侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40、Aβ1-42和tau^202、tau^396．tau^404表达增加

目的 探讨用链脲霉素(Streptozotocin，STZ)阻断脑内胰岛素信号传导，引起脑能量代谢障碍与Aβ表达及tau蛋白过度磷酸化的关系。方法 24只SD大鼠随机分为实验组和生理盐水组，实验组双侧侧脑室注入STZ3mg/kg，第3天重复此剂量；生理盐水组手术操作相同，但注入等量的生理盐水代替STZ。21d后，采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ1-40、Aβ1-42、tau^202、tau^396．tau^404阳性细胞表达。结果 与生理盐水组相比，实验绀皮层和海马Aβ1-40、Aβ1-42、tau^202、tau^396、tau^404阳性细胞明显增多。结论 侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多和tau蛋白过度磷酸化。     

侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40和Aβ1-42表达增加

目的:探讨大鼠侧脑室注射链脲霉素(Streptozotocin,STZ)阻断脑内胰岛素信号传导与Aβ表达的关系.方法:24只SD大鼠随机等分为手术组和对照组(n=12),手术组双侧侧脑室注入STZ 3 mg/kg,第3日重复此剂量,对照组只手术操作但不注射药物.21 d后,采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ1-40和Aβ1-42阳性表达.结果:与对照组相比,手术组皮层、海马Aβ1-40和Aβ1-42阳性细胞明显增多.结论:侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多,提示胰岛素/胰岛素受体系统障碍与阿尔茨海默病(AD)发病有密切关系.     

人Aβ42重组抗原的融合表达及Aβ抗体的检测

目的 原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ₄₂)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术。方法 化学合成Aβ₄₂基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ₄₂基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ₄₂融合蛋白。Westernblotting检测其抗原特异性。以GST-Aβ₄₂和Aβ₄₂肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ₄₂免疫的大鼠血清中Aβ抗体。结果 原核表达的可溶性GST-Aβ₄₂融合蛋白相对分子质量为31000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800mg/L菌液,纯度大于95%;Westernblotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ₄₂为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2ng/ml;以GST-Aβ₄₂和化学合成的Aβ₄₂分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ₄₂肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P>0.05)。结论 原核表达的GST-Aβ₄₂融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ₄₂肽抗原,用于检测Aβ抗体。     

EGCG对铅暴露C57BL/6仔鼠海马Aβ蛋白及NEP酶表达的影响

目的 探讨不同剂量的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对哺乳期铅暴露仔鼠海马学习记忆能力损伤的作用,及对β淀粉样蛋白、脑啡肽酶的影响。 方法 选取SPF级C57BL/6孕鼠,随机分为对照组和铅暴露组。铅暴露组孕鼠在哺乳期饮用0.5%醋酸铅水溶液,对照组饮用蒸馏水。染铅结束后,取40只染铅雄性仔鼠(分为低、中、高剂量EGCG干预组、铅暴露模型组,每组各10只),对照组10只雄性仔鼠,分别用不同浓度的EGCG溶液和生理盐水等体积灌胃21 d,采用Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力,石墨炉原子吸收光谱法测定各组小鼠血铅含量,并对海马组织中Aβ_1-40、Aβ_1-42、AβPP mRNA、AβPP、脑啡肽酶( Nep)的蛋白含量进行测定。 结果 铅暴露模型组,低、中、高剂量EGCG干预组的血铅含量明显高于对照组(P<0.001),低、中、高剂量EGCG干预组和铅暴露模型组血铅含量比较差异无统计学意义(P=0.174,0.086,0.071);铅暴露模型组逃避潜伏期高于对照组(P<0.001),中、高剂量EGCG干预组的逃避潜伏期低于铅暴露模型组(P<0.001);铅暴露模型组小鼠海马内Aβ_1-40、Aβ_1-42的含量与对照组比较明显升高(P<0.001),Nep含量明显降低(P<0.001),中、高剂量EGCG干预组Aβ_1-40、Aβ_1-42的含量与铅暴露模型组比较明显降低,Nep含量明显升高(P<0.001),其中以高剂量EGCG干预组效果最佳。 结论 EGCG干预能明显提高小鼠的学习记忆能力,且EGCG能够降低小鼠海马组织中Aβ_1-40、Aβ_1-42的含量,抑制Aβ相关基因AβPP的表达,上调Nep蛋白的表达。     

