一氧化氮与老年性聋研究进展

老年性聋是指因听觉器官衰老蜕变出现的双耳对称的、缓慢进行性的听力减退，属生理现象。病变不仅与耳蜗毛细胞、听神经纤维的改变有关，而且涉及到线粒体DNA基因改变及耳蜗微循环障碍等。随着对老年性聋发病机制的深入研究，人们认为一氧化氮（NO）在老年性聋发病机制中起一定的作用。     

褪黑素对豚鼠老年性聋的拮抗作用

目的:观察褪黑素对豚鼠老年性聋的拮抗作用.方法:80只豚鼠随机分为4组:正常对照组(A组),老年性聋模型组(B组),褪黑素治疗的老年性聋模型组(C组0.3 mg/(kg·d和D组1.0 mg/(kg·d).以腹腔注射D-半乳糖制作老年性聋模型,4周后测量各组ABR、耳蜗组织谷胱甘搿-过氧化物酶(GSH-Px)含量,耳蜗铺片观察毛细胞变化情况.结果:与A组比较,B、C组ABR阈值、Ⅰ波潜伏期、Ⅲ波潜伏期及Ⅰ、Ⅲ波间期均升高,GSH-Px含量降低(P＜0.05或0.01).D组上述各指标与A组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).耳蜗铺片结果,B组耳蜗基底膜各周外毛细胞排列紊乱,大小不一,胞内颗粒染色变浅,可见细胞点状缺失;A、D组外毛细胞排列整齐,无缺失;C组介于B、D组之间.结论:褪黑素对老年性聋豚鼠听力及耳蜗毛细胞有保护作用,且与剂量有关.     

老年大鼠耳蜗螺旋神经节Caspase-3、Calretinin的表达

目的探讨老年性聋的发病机制。方法建立D-半乳糖衰老大鼠模型,获取老年大鼠耳蜗标本并以正常青年大鼠作对照,用免疫组化SP法检测老年大鼠和青年大鼠耳蜗螺旋神经节Caspase-3,Calretinin的表达。结果老年大鼠耳蜗螺旋神经节Caspase-3,Calretinin的积分光密度明显高于对照组（P〈0．05）。结论老年大鼠耳蜗螺旋神经节Caspase-3、Calretinin含量升高。     

铁缺乏对大鼠耳蜗肌动蛋白影响的实验探讨

目的 观察铁缺乏对大鼠耳蜗肌动蛋白的影响,探讨铁缺乏致聋的发病机制。方法 应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳、双波长薄层扫描分析、免疫组织化学及听性脑干诱发电位检测,对照观察６～８ｗｋ铁缺乏大鼠和正常大鼠耳蜗肌动蛋白含量及分布的变化与听阈变化的关系。结果 铁缺乏引起感音神经性聋大鼠耳蜗肌动蛋白相对含量及免疫反应活性均有明显下降。结论 耳蜗内肌动蛋白含晡不免疫反应活性均有明显下降。结论 耳蜗内肌动蛋白含量     

不同缺铁期大鼠耳蜗肌动蛋白的含量及分布

目的 :观察不同缺铁饲养期对大鼠耳蜗肌动蛋白含量及分布的影响 ,探讨铁缺乏致聋的发病机制。方法 :应用 SDS-PAGE蛋白电泳、双波长薄层扫描分析、免疫组织化学以及听性脑干诱发电位检测 ,观察比较铁缺乏 8周、12周的大鼠及正常大鼠耳蜗肌动蛋白含量与分布的变化。 结果 :与正常对照大鼠比较 ,铁缺乏引起的感音神经性聋大鼠耳蜗肌动蛋白相对含量明显下降 (P<0 .0 1) ,免疫组化反应减弱 ;但不同缺铁期间耳聋大鼠耳蜗肌动蛋白变化比较无显著性差异 (P>0 .0 5 )。 结论 :耳蜗内肌动蛋白相对含量减少和 (或 )免疫组化反应减弱与铁缺乏致聋存在密切关系 ;缺铁时间长短对大鼠耳蜗肌动蛋白含量及免疫组化反应无明显影响。     

ATP对细菌内毒素引起的大鼠耳蜗iNOS表达的影响

目的:探讨三磷酸腺苷(ATP)对细菌内毒素(LPS)引起的大鼠耳蜗诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响及其对耳蜗损伤的保护作用.方法:通过向大鼠鼓室内注射LPS造成急性中耳炎的动物模型,应用免疫组化方法,结合听性脑干反应(ABR)阚值检测,研究ATP对LPS引起的大鼠耳蜗iNOS活性的影响.结果:ATP对LPS引起的大鼠耳蜗iNOS表达和ABR阈移有明显的抑制作用.结论:ATP对LPS引起的大鼠耳蜗损伤有保护作用,这种保护作用可能与降低耳蜗iNOS活性有关.     

