猫年龄相关的视网膜γ-氨基丁酸和神经丝蛋白表达

目的：对老年猫与青年猫视网膜的变化进行比较研究。方法：运用免疫组织化学ABC法显示卜氨基丁酸（GABA）、神经丝蛋白（NF）阳性结构。显微镜下观察GABA、NF阳性反应,并计阳性细胞数。结果：老年猫、青年猫GABA免疫反应阳性结构均见于无长突细胞、内网状层、神经节细胞和神经纤维层。老年猫NF阳性结构见于水平细胞、无长突细胞以及神经节细胞。青年猫无长突细胞未见阳性反应。与青年猫相比较,老年猫视网膜中GABA、NF阳性反应强于青年猫,免疫反应阳性细胞显著增加。结论：老年猫视网膜在衰老过程中呈现年龄相关的结构改变,这可能是造成视觉功能衰退的重要因素之一。     

脑红蛋白在绵羊视网膜中的分布

目的:探讨脑红蛋白在绵羊视网膜的分布特征。方法:利用免疫组织化学显色SP法,观察脑红蛋白在健康成年绵羊视网膜中的分布情况。结果:脑红蛋白在绵羊视网膜的视神经纤维层、内网状层、外网状层和光感受器内节段中有强阳性表达,在视网膜的内核层和节细胞层有弱阳性表达,在视网膜外核层、光感受器外节段和色素上皮层中未见有阳性表达,内界膜、外界膜和视神经中亦有脑红蛋白阳性表达。绵羊视网膜脑红蛋白阳性表达的细胞类型主要有节细胞、双极细胞和光感受器细胞,其中节细胞的阳性表达定位于细胞质,胞核中未见表达。结论;除外核层、光感受器外节段和色素上皮层外,脑红蛋白在绵羊视网膜其他各层中均有表达,提示脑红蛋白在维持视网膜中氧平衡状态时发挥重要作用。     

P>猫皮层第一体感区髓质胶质反应的年龄相关性变化/P>

目的 比较青年猫与老年猫大脑皮层第一躯体感觉区(SI区)髓质中胶质细胞和S100蛋白免疫阳性细胞和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫阳性细胞的年龄相关性形态学变化, 探讨该变化的原因及其在老年性躯体感觉功能衰退中的意义.方法 选青年猫与老年猫各4只,用改良的Holzer结晶紫染色显示SI区髓质中所有胶质细胞,并用成年动物Golgi法显示其形态;免疫组织化学法(SABC法)显示S100蛋白免疫阳性(S100-IR)细胞及GFAP免疫阳性(GFAP-IR)细胞.光镜下观察细胞形态,用BI-2000医学图像分析系统计数SI区髓质中的胶质细胞、S100-IR细胞及GFAP-IR细胞的数量,测定S100及GFAP表达的平均吸光度值和阳性细胞面积比.结果 与青年猫相比,老年猫SI区髓质中胶质细胞、S100-IR细胞及GFAP-IR细胞密度显著增加(P<0.01),S100-IR细胞及GFAP-IR细胞占胶质细胞的比例均增加,免疫组织化学染色平均吸光度值及阳性细胞面积比也显著增大(P<0.01);星形胶质细胞胞体膨大,突起稠密、粗大.结论 衰老过程中,猫SI区髓质中存在明显的反应性胶质化, 其中星形胶质细胞对衰老更为敏感.     

碱性成纤维细胞生长因子对谷氨酸毒性损伤豚鼠视网膜内突触小泡蛋白表达的影响

目的:探讨过量谷氨酸毒性损伤豚鼠视网膜内突触小泡蛋白(SYP)的表达及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其表达的影响。方法:豚鼠随机分成谷氨酸钠损伤组、对照组和bFGF治疗组。采用免疫组织化学方法和图像分析技术,对各组豚鼠视网膜内SYP免疫反应产物的表达进行检测。结果:对照组豚鼠视网膜内SYP的表达为强阳性,主要定位于外网状层和内网状层,损伤组视网膜相应区域内阳性反应产物的光密度值明显低于对照组,bFGF治疗后SYP的阳性表达明显高于损伤组,且与对照组相比,无显著性差异。结论:bFGF可抑制过量谷氨酸钠诱发的视网膜内SYP的表达减少,上调SYP的表达,对视神经损伤有显著地促功能修复作用。     

