烧伤患者铜绿假单胞菌分离株16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 了解烧伤病房患者铜绿假单胞菌分离株16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况.方法 分离自烧伤病房患者的铜绿假单胞菌32株,采用GNS-448药敏卡及K-B法测定抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析法分析16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因[armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA、aac(3)-Ⅰ、sac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、am(2")-Ⅰ].结果 32株铜绿假单胞菌对氨苄西林、头孢呋辛、头孢西丁、复方新诺明完全耐药,对阿米卡星的敏感率最高为68.0%,对庆大霉素的敏感率为46.9%,而对亚胺培南、美罗培南的耐药率分别达到68.8%、59.4%;检出3株aac(6')-Ⅰ b、1株aac(6')-Ⅱ、9株ant(3")-Ⅰ、8株ant(2")-Ⅰ、1株rmtB基因,阳性率分别为9.4%、3.1%、28.1%、25.0%,3.1%,其中2株aac(6')-Ⅰ b为突变新亚型.结论 分离自烧伤患者的铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因携带率较高,铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药与16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因表达有关.     

泛耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶与16SrRNA甲基化酶基因检测研究

目的研究泛耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类的耐药机制,以指导临床合理使用抗菌药物,降低细菌耐药性的产生。方法收集2010年1-12月浙江绍兴第二医院住院患者痰液标本中分离到的泛耐药铜绿假单胞菌共20株,用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析14种氨基糖苷类修饰酶基因与7种16SrRNA甲基化酶基因。结果 20株铜绿假单胞菌均检测到aac(6′)-Ⅱ及rmtB基因,检出率100.0%;17株检测到aac(6′)-Ⅰb,检出率85.0%;18株检测到ant(2″)-Ⅰ,检出率90.0%;2株检测到ant(3″)-Ⅰ,检出率10.0%。结论 aac(6′)-Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶与rmtB型16SrRNA甲基化酶基因流行是泛耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类耐药的重要原因。     

肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因检测

目的:了解肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法:自2006年1月-2006年10月住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药肺炎克雷伯菌,微量肉汤稀释法检测20种抗菌药物的敏感性;PCR法检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果:20株多重耐药肺炎克雷伯菌1氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅱ基因阳性15株、aac(6)′-Ib基因阳性1株、ant(3)″-Ⅰ基因阳性16株、aph(3)′-Ⅰ基因阳性3株,ant(2)″-Ⅰ基因阳性1株。结论:肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因是aac(3)-Ⅱ、aac(6)′-Ib、ant(3)″-Ⅰ、aph(3)′-Ⅰ和ant(2)″-Ⅰ5种氨基糖苷类修饰酶基因的存在。     

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因检测及耐药特性分析

目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌的耐药基因及其耐药特性。方法对100株多重耐药铜绿假单胞菌进行药敏试验,并检测β-内酰胺酶编码基因、Opr D2基因、氨基糖苷类修饰酶基因等。结果发现多重耐药铜绿假单胞菌对氨苄西林、头孢替坦、氨苄西林/舒巴坦敏感性最低,对庆大霉素敏感性最高,差异有统计学意义(P0.05)。β-内酰胺酶编码基因:TEM、CTX-M-1、DHA检出率分别为29%、61%、8%,SHV、PER、OXA-10、VEB、GES、IMP、CARB和VIM基因未检出。Opr D2基因的检出率仅为8%;氨基糖苷类修饰酶基因:aac(6')-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ的检出率分别为60%、35%、32%,aac(6')-Ⅰ基因未检出。结论通道蛋白Opr D2缺失是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,本研究发现多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因以aac(6')-Ⅱ检出率最高。     

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的检测与分析

目的:调查我院多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶编码基因、外膜通道蛋白D2(OprD2)基因、氨基糖苷类修饰酶基因和耐消毒剂基因的存在状况。方法:采用K-B法测定临床分离的铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的药物敏感性,筛选出100株多重耐药菌株,采用聚合酶链反应检测β-内酰胺酶编码基因、OprD2基因、氨基糖苷类修饰酶基因和耐消毒剂基因。结果:100株多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶编码基因CTX-M-1群、TEM、DHA的检出率分别为54.0%、30.0%、9.0%,未检出SHV、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、IMP和VIM基因;OprD2基因的缺失率为61.0%;氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ的阳性率分别为59.0%、33.0%、25.0%,未检出aac(6′)-Ⅰ;耐消毒剂基因qacE△1-sul1的检出率为15.0%。结论:我院多重耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,对β-内酰胺类抗生素的耐药主要与CTX-M-1群、TEM、DHA型耐药基因有关,对亚胺培南耐药主要与OprD2基因缺失有关,对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与aac(6′)-Ⅱ、a...     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因检测研究

