基于PCR熔解曲线技术的结核分枝杆菌Spoligotyping基因分型的临床应用研究

目的 利用基于PCR熔解曲线技术的结核分枝杆菌Spoligotyping基因分型方法(McSpoligotyping)对结核分枝杆菌分离株进行基因分型,以评价其在结核病流行病学调查中的应用价值。方法 对广西2017年结核耐药监测点收集的949株结核分枝杆菌,采用McSpoligotyping分型方法对其进行基因分型。首先,通过对其中的361株菌株的McSpoligotyping 分型结果与全基因组测序(WGS)结果的一致性比较来评价McSpoligotyping分型方法。其次,对949株菌株分型数据与SITVITWEB数据库进行比对,获取间隔区寡核苷酸国际型别(spoligotype intemational type,SIT)编号,将分型结果提交到https://www.miru-vntrplus.org/MIRU/index.faces 网站进行聚类分析。结果 McSpoligotyping分型与WGS结果一致率为94.18%(340/361),在结果不一致标本中,出现不一致较多间隔序列在第5间隔。在949株菌株中新发现基因型为121株,已定义基因型为828株;其中已定义基因型共分为84种基因型,主要归属于5种基因家族(BEIJING、T、H、EAI、LAM)和3个家系(Lineage 1、Lineage 2、Lineage 4);5种基因家族主要流行为BEIJING和T基因家族,家系中主要流行为Lineage 2。949株菌株中的822株聚为49个簇(2~528株),最大一簇为Beijing家族SIT1基因型,其余的127株菌表现为独特的基因型。结论 利用PCR熔解曲线技术可快速对MTB进行基因分型,此技术较传统方法操作简便、耗时短,对结核病疫情处置及结核病分子流行病学研究具有重要意义。     

台湾东部耐多药结核病的分子流行病学研究

台湾从2007年5月启动了耐多药结核病项目。在台湾东部,自2007年5月到2009年2月共纳入了77例耐多药结核病(MDR-TB)患者。获取了其中的73例(93%)患者的分离株以应用间隔区寡核苷酸基因分型(spoligotyping)和MIRU-VNTR(分枝杆菌分散重复单位-可变数目的串联重复序列)进行基因分型。spoligotyping的分析结果表明,北京基因型是主要的流行基因型(n=48,66%)。在73株菌株中,28(38.4%)株有独特的基因型,45(61.6%)株菌株成簇。在45位基因型成簇的患者中,有21例患者发现存在流行病学联系。在台湾东部MDR结核病患者的菌株成簇比例高。     

广东省地区结核分枝杆菌寡核苷酸基因分型及耐药相关性

目的 研究结核分枝杆菌(MTB)不同基因型在广东省各地区的流行情况及其耐药相关性。方法 随机数字法抽取广州市胸科医院2014-2015年临床分离的来自于广东省不同地区的504株结核分枝杆菌菌株,采用比例法进行药物敏感性实验,选用间隔区寡核苷酸分型方法(Spoligotyping)对结核分枝杆菌进行基因分型。基因型耐药率差异比较采用χ²检验。结果 (1)在504株结核分枝杆菌临床分离株中北京家族和非北京家族分别是386株和118株。非北京家族中,T家族高达48株;其余是H3家族、EAI家族、MANU家族、AMBIGO家族、LAM家族以及新发基因型。北京家族构成比在性别、年龄上无统计学差异(P>0.05),但在汕头、汕尾、揭阳、东莞四个地级市的构成比低于广州市,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)504株结核分枝杆菌中,453株在SPOIDB 4.0数据库中分为49种寡核苷酸类型归类于30个簇,其主要流行簇依次为:SIT1、SIT53、SIT52、SIT19、SIT523。SIT1基因型的异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、 吡嗪酰胺(PZA)、 阿米卡星(AMK)、左氧氟沙星(LVFX)、耐多药(MDR)、泛耐药(XDR) 的耐药率均高于SIT53、 SIT52、SIT19,而SIT523在 RFP、SM、EMB、MDR的耐药率方面高于SIT1 (3)主要流行基因型北京家族的INH、PZA、AMK的耐药率高于非北京家族,差异有统计学意义(P<0.05),其余药物的耐药性无显著性差异(P>0.05)。结论 广东省结核分枝杆菌呈基因多态性,北京基因型菌株为本省结核分枝杆菌主要流行株,而且与异烟肼、吡嗪酰胺、阿米卡星耐药相关。非北京基因型在潮汕和东莞等华侨之乡比例有所增加。     