马钱苷通过抑制蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化降低tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨马钱苷对tau蛋白过度磷酸化的影响及其作用机制。方法 马钱苷（500、1 000 μmol/L）与人神经母细胞瘤细胞株（SK-N-SH细胞）预孵育24 h,之后加入PI3K抑制剂Wortmannin（WT）及PKA抑制剂GF-109203X（GFX）与SK-N-SH细胞孵育3 h,采用Western blotting方法观察马钱苷对tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的磷酸化,GSK-3β-Ser9、GSK-3β、PP2A催化亚基C（protein phosphatase 2A catalytic subunit C,PP2Ac）磷酸化/甲基化及PP2Ac的表达。结果 WT/GFX明显抑制p-GSK-3β-ser9的表达,引起GSK-3β活性增高,从而导致tau蛋白Thr205、Thr217、PHF-1位点高度磷酸化。马钱苷能够明显抑制模型细胞tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的过度磷酸化,但是不能增高p-GSK-3β-ser9的表达,提示马钱苷抑制tau蛋白磷酸化的作用不是通过影响GSK-3β通路实现的。但是实验显示马钱苷能够抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,但对Leu309位点甲基化无影响。结论 马钱苷能够抑制tau蛋白过度磷酸化,机制可能与其抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,提高PP2A活性有关,与GSK-3β通路无关。     

脑益康对阿尔茨海默病大鼠tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响

目的探讨脑益康对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响。方法采用β-淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）右侧海马注射制备AD大鼠模型,免疫组化法和Western blot法检测大鼠海马神经元tau蛋白在Ser404位点的磷酸化水平、蛋白磷酸酯酶2A（PP-2A）的表达情况,ELISA法检测糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）蛋白的水平。结果AD模型组大鼠海马组织p-tau（Ser404）、GSK-3β表达增加,PP-2A表达减少,与假手术组的差异有高度统计学意义（P〈0.01）;脑益康治疗组大鼠的p-tau（Ser404）、GSK-3β表达显著减少,PP-2A表达显著增加,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论脑益康可通过增加PP-2A的表达和抑制GSK-3β的表达减轻AD模型大鼠tau蛋白的过度磷酸化。     

IGF-1对Aβ1-40诱导PC12细胞tau蛋白过度磷酸化的保护作用及其机制研究

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对β样淀粉蛋白(Aβ1-40)引起的PC12细胞tau蛋白磷酸化的保护作用及其机制.方法 通过MTT法观察不同浓度的IGF-1对PC12细胞存活的影响.应用蛋白免疫印迹方法,检测Aβ1-40处理后PCI2细胞tau蛋白磷酸化、总tau蛋白、糖原合成激酶3 β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3βSer9的表达情况;观察IGF-1或GSK-3β特异性抑制剂氯化锂(IACl)对Aβ1-40诱导PCI2细胞上述指标变化的影响.结果 不同浓度的IGF-1均能提高PC12细胞生存率,1μg/mL IGF-1作用最明显.tau蛋白Ser396、Ser199/202位点的磷酸化水平在Aβ1-40诱导后3 h开始增高,12 h达到高峰;总tau蛋白的变化趋势与tau蛋白磷酸化的改变大体一致.在tau蛋白磷酸化达高峰时,GSK-3β的表达增加而磷酸化GSK-3βSer9的表达减少.用IGF-1或LiCl处理后,可减轻Aβ1-40所诱导的tau蛋白过度磷酸化,同时GSK-3β的表达下降而磷酸化GSK-3βSer9的表达增加.结论 Aβ1-40可使PC12细胞tau蛋白Ser396、Ser199/202位点的磷酸化水平增高,该作用主要通过激活GSK-3β实现.IGF-1可抑制GSK-3β的活性,最终达到减轻Aβ1-40所诱导的PC12细胞tau蛋白过度磷酸化的作用.     

