ATF3在先天性尿道下裂组织中的表达宰

目的 探讨转录激活因子3(ATF3)在尿道下裂组织中的表达及其与尿道下裂程度的关系.方法 收集28例尿道下裂组织.其中轻中度22例,重度6例,相应的正常环切包皮15例,采用免疫组化法检测ATF3的表达,分析蛋白阳性表达率.收集24例尿道下裂组织,其中轻中度8例,重度16例,对照为相应的正常环切包皮19例,采用RT-PCR法检测ATF3 mRNA的表达.结果 ATF3蛋白在尿道下裂组织中表达阳性率为85.7%(24/28),在正常包皮组织中的表达阳性率为13.3%(2/15),ATF3蛋自在尿道下裂组织中的表达阳性率明显高于在正常包皮组织中的表达.重度尿道下裂ATF3蛋白阳性率100%(6/6),高于轻中度尿道下裂中的表达,在轻中度尿道下列中的表达为81.8%(18/22).RT-PCR显示ATF3 mRNA表达在正常包皮组织、轻中度、重度尿道下裂组织中的相对累计光密度值比分别为(0.58±0.21)、(1.81±0.22)和(3.55±0.27),3组中的两两比较差异均有统计学意义.结论 ATF3在尿道下裂组织中的表达明显上调,且与尿道下裂的程度显著相关,提示ATF3可能是尿道下裂发生中的一个候选基因.     

雷帕霉素对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的:雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用,深入探讨其作用机制。方法:用雷帕霉素的不同药物浓度干预体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,CCK-8方法检测对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响;免疫组化、RT-PCR和western blot检测干预前后瘢痕疙瘩成纤维细胞中磷酸化的P70s6k、4E-BP1表达情况。结果:CCK-8检测体外培养瘢痕疙瘩成纤维的吸光度,随浓度和时间的增大而减小,各组之间差别具有统计学意义(P0.05);免疫组化(药物浓度取10nmol/L),RT-PCR和western blot对不同药物浓度(0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L)干预前后,基因表达和蛋白表达均下降,各组之间差别具有统计学意义(P0.05)。结论:雷帕霉素对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,也抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中磷酸化的P70s6k、4E-BP1表达。     

淫羊藿苷对人成骨样细胞成骨分化及OPG/RANKL 表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对人成骨样细胞(MG-63)成骨分化及OPG/RANKL表达的影响。方法用1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L、1μmol/L、10μmol/L 5种浓度的淫羊藿苷对MG-63进行干预,并同时进行成骨诱导,RT-PCR在第3天检测其细胞增殖基因MYC、CDK7表达量,在第6天检测成骨分化标志基因RUNX2、COL1A1及OPG、RANKL的表达量。结果对成骨分化相关基因,10 nmol、1μmol干预的MG-63 RUNX2基因表达量较1 nmol及10μmol的高(P0.05),与100 nmol及空白对照组没有明显差别(P0.05),10μmol的RUNX2蛋白表达量较其余各组更高;COL1A1的基因表达呈剂量依赖型,随浓度的增加而升高,10μmol的表达量较其余各组有明显升高(P0.05),其蛋白表达也更多;RANKL的表达量极低,且在各组之间均无明显差异(P0.05);OPG的表达在1μmol浓度时较100 nmol、10μmol明显增高(P0.05),与1 nmol、10 nmol及空白组没有统计学差异(P0.05);与细胞增殖相关的MYC的表达各组之间均没有差异(P0.05),而CDK7的表达均较空白组降低(P0.05)。结论 10μmol/L的淫羊藿苷能够明显促进MG-63细胞的成骨分化,但并不通过影响OPG/RANKL起效。     