目的了解医院铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶编码基因的存在状况。方法对临床分离的59株铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因进行PCR检测。结果共检出同时含aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ3种氨基糖苷类修饰酶基因的铜绿假单胞菌35株,且氨基糖苷类修饰酶基因对庆大霉素、阿米卡星的耐药表型有较高的阳性预测值>75%。结论铜绿假单胞菌对庆大霉素、阿米卡星耐药中氨基糖苷类修饰酶基因发挥着重要的作用。     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学研究

目的研究铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学. 方法用PCR方法对35株铜绿假单胞菌的氨基糖苷类耐药相关基因、氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、 aph(3′)-Ⅵ、ant(3″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ等9种基因进行了检测与分析. 结果35株中20株检出氨基糖苷类修饰酶基因(57.1%);9种基因由高到低的检出率分别为aac(6′)-Ⅱ(34.2%)、ant(2″)-Ⅰ(28.6%)、aac(3)-Ⅱ(17.1%)、aac(6′)-Ⅰ(17.1%)、ant(3″)-Ⅰ(14.3%) 、aac(3)-Ⅰ(0)、aac(3)-Ⅲ(0)、aac(3)-Ⅳ(0)、aph(3′)-Ⅵ(0). 结论本研究表明,湖北襄樊地区铜绿假单胞菌耐氨基糖苷类药物,主要机制为产氨基糖苷类修饰酶(57.1%),本组铜绿假单胞菌中另有15株表型为氨基糖苷类药物不敏感但9种基因检测为阴性,可能存在其他修饰酶基因,或者存在16S rRNA基因突变.     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药表型及耐药基因的检测

目的了解中山地区铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物的耐药表型和基因表型的分布及其关系。方法采用VITEK-2Compact高级专家系统判定2010年1-9月896株铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药表型,并对其中15株多药耐药铜绿假单胞菌采用PCR的方法检测4种氨基糖苷类修饰酶基因。结果 896株铜绿假单胞菌及15株多药耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药表型模式均主要为表型模式RESISTANT(GEN、NET、AMI、TOB),阳性株分别为468、12株;15株多药耐药菌株全部检出氨基糖苷类耐药基因:aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ分别为13、4、3、8株。结论临床分离的铜绿假单胞菌以单一耐药表型模式为主,推测该地区氨基糖苷类药物耐药的主要原因,是氨基糖苷类修饰酶基因的存在导致。     

铜绿假单胞菌临床分离株新型氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的了解铜绿假单胞菌临床分离株对氨基糖苷类药物耐药的遗传学背景。方法收集2018年3月-2019年5月浙江省宁波与杭州两个地区6所医院的耐药铜绿假单胞菌98株(非重复株),采用琼脂稀释法测定其对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);聚合酶链反应检测14种氨基糖苷类修饰酶基因和10种16S rRNA甲基化酶基因;比较宁波与杭州地区分离株耐药率和耐药基因携带率。结果 98株铜绿假单胞菌对阿米卡星、妥布霉素和庆大霉素3种氨基糖苷类药物耐药率均30%,对其余10种抗菌药物的耐药率高达60.20%～94.90%。宁波分离株对3种氨基糖苷类药物的耐药率均高于杭州分离株。98株菌共检出5种氨基糖苷类修饰酶基因:ant(3″)-Ⅰ(13/98,13.27%)、ant(2″)-Ⅰ(11/98,11.22%)、aac(6′)-Ⅰb (7/98,7.14%)、aph(3′)-ⅩⅤ(4/98,4.08%)、aac(6′)-Ⅱ(3/98,3.06%),和1种16S rRNA甲基化酶基因:rmtB(10/98,10.20%)。宁波分离株氨基糖苷类耐药基因ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-ⅩⅤ和rmtB检出率高于杭州分离株。25株菌检出氨基糖苷类耐药基因(25/98,25.51%),其中15株携带2种及以上耐药基因,10株携带1种耐药基因。10株检出16S rRNA甲基化酶基因rmtB的菌株对氨基糖苷类药物的MIC均≥256μg/ml。耐药基因携带模式共有6种,与氨基糖苷类药物耐药表型相符。结论携带ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、aph(3′)-ⅩⅤ、aac(6′)-Ⅱ、rmtB基因是本组铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因。     

多药耐药铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 研究铜绿假单胞菌连续分离株的16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因的分布状况.方法 以K-B法检测铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的耐药性;以PCR法检测20株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序.结果 20株铜绿假单胞菌检出1种16S rRNA甲基化酶基因(rmtB);检出5种氨基糖苷类修饰酶基因,分别为:aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ b、aac(6')-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ;1号株和3号株进行甲基化rmtB基因测序,将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的rmtB氨基酸序列比较,均存在氨基酸序列差别,因此均可确认为新亚型.结论 医院铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗菌药物耐药主要与16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB及5种氨基糖苷类修饰基因有关,并发现两种铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB新亚型.     