1型糖尿病大鼠海马Alzheimer样磷酸酯酶2A活性降低导致tau蛋白过度磷酸化

目的 为探讨1型糖尿病增高阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)发病风险的机制,采用1型糖尿病大鼠模型,研究tau蛋白过度磷酸化及其形成机制.方法 以同龄Wistar大鼠为对照组(CTL),大剂量链脲佐菌素(strepto-zotocin,STZ)造成1型糖尿病大鼠模型(T1DM).葡萄糖氧化酶法检测血糖,放射免疫法检测血浆胰岛素;蛋白质印迹分析海马内总tau蛋白及tau蛋白上部分位点(Ser199/202、Ser214、Ser396及Ser422)的磷酸化水平及胞质内总糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)、磷酸化GSK-3β水平;免疫组化技术分析海马神经细胞内tau蛋白上位点Ser396磷酸化状态;蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)、蛋白磷酸酯酶2B(PP2B)试剂盒检测PP2A、PP2B活性.结果 T1DM组血糖水平较对照组(CTL)显著升高,血浆胰岛素水平显著下降.TIDM组大鼠海马总tau蛋白水平与CTL组比较差异无显著性意义,但tau蛋白上位点Ser199/202、Ser214、Ser396及Ser422上磷酸化程度有明显升高,Tau-1所检测的Ser199/202位点的非磷酸化水平较CTL组显著降低.免疫组化结果显示T1DM组海马区tau蛋白位点Ser396磷酸化水平显著高于CTL组.两组总GSK-3β水平差异无显著性意义,TIDM组磷酸化GSK-3β水平较CTL组下降,但差异无显著性意义.磷酸酯酶活性检测结果显示,T1DM组PP2A活性显著下降至CTL组的1/3,而PP2B活性不变.结论 1型糖尿病大鼠海马中.主要由于PP2A活性下降导致tau蛋白呈Alzheimer样过度磷酸化改变.     

山茱萸环烯醚萜苷对创伤性脑损伤大鼠认知功能及tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察山茱萸环烯醚萜苷（cornel iridoid glycoside,CIG）对创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）大鼠认知功能及tau蛋白过度磷酸化的影响。方法 采用改良自由落体Feeney法致右侧大脑皮质损伤制备TBI大鼠模型。造模后3 h开始给药,持续给药28 d。应用避暗试验检测大鼠被动回避记忆能力,应用Fluoro Jade B染色检测变性神经元,采用Western blotting法检测tau蛋白磷酸化的水平。结果 TBI造模术后28 d,模型组大鼠在避暗试验中的错误次数增多,海马区变性神经元增多,创伤部位tau蛋白磷酸化水平增高。CIG灌胃给药28 d能够改善TBI大鼠的被动回避记忆功能障碍,减轻海马区神经元退行性病变,抑制TBI大鼠脑创伤部位tau蛋白在Thr205和Ser396位点的过度磷酸化。结论 CIG对脑创伤所致认知功能障碍可能具有治疗作用。     

人参皂苷Rg1通过ODK5途径减轻Aβ25-35诱导的神经元tau蛋白磷酸化

目的探讨在Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中，人参皂苷Rg1对tau蛋白过度磷酸化及周期依赖性蛋白激酶5（CDK5）的激动亚基p35的影响。方法通过蛋白免疫印迹法检测胎鼠皮层神经元CDK5的两个亚基cdk5和p35／p25的蛋白水平，以及CDK5的磷酸化底物tau蛋自在Thr205和Ser404位点的磷酸化水平。结果凝聚态Aβ25-35（20μmol／L）作用于皮层神经元12h，皮层神经元中p35裂解成p25的数量增多，tau蛋白在Thr205和Ser404位点的磷酸化水平增高，对cdk5亚基表达水平的影响不明显。人参皂苷Rg1和calpain特异性抑制剂calpeptin可稳定皮层神经元的p35蛋白，减少p25生成，人参皂苷Rg1和CDK5特异性抑制剂roscovitine可减轻凝聚态Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化。结论CDK5可能参与人参皂苷Rg1减轻寡聚态Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化。     

人参皂苷Rgl通过CDK5途径减轻Aβ25-35诱导的神经元tau蛋白磷酸化

目的 探讨在Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rgl对tau蛋白过度磷酸化及周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)的激动亚基p35的影响. 方法 通过蛋白免疫印迹法检测胎鼠皮层神经元CDK5的两个亚基cdk5和p35/p25的蛋白水平.以及CDK5的磷酸化底物tau蛋白在Thr205和Ser404位点的磷酸化水平. 结果 凝聚态Aβ25-35(20μmol/L)作用于皮层神经元12 h.皮层神经元中p35裂解成p25的数量增多,tau蛋白在Thr205和Ser404位点的磷酸化水平增高.对cdk5亚基表达水平的影响不明显.人参皂苷Rgl和calpain特异性抑制剂calpeptin可稳定皮层神经元的p35蛋白,减少p25生成,人参皂苷Rgl和CDK5特异性抑制剂roscovitine可减轻凝聚态Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化. 结论 CDK5可能参与人参皂苷Rgl减轻寡聚态Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化.     

