DJ-1 过表达通过PTEN/Akt 通路促进人胃癌MGC803 细胞的增殖、迁移、侵袭与上皮间质转化

目的：探讨DJ-1基因过表达对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭与上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法：利用基因转染技术构建DJ-1基因过表达MGC803 细胞,实验分为MGC803、空载体和DJ-1过表达组。采用MTT、平板克隆形成、细胞划痕和Transwell 实验分别检测DJ-1过表达对MGC803 细胞增殖、克隆形成、迁移与侵袭的影响;qPCR和WB法检测DJ-1过表达对各组细胞DJ-1、PTEN、Akt、p-Akt、Snail、vimentin、E-cadherin、MMP-9与TIMP-3表达的影响,相差显微镜下观察MGC803细胞形态学的变化。裸鼠荷瘤实验检测DJ-1过表达对MGC803细胞移植瘤体内生长的影响。结果：成功构建DJ-1基因稳定过表达的MGC803 细胞。与MGC803 组和空载体组比较,DJ-1过表达组细胞的增殖能力与克隆形成数均显著增加（均P<0.05）,细胞迁移距离明显增加、划痕距离明显缩短（均P<0.05）,迁移与侵袭细胞数显著增多（均P<0.05）,DJ-1 mRNA与蛋白表达明显上调、 PTEN mRNA与蛋白表达下调（均P<0.05）,Akt 总蛋白各组比较无明显差异（均P>0.05）,p-Akt 蛋白表达明显上调（P<0.05）, Snail、vimentin 与MMP-9表达上调、E-cadherin 与TIMP-3表达下调（均P<0.05）。相差显微镜下见长梭形细胞数目增多,圆形与椭圆形细胞减少,异型性更为明显。荷瘤裸鼠体内实验结果表明,与MGC803 组相比较,DJ-1过表达组MGC803 细胞移植瘤生长速度明显加快、移植瘤质量显著增加（均P<0.05）。结论：DJ-1过表达可通过PTEN/Akt 通路在体内外抑制MGC803 细胞的增殖、迁移、侵袭与EMT。     

索拉非尼对食管癌EC9706细胞的生长抑制作用

目的 探讨索拉非尼（sorafenib）体外对EC9706细胞生长抑制作用及其机制。方法 qRTPCR检测sorafenib作用后MMP-2、MMP-9、TIMP1、AKT和Bcl-2 mRNA的表达;Western blot检测sorafenib作用后AKT、p-AKT、Bcl-2、MMP-2和TIMP1蛋白表达水平的变化;Hoechst/PI 染色荧光显微镜观察sorafenib诱导的细胞凋亡/坏死;细胞划痕实验观察sorafenib对EC9706细胞的迁移抑制作用。结果 与对照组相比,qRT-PCR显示sorafenib下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2 mRNA表达,上调TIMP1 mRNA 表达（P<0.05）;Western blot显示sorafenib降低MMP-2、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达水平,上调TIMP1蛋白表达水平（P<0.05）;荧光显微镜观察发现sorafenib诱导红染细胞增加（P<0.05）;细胞划痕实验发现sorafenib作用后划痕明显变宽,并且具有浓度依赖性（P<0.05）。结论 索拉非尼能够上调TIMP1表达水平、下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2表达水平,可以抑制食管鳞癌EC9706细胞的迁移、促进凋亡坏死,这些可能是其产生抗肿瘤作用的机制之一。     

LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 pcDNA-lincRNA-p21、空载质粒pcDNA转染A549细胞设为过表达组和空载组;稳定转染过表达组加入Notch信号通路特异性激活剂Jagged1蛋白,设为Notch激活剂组;不作处理细胞为对照组。MTT法、划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞增殖、迁移和侵袭情况。RT-qPCR及Western blot法检测各组Notch1、HES-1、NICD、E-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达。结果 过表达组培养24、48和72 h MTT实验A值均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组48 h细胞迁移率和穿膜细胞数及Notch1、HES-1、NICD、Vimentin mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和Notch激活剂组,Notch激活剂组高于空载组和对照组（P<0.05）。结论 LncRNA-p21基因过表达可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其调控机制可能与抑制Notch信号通路、阻断A549细胞上皮间质转化有关。     