重庆市结核分枝杆菌临床分离株的基因分型及相关耐药性分析

目的 对重庆市结核分枝杆菌临床分离株进行基因分型,研究不同基因型在重庆的流行情况,并分析基因型与耐药表型的关系。 方法 收集2011年1-12月重庆市结核病防治所分离的113株结核分枝杆菌临床分离株,采用比例法进行药物敏感性检测;应用间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）和PCR方法对113株结核分枝杆菌临床分离株进行基因分型。 结果 在113株结核分枝杆菌临床分离株中,可分为北京家族和非北京家族,分别占77株（68.1%,77/113）和36株（31.9%,36/113）;北京家族菌株中现代型为48株（62.3%,48/77）,古代型为29株（37.7%,29/77）;非北京家族菌株中,T1型高达13株（36.1%,13/36）,发现9种新基因型。北京家族菌株耐药率为24.7%（19/77）,非北京家族菌株耐药率为38.9%（14/36）,差异无统计学意义（χ²=2.40,P>0.05）。现代型北京家族菌株耐药率为27.1%（13/48）,古代型北京家族菌株耐药率为20.7%（6/29）,差异无统计学意义（χ²=0.39,P>0.05）。 结论 重庆地区结核分枝杆菌具有明显的基因多态性,其主要流行基因型为北京家族,其中北京家族中主要为现代型;北京家族菌株、非北京家族菌株均与耐药性无明显相关性。     

福建省耐多药结核分枝杆菌VNTR和Spolilgotyping基因多态性分析

目的了解福建省耐多药结核分枝杆菌的基因多态性和主要流行基因型,为耐多药结核病的传播防控提供参考。方法回顾性分析福建省耐药监测数据,收集标本并采用WHO推荐的方法进行药敏试验检出的耐多药结核分枝杆菌119株,采用24位点VNTR(24-VNTR)和间隔区寡核苷酸分型技术(Spoligotyping)进行基因分型,实验数据及结果数字化后录入Excel,在网站http://www.miru-vntrplus.org进行比对,分型结果通过BioNumerics5.0软件进行聚类分析。结果 119株MDR菌株经24-VNTR分型呈现112种基因型(105个独特基因型,7个基因簇),成簇率为11.76%。24-VNTR对119株菌的分辨力(HGDI)为0.999。经Spoligotyping分型,北京基因型占67.23%,非北京基因型占32.77%,以H家族,T家族常见。共26个基因型(19个独特基因型和7个簇),成簇率为84.03%(每簇含2～75株)。Spoligotyping对119株菌的Hunter-Gaston指数为0.597。结论福建省耐多药结核分枝杆菌主要流行型为北京基因型,具有基因多态性。     

江西省MDR-TB的MIRU-VNTR分型研究

目的调查江西省耐多药结核分枝杆菌MIRU-VNTR分子特征及传播情况。方法分离自江西地区的耐多药结核分枝杆菌131株,采用15位点MIRU-VNTR进行RD105片段缺乏(北京基因行)检测;进行分型,计算等位点差异、分辨率、成簇率以及近期感染率的估算值。结果江西地区人感染耐多药结核分枝杆菌中北京基因型占83.21%。分离株结核分枝杆菌15位点MIRU-VNTR的HGI值为0.9947,北京家族菌为0.9923。131株菌共分为11个基因簇和98个孤立基因型,成簇率为25.19%,近期感染率估计值为16.79%;北京家族株成簇率为28.44%,近期感染率估计值为19.27%。结论 15位点MIRU-VNTR对包括北京家族株结核分枝杆菌的分辨率高,该方法适合于江西地区耐多药结核分枝杆菌的基因分型。江西省耐多药结核病的流行主要为内源性复燃,但近期传播仍不能忽视。     