低氧条件下辛伐他汀对瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的影响

目的:研究辛伐他汀在低氧条件下对瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及瘢痕生成相关因子表达的影响。方法:2%O2低氧条件下处理原代瘢痕疙瘩成纤维细胞36h为对照组,在对照组基础上添加10μmol/L辛伐他汀作为干预组,采用CCK-8法检测常氧和低氧条件下不同浓度辛伐他汀对成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting分析Caspase-3、Bax、Bcl-2、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、Ⅰ型胶原、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达水平。结果:在常氧和低氧条件下,随着辛伐他汀药物浓度增加,成纤维细胞存活率显著降低,差异有统计学意义(P0.01);当药物浓度≥10μmol/L时,低氧条件辛伐他汀对细胞增殖的抑制作用大于常氧组(P0.01)。干预组细胞凋亡率显著大于对照组(P0.05),且干预组细胞促凋亡因子Bax、Caspase-3表达增加,而凋亡抑制因子Bcl-2表达减少(P0.05)。干预组中HIF-1α、Ⅰ型胶原、CTGF蛋白表达水平显著低于对照组,TIMP-1表达水平则明显高于对照组(P0.05)。结论:辛伐他汀在低氧条件下可抑制瘢痕成纤维细胞体外增殖活性及瘢痕生成相关因子的表达,可显著促进细胞凋亡。     

熊果酸通过抑制FAK信号通路抑制成纤维细胞的增殖和迁移

目的探讨熊果酸(ursolic acid, UA)是否能够通过影响FAK信号通路影响成纤维细胞的增殖和迁移。方法将成纤维细胞分为四组,分别为对照组(0.9%NaCl)、10μmol/L UA组、20μmol/L UA组和40μmol/L UA组,分别于0、12、24、36、48 h应用MTT法检测细胞的增殖情况。使用20μmol/L和40μmol/L UA作用成纤维细胞24 h后,Transwell实验和WB实验检测UA对细胞迁移和细胞中p-FAK和FAK的调节作用。沉默成纤维细胞中的FAK后,使用20μmol/L UA作用成纤维细胞,MTT实验检测细胞的增殖情况,WB实验检测细胞中p-FAK和FAK的表达情况。结果与对照组相比,10、20μmol/L和40μmol/L UA组均可以显著抑制细胞的增殖,其差异具有统计学意义(P0.05)。20μmol/L和40μmol/L UA能够抑制成纤维细胞的迁移能力,下调成纤维细胞中p-FAK的表达。沉默FAK后,UA对成纤维细胞中p-FAK的抑制作用减弱。结论 UA可以通过抑制FAK磷酸化水平来抑制成纤维细胞的增殖和迁移。     

17-DMAG体外对结肠癌HT-29细胞增生和凋亡的影响

目的 观察17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamyein,17-DMAG)对人结肠癌HT-29细胞增生抑制及诱导其凋亡的作用.方法 用CCK-8检测17-DMAG对结肠癌HT-29细胞增生的影响;DAPI染色在倒置荧光显微镜下观察17-DMAG作用于HT-29细胞24 h后细胞核的形态;AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞检测细胞凋亡率;免疫印迹实验分析Caspase-3蛋白表达水平变化.结果 17-DMAG呈时间-剂量-依赖性抑制HT-29细胞增生.0.1μmol/L、0.25μmol/L 、0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.5μmol/L和0.5μmol/L作用于HT-29细胞24 h后,细胞增生抑制率分别为(14.36±0.95)％、(22.17±1.15)％、(28.45±1.16)％、(35.04±1.58)％、(46.85±2.44)％和(57.19±2.06)％;作用48h后,细胞增生抑制率分别为(20.80±1.17)％、(27.55±0.65)％、(33.33±1.23)％、(46.20±4.76)％、(55.45±4.47)％和(61.75±2.72)％;作用72h,细胞增生抑制率分别为(29.62±2.27)％、(39.19±1.74)％、(44.29±2.00)％、(50.66±2.17)％、(58.84±3.18)％和(70.74±2.65)％.DAPI染色倒置荧光显微镜观察0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L与2.5μmol/L的17-DMAG作用HT-29细胞24h,均可见到细胞凋亡的改变.AnnexinV-FITC双染法检测结果显示,正常对照组HT-29细胞24h的自然总凋亡率(早期+晚期)为(2.72±0.57)％,0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L 17-DMAG干预24 h后细胞总凋亡率分别为(5.38±0.46)％、(6.88±0.52)％、(10.44±0.32)％与(17.87±4.66)％,不同浓度组的细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.05).17-DMAG药物作用HT-29细胞24h,随着药物剂量的增加,cleaved Caspase-3的表达有增加趋势.结论 17-DMAG体外呈时间-剂量依赖性抑制HT-29细胞增生,诱导其通过Caspase-3途径凋亡.     