多药耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的研究临床分离的多药耐药铜绿假单胞菌(MDR-PEA)常见氨基糖苷类修饰酶及甲基化酶基因的存在状况。方法收集2009年2月-2010年4月从医院住院患者分离出来的MDR-PAE20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析对6种甲基化酶及8种氨基糖苷类修饰酶基因进行检测及测序。结果 20株MDR-PAE中,甲基化酶基因rmtB阳性率为15.0%;氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ的阳性率分别为40.0%、10.0%、20.0%、15.0%、10.0%,未检出aac(3)-Ⅰ、ant(4′)-Ⅰ及aph(3′)-Ⅱb。结论产氨基糖苷类修饰酶是MDR-PAE对氨基糖苷类药物耐药的主要机制,非产氨基糖苷类修饰酶MDR-PAE株对氨基糖苷类药物耐药可能与其他机制有关。     

Susceptibility of gram-negative bacterial isolates to six beta-lactam and two aminoglycoside antibiotics at our university hospital

Susceptibilities of Gram-negative bacterial strains isolated at the University Hospital in 1987 to six beta-Lactam antibiotics (azthreonam cefmetazole, ceftizoxime, latamoxef, aminobenzyl-penicillin and piperacillin) and two aminoglycoside antibiotics (gentamicin and amikacin) were examined by agar dilution and the agar diffusion method. Results obtained from both methods correlated well in most of the strains. Most of the strains belonging to Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae and Proteus mirabilis were sensitive to the beta-lactam antibiotics except aminobenzyl-penicillin and piperacillin. They were also sensitive to aminoglycoside antibiotics. Most strains of Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae and Serratia marcescens were sensitive to azthreonam, latamoxef and aminoglycosides, but were less sensitive to other beta-lactams. Acinetobacter calcoaceticus was generally resistant to beta-lactams except ceftizoxime, but was sensitive to aminoglycosides. More than half of the strains of Pseudomonas aeruginosa were sensitive to azthreonam, piperacillin and aminoglycoside antibiotics and only latamoxef was active in Pseudomonas maltophilia.     

In99, an In100-related integron, its occurrence and prevalence in clinical Pseudomonas aeruginosa strains from a central region of Portugal

In99, a possible ancestor of In100, is a class 1 integron associated with carbenicillinase (blaPSE) and aminoglycoside resistance genes [aac(6')-Ib and aadA2]. In99 was present in 8 of 81 clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa from unrelated patients collected in different years. The strains fell into two clonal groups and exhibited resistance to beta-lactams and aminoglycosides.     

ICU分离的铜绿假单胞菌血清分型及耐药性分析

目的确定重症监护室(ICU)铜绿假单胞菌流行菌株血清型别及其对抗菌药物的耐药情况,为研究铜绿假单胞菌感染的控制措施,合理应用抗菌药物提供依据。方法采用日本生研株式会社的铜绿假单胞菌血清分型试剂盒,对某院呼吸内科、神经内科、麻醉科ICU住院患者痰液及相关环境标本中分离的铜绿假单胞菌进行血清学分型及耐药性监测。结果3个ICU共检出铜绿假单胞菌88株,对其中80株进行了血清学分型,分型率90.91%;所占比率较大的血清型为:B型52.27%,G型22.73%,未分型菌9.09%。各型对10种抗菌药物的耐药种类数为:B与G型10种,未分型菌9种,D与E型8种,F型7种,I,M与K型<3种;铜绿假单胞菌对10种抗菌药物总的耐药率分别为:头孢曲松67.05%,阿洛西林61.36%,头孢吡肟44.32%,替卡西林/他唑巴坦54.55%,阿米卡星56.82%,头孢哌酮46.59%,左氧氟沙星54.55%,头孢哌酮/舒巴坦6.82%,亚胺培南55.68%,头孢他啶28.41%;B型菌的耐药率高于其他各型。结论该院ICU铜绿假单胞菌血清分型以B型为主;以多重耐药菌株多见;对头孢哌酮/舒巴坦和头孢他啶耐药率较低,此两种药可作为铜绿假单胞菌感染治疗的首选药物。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及其耐药机制的初步研究