老年性聋的临床听力学表现初步研究(附加税112例报告)

目的探讨老年性聋临床听力学表现及与耳蜗毛细胞损害的关系.方法对2001年8月至2002年7月间的112例老年性聋病人进行临床听力检查并对结果进行分析.结果老年性聋男性(65.9%)较女性(34.1%)高发,听力损害较女性重;耳声发射检出率低(TEOAE的引出率仅为7.14%,DPOAE引出率为17%).结论老年性聋与老年后耳蜗毛细胞退行性变有关.     

耳鼻咽喉科学

991091自由基代谢与老年性聋关系研究/张向阳…//中国老年学杂志一1998,18(6).一3“~367 对“例老年性聋患者血清中过氧化脂质(LPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性进行检测,并与26例听力检测正常的健康老年人为对照组。结果:老年性聋患者血清LPO含量明显高于对照组,而SOD活力却明显低于对照组,并且这种改变与耳聋的程度有关。说明自由基损伤是引起老年性聋听觉器官退行性变的重要原因。认为:使用清除自由基、增加SOD活性的药物,在老年性聋的防治中是非常必要的。表2参7(陈自敏) ,,10,2复聪片对老年大鼠蜗内神经结构影响的实验研究/刘佳运…     

老年大鼠耳蜗核γ-氨基丁酸免疫反应的变化

目的检测老年大鼠耳蜗核组织γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应的变化,研究其与老年性耳聋的发病关系。方法采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法,对成年（２～３月龄）和老年（２０～３６月龄）Ｗｉｓ－ｔａｒ大鼠耳蜗核组织进行免疫组织化学染色,并利用计算机图像分析系统对ＧＡＢＡ免疫反应阳性细胞进行计数。结果发现ＧＡＢＡ免疫反应阳性神经元主要分布于背侧核（ＤＣＮ）的表层,老年大鼠耳蜗背侧核ＧＡＢＡ阳性细胞数目低于成年组（Ｐ＜０．００１）。结论耳蜗核ＧＡＢＡ含量的降低可能与老年性耳聋的发病具有一定的相关性。     

JNK信号通路在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Juna mino-terminal kinase,JNK)信号通路在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用,为老年性聋的预防和治疗提供更多的切入点。方法Wistar大鼠24只,其中12只为对照组(3～4月龄),12只为自然衰老组(22～24月龄);听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测听力学改变;采用透射电镜观察老年大鼠耳蜗的超微病理变化;用免疫组化及Western blotting方法检测p-JNK和p-c-Jun蛋白的表达。结果老年组大鼠听力〔(72.083±13.345)dBSPL〕较对照组〔(32.083±3.878)dBSPL〕明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01);透射电镜下可见外毛细胞有凋亡样改变,螺旋神经节细胞内大量脂褐素沉着;在耳蜗石蜡切片中可观察到p-JNK和p-c-Jun免疫反应阳性细胞,定位于细胞核,老年组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blotting结果显示老年组内耳组织p-JNK和p-c-Jun的蛋白表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在大鼠老年性聋的发生过程中,各种损伤因素可能通过激活JNK信号通路而促使耳蜗细胞的凋亡。     

吗啡依赖大鼠脑细胞色素C氧化酶活性的改变

目的：探讨吗啡依赖大鼠脑线粒体细胞色素C氧化酶（COX）活性的变化。方法：采用药参食法培养大鼠吗啡依赖模型，通过差速离心法分离线粒体。采用分光光度及化学发光等方法测定COX活性、心磷脂（CL）含量、膜流动性（MF）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。结果：COX活性、CL含量、MF及SOD活性都明显降低（P＜0．01），MDA含量明显升高（P＜0．01）。结论：吗啡依赖大鼠脑线粒体COX活性降低，这与SOD活性降低导致的脂质过氧化水平升高有关。     