广东口岸结核分枝杆菌复合群分子流行病学特征分析

目的 了解广东口岸结核分枝杆菌复合群(MTBC)主要流行菌株及输入性菌株的分子流行病学特征。方法 采用熔解曲线间隔区寡核苷酸分型(melting curve spoligotyping,McSpoligotyping)技术对广东口岸558株MTBC菌株进行基因分型,将分型结果与SITVITWEB数据库进行比对,获取间隔区寡核苷酸国际型别(spoligotype international type,SIT)编号,并用BioNumerics 7.6进行聚类分析。结果 558株MTBC菌株共分为107种基因型,其中66种归属于8种基因家族及4种家系。家系2和家系4共占菌株总数的86.38%(482/558)。6个主要流行簇分别为SIT1、SIT53、SIT52、SIT50、SIT190和SIT19,其中SIT1为最大流行簇。17株输入性MTBC包含北京、拉丁美洲和地中海(Latin American and Mediterranean,LAM)、East African Indian(EAI)、T、Africanum(AFRI)及未定义的基因家族,其中包含23.53%(4/17)的新基因型。北京家族菌株耐药率为27.25%(106/389),非北京家族菌株耐药率为23.81%(40/168),差异无统计学意义(χ ²=0.72,P=0.40)。典型北京家族菌株耐药率为26.03%(95/365),非典型北京家族菌株耐药率为45.83%(11/24),差异有统计学意义(χ ²=4.46,P=0.03)。 结论 广东口岸以家系2和家系4 MTBC为主要流行菌株,输入性菌株以来源地区流行的基因家族和新基因型为主,应加强对主要流行菌株及输入性菌株的分子流行病学监测。非典型北京家族菌株与耐药性具有相关性。     

耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药基因突变及其分子流行病学调查研究

目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG基因突变特点以及Spoligotyping分型和结核病流行关系。方法对123株结核分枝杆菌临床分离株，其中有药敏结果的98株，（耐异烟肼菌株45株；异烟肼敏感株53株）的katG基因进行DNA片断扩增然后进行SSCP分析；同时对其中的121株菌株进行Spoligotyping分型。结果45株耐INH结核杆菌株中，27株（60％）第315位点突变，低耐药菌株（1mg／L）第315位点突变率显著高于高耐药菌株（10mg／L；53株敏感株中无KatG基因315位密码子突变。对121株临床株的Spoligotyping DNA指纹分析，1型，（北京型）103株占84％（103／121），其它基因型18株，分散在13种基因型中。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG基因突变之间的关系；北京型感染是北京地区结核病流行的重要原因。     

IS6110-限制性片段长度多态性和间隔区寡核苷酸分型技术在结核分枝杆菌菌株鉴定中的应用

目的评价IS6110-限制性片段长度多态性（IS6110-RFLP）和间隔区寡核苷酸分型技术（spoligotyping）两种方法在结核病流行病学中的应用，探讨我国各地区的结核分枝杆菌菌株特点。方法收集158株结核分枝杆菌临床分离株，分别应用IS6110-RFLP和Spoligotyping两种方法进行鉴定。结果①IS6110-RFLP的分辨力大于spoligotyping分型。②将本次实验结果与国际spoligotype数据库进行比较。结果有14个类型属于共有类型，其中类型1为流行的类型，分布广泛，即所说的北京基因型。③广东地区与其他地区成簇率和北京基因型所占比例差异有统计学意义（P〈0．05）。广东地区成簇率和北京基因型所占比例均显著低于其他地区。结论同时应用IS6110-RFLP分型和Spoligotyping两种方法进行结核病流行病学调查研究非常有效，在中国不同地区的菌株具有不同的特点。     