目的分析临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药特征及对亚胺培南的耐药机制。方法采用BD Phoenix 100 全自动微生物分析仪进行细菌鉴定,纸片扩散法（K B法）进行药敏试验;聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶相关基因(IMP、VIM、OXA、GES)及外膜蛋白基因oprD2。结果耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星耐药率最低,为8.33%;对庆大霉素、妥布霉素的耐药率＜20%;第三四代头孢菌素、氨曲南、美罗培南、复方磺胺甲口恶唑、米诺环素等抗菌药物抗菌活性差, 耐药率＞60%,对氨苄西林/ 舒巴坦全部耐药。检测到1株OXA 17阳性菌,阳性率2.78%;oprD2缺失率为38.89%;未检测到其余耐药基因。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌除对氨基糖苷类抗生素耐药率较低外, 对其他常用抗菌药物耐药严重;膜蛋白OprD2缺失与碳青霉烯酶产生等机制导致铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药。     

Long-term evolution of a nosocomial outbreak of Pseudomonas aeruginosa producing VIM-2 metallo-enzyme

From April 1996 to July 2004, an outbreak of metallo-beta-lactamase-positive (MBL) Pseudomonas aeruginosa occurred in the haematology ward at Nantes University Hospital in France. Fifty-nine patients were carriers of VIM-2-positive strains of whom 14 were infected (mostly urinary tract infections and pneumonia). Pulsed-field gel electrophoresis identified related isolates demonstrating resistance to all beta-lactams, aminoglycosides, fluoroquinolones, fosfomycin, rifampicin but not colistin. The bla(VIM-2) gene responsible for VIM-2 MBL was not plasmid-encoded but part of a novel type of class 1 integron. VIM-2-positive strains were mostly from urine samples and clinical data suggest that in the absence of therapeutic guidelines, piperacillin-tazobactam or aztreonam may be a reliable choice for treating infections with MBL-producing strains.     

重庆地区铜绿假单胞菌医院感染及耐药性分析

目的了解铜绿假单胞菌(PA)引起医院感染的特点以及对抗生素的耐药性的变化趋势. 方法对2000～2002年分离出的325株铜绿假单胞菌选用12种抗生素进行药敏实验,按NCCLS标准判断. 结果该菌对氨基糖苷类、环丙沙星、哌拉西林等耐药率呈明显上升趋势;对碳青酶烯类药物亚胺培南耐药率达15.7%,对第三代头孢菌素的敏感率最低. 结论了解铜绿假单胞菌的耐药现状,有利于为临床合理用药提供依据.     

铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM与碳青霉烯类药物耐药的关系研究

目的:探讨临床分离的铜绿假单胞菌的主动外排系统MexAB-OprM与其对碳青霉烯类药物耐药之间的关系,研究其耐药分子机理。方法:测定临床分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的体外抗菌活性,根据耐药情况,分为碳青霉烯类药物敏感组和碳青霉烯类药物耐药组;应用RT-PCR方法,研究两组菌株的主动外排系统MexAB-OprM中结构基因oprM的mRNA表达水平;用PCR法扩增两组菌株的泵调节基因mexR,对扩增产物进行DNA双向测序。结果:耐药组oprM的mRNA表达水平明显高于敏感组(P0.05);一株菌发现MexR第126位氨基酸突变(缬氨酸→谷氨酸),两株菌发现MexR第70位氨基酸突变(精氨酸→谷氨酰胺)。结论:山西医科大学第一医院临床分离铜绿假单胞菌的主动外排系统MexAB-OprM参与碳青霉烯类药物的耐药;MexAB-OprM高表达的分子机理可能与泵调节基因mexR的突变以及其他突变型有关。     

多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排机制

铜绿假单胞菌(PA)对多种抗菌药物都有不同程度的耐药,其耐药机制包括酶的产生、生物被膜的形成、外排泵的高表达和外膜孔蛋白表达的降低或缺失,其中多药外排泵能排出多种结构和功能不相关的抗菌药物,包括β-内酰胺类、氟喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素、氯霉素等,目前被认为是导致PA固有和获得性多重耐药的重要原因.     

RICU下呼吸道致病菌及其耐药性监测分析

目的　调查RICU 下呼吸道致病菌及其耐药性。方法　对1994～1996 年RICU 患者下呼吸道分离出的353株致病菌及其药敏试验结果加以整理分析。结果　G- 菌占69.7% ,主要病原菌依次为嗜麦芽黄单胞菌(21.5% )、铜绿假单胞菌(17.8% )、金黄色葡萄球菌(16.4% )。金黄色葡萄球菌的发生率逐年上升(10% 、19.4% 、21.8% ),ORSA 检出率高达87.8% 。嗜麦芽黄单胞菌呈高度多重耐药性,对第三代头孢菌素及氨基糖甙类抗生素的耐药率分别超过50% 和80% ,对环丙沙星和伊米配能的耐药率分别达65.7% 及81.5% ,对氨曲南无一敏感。3 年间主要病原菌对常用抗生素的耐药性基本呈上升趋势。结论　及时掌握病原菌及耐药性的最新动态,指导临床医生正确选用抗生素