大鼠心肌缺血预处理中COX2与P38MAPK间信号传导关系的研究

目的 :探讨大鼠心肌细胞缺血预处理时COX2 的作用及其与P38MAPK的关系。方法 :实验分为 4组 (对照组、缺血预处理组、SB组和NS3 98组 ) ,用Westernblotting法测定心肌细胞的COX2 表达量和Phosph -P38MAPK量 ,以LDH释放和台盼蓝排斥试验判断心肌细胞损伤程度。结果 :缺血预处理组的LDH释放较对照组少、细胞存活率则较高 ;SB组和NS3 98组LDH释放较缺血预处理组多、细胞存活率则较低。NS3 98组的Phosph -P38MAPK量与缺血预处理组无差异 (P >0 .0 5 ) ,SB组的COX2 表达量比缺血预处理组低 ,差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :缺血预处理时COX2 和P38MAPK表达、活化 ,COX2 活化依赖P38MAPK ,在其信号传导中 ,P38MAPK活化是COX2 的上游。     

Effects of chloramphenicol preconditioning on oxidative respiratory function of cerebral mitochondria in rats exposed to acute hypoxia

To investigate the roles of chloramphenicol (CAP) preconditioning in the oxidative respiratory function of cerebral mitochondria in rats exposed to acute hypoxia during acute hypoxia by observing the changes of mitochondrial oxidative respiratory function and cytochrome C oxidase (COX) activity. Methods: Adult male Wistar rats were randomly divided into 4 groups: control (C), medication (M), hypoxia (H), and medication plus hypoxia (MH). Rats in groups M and MH were administered by peritoneal injection of CAP (50 mg/kg) every 12 h for 7 d before decapitation, but those in groups H and MH were exposed to a hypobaric chamber simulating 5 000 m high altitude for 24 h. The rat cerebral cortex was removed and mitochondria were isolated by centrifugation. Mitochondrial respiratory function and COX activity were measured by Clark oxygen electrode. Results: Compared with Group C, Group H showed significantly elevated state 4 respiration (ST4), decreased state 3 respiration (ST3), and respiratory control rate (RCR) in mitochondrial respiration during acute hypoxic exposure. ST3 in Group MH was significantly lower than that in Group C, but was not significantly different from that in Groups H and M, while ST4 in Group MH was significantly lower than that in groups C and H. RCR in Group MH was higher than that in Group H, but lower than that in Group C. COX activity in Group H was significantly lower than that in Group C. In Group MH, COX activity increased and was higher than that in Group H, but was still lower than that in Group C. Conclusion: Acute hypoxic exposure could lead to mitochondrial respirator3 dysfunction, suggesting that CAP preconditioning might be beneficial to the recovery of rat respiratory function. The change of COX activity is consistent with that of mitochondrial respiratory function during acute hypoxic exposure and CAP-administration, indicating that COX plays an important role in oxidative phosphorylation function of mitochondria from cerebral cortex of hypoxic rats.     

Effects of Ge Gen Decoction on PGE2 Content and COX Activity in the Degenarated Cervical Intervertebral Discs of Rats

After the rat model of cervical spondylosis was developed for 6 months, the PGE2 content and COX activity in the cervical intervertebral discs were determined respectively by radioimmunoassay and catalytic activity assay.The results indicated that the PGF2 content and COX activity in the model rat increased significantly, and that Ge Gen Decoction could down-regulate the PGE2 content and inhibit COX activity. This is possibly one of the mechanisms of Ge Gen Decoction for treating cervical spondylosis.     

环氧化酶2在大鼠肝脏癌变过程中的表达及意义

目的：了解环氧化酶2（COX-2）在大鼠肝脏癌变过程中的表达规律及与肝癌的关系。方法：用二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌模型,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法,检测COX-2在大鼠肝脏癌变过程中的表达。结果：COX-2表达在大鼠肝脏癌变过程中呈动态变化,在诱癌的第6周即可出现,在肝癌晚期表达最明显,而在正常肝组织未见表达。结论：COX-2表达与大鼠肝脏癌变关系密切,COX-2参与了大鼠肝癌的发病过程。     