IL-17RA基因过表达对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨白介素-17受体A（interleukin-17 receptor A,IL-17RA）对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:构建IL-17RA基因过表达慢病毒载体并感染A549细胞,采用RT-qPCR法和Western blot方法检测IL-17RA、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达。MTT实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测IL-17RA过表达对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:IL-17RA过表达A549细胞中IL-17RA mRNA和蛋白表达显著上调。IL-17RA过表达细胞的增殖活性同对照组无明显变化,但过表达组细胞的迁移距离较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）,过表达组穿膜细胞数较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）。IL-17RA高表达可明显上调MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论:成功构建IL-17RA过表达A549细胞,IL-17RA具有增强A549细胞迁移及侵袭的作用,其机制可能与上调MMP-2和MMP-9表达有关。     

RORα激动剂SR1078抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭的作用

摘 要：［目的］ 观察RORα激动剂SR1078对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移与侵袭的影响。［方法］ 实验分为10μmol/L SR1078处理MGC803细胞组与MGC803细胞组。Western blot 与免疫荧光检测RORα表达,MTT检测细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭。［结果］ Western blot检测显示,10μmol/L SR1078处理组较对照组RORα蛋白明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光显示,SR1078处理MGC803细胞RORα表达增强。MTT检测显示,10μmol/L SR1078作用MGC803细胞24h、48h、72h、96h后,增殖抑制率分别为37.2%、46.9%、52.7%、68.6%,SR1078可呈时间依赖性抑制MGC803细胞增殖 (P<0.05)。划痕实验显示,10μmol/L SR1078处理组迁移距离(5.74±0.078μm)明显低于对照组 (9.37±0.098μm),差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移实验显示,10μmol/L SR1078处理组迁移细胞(80±1.155个)较对照组(103±1.155个)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。侵袭实验显示,10μmol/L SR1078处理组细胞穿膜细胞(19.67±1.764个)较MGC803细胞（40.67±1.202个）明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。［结论］SR1078可通过上调RORα抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭。     

芦荟苷对食管癌细胞系KESY70增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨芦荟苷对食管癌细胞系KESY70增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 用不同浓度的芦荟苷处理食管癌细胞系KESY70。食管癌KESY70细胞随机分为5组：未处理组（KESY70）、对照组（DMSO）和芦荟苷（10、40、80 μmol/L）组。CCK-8检测细胞活力和增殖能力。流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,蛋白印记法分析PCNA、Cleaved caspase-3和MMP-9的表达。结果 与DMSO组相比,40、80和120 μmol/L芦荟苷处理组细胞活力明显减弱（P<0.01）。40和80μmol/L的芦荟苷处理3 d后,芦荟苷组细胞增殖能力明显降低（P<0.05）,芦荟苷组的细胞凋亡率明显高于DMSO组（P<0.05）,侵袭能力受到明显抑制（P<0.05）,PCNA、MMP-9蛋白的表达明显下降（P<0.05）,Cleaved caspase-3表达明显升高（P<0.05）。结论 芦荟苷可抑制食管癌细胞系KESY70的增殖和侵袭,促进细胞凋亡。     

沉默ANLN基因对胃癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响

目的 探讨肌动蛋白结合蛋白ANLN在体外对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞株、胃黏膜细胞株中ANLN的表达情况和验证siRNA对ANLN基因的敲减情况。划痕实验和Transwell检测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。CCK-8实验、细胞荧光染色和流式细胞术检测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞增殖和凋亡的变化。结果 胃癌细胞株SGC-7901/MGC-803中的ANLN的mRNA和蛋白表达显著高于正常胃黏膜细胞株GES-1（P<0.001）。siRNA干扰后RT-PCR和Western blot结果证明转染成功,转染组的mRNA和蛋白表达量与对照组差异有统计学意义（P<0.05）。下调ANLN能够显著降低胃癌细胞的迁移、侵袭、增殖和凋亡能力。结论 下调ANLN的表达可以显著降低胃癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡能力。     