19952004年芬兰耐药结核分枝杆菌分离株分子基因学分析

背景：利用现代分子生物学来帮助我们理解结核分枝杆菌的传播和流行病学机理。目的：分析耐药结核分枝杆菌分子流行病学和1995--2004年芬兰耐异烟肼及利福平相关突变菌株。设计：对3959株新结核分枝杆菌菌株进行了药物敏感性试验，如有必要，所有的耐药性表型菌株都进行了IS6110限制性片段长度多态性和间隔寡核苷酸分型分析。对耐异烟肼及利福平菌株分别进行了katG315位密码子和rpoB耐性基因测序。结果：在测试的3959（92．4％为培养阳性）株分离株中，183个（4．6％）对至少一种一线抗结核药耐药；14（0．4％）株为耐多药。37株（20．4％）耐性菌株属于17个簇，其中最大的簇包括4个分离株。北京家族占所有耐药菌株的8．8％（16株）。在异烟肼耐药菌株中，katG的Ser315Thr突变占46．7％（56株）；在利福平耐药菌株中rpoB突变占85．7％（18株）。结论：耐药结核病在芬兰传染率很少，尤其在本地和外来人口间。如果存在产生耐多药的危险因素，筛查异烟肼和利福平耐药相关突变是可行的。     

Multifocal osteoarticular tuberculosis and pleuropulmonary involvement in an immunocompetent patient

Introduction

Multifocal tuberculosis is an uncommon presentation in immune-competent patients; it’s associated more with an immune-depression like HIV (Human Immunodeficiency Virus) infection. Here, we are presenting unusual multifocal osteoarticular localizations including the wrist and tarsal joint which are rare and pleura-pulmonary tuberculosis.

耐药结核病的分子生物学研究进展

结核病是一个严重的全球公共卫生问题,每年有超过40万耐多药结核病新病例的发生。利用分子生物学方法,从基因水平阐明结核分枝杆菌耐药性的机理,并在此基础上建立敏感、快速和特异的检测方法成为耐药结核病研究的重点。本文就耐药结核病的分子生物学研究现状进行概述。     

Tuberculous meningitis and miliary tuberculosis in young children

OBJECTIVES: To document the clinical and diagnostic features of tuberculous meningitis (TBM) in young children with and without concomitant miliary tuberculosis (TB). METHODS: A retrospective comparative study. RESULTS: Of 104 children with TBM, 32 (31%), median age 17.0 months, had a miliary appearance on chest radiograph; 72 (69%), median age 30.5 months, had TBM only (P = 0.04). Mediastinal adenopathy was noted in 27 (84%) of the children with miliary TB and 33 (46%) of those with TBM only (P = 0.0005). The mean cerebrospinal fluid (CSF) lymphocyte and polymorphonuclear counts of all children (no significant differences between groups) were 137 x 10(6)/l and 38 x 10(6)/l and the mean protein and glucose concentrations were 1.45 g/l and 0.72 mmol/l, respectively. Polymorphonuclear leukocytes were predominant in the CSF of 17% of children, in 16% the CSF glucose was > 2.2 mmol/l and in 26% the CSF protein was < 0.8 g/l. On Mantoux testing 37 (65%) of 57 children with TBM only and 12 (48%) of 25 children with TBM and miliary TB had an induration of > or = 10 mm (P = 0.23). Ten children (10%) died, five (7%) who had TBM only and five (16%) who had TBM and miliary TB. CONCLUSION: Children with TBM and miliary TB were younger and more likely to have mediastinal adenopathy on chest radiography than those with TBM only. Diagnostic features and investigations in both groups may be misleading at times.     