前列地尔联合针刺对噪音性耳聋大鼠耳蜗毛细胞血管内皮生长因子、Bcl-2及Bax表达的影响

目的:观察针刺联合前列地尔对噪音性耳聋大鼠耳蜗毛细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、Bax及Bcl_2表达的影响.方法: 32只雄性Wistar大鼠按照随机数字法分为4 组:空白对照组、模型组、前列地尔治疗组和针刺联合前列地尔治疗组.除对照组外,其余3组制备噪音性耳聋大鼠模型.对各组大鼠进行听觉脑干诱发电位( au-ditory brainstem response,ABR)听力阈值测试.联合治疗组的针刺治疗穴位选取三焦经腧穴翳风(双)、外关(双).对各组大鼠进行耳蜗VEGF、Bax及Bcl-2表达检查.结果: 造模结束后,各组大鼠ABR听力阈值显著高于对照组;模型组VEGF水平较空白对照组低,耳蜗Bcl-2 mRNA表达减弱, Bax mRNA表达增强,差异有统计学意义(P＜0. 05);联合治疗组与模型组相比,大鼠耳蜗基底膜毛细胞VEGF水平显著恢复,耳蜗Bcl-2 mRNA表达增强, Bax mRNA表达减弱,差异有统计学意义( P＜0. 01).结论: 针刺联合前列地尔治疗能改善噪声导致的听力损害,其改善听力、保护耳蜗结构是通过调节耳蜗基底膜毛细胞VEGF、耳蜗相关凋亡因子Bcl-2、BaxmRNA的表达而达到的.     

颞叶癫痫大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅲ和Ⅳ表达的变化

目的:探讨癫痫对大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶（COX）的mtDNA和nDNA编码亚基Ⅲ、Ⅳ表达的影响。方法:将成年雄性Wistar大鼠40只随机分为生理盐水对照组,癫痫持续状态（SE）后急性期（3h）、静止期（7d）、慢性期（45d）组和注射匹鲁卡品（PILO）但未出现SE组,每组8只。荧光实时定量PCR和Western blot分别检测海马线粒体COX Ⅲ、Ⅳ mRNA和蛋白的表达。结果: COX Ⅲ mRNA和蛋白在SE后3h表达明显升高(P<0.001, P<0.01),7d时降到对照水平,45d显著降低(P<0.001, P<0.01);COX Ⅳ mRNA和蛋白在3h时表达较对照组升高,但差异无统计学意义（P＞0.05),7d和45d时下降至对照水平。注射PILO但无SE组与对照组结果类似。结论: 颞叶癫痫海马cox功能紊乱与痫性发作相关,线粒体编码的基因更易受痫性发作的影响。     

Detection of GABAA alpha 2 mRNA in rat cochlear spiral neuron with in situ hybridization]

OBJECTIVE: To investigate the expression of gamma-aminobutyric acid (GABA)A receptor alpha 2 subunit mRNA on rat cochlear spiral neurons and its' significance. METHODS: In the rat cochlear paraffin slides, the GABAA alpha 2 receptor in spiral ganglion neuron was detected with in situ hybridization. Digoxigenin-GABAA alpha 2 cDNA probe (549 base pair), anti-digoxigenin-AP(Fab fragments) and BM purple substrate(precipitating) were used. RESULTS: Positive signals(GABAA alpha 2 mRNA) were seen in all cochlear spiral neurons and their nerves. GABAA alpha 2 mRNA was not found in other structure such as bony spiral lamina. As a positive control, GABAA alpha 2 mRNA was seen in Purkinje cells, granule cells and their axons in rat's cerebellum. GABAA alpha 2 mRNA was not found in OMP cDNA probe (olfactory membrane estrogen receptor probe) negative control, non-probe negative control and non-anti-digoxingenin control in cochlear spiral neuron and cerebellum. CONCLUSION: GABAA alpha 2 receptor has been found in type I spiral neurons and their nerves. It strongly indicates that GABA as a nerve transmitter plays an important role in inhibiting the excessive stimulation transmission of the inner hair cells.     

庆大霉素对豚鼠耳蜗琥珀酸脱氢酶的影响

目的观察庆大霉素（ＧＥ）对耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）的影响。方法用组织化学染色方法,观察ＧＥ引起的豚鼠耳蜗毛细胞ＳＤＨ的变化。结果正常豚鼠耳蜗内毛细胞的ＳＤＨ呈深蓝色染色,显示毛细胞排列形式;ＧＥ耳中毒豚鼠耳蜗毛细胞内的ＳＤＨ显示变淡,甚至消失,毛细胞破坏显著。结论实验结果表明,ＧＥ引起的耳蜗毛细胞的损坏与线粒体呼吸酶活性变化有关,可能由于呼吸酶活性降低,导致细胞供能障碍,最终引起毛细胞的坏死