猫小脑皮质结构的年龄相关性变化

目的：对青年和老年猫小脑皮质结构的年龄性变化进行比较。方法：动用Nissl染色显示小脑皮质神经元,免疫组织化学方法显示胶质纤维酸性蛋白免疫阳性（GFAP-IR）星形胶质细胞和神经丝蛋白免疫阳性（NF-IR）结构。显微镜下观察测量小脑皮质厚度和细胞密度。结果：与青年猫比较,老年猫小脑皮质总厚度及分子层厚度显著下降,颗粒层厚度明显增加,各层神经元密度明显降低;颗粒层中GFAP-IR细胞密度显著增加,阳性反应增强;老年猫蒲肯野细胞（PC）NF免疫阳性树突分支明显减少。结论：衰老过程中小脑皮质神经元丢失和PC中NF阳性树突减少,可能会导致老年小脑皮质接受和整合信息的功能降低,而星形胶质细胞活动增强对皮质神经元可能起保护作用。     

RCS大鼠感光细胞凋亡与 Fas蛋白表达

为了探讨遗传性视网膜变性时感光细胞凋亡及其基因调控机制 ,本研究对出生后 9、15、2 0、2 5、3 0、3 5、40、60 d的 RCS大鼠及同龄 SD大鼠各 4只的视网膜进行了 TU NEL 凋亡检测及 Fas蛋白免疫组织化学反应。结果表明 ,出生后 2 5～ 40 d,RCS大鼠视网膜外核层可见 TUNEL阳性的感光细胞核 ,TUNEL阳性细胞数到 3 5 d达高峰 ( P<0 .0 5 )。Fas蛋白免疫组织化学检测发现 ,RCS大鼠视网膜内核层在 15～ 40 d可见 Fas免疫阳性细胞 ,阳性细胞数以 2 5 d为最多 ( P<0 .0 5 ) ;外核层在 2 5 d也可见Fas蛋白免疫阳性反应 ,一直持续到 40 d;节细胞层在 15～ 40 d可见 Fas蛋白表达。到 60 d时则各层又都不见明显的 Fas蛋白阳性反应。本研究结果提示 ,在 RCS大鼠视网膜变性过程中 ,感光细胞发生凋亡 ,Fas蛋白高表达可能与感光细胞的凋亡有关     

兔视网膜中P物质样免疫反应神经元的发育

本实验用免疫细胞化学ABC法,研究了成年、新生和生后兔视网膜中P物质(SP)样免疫反应神经元的定位和发育。结果表明,成年兔视网膜SP样免疫反应细胞胞体位于内核层和节细胞层,胞突分布在内网层的第1、3、5亚层,偶见于视神经纤维层。细胞密度以视纹最高,从视纹向背腹视网膜边缘区密度渐变小。在新生兔视网膜已有SP阳性胞体和胞突出现,胞体主要位于节细胞层,突起在内网层第5亚层,但未形成连续网层,在第1亚层很少,第3亚层未见SP阳性突起。SP阳性细胞密度从新生到生后第4天增加,生后第6天到第12天细胞密度渐下降。生后第12天SP阳性胞体主要位于内核层。生后第20天,SP阳性细胞的形态、密度与分布已接近成年水平。上述结果提示,在兔视网膜中SP样免疫反应胞体和突起在生前已出现,生后继续发育,到生后20天后其形态发育已接近成熟。     

大鼠生后中枢神经系统S100B和胶质纤维酸性蛋白表达的变化

目的 探讨SD大鼠生后中枢神经系统发育过程中S100B和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化.方法 24只雄性SD大鼠分为生后7d、14d、21d和成年4组,用免疫组织化学方法对脑、脊髓切片进行S100B、GFAP抗体染色,观察不同时间点不同部位中两种阳性细胞平均数.结果 生后7d到成年,前额皮质、海马、纹状体、黑质和脊髓S100B阳性标记的密度和数量逐渐减少,生后2～3周时渐趋于稳定;脑内GFAP阳性星形胶质细胞(AST)随年龄增大逐渐增多,突起增粗增长,生后21d GFAP阳性细胞数量已接近成年;相反,脊髓GFAP阳性标记数则随年龄增长呈现由多到少的趋势;海马CAl区生后各年龄段GFAP和S100B免疫荧光双标显示,生后1周至成年S100B阳性细胞的数量明显减少,尤以分子层明显;随年龄增长,双标阳性细胞的比例逐渐增高,多集中分布于锥体细胞层和多形层.结论 大鼠中枢神经系统中S100B和GFAP两种星形胶质细胞蛋白存在不同的表达模式;同时S100B和GFAP蛋白的表达在发育过程中可能受不同机制的调节,并可能代表星形胶质细胞的不同亚型.     