过表达RSK4m1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和侵袭的影响

目的 探讨过表达p90核糖体S6蛋白激酶4变异体1（ribosomal protein S6 kinase 4 variant 1,RSK4m1）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长和侵袭的影响。方法 通过负载RSK4m1慢病毒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中稳定过表达RSK4m1。以MDA-MB-231亲本细胞为空白对照组（Con组）、转染空载病毒的MDA-MB-231细胞为阴性对照组（Mock组）、转染过表达RSK4m1的MDA-MB-231细胞为实验组（OE组）。采用qRT-PCR和Westen Blot法检测各组RSK4m1 mRNA及蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果 OE组中RSK4m1 mRNA及蛋白的表达量均明显高于Con组及Mock组（P<0.05）。CCK-8实验显示,24 h、48 h、72 h和96 h时OE组细胞增殖均低于Mock组和Con组（P<0.05）;细胞划痕实验显示,细胞培养24 h后,OE组细胞迁移率显著低于Con组和Mock组［（14.53±0.64）% vs （25.67±2.44）%、（24.47±2.25）%,P<0.05］。Transwell小室侵袭实验显示,OE组细胞侵袭能力显著低于Con组和Mock组［（35.00±5.57）个 vs （66.70±5.86）个、（58.67±4.16）个,P<0.05］。结论 过表达RSK4m1可显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭能力,为RSK4m1可能成为乳腺癌的治疗新靶点提供了实验依据。     

布洛芬通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控肝癌QGY-7703细胞迁移和侵袭的机制

目的 探讨布洛芬通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对肝癌QGY-7703细胞迁移和侵袭的调控机制。方法 取对数生长期人肝癌细胞QGY-7703,采用随机法分为两组,对照组（C组）：加入等容量的RPMI l640培养液;实验组（B组）：按照不同布洛芬浓度分为三个亚组：B1组250 μmol/L,B2组500 μmol/L、B3组1 000 μmol/L。各组分别作用24、48和72 h后,利用Transwell小室检测各组细胞的侵袭和迁移能力。各组分别作用48 h后,采用Real-time PCR检测各组细胞中PI3K、PTEN和MMP-9基因表达的变化;用Western blot检测各组细胞中PTEN、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）和MMP-9蛋白表达情况。结果 与C组比较,B1、B2、B3三组细胞迁移和侵袭能力均降低,具有浓度和时间的依赖性,差异有统计学意义（P<0.01）;与C组比较,B1、B2、B3三组细胞PTEN mRNA和PTEN蛋白表达明显升高,且随着布洛芬作用浓度的增加而升高,具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）;与C组比较,B1、B2、B3三组细胞PI3K mRNA、Akt和mTOR蛋白的表达量差异均无统计学意义（P>0.05）;与C组比较,B1、B2、B3三组细胞MMP-9 mRNA和蛋白的表达以及p-Akt、p-mTOR蛋白的表达均显著下降,且随着布洛芬作用浓度的增加而降低,具有良好的浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 布洛芬可以抑制QGY-7703细胞的迁移和侵袭能力,与布洛芬对细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控有关。     

沉默B7-H3基因表达对人肝癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究靶向沉默B7-H3基因表达对HepG2细胞侵袭能力的影响及可能机制。方法 设计针对B7-H3基因的shRNA沉默质粒,转染HepG2细胞,下调B7-H3的表达。划痕修复实验检测转染前后HepG2细胞移行能力的变化,Transwell实验检测基因沉默对细胞侵袭能力的影响,MST-1法和ELISA凋亡试剂盒分别检测细胞增殖和凋亡水平变化。通过Western blot实验和明胶酶谱实验检测侵袭相关分子MMP-2、MMP-9的表达和活性变化。结果 成功构建B7-H3 shRNA沉默质粒并转染HepG2细胞。与对照质粒转染组和未转染组比较,沉默B7-H3基因表达后,B7-H3 shRNA转染组HepG2细胞的移行（24 h: P=0.001; 48 h: P<0.001; 72 h: P<0.001）和侵袭（P<0.001）能力受到显著抑制,细胞的增殖和凋亡水平没有明显变化（P>0.05）。MMP-2、MMP-9的蛋白表达（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P=0.007）和活性（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P<0.001）均显著下降。结论 通过B7-H3 shRNA沉默质粒靶向沉默B7-H3的基因表达能抑制HepG2细胞的侵袭能力,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性有关。     