地塞米松对骨髓间充质细胞增殖及成骨、成脂分化的效应

目的 探讨不同浓度地塞米松(dexamethasone,DEX)作用不同时间对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的增殖及成骨、成脂分化的影响.方法 体外分离培养大鼠BMSCs,将状态良好的第三代细胞接种于96孔板中,随机分组为对照组(不加入DEX)及不同浓度(1 nmol/L、10 nmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L)DEX作用组,培养1、3、5、7、9 d后,分别用细胞增殖检测(CCK-8)法检测细胞增殖状况.将BMSCs接种于6孔板中,随机分为对照组及不同浓度(1 nmol/L、10 nmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L)DEX作用组,培养7、14 d后分别用荧光定量PCR方法检测成骨、成脂相关基因的表达,培养14 d后用Western blot检测成骨、成脂相关蛋白的表达.培养5 d后进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色,培养14 d后进行油红"O"染色、茜素红染色.结果 较低浓度的DEX促进BMSCs增殖,而较高浓度DEX抑制BMSCs增殖.干预早期,较低浓度的DEX促进BMSCs成骨分化而高浓度DEX抑制其成骨分化;干预晚期,各浓度DEX均促进BMSCs成骨指标的表达,但是不能诱导BMSCs钙质沉积.DEX浓度依赖性地促进BMSCs成脂相关指标基因和蛋白的表达,并诱导BMSCs细胞内脂质沉积.结论 DEX可直接影响BMSCs增殖及向成骨、成脂方向分化,这种效应存在浓度和干预时间依赖性.     

miR-21在增生性瘢痕成纤维细胞增殖及青蒿琥酯等药物作用下表达情况的实验研究

目的:研究青蒿琥酯抑制人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)增殖作用机制及miR-21所起的作用,为青蒿琥酯抑制皮肤瘢痕增生提供依据。方法:原代分离人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞,分别使用100、200、300、500μmol/L的青蒿琥酯处理24h,采用CCK8检测细胞的增值,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-21的表达情况。调控青蒿琥酯干预的HSFBs中的miR-21的表达,通过qRT-PCR和WB检测细胞中结缔组织生长因子(CTGF)以及机制金属蛋白酶1(MMP-1)的表达。结果:青蒿琥酯能抑制HSFBs的增值,并且抑制miR-21的表达。HSFBs细胞使用mimics处理,能显著降低青蒿琥酯对HSFBs的增值抑制作用,同时CTGF的表达升高,而MMP-1的表达降低。结论:青蒿琥酯可能通过调控miR-21的表达来抑制HSFBs的增值。     

青蒿琥酯抑制增生性瘢痕成纤维细胞Smad3表达的研究

目的:研究青蒿琥酯(ART)抑制增生性瘢痕成纤维细胞的果蝇抗皮肤生长因子原体3(Smad3)的表达。方法:原代培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞,以浓度为0,75,150,300,600μmol/L ART分别干预24h。荧光定量RT-PCR法检测其Smad3 mRNA的表达,Western blot法检测其Smad3蛋白表达。结果:各浓度ART作用于成纤维细胞后,荧光定量RT-PCR法检测发现Smad3 mRNA表达下调,与空白对照组比较,差异有统计学差异(P0.01)。Western blot法检测发现各干预组Smad3蛋白表达下调,与空白对照组比较,差异均有统计学差异(P0.01)。结论:ART能下调人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞Smad3的mRNA及蛋白水平,通过抑制Smad3的表达从而减少胶原合成可能是ART抑制增生性瘢痕的机制之一。     