泛素蛋白酶系统在四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠视网膜中的表达

目的:建立泛素蛋白酶系统(UPS)在正常和8周糖尿病大鼠视网膜的表达图谱,探讨其在糖尿病视网膜病变(DR)发生发展中可能的分子机制。方法:在限制片段差异显示PCR(RFDD-PCR)技术建立正常和8周糖尿病大鼠视网膜基因表达谱的基础上,对差异片段进行生物信息学分析,筛选UPS DR相关基因,并以免疫组织化学、半定量RT-PCR技术进行验证。结果:RFDD-PCR结果显示,泛素蛋白酶系统DR相关基因UBS3A、PSMD8和PSMD11在糖尿病组表达上调。RT-PCR结果显示,糖尿病组UBS3A表达比正常组明显增高,PSMD8和PSMD11则仅在糖尿病组中表达。免疫组织化学结果显示,正常组UBE3A阳性免疫反应物见于内丛状层,外丛状层和锥、杆体细胞层,PSMD8和PSMD11未见阳性细胞;糖尿病组UBE3A、PSMD8和PSMD11阳性细胞明显增多,见于节细胞层、内核层和外核层。结论:UPS与DR发生发展有关。     

ENK与CaBPs在PPE-GFP转基因小鼠视网膜细胞中的共存

目的:以PPE-GFP转基因小鼠为研究工具,观察绿色荧光蛋白(GFP)阳性的脑啡肽(ENK)能神经元与钙结合蛋白D28K(CB)、钙视网膜蛋白(CR)和小白蛋白(PV)等钙结合蛋白(CaBPs)成员在视网膜的分布及共存情况。方法:利用免疫组织化学和免疫荧光双标染色的方法。结果:GFP阳性的ENK能细胞主要分布在视网膜内核层内缘,少量分布在节细胞层。所有的GFP阳性细胞均与神经元标志物NSE共存,但不与星形胶质细胞标志物GFAP共存。GFP与CB、CR和PV均有部分共存,其中GFP/CB共存神经元占GFP阳性细胞的8.65%,占CB阳性细胞的5.84%;GFP/CR共存神经元占GFP阳性细胞的18.18%,占CR阳性细胞的14.28%,且共存细胞仅见于内核层;GFP/PV共存细胞占GFP阳性细胞的68.75%,占PV阳性细胞的91.67%,共存细胞主要位于内核层,少量见于节细胞层。结论:ENK能神经元在视网膜内具有板层特异性的分布特点和与钙结合蛋白成员有不同的共存模式,上述结果为深入研究小鼠视网膜ENK能神经元的功能意义提供了形态学依据。     

蛋白质与蛋白质相互作用的研究进展

通过研究蛋白质与蛋白质的相互作用，人们能更好地注释蛋白质的功能，解码生命现象，特别是在新药物的设计上具有极大的实用价值，这是后基因组研究的重要任务之一。蛋白质结构的剖析、计算机分子模拟技术的发展和分子生物学技术更新为研究蛋白质间相互作用创造了各种有利条件。     

TSHR蛋白表达质粒的构建和TSHR蛋白的表达

目的：为获得足量的ＴＳＨＲ蛋白及建立Ｇｒａｖｅｓ’病的动物模型。方法：将构建于ｐＣＲ＾ＴＭ３中的ＴＳＨＲ ｃＤＮＡ经限制性内切酶处理后,重新构建于表达型载体ＰｉｎＰｏｉｎｔ Ｘ质粒中,经酶切分析和ＰＣＲ检测,并在Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９中表达,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｉｎｇ免疫印迹法检测其免疫活性．结果：证明ＴＳＨＲ ｃＤＡ基因正确地重组于ＰｉｎＰｏｉｎｔ Ｘ中,并在Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９中表达     

腺苷酸活化蛋白激酶与骨骼肌蛋白质降解*☆

背景：机体运动时骨骼肌收缩,ATP被大量消耗,产生大量腺苷一磷酸,导致腺苷酸活化蛋白激酶的激活。 目的：综述不同运动过程中腺苷酸活化蛋白激酶活性的变化,以及腺苷酸活化蛋白激酶对骨骼肌蛋白质降解的研究成果。 方法：检索中国期刊网、维普期刊数据库、www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed和http://highwire.stanford.edu/网站与腺苷酸活化蛋白激酶、运动、蛋白质降解研究相关的文章。并对腺苷酸活化蛋白激酶的结构与作用,不同运动过程中腺苷酸活化蛋白激酶活性的变化,以及腺苷酸活化蛋白激酶升高对骨骼肌蛋白质降解的内容进行分析综述。 结果与结论：共纳入相关文献35篇。本文综述了腺苷酸活化蛋白激酶的结构、作用的研究进展;在抗阻运动和中到大强度的周期运动中,腺苷酸活化蛋白激酶活性都可能升高,而在小强度周期运动过程中腺苷酸活化蛋白激酶活性可能不升高;腺苷酸活化蛋白激酶的活化可能对骨骼肌蛋白质的降解有促进作用。     