TAGLN基因过表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 研究TAGLN基因过表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力和侵袭能力的影响及其分子机制.方法 对MDA-MB-231细胞采用慢病毒表达系统构建TAGLN基因稳定过表达细胞株,将MDA-MB-231细胞正常培养设为空白对照组,空载体慢病毒包装感染MDA-MB-231细胞后获得的稳定转染细胞株设为空载体对照组.Real time PCR和Western blot检测TAGLN mRNA和蛋白表达,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测TAGLN基因过表达后基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9蛋白表达变化.结果 MDA-MB-231细胞感染TAGLN基因过表达慢病毒载体后,细胞中TAGLN mRNA表达和蛋白表达升高(均P＜0.01),成功构建TAGLN基因过表达稳定细胞株(231-TAGLN).231-TAGLN细胞的体外迁移能力和侵袭能力下降,与空载体对照组和空白对照组细胞比较,差异均具有统计学意义(均P＜0.01),同时伴有MMP-2和MMP-9表达水平降低(均P＜0.01).结论 TAGLN基因过表达可以抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,MMP-2和MMP-9基因表达下降可能参与这一过程.     

ELMOD2对胃癌细胞MGC803 恶性生物学行为的影响

［摘要］ 目的：探讨ELMOD2 过表达对胃癌细胞MGC803 恶性生物学行为的影响,并初步研究其相关的分子机制。方法：将GV141-ELMOD2 表达载体转染人胃癌MGC803 细胞,qPCR 及WB实验检测MGC803 细胞中ELMOD2 mRNA和蛋白的表达,CCK-8 法检测MGC803 细胞增殖能力,流式细胞术检测MGC803 细胞凋亡情况,Transwell 法检测MGC803 细胞迁移能力,WB实验检测细胞中PCNA、BAX 和Bcl-2 以及Vimentin 蛋白的表达。结果：ELMOD2 表达载体转染后,MGC803 细胞中ELMOD2 mRNA和蛋白表达水平均显著提高（P<0.05）。ELMOD2 过表达可使MGC803 细胞增殖、迁移能力显著提高,凋亡率显著降低（P<0.05 或P<0.01）;细胞中PCNA、Vimentin、Bcl-2 蛋白水平增高,BAX蛋白水平降低（P<0.05 或P<0.01）。结论：ELMOD2 过表达可促进MGC803 细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡,上述效应可能部分通过提高PCNA、Vimentin、Bcl-2 蛋白水平及降低BAX蛋白水平实现。     

腺病毒介导p55γ基因N末端的过表达对胃癌细胞增殖和迁移的抑制

背景与目的:通过腺病毒介导,观察PI3K P55γ调节亚基N末端对胃癌细胞增殖和迁移的影响。材料与方法:在腺病毒E1基因转化的人胚肾细胞HEK293中扩增复制缺陷型重组腺病毒Ad-N24-GFP以及空载体病毒Ad-GFP,分别用Ad-GFP和Ad-N24-GFP感染MGC803细胞后,通过荧光显微镜观察病毒对肿瘤细胞的感染效率,计数活细胞,制作细胞生长曲线,观察Ad-N24-GFP对细胞生长的影响;并采用流式细胞术和细胞迁移实验分别检测Ad-N24-GFP对MGC803细胞周期和细胞运动迁移能力的影响。结果:重组腺病毒经过感染HEK293细胞后大量扩增,在病毒感染复数(MOI)为100时病毒对细胞的感染效率最高。与感染空载体的细胞相比,感染Ad-N24-GFP的MGC803细胞生长速度减慢、细胞倍增时间延长;Ad-N24-GFP的过表达使MGC803细胞G0/G1期百分率由(68.7±5)%上升到(84.2±5.4)%,差异具有统计学意义(P<0.05);感染Ad-N24-GFP的MGC803细胞其细胞迁移能力明显降低,与空载体组细胞相比,差异亦具有统计学意义(P<0.05)。结论:腺病毒介导p55γN末端24肽的过表达能够显著抑制胃癌MGC803细胞的增殖和迁移,其在胃癌的基因治疗上可能具有潜在的应用前景。     