维生素K2促进BM-MSCs成骨分化及其机制研究

目的探讨维生素K2对骨髓来源间充质干细胞(BM-MSCs)成骨分化能力的影响和机制。方法通过CCK-8活细胞计数法检测维生素K2不同浓度(1 nmol/L,10 nmol/L,100 nmol/L,1μmol/L,10μmol/L)在不同时间(24、48、72 h)对BMMSCs生长增殖的影响,运用Q-PCR检测不同浓度维生素K2对BM-MSCs成骨分化相关基因BMP-2表达水平的影响,进一步探讨维生素K2是否通过成骨信号通路Smad1/5/8、Runx2及Osterix调控BM-MSCs成骨分化。结果与对照组比较,低浓度(1 nmol/L)的维生素K2不影响BM-MSCs的生长活性,中浓度(10 nmol/L,100 nmol/L,1μmol/L)明显促进BM-MSCs的生长,高浓度(10μmol/L)明显抑制细胞的生长(P0.05)。中浓度范围的维生素K2呈剂量依赖性地促进BM-MSCs成骨过程中BMP-2 mRNA表达及钙结节的形成,且1μmol/L的维生素K2明显促进BM-MSCs的Smad1/5/8、Runx2及Osterix蛋白水平。结论维生素K2能够促进BM-MSCs的成骨分化,并且可能通过成骨信号轴BMP-2/Smad/Runx2/Osterix来调控BM-MSCs的成骨分化过程。     

Up-regulation of estrogen responsive genes in hypospadias: microarray analysis

PURPOSE: An unexplained increase in the incidence of hypospadias has been reported, and yet to our knowledge the molecular events and their regulation leading to hypospadias remain unknown, although environmental compounds capable of endocrine activity are suspected. We screened on a global scale abnormalities in gene expression in human hypospadiac tissue compared to those in nonhypospadiac tissue. Additionally, microarray analysis of tissue from a pair of fraternal twins, including 1 with and 1 without hypospadias, served as a control for genetic variability. We hypothesized that gene expression would differ between hypospadiac vs nonhypospadiac tissue and fraternal twin data would show patterns similar to those of group data on hypospadiac and nonhypospadiac tissue. MATERIALS AND METHODS: Microarray analysis was performed on tissue from patients with and without hypospadias, and from a pair of fraternal twins, including 1 with and 1 without hypospadias. Analysis incorporated the expression of 22,000 genes. RESULTS: We found significant differences in gene expression, specifically with a group of genes, including CYR61, CTGF, ATF3 and GADD45beta, known to be responsive to estrogen or to interact with estrogen receptor. CONCLUSIONS: Our findings provide support for the hypothesis that endocrine active environmental compounds may contribute to the development of hypospadias. Additionally, regulation of these genes may have a role in formation of the urethra.     

Effects of irbesartan on the expression of hypoxia-induced factor 1α and connective tissue growth factor in the kidney of unilateral ureteral ligation operation model rats

Objective To investigate the expression of hypoxia-induced factor 1α (HIF-1α)and connective tissue growth factor (CTGF) in the kidneys of unilateral ureteral ligation operation (UUO)model rats and the effect of irbesartan on the expression. Methods Thirty healthy adult male SD rats were randomly divided into 3 groups: sham operation group (n＝10), UUO group (n＝10) and irbesartan group (n＝10, UUO rats treated with irbesartan by lavage 2 days before operation). The rats in sham group and UUO group were treated with equal normal saline by lavage. Renal function, histopathological changes, urinary protein of 24 hours in rats at week 2 were measured. In situ hybridization and Western blotting were applied to measure the expression of HIF-1α and CTGF. Results At week 2, the levels of BUN, Scr and the expressions of HIF-1α and CTGF were significantly increased in UUO group compared with those in sham group (all P＜0.01). There was significant positive correlation between HIF-1α mRNA and CTGF mRNA (r＝0.697, P＜0.01). Compared with UUO group, the levels of urine protein and Scr were significantly decreased [(103.44±8.76) mg/24 h vs (278.23±26.15) mg/24 h, P＜0.01; (109.15±3.93) μmol/L vs (185.04±13.45) μmol/L P＜0.01], and renal tubulointerstitial lesion area became smaller (0.28±0.02 vs 0.51±0.05, P＜0.01) in irbesartan group. The expression of HIF-1α mRNA and protein was also significantly decreased after the treatment of irbesartan (all P＜0.01). Conclusions The expressions of HIF-1α and CTGF in UUO rats increase significantly. Irbesartan can improve renal fibrosis through down-regulating the expression of HIF-1α and CTGF.     