微管相关蛋白tau转基因细胞和动物模型的建立及tau蛋白病变表征

目的 构建并表征tau及突变tau蛋白细胞和动物模型,检测模型tau蛋白及磷酸化tau蛋白表达情况及微管的形态,为tau蛋白及相关疾病的研究提供疾病模型。方法 将不同的质粒分别转染到HEK293细胞中,构建过表达野生型tau以及P301L/P301S突变tau的细胞模型。引进并繁育rTg4510小鼠（P301L突变tau转基因小鼠）以及PS19小鼠（P301S突变tau转基因小鼠）。通过Western blotting法检测总tau及磷酸化tau蛋白的表达,应用免疫组织化学的方法检测转基因小鼠脑内磷酸化tau蛋白的表达情况,应用免疫荧光的方法检测HEK293细胞微管形态的变化。结果 本研究成功构建过表达tau蛋白的细胞模型,繁育了两种tau转基因小鼠,在这些模型中tau蛋白表达及tau蛋白的磷酸化水平显著高于对照组。在不同突变类型的细胞和动物模型中,tau蛋白不同位点的磷酸化水平变化以及微管形态变化略有差异。结论 本研究成功构建了P301L/P301S突变tau蛋白的细胞和动物模型,这些模型均表现了显著的tau蛋白过度磷酸化的病变,并引起了细胞微管形态或tau蛋白病理的变化,进而为包括AD在内的tau蛋白病变提供了实验模型。     

山茱萸环烯醚萜苷对蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化的调节机制

目的 探讨山茱萸环烯醚萜苷（Cornel iridoid glycoside,CIG）上调蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）,PP2A活性抑制tau蛋白磷酸化的作用机制。方法 1确定最佳转染条件：将Src质粒DNA（0.2、0.4、0.6、0.8 μg）瞬时转染入小鼠神经瘤母细胞（Neuro-2A cell,N2a细胞）,观察不同量Src对PP2A催化亚基C磷酸化和tau蛋白磷酸化的影响;2将0.6 μg Src质粒DNA转染入N2a细胞,24 h后加入CIG（50、100、200 μg/mL）共同孵育24 h,观察CIG对Src、蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B（protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B）、p-PP2Ac及tau蛋白磷酸化的作用。结果 1转染Src（0.2、0.4、0.6 μg）质粒DNA到N2a细胞,Src蛋白表达明显增加,p-PP2Ac水平上调,PP2Ac蛋白总量表达无变化,tau蛋白在Ser 199/202、Ser 396位点磷酸化显著增加;转染0.8 μg Src质粒DNA到N2a细胞与转染0.6 μg Src相比,p-PP2Ac表达下降,PP2Ac蛋白总量表达无变化,tau蛋白在Ser 199/202、Ser 396位点磷酸化降低。2转染0.6 μg Src质粒DNA到N2a细胞,Src蛋白表达增加,p-PP2Ac表达增加,tau蛋白在Ser 199/202、Thr 205、Thr 217以及Ser 396位点的磷酸化明显增加;CIG对Src蛋白表达无影响,能够抑制p-PP2Ac的表达,抑制tau蛋白在Ser 199/202、Thr 205、Thr 217以及Ser 396位点的磷酸化。此外,CIG能上调PTP1B蛋白表达。结论 CIG对Src蛋白无明显调节作用,但能通过增加PTP1B的表达,降低PP2A催化亚基C磷酸化,从而升高PP2A活性,进一步降低tau的过度磷酸化。CIG对tau蛋白过度磷酸化的抑制作用,将会给阿尔茨海默病的治疗带来广阔的应用前景。     