C-reactive protein

Over the past few years substantial insight was gained into the biol ogy and biochemistry of human C-reactive protein (CRP). X-ray crystallography in conjunction with mutational analyses, generated the three-dimensional structure of the protein and indicated the topology and structure of ligand-binding sites. Using human CRP transgenic mice infected withStreptococcus pneumoniae, we obtained data that clearly established CRP as an important host defense molecule. Studies using the same mice revealed a previ ously unknown testosterone-dependence of constitutive expression of human CRP. In this article we provide a brief overview of these recent findings.     

Global analysis of protein function using protein microarrays

Protein microarrays containing thousands of proteins arrayed at high density can be prepared and probed for a wide variety of activities, thereby allowing the large scale analysis of many proteins simultaneously. In addition to identifying the activities of many previously uncharacterized proteins, protein microarrays can reveal new activities of well-characterized proteins, thus providing new insights about the functions of these proteins. Below, we describe the construction and use of protein microarrays and their applications using yeast as a model system.     

Tamm-Horsfall protein

Human Tamm-Horsfall glycoprotein, the major urinary protein, is a glycosyl-phosphatidyl-inositol (GPI) - anchored membrane protein which mainly resides at the luminal face of cells of the thick ascending limb of Henle's loop (TAL) and early distal convoluted tubules of nephron. Tamm-Horsfall protein contains exclusively N-linked glycans, mainly of polyantennary type largely sialylated and fucosylated, but also high-mannose glycans. Only a portion of the Tamm-Horsfall protein is released as soluble protein by the action of proteases and in a minor amount by a cell-associated GPI-specific phospholipase. The physiological function of Tamm-Horsfall glycoprotein has not been clarified to date. Since the urinary Tamm-Horsfall protein has a high gel-forming tendency, it has been postulated that it takes part in the water impermeability of TAL. It is also proposed that the Tamm-Horsfall protein plays a protective role towards pyelonephritogenic pathogens such as Escherichia coli. The Tamm-Horsfall protein may inhibit the colonization of these pathogens in the renal mucosa in that the soluble form competes with that exposed at the plasma membrane. Recently, urinary Tamm-Horsfall protein has been implicated in tubulointerstitial nephritis.     

Phosphorylation of hepatitis C virus core protein by protein kinase A and protein kinase C

Hepatitis C virus (HCV) core protein can form capsid-like particles and is believed to be the viral capsid protein. Besides its structural functions, this protein is also known to possess multiple regulatory functions. In this article, we have studied the possible phosphorylation of HCV core protein in two different human liver-derived cell lines Huh7 and HepG2. Our results indicated that the HCV core protein could be phosphorylated, albeit inefficiently, independent of its downstream E1 protein in these two cell lines. Two of the basal phosphorylation sites were identified to be serine-53 and serine-116. The phosphorylation of the core protein could be enhanced by the PKC activator phorbol 12-myristic 13-acetate (PMA), and the PKA activator forskolin, and these enhancements could be abolished by the respective inhibitors of PKC and PKA, indicating that the core protein is a substrate of these two kinases. While both serine-53 and serine-116 served as the PKC phosphorylation sites, serine-116 appeared to be the major PKA phosphorylation site. Further analyses using serine-to-alanine mutation to mimic dephosphorylation and serine-to-aspartic acid mutation to mimic phosphorylation revealed that the conversion of serine-116 to aspartic acid led to an enhanced nuclear localization of the core protein. This observation indicates that one function of phosphorylation may be to regulate the nuclear localization of the core protein.     

Application to immunoassays of the fusion protein between protein ZZ and enhanced green fluorescent protein

Enhanced green fluorescent protein (EGFP) from Aequorea victoria was fused to the C terminal region of protein ZZ, an artificial synthetic IgG Fc fragment binding protein derived from tandem repeats of the B domain of protein A. The ZZ-EGFP fusion protein was expressed in Escherichia coli with a His(6) tag and purified in high yield by one-step Ni(2+) chelating affinity chromatography. It was then used in the immunoblot analysis of GST and TNFalpha as well as in immunofluorescent assays of 293T cells transfected with IRF3, an interferon regulatory factor which localized in cytoplasm without virus infection. The fusion protein also performed effectively in FACS analysis of surface integrin beta3 subunit on 293 T cells. The chimeric protein bound various antibodies from different animal sources, directed against a variety of proteins. Thus, ZZ-EGFP showed broad promise in potential immunological applications.