17β-雌二醇对体外培养人成骨细胞CTGF和PAIP-1基因表达的作用

目的　观察结缔组织生长因子 (CTGF)和多聚腺苷酸结合蛋白相互作用蛋白 1(PAIP 1)mRNA在体外培养的人成骨细胞增殖分化不同阶段的表达 ,研究 17β- 雌二醇 (E2 )对成骨细胞CTGF和PAIP 1mRNA表达的作用 ,探讨雌激素对骨组织保护作用的新机制。方法　用改良的钙 钴法ALP染色 ,vanGieson法 1型胶原染色 ,0. 1%茜素红矿化结节染色 ,半定量RT- PCR检测成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙素 (OC)和 1型胶原mRNA的表达 ,半定量RT- PCR和Northernblot方法检测成骨细胞CTGF和PAIP- 1mRNA表达。结果　半定量RT -PCR和组织化学染色的结果均表明 ,成骨细胞接种培养后 0～11d为细胞增殖阶段 ,7～ 15d为骨基质成熟阶段 ,15d后为骨基质矿化阶段 ;在成骨细胞培养的不同阶段 ,均检测到CTGF和PAIP- 1mRNA的表达 ,E2 可显著下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,呈时间剂量依赖关系 (P <0 . 0 1) ,但对PAIP 1mRNA表达无明显作用。结论　E2 时间剂量依赖性下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,但对PAIP 1mRNA表达无明显影响。     

PPARγ配体对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞结缔组织生长因子和纤溶酶原激活抑制因子1表达的影响

目的 研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）天然配体15d-PGJ2及人工合成配体吡格列酮（pioglitazone）对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）表达结缔组织生长因子（CTGF）和纤溶酶原激活抑制因子1（PAI-1）的影响。 方法 胰蛋白酶消化法分离培养RPMC,经鉴定分组：（1）0.1%、1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖作用24 h组;（2）2.5%葡萄糖作用0、6、12、24、36、48、72 h组 ;（3）0.1%、1.5%、2.5%、4.25%甘露醇作用24 h组;（4）15d-PGJ2（5、15 μmol/L）及吡格列酮（5、15 μmol/L）分别预孵育2 h,加2.5%葡萄糖再作用24 h。RT-PCR检测CTGF和PAI-1 mRNA表达;Western印迹检测PPARγ、CTGF及PAI-1 蛋白表达。 结果 正常RPMC有PPARγ表达。1.5%葡萄糖使RPMC的PPARγ蛋白表达减少（P < 0.05）,而4.25%葡萄糖作用最大（P < 0.01）;2.5%葡萄糖作用6 h,RPMC的PPARγ蛋白表达减少（P < 0.05）,而72 h达高峰（P < 0.01）。各种浓度的甘露醇作用24 h,RPMC的PPARγ蛋白表达均无明显变化（P > 0.05）。2.5%葡萄糖作用后RPMC的CTGF和PAI-1 mRNA和蛋白表达均显著增加（P < 0.01）。5 μmol/L的吡格列酮显著降低CTGF和PAI-1 mRNA和蛋白表达（均P < 0.05）,而15 μmol/L作用更强（P < 0.01）。5 μmol/L的15d-PGJ2显著降低RPMC的CTGF mRNA和蛋白表达以及PAI-1 mRNA的表达（均P < 0.05）,但不影响PAI-1蛋白表达（P > 0.05）,15 μmol/L的15d-PGJ2对CTGF和PAI-1 mRNA和蛋白表达均有抑制作用（P < 0.05或P < 0.01）。 结论 葡萄糖以时间和剂量依赖方式调节RPMC PPARγ的表达,其作用与高渗透浓度无关。PPARγ配体可显著抑制高糖诱导的CTGF和PAI-1 的表达,提示激活PPARγ可能成为防治腹膜透析相关腹膜纤维化的新途径之一。     