北五味子酸性多糖对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力的改善作用

目的：观察北五味子酸性多糖（SCP-A）对Aβ_25-35致阿尔茨海默病（AD）模型小鼠学习记忆能力的改善作用,并阐明其相关机制。方法：75只雄性C57BL小鼠随机分为空白组（侧脑室注射生理盐水,灌胃蒸馏水）,模型组（侧脑室注射Aβ_25-35,灌胃蒸馏水）,5、10和20 mg·kg^-1 SCP-A组（侧脑室注射Aβ_25-35,灌胃SCP-A）,每组15只。灌胃药物每日1次,连续14 d,于第8天给予Aβ_25-35进行侧脑室注射。给药完毕后,第15天依次进行避暗实验及Morris水迷宫实验观察小鼠的潜伏期、错误次数、找到平台时间、穿越平台次数和目标象限停留时间,Western blotting法检测小鼠海马组织中Tau蛋白、糖原合成酶激酶3（GSK-3β）及其磷酸化蛋白的表达水平。结果：避暗实验,与空白组比较,模型组小鼠潜伏期明显缩短,错误次数明显升高（P<0.01）;与模型组比较,10和20 mg·kg^-1 SCP-A组小鼠潜伏期明显延长（P<0.01）,错误次数明显减少（P<0.05或P<0.01）。Morris水迷宫,与空白组比较,模型组小鼠找到平台时间明显延长（P<0.01）,穿越平台次数及目标象限停留时间明显缩短（P<0.01）;与模型组比较,10和20 mg·kg^-1 SCP-A组小鼠找到平台时间明显缩短（P<0.01）,穿过平台次数及平台区域停留时间明显增加（P<0.01）。Western blotting法检测,与模型组比较,20 mg·kg^-1SCP-A组小鼠海马组织中磷酸化蛋白Tau Ser199、Tau Ser396及Tau Ser404表达水平明显降低（P<0.05）,GSK-3β表达水平明显降低（P<0.01）,磷酸化蛋白GSK-3β Tyr216相对表达水平明显降低（P<0.05）,磷酸化蛋白GSK-3β Ser9相对表达水平明显升高（P<0.05）。结论：SCP-A具有抗AD作用,该作用与其调节GSK-3β活性进而降低海马组织中Tau蛋白磷酸化水平有关。     

miR-21-5p靶向TGF-β1调节大鼠心肌细胞增殖和凋亡

目的 探讨miR-21-5p通过调控转化生长因子-β₁(transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)对大鼠心肌细胞H9c2增殖和凋亡的影响。方法 抑制或过表达TGF-β₁后,通过RT-qPCR检测H9c2细胞中miR-21-5p的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-21-5p和TGF-β₁的靶向关系,CCK-8及Annexin V-FITC/PI检测H9c2细胞增殖和凋亡,Western blotting检测H9c2细胞中TGF-β₁的表达水平。结果 miR-21-5p表达抑制后使H9c2细胞增殖受到抑制并诱导其凋亡(P＜0.05)。miR-21-5p靶向负调控TGF-β₁的表达水平(P＜0.05)。过表达TGF-β₁显著抑制H9c2细胞增殖并诱导其凋亡(P＜0.05)。结论 miR-21-5p通过靶向下调TGF-β₁的表达水平,促进大鼠H9c2心肌细胞增殖和抑制细胞凋亡。     

乙酰葛根素对Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞Caspase-3表达的影响

目的 探究乙酰葛根素对β淀粉样蛋白(Aβ_25-35)诱导BV-2小胶质细胞形态及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法 用凝聚态Aβ_25-35诱导体外培养的BV-2小胶质细胞作为阿尔茨海默病炎症细胞模型,将细胞分为对照组、模型组、Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-fmk)组以及乙酰葛根素低(0.1 μmol/L)、中(0.4 μmol/L)、高(1.6 μmol/L)剂量共6组,采用倒置相差显微镜观察小胶质细胞形态变化,应用Western blotting检测Caspase-3蛋白表达水平。结果 形态学结果显示,Aβ_25-35可激活小胶质细胞使其由静息态变为阿米巴样,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素可改善Aβ_25-35诱导的小胶质细胞形态改变。Western blotting结果显示,与对照组相比,模型组Caspase-3表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素各剂量组Caspase-3表达均显著降低(P<0.01);与Caspase-3抑制剂组相比,乙酰葛根素低、中剂量组Caspase-3表达均显著升高(P<0.01),高剂量组则无统计学意义。结论 乙酰葛根素可抑制Aβ诱导BV-2小胶质细胞激活,其机制可能与降低Caspase-3表达有关,且以高剂量组效果较好。     

瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)在SGC-7901细胞增殖中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)与SGC-7901细胞增殖的关系。方法 体外培养SGC-7901细胞,以是否加入TGF-β₁分为对照组和实验组。根据实验组是否加入SKF96365抑制剂分为TGF-β₁和TGF-β₁+SKF96365组。免疫荧光染色观察TRPC6在对照和TGF-β₁组的表达。Western blot方法检测TRPC6和增殖指标在对照组、TGF-β₁组和TGF-β₁+SKF96365组中的变化。结果 与对照组相比,TRPC6蛋白在TGF-β₁组中表达升高(P＜0.05)。抑制TRPC6蛋白表达,增殖指标在TGF-β₁+SKF96365组表达明显降低(P＜0.01)。结论 抑制TRPC6蛋白表达可降低SGC-7901细胞增殖能力。     