piR-9994对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制

目的 探讨piR-9994对胃癌细胞生物学行为的影响及可能机制。方法 qRT-PCR检测piR-9994在胃癌细胞系（MGC803和AGS）和正常胃上皮细胞（GES-1）中的表达情况;构建过表达和敲低piR-9994的MGC803胃癌细胞株,MTT、克隆形成实验检测piR-9994表达变化对细胞增殖能力的影响,划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。qRT-PCR和Western blot检测细胞增殖和EMT相关基因表达。结果 piR-9994在胃癌细胞MGC803中表达水平显著高于正常人胃黏膜上皮细胞GES-1（P<0.05）。piR-9994过表达促进胃癌细胞增殖、侵袭和转移,敲低则作用相反。piR-9994表达与细胞周期密切相关,特别是S期。piR-9994过表达促进增殖相关基因PCNA、CCND1、Bcl-2表达,抑制凋亡基因c-PARP表达,促进EMT相关基因N-cadherin、MMP7、Twist和Vimentin表达及抑制E-cadherin表达;敲低则作用相反。结论 piR-9994异常表达影响胃癌细胞增殖、侵袭、转移及EMT进程。piR-9994可能是胃癌新的标志物和治疗靶点。     

LINC00312 inhibits the migration and invasion of bladder cancer cells by targeting miR-197-3p

To investigate the influence of the long non-coding RNA LINC00312 on bladder cancer (BC) cell invasion and metastasis by targeting miR-197-3p. BC and corresponding adjacent tissues were collected. LINC00312 and miR-197-3p were measured, and their correlation was detected through quantitative real-time PCR (qRT-PCR). BC cell line T24 was transfected and grouped (five groups) according to different transfection conditions. A scratch test was applied to analyze cell migration, and a Transwell assay was used to test cell invasion ability. Western blotting was to measure matrix metalloproteinase (MMP)-2, MMP-9, and the tissue inhibitor of metalloproteinase 2 (TIMP2) protein levels. qRT-PCR indicated that LINC00312 expression was lower but miR-197-3p expression was higher in BC tissues compared with adjacent tissues; LINC00312 was negatively correlated with miR-197-3p. The migration test revealed that the downregulation of miR-197-3p and overexpression of LINC00312 inhibited cell migration and invasion abilities, while the overexpression of miR-197-3p and the upregulation of LINC00312 promoted cell migration and invasion. BC cells with downregulated miR-197-3p or upregulated LINC00312 had low MMP-2 and MMP-9 levels but high TIMP2. LINC00312 inhibited BC cell invasion and metastasis through mediating miR-197-3p.     

阿帕替尼通过抑制HMGA2增强顺铂对胃癌的抗瘤作用

目的：探讨阿帕替尼（apatinib,APA）联合顺铂（cisplatin,DDP）对胃癌（gastric carcinoma,GC）细胞增殖、侵袭和迁移 能力的影响及其分子机制。方法：收集2016年1月到2019年6月武威市人民医院手术切除的50例GC患者的癌及癌旁组织标 本,以及GC细胞系MGC803和SGC7901, 用qPCR检测组织中HMGA2和细胞中增殖、迁移及侵袭相关mRNA的表达水平。采 用脂质体转染技术, 将pcHMGA2转染MGC803和SGC7901细胞,经分别用不同浓度的DDP和APA处理,分为NC、pcHMGA2、 pcHMGA2+DDP及pcHMGA2+DDP+APA组, 用Western blotting检测GC细胞中HMGA2蛋白的表达水平,MTT、Transwell小室 法分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：HMGA2 mRNA在GC组织中表达水平高于癌旁组织（P<0.05）,且高表达组 GC患者的生存率显著降低（P<0.01）。DDP 显著抑制 MGC803 和 SGC7901 细胞的增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.01）; DDP+APA组MGC803和SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著低于DDP组（均P<0.01）;APA显著增强DDP对GC细胞 HMGA2表达的抑制作用（均P<0.01）;APA通过下调HMGA2表达增强DDP对GC的抗肿瘤性。结论：APA能促进DDP对GC的 抗瘤作用,其分子机制可能是增强DDP对HMGA2表达的抑制作用有关。