者口腔的主要菌种是白色念珠菌和光滑念珠菌,并且白色念珠菌和光滑念珠菌共存的比例大于单一菌株的比例.     

临床标本中都柏林念珠菌的鉴定

Ｃ．ｄｕｂｌｉｎｉｅｎｓｉｓ（都柏林念珠菌）是Ｓｕｌｌｉｖａｎ １９９５年才命名的新的致病性念珠菌，该菌与Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ（白色念珠菌）的表型特征极为相似，致使大部分微生物实验室长期以来误将其鉴定为白色念珠菌。都柏林念珠菌主要引起艾滋病患者的口腔感染，也有从痰、血液、分泌物、粪便等标本中分离的报道［１］。为了解都柏林念珠菌的分布情况，我们对以往从临床标本中分离的１１２株白色念珠菌进行了重新鉴定，结果如下。１材料与方法１．１标本来源 １１２株白色念珠菌来自痰、咽拭子等呼吸道标本８４份，阴道分泌物…     

耐万古霉素金黄色葡萄球菌生物学特性改变与细菌鉴定

目的 了解金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药后生物学特性的变化及其对临床细菌鉴定结果的影响。方法 使用万古霉素体外诱导试验将1株临床分离的异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌（h-VRSA）逐渐诱导为万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌（VISA），观察原代菌和诱导菌的生长特征和生化反应，并使用VITEK32和MicroscanWalkAway40进行细菌鉴定。结果 h-VRSA和VISA的主要生物学特性改变为：菌落大小不等、色素由淡黄色变成灰白色、溶血环消失，血浆凝固酶、甘露醇、甘露糖等生化反应由阳性转为阴性；对杆菌肽由敏感变为耐药；仪器鉴定结果为溶血葡萄球菌或模仿葡萄球菌。结论 金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药后可表现出培养特征、生化反应等一系列表型特征的改变，并可导致临床细菌鉴定结果错误。     

改进的多重PCR技术鉴定白色念珠菌、新生隐球菌及烟曲霉的实验研究

[目的]建立一种快速而简便的鉴定白色念珠菌、新生隐球菌及烟曲霉的分子生物学方法。[方法]应用通用引物ITS1与ITS4，PCR扩增真菌的内转录间隔区（包含5．8SrDNA），然后将白色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉的单条种特异性异物与引物ITS1结合，对通用引物的扩增产物进行多重PCR扩增，达到鉴定上述菌株的目的。[结果]实验所采用的所有致病真菌，经通用引物的PCR扩增均能扩增出特异性的条带，而非真菌菌株扩增为阴性；白色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉的3种种特异性引物与ITS1结合进行的多重PCR扩增，只对目的菌株进行了有效扩增，其他菌株扩增为阴性。应用此方法对临床分离的菌株，白色念珠菌，新生隐球菌，烟曲霉进行鉴定，也得到特异性扩增条带。[结论]改进的多重PCR技术，更加经济，简单，快速，为致病真菌菌种的鉴定提供了有效手段。     

都柏林念珠菌感染的实验室诊断进展

都柏林念珠菌是一种新近鉴定的条件致病念珠菌 ,与白色念珠菌很相似。其鉴别主要靠一些选择性培养基 ,如CHROMagarCandida琼脂培养基、甲基蓝 沙保弱氏琼脂培养基等培养及生化鉴定、分子生物技术鉴定。     

黄连解毒汤对白色念珠菌的抗真菌作用研究

目的 观察黄连解毒汤对白色念珠菌的体外抗真菌效果.方法 采用微量稀释法药物敏感性试验测定黄连解毒汤对标准菌株、氟康唑敏感株、氟康唑中度敏感株、氟康唑耐药株4种白色念珠菌的最低抑菌浓度.结果 黄连解毒汤对4种白色念珠菌均具有较好的抑制作用,其对白色念珠菌标准菌株的最低抑菌浓度为4mg/ml,对氟康唑敏感型白色念珠菌最低抑菌浓度为8mg/ml,对中度敏感型白色念珠菌最低抑菌浓度为16mg/ml,对耐药型白色念珠菌最低抑菌浓度为 64mg/ml.结论 黄连解毒汤对白色念珠菌有明显的抑制作用,可作为临床用药的参考.