迷迭香酸通过激活Nrf2/HO-1通路对Aβ1-42所致星形胶质细胞损伤的保护作用

目的 探讨迷迭香酸（RA）对β淀粉样蛋白1-42（Aβ_1-42）引起的星形胶质细胞损伤的保护作用及炎症因子释放的抑制作用,并阐明其相关机制。 方法 原代培养星形胶质细胞,将细胞分为对照组,Aβ_1-42组（5 μmol?L^－1）,不同浓度（20,50和100 μmol?L^－1）RA+Aβ_1-42组,核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）组,ML385+RA+Aβ_1-42组。星形胶质细胞以不同浓度（20、50和100 μmol?L^－1）RA预处理24 h,再给予终浓度5 μmol?L^－1Aβ_1-42处理24 h,ML385组在加入RA前先加入终浓度10 μmol?L^－1 ML385预处理6 h。MTT法检测各组细胞活性,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测各组细胞LDH释放率,酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测各组细胞中白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,Griess法检测各组细胞培养液中一氧化氮（NO）水平,免疫荧光法检测各组细胞中胶质原纤维酸蛋白（GFAP）和Nrf2表达情况,Western blotting法检测各组细胞中GFAP、Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与Aβ_1-42组比较,不同浓度RA+Aβ_1-42组细胞活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显降低（P<0.01）,GFAP荧光强度明显减弱, Nrf2荧光强度明显增强,细胞中GFAP蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与RA（50 μmol?L^－1）+Aβ_1-42组比较,ML385+RA+Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论 RA对Aβ_1-42诱导的星形胶质细胞炎症因子和NO释放有抑制作用,使星形胶质细胞免受损伤,该保护作用可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。     

Aβ1-42对大鼠基底前脑神经元KATP通道各亚基蛋白表达的影响

目的研究β淀粉样蛋白（Aβ_1-42）对原代培养基底前脑胆碱能神经元ATP敏感性钾通道（KATP）各亚基蛋白表达的影响,探讨阿尔茨海默病发病的细胞毒性分子机制。方法 运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定, 用2μmmol/L的Aβ_1-42对原代培养细胞进行干预, 免疫荧光双染及免疫印记观察干预后不同时间(分别为0, 24, 72h)细胞KATP通道各亚基Kir6.1、Kir6.2和SUR1、SUR2蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,Aβ_1-42作用胆碱能神经元24h后, KATP通道亚基Kir6.1及SUR2蛋白表达显著增多(P<0.05),而亚基Kir6.2及SUR1蛋白表达无明显变化。但Aβ_1-42作用时间达72h后, KATP通道各个亚基蛋白表达均显著升高(P<0.05)。 结论 Aβ_1-422作用胆碱能神经元不同的时间段（24h和72h）,细胞KATP通道各亚基蛋白表达有不同程度的增加,且增加速度不一致。可能由此改变KATP通道的结构和功能,从而影响Aβ_1-42的神经细胞毒性作用。     

脑低灌注触发脑内tau过度磷酸化和胆碱能神经损害

目的 探讨脑低灌注对脑内tau蛋白的过度磷酸化和胆碱能指标变化的影响.方法 40只SD大鼠随机分为低灌注组和假手术组,永久性阻断双侧颈总动脉制作脑低灌注模型;应用Y迷宫检测大鼠学习记忆能力,用免疫组化法检测大脑皮质和海马组织色氨酸404位点tau蛋白过度磷酸化(Pser404-Tau)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达,用考马斯亮蓝法检测海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性.结果 脑低灌注术后14 d和21 d,大鼠学习记忆能力明显减退,与假手术组相比差异有统计学意义(P＜0.01);大脑皮质和海马组织Pser404-Tau阳性细胞数较假手术组明显增加(P＜0.01);大脑皮质和海马组织ChAT阳性细胞计数较假手术组明显减少(P＜0.01);海马组织AChE活性较假手术组明显降低(P＜0.01).结论 脑低灌注后出现认知功能障碍,可能与脑缺血导致脑内tau蛋白过度磷酸化、损害胆碱能神经功能有关.