17β雌二醇对人皮肤成纤维细胞胶原和弹性蛋白合成的影响

目的探讨不同浓度17β雌二醇（17β-estrogen,17β-E2）在不同时间点对体外培养的人皮肤成纤维细胞（Human skin fibroblast,h SFB）合成胶原及弹性蛋白的影响。方法体外培养hSFB,分别加入不同浓度的17β-E2(10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11mol/L),继续培养24 h、48 h、72 h,在不同时间点分别提取相应的RNA,RT-PCR检测经17β-E2处理后的hSFB的Ⅰ、Ⅲ型前胶原及原弹性蛋白mRNA的表达情况。结果 RT-PCR结果显示,17β-E2处理组较空白对照组前胶原及原弹性蛋白表达水平在24 h没有变化,48 h时明显上调,72 h时呈现下降;在48 h时,17β-E2对前胶原与原弹性蛋白的影响,10^-10 mol/L组上调作用较其他浓度组明显;在48 h时,同一浓度17β-E2对前胶原蛋白的促进作用较原弹性蛋白明显,尤其是对Ⅲ型的促进作用更强。结论 17β-E2对胶原及弹性蛋白的合成有一定的促进作用,不同时间、不同浓度对其影响不同,在10^-10 mol/l、48 h时作用最强。     

P物质对肉芽组织成纤维细胞bFGF表达的调控作用及意义

目的　观察感觉神经肽P物质 (substanceP ,SP)对离体培养的肉芽组织成纤维细胞中碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)表达的特点及调控作用。　方法　采用甲醛注射的方法造成Wistar大鼠局部无菌性炎性反应 ,提取肉芽组织进行成纤维细胞原代培养 ;采用RT PCR方法检测SP对肉芽组织成纤维细胞bFGF基因表达的调控作用 ,观察时间及剂量 效应关系 ;采用Western blot方法检测bFGF蛋白表达情况 ,观察时间及剂量 -效应关系。结果　 10 -7mol/LSP可诱导成纤维细胞bFGFmRNA的表达 ,在作用后 3、6h与对照组比较 ,差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1) ;12h后可检测到bFGF蛋白表达明显增强 (P <0 .0 1) ,2 4h达高峰 ,4 8h后逐渐回落。SP在 10 -9～ 10 -5mol/L范围内可显著促进成纤维细胞bFGFmRNA表达 ,在 10 -8～ 10 -5mol/L范围可诱导bFGF蛋白的表达 ,均在 10 -7mol/L剂量点达到峰值 (P <0 .0 1)。　结论　SP可诱导肉芽组织成纤维细胞bFGF基因和蛋白的表达 ,且呈现出一定的时间和剂量特点 ,在SP调控创伤愈合的作用中具有重要意义。     

The expression of TGF-βmRNA and its biological function in rat osteoblasts with exposure to raloxifene

Objective:To investigate the effects of raloxifene and estradiol on the proliferation,differentiation and the expression of transforming growth factor-β(TGF-β)of osteoblasts in vitro.Methods:Different doses of raloxifene and estradiol were added into the medium of the second generation osteoblasts obtained from the skull of newborn SD rats.The following parameters including cell proliferation,activity of alkaline phosphatase(ALP),the levels of type Ⅰ collagen(Col-I)mRNA and TGF-β1 mRNA in different groups were measured and analyzed.Results:Raloxifene and 17-βestradiol(17-β E2)showed no significant effect on stimulating the proliferation of osteoblasts(P>0.05 vs the control).However,raloxifene could significantly improve ALP activity and Col-I mRNA expression in high consistency group(P<0.01)in dose-dependent manner.Raloxifene group in 10-8 mol/L increased the expression of TGF-β1 mRNA(vs the control,P<0.05).Estradiol significantly increased ALP activity,Col-I mRNA expression and TGF-β1 mRNA expression(P<0.05 or P<0.01 vs the control).Conclusions:Both of raloxifene and estradiol could stimulate differentiation of osteoblasts and expression of bone matrix,but showed no effect on proliferation of cultured osteoblasts.The expressions of TGF-β1 mRNA were different,which might imply their different mechanisms by means of estrogen receptor.     