山东省滨州市123例肺结核患者痰结核菌耐药情况分析

目的探讨肺结核患者痰结核菌的耐药情况。方法采用痰结核分支杆菌培养并做药物敏感性试验检测。结果肺结核患者耐药率为58.54%;耐异烟肼（INH,H）37.4%、利福平（RFP,R）13.8%、链霉素（SM,S）56.1%、乙胺丁醇（EMB,E）2.4%。至少耐异烟肼和利福平两种药的比例为16.26%。结论肺结核耐药情况严重,尤其是耐多药比例偏高,应引起足够重视。     

Tuberculosis in a Developed Country

ABSTRACT. All 515 patients notified for tuberculosis for the first time in 1972, 1977 and 1982 in Copenhagen have been studied. Changes during the period and differences between Danes and immigrants were looked for. The percentage of immigrants increased during the period. The immigrants had a different age distribution, higher frequency of extrapulmonary tuberculosis with a distribution different from that of Danes, fewer complicating diseases and they drank less alcohol. No significant changes in the patient population took place in the decade studied, except for a decreasing number of Danes with tuberculosis, a decreasing number of abacillary patients and an increase in the percentage of extrapulmonary tuberculosis. At follow-up in 1983, none of the immigrants, but 147 of 407 Danes had died, mainly from complicating diseases. Life expectancy for the Danes, who survived the initial phase, was not significantly different from that for the population at large. None of the patients were bacillary at the time of the follow-up.     

五药联合方案治疗耐多药结核病的疗效分析

目的　评价异烟肼 (H)、对氨基水杨酸钠 (P)、卷曲霉素 (C)、氧氟沙星 (O)或左氧氟沙星 (L V)和丙硫异烟胺 (Th)方案治疗耐多药结核病 (MDR- TB)的疗效。方法　将 85例 MDR- TB随机分为两组 :治疗组 (4 5例 )应用 H、P、C、O或 L V、Th;对照组 (4 0例 )应用 H、丁胺卡那霉素、利福喷丁、吡嗪酰胺和乙胺丁醇。结果　痰菌阴转率 :治疗组 86 .7% ,对照组 5 5 % ,有高度显著性差异 (P<0 .0 1) ;病灶吸收好转率治疗组 6 4 .4 ,对照组 4 0 ,有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;空洞闭合率 :治疗组 6 8.9 ,对照组 4 0 ,有高度显著性差异 (P<0 .0 1)。随访 2年 ,治疗组和对照组总治愈率分别为 84 .4和 5 0 ,有高度显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　 H、P、C、O或 L V、Th方案治疗 MDR- TB疗效满意 ,可作为首选方案     

HspX的功能及其在结核疫苗研制中的应用进展

研制安全有效的结核疫苗一直是结核病研究的重点,因此,有必要对其主要致病菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原进行科学合理的评价。本文综述了潜伏性结核感染重要抗原HspX的致病机制及其在结核疫苗研制中的应用进展,探讨了HspX抗原在不同类型疫苗研制中的作用,旨在为将来研制有效的结核疫苗提供较准确的信息。     

结核病发病机制的研究进展

结核病(Tuberculosis, TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis, M.tb)感染引起的、主要引发肺部炎症的慢性传染性疾病,在人类历史上已存在上千年并且严重危害人体健康,是一个亟待攻破的全球性公共卫生难题。其发病机制复杂多样,具体涉及遗传进化及分子生物学等多个方面。近年来,关于结核病发病机制方面的研究不断深入,为结核病的诊断治疗和疫苗研发等开辟了新的方向,本文主要从免疫相关基因、MTBC的变异与进化、免疫细胞和肉芽肿与结核病的关系以及影响宿主代谢的角度加以综述。     

Hepatosplenic tuberculosis mimicking disseminated candidiasis in patients with acute leukemia

Two cases of hepatosplenic tuberculosis in patients with acute leukemia during or after chemotherapy following prolonged neutropenia are presented. Tuberculosis should be considered as one cause of hepatosplenic abscesses during prolonged neutropenia, especially in countries where the disease is endemic.