蛇床子素对体外培养大鼠股骨组织吸收的抑制作用

目的:研究蛇床子素(Osthole,OS)对体外培养股骨组织(骨干和骨骺端)吸收活性的影响.方法:取(80±5)g雄性SD大鼠6只,体外分离培养大鼠股骨组织的骨干和骨骺端,随机分为对照组、雌二醇组(estradiol,E)和蛇床子素处理组.同时在股骨组织分离培养48 h后采用终浓度为1×10^-5 mol/L的蛇床子素和1×10^-8 mol/L雌二醇对体外培养骨干和骨骺端进行处理;分别在药物处理后的第3、6、9、12 天后测定抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,StrACP)活性、培养基中葡萄糖(Glucose,Glu)、乳酸(Lactic acid,La)的含量、Real-Time RT-PCR StrACP、集落刺激因子(Macrophage colony stimulating factor,MCSF)、组织激酶K(Cathepsin K,CTSK)mRNA的表达水平.结果:1×10^-5 mol/L蛇床子素组碱性磷酸酶(ALP)活性为2226,1×10^-8 mol/L雌二醇组ALP活性为2498;与对照组比较1×10^-5 mol/L蛇床子素和1×10^-8 mol/L雌二醇组在加药处理后的第6、9和12天显着抑制StrACP酶活性(P<0.05);1×10^-5 mol/L蛇床子素处理体外培养大鼠骨骺端和骨干组织的第3、6、9天后显着增加培养基中乳酸含量(P<0.05),并显着减少培养基中葡萄糖的含量(P<0.05).与对照组比较,1×10^-5 mol/L的蛇床子素处理体外培养大鼠股骨组织后的第6和9天蛇床子素能显着抑制StrACP,MCSF,CTSK mRNA的表达水平(P<0.05).结论:蛇床子素抑制体外培养大鼠股骨组织的骨骺端和骨干吸收活性同时可提高营养代谢水平.     

Connective tissue growth factor stimulates cell proliferation and collagen type I secretion through ERK1/2 signaling pathway in cultured renal myofibroblasts

Objective To examine the effects of connective tissue growth factor (CTGF) on cell proliferation and production of collagen type Ⅰin cultured rat cortical myofibroblasts，and to investigate the role of ERK1/2 siganling pathway. Methods Myofibroblasts were obtained from normal rat renal cortex. 5’-bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation assay and cell counting were used to detect cell proliferation. Western blot analysis was used to detect the levels of collagen typeⅠin the supernatant medium and the activation of ERK1/2 signaling pathway in cultured myofibroblasts. Results CTGF could induce the proliferation of myofibroblasts in a dose- and time-dependent manner. Cell number of 100 μg/L CTGF at day 4 was 1.6 folds of control group(P<0.05). Incubation with 100 μg/L CTGF also significantly increased secretion of collagen type I in the supernatant medium compared with control group (2.6±1.2 folds over control, P<0.01). ERK1/2 activation occurred as early as 5 minutes following 100 μg/L CTGF treatment, and persisted till 15 minutes later, and then declined back to the basal level after 30 minutes. Pretreatment with 50 μmol/L PD98059, a specific inhibitor of ERK1/2 pathway, abolished the effects of CTGF-induced cell proliferation (7%±5% vs 85%±7%, P<0.01) and CTGF-increased secretion of collagen type I (1.0±0.1 vs 1.6±0.3, P<0.05). Conclusion CTGF promotes cell proliferation and secretion of collagen type I through ERK1/2 pathway in primary cultured rat myofibroblasts.     

结缔组织生长因子诱导人近端肾小管上皮细胞整合素连接激酶的表达及与激酶信号途径的关系

目的探讨结缔组织生长因子（CTGF）对人近端肾小管上皮细胞系HK-2整合素连接激酶（ILK）表达的影响，以及丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）和磷脂酰肌醇3激酶（P13-K）途径对该因子表达的影响。方法用不同浓度的CTGF作用HK-2细胞24h及50μg／L的CTGF作用HK-2细胞不同时间，以实时PCR和Western印迹方法检测ILKmRNA及蛋白的表达。用信号通路特异性抑制剂预处理，观察其对CTGF的干预作用。结果CTGF呈时间及浓度依赖性诱导人近端肾小管上皮细胞ILK蛋白表达。5、20、50μg／L的CTGF可使ILK表达量分别增加为对照组的3．284、5．103、5．638倍。50μg／LCTGF使ILK的表达在6h开始升高，高峰在48h（为对照组5．740倍），MEK抑制剂PD98059和P13．K抑制剂LY294002显著降低CTGF诱导的HK-2细胞ILK基因和蛋白的表达（P均〈0．05）。p38MAPK抑制剂SB203580对CTGF诱导的ILK表达无显著影响。结论CTGF能诱导HK-2细胞ILK蛋白的表达，该作用可能与ERK1／2和P13-K信号途径激活有关。