长链非编码RNA MALAT1与细胞凋亡诱导因子在早产儿支气管肺发育不良中表达及意义

目的探讨支气管肺发育不良(BPD)早产儿外周静脉血中长链非编码RNA MALAT1及细胞凋亡诱导因子(AIF)表达与BPD的关系。方法采用前瞻性病例对照研究方法,选取2015年1月至2016年12月新生儿科收治的20例BPD早产儿作为BPD组,选取20例同期收治吸氧时间3天且胎龄32周的早产儿作为对照组。收集比较两组早产儿的临床资料,以Real-Time PCR方法检测的外周血MALAT1和AIF表达水平。结果与对照组相比,BPD组早产儿外周血中MALAT-1表达上升,AIF表达下降,两组间差异均有统计学意义(P0. 05)。结论长链非编码RNAMALAT 1与AIF可能参与BPD发病。     

高氧诱导肺损伤新生小鼠肺组织中长链非编码RNANANCI的表达及对NKX2.1的调控作用

目的探讨长链非编码RNA NANCI在高氧诱导肺损伤新生小鼠肺组织中的表达变化及对NKX2.1的调控作用。方法采用随机分组法将48只C57BL/6J新生小鼠随机分为空气组和高氧组,每组24只,各组再随机分为生后7 d组、14 d组、21 d组,每组8只。空气组置于室内环境(Fi O2=21%)中饲养,高氧组置于高氧箱(保持氧浓度95%)中饲养,在各时间点分别处死两组动物后收集肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法观察小鼠肺组织病理变化;采用RT-q PCR及Western blot技术分别检测NANCI、NKX2.1的m RNA和蛋白表达水平。结果空气组新生小鼠肺组织NANCI和NKX2.1的m RNA表达水平7 d最高(P0.05),14 d与21 d呈同水平表达。与空气组比较,高氧组肺组织肺泡化程度降低,辐射状肺泡计数(RAC)减少(P0.05),且高氧组RAC值随高氧处理时间延长逐渐降低(P0.05)。各时间点高氧组NANCI m RNA、NKX2.1 m RNA及其蛋白表达水平均低于空气组(P0.05),且随高氧处理时间延长逐渐降低(P0.05)。NKX2.1与NANCI表达呈正相关(r=0.585,P=0.003);两者与高氧组RAC水平均呈正相关(分别r=0.655、0.541,P0.05)。结论 NANCI可能主要参与未成熟肺组织发育;肺组织损伤程度随高氧暴露时间的延长逐渐加重,且NANCI及NKX2.1水平与肺损伤程度相关,提示NANCI/NKX2.1靶基因信号通路可能参与新生小鼠高氧肺损伤过程。     

硫氧还蛋白在早产鼠高氧肺损伤中的动态表达及其临床意义

目的研究高氧肺损伤早产鼠肺组织硫氧还蛋白(Trx)的表达及其临床意义。方法早产新生SD大鼠128只,生后d1随机分为空气组和高氧组,每组64只。分别于d1、4、7、10、14提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx mRNA水平;免疫组织化学方法检测肺组织切片凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3);HE染色观察肺组织病理变化。结果高氧组肺发育明显受阻,与空气组比较,高氧暴露后Trx mRNA表达显著增强,且于d10时达高峰(P<0.05,0.01)。Caspase-3表达显著升高(P<0.05,0.01)。结论高氧上调早产鼠肺组织Trx mRNA的表达;肺组织Trx mRNA的表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发生发展中发挥重要保护作用。     

地塞米松对高氧肺损伤新生大鼠肺水通道蛋白1表达的影响

目的 探讨地塞米松对新生大鼠高氧肺损伤时水通道蛋白1(AQP1)表达的影响及其对肺损伤的可能保护机制.方法 新生Wistar大鼠32只随机分为空气组、高氧组、空气+地塞米松组、高氧+地塞米松组.第3天取肺组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测AQP1的mRNA表达和分布变化;并对肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、肺通透指数及组织病理学改变进行对比分析.结果 高氧暴露第3天肺组织出现出血、炎性细胞浸润和水肿,肺W/D、BALF蛋白含量、肺通透指数明显升高;地塞米松干预组肺损伤程度减轻,测定值降低.空气组、高氧组、高氧+地塞米松组AQP1 mRNA相对吸光度比值分别为0.70±0.04、0.42±0.03、1.04±0.04,各组间差异有显著性(P<0.05);与空气组相比,高氧组AQP1 mRNA表达明显降低,高氧+地塞米松组AQP1 mRNA表达显著上调;AQP1蛋白表达与其mRNA变化一致.结论 高氧肺损伤时大鼠肺AQP1表达下调;地塞米松干预对肺损伤有保护作用,上调肺AQP1的表达可能是其作用机制之一.     

硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达

目的 研究硫氧还蛋白(Trx)及其还原酶(TR)在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义.方法 早产新生SD大鼠,生后第一天随机分为空气组和高氧组.每组64只.两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx和TR mRNA表达;同时采用HE染色观察肺组织病理学变化,并进行辐射状肺泡计数(RAC).结果 病理学观察显示:与对照组比较,高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后,同时RAC值亦较空气组显著减少(P＜0.05).高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强(P＜0.05),且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰.结论 高氧上调肺组织Trx、TR表达;肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用.     

水通道蛋白在高浓度氧肺损伤中的研究进展

高浓度氧(高氧)肺损伤是发生于新生儿(特别是早产儿)用高氧持续机械通气后的一种肺损伤性疾病,早期特征性改变是肺泡炎性水肿,继之出现肺间质增生和肺纤维化。水通道蛋白(AQPs)为近年发现的一种功能性水转运蛋白,在肺组织中分布甚广,大多数学者研究发现肺AQPs在高氧肺损伤时表达下降,推测肺损伤时出现的肺泡和间质水肿系AQPs减少所致。     

前列腺素 E-1 对新生大鼠高氧肺损伤的作用及机制

目的探讨前列腺素E1(PGE-1)皮下注射对新生大鼠高氧肺损伤的治疗及机制。方法 45只新生Wistar大鼠随机分为对照组、高氧肺损伤模型组、高氧肺损伤+PGE-1组,每组15只。高氧肺损伤模型组、高氧肺损伤+PDE-1组置于氧浓度85%的实验舱内制作高氧肺损伤模型,对照组置于同气压下的空气中。对照组、高氧肺损伤模型组从生后第1天起皮下注射0.9%的Na Cl溶液,高氧肺损伤PGE-1组注射2μg/(kg·d)的PGE-1,均连续注射7天。观察肺干湿质量比,计数肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数,HE染色观察支气管及肺泡的形态改变,核染色结合TUNEL查看肺组织凋亡,Western blotting法检测肺组织GRP 78、CHOP蛋白表达。结果对照组、高氧肺损伤模型组和高氧肺损伤+PGE-1组之间肺干湿质量比,BALF白细胞总数,细胞凋亡指数,肺组织GRP78、CHOP蛋白表达的差异均有统计学意义(P0.001),其中高氧肺损伤模型组上述指标最高,高氧肺损伤+PGE-1组居中,对照组最低,两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。肺组织病理切片观察见高氧肺损伤模型组肺泡腔增大、融合,间质细胞水肿,可见纤维渗出;高氧肺损伤+PGE-1组介于高氧肺损伤模型组和对照组之间。结论 PGE-1皮下注射对新生大鼠高氧肺损伤有治疗作用,其机制可能与抑制CHOP、GRP 78蛋白表达有关。     

糖皮质激素对高氧诱导新生大鼠肺组织RAGE-NF-κB通路的影响

目的探讨RAGE-NF-κB信号通路在新生大鼠高氧肺损伤过程中的变化,以及糖皮质激素对其的影响。方法 24只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧模型组和激素干预组。模型组新生大鼠于生后即暴露于95%氧气浓度环境中1周,空气对照组大鼠生后仅暴露于同室内空气中饲养7 d,激素干预组于造模后行尾静脉注射地塞米松(1 mg/kg),隔天1次,共3次。日龄13 d时处死全部大鼠,RT-PCR检测各组肺组织RAGE m RNA及NF-κB m RNA的表达;Western blot检测RAGE及NF-κB蛋白水平;ELISA法检测血清及肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和s RAGE含量;苏木精-伊红染色后行肺组织病理学评估。结果与对照组和激素干预组相比,高氧模型组肺组织RAGE、NF-κB的m RNA和蛋白表达水平均明显增高(均P0.05),血清中s RAGE含量明显升高(P0.01),BALF中s RAGE含量下降(P0.01);与对照组相比,激素干预组肺组织RAGE、NF-κB的m RNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05),血清中s RAGE含量明显升高(P0.05),而BALF中s RAGE含量明显下降(P0.05)。结论 RAGE-NF-κB通路在高氧诱导的新生大鼠肺损伤中活化增强,糖皮质激素可能通过下调RAGE-NF-κB信号通路对高氧肺损伤发挥保护作用。     

泛素-蛋白酶体途径在高体积分数氧肺损伤大鼠早期的激活

目的 探讨高体积分数氧(高氧)暴露早期大鼠肺损伤情况,以及泛素-蛋白酶体途径是否激活.方法 实验采用完全随机设计,SD大鼠20只随机分为高氧组和空气组,每组10只.空气组大鼠持续吸入空气(氧体积分数210 ml/L)72 h;高氧组大鼠持续吸入高氧(氧体积分数950 ml/L)72 h制备高氧肺损伤模型.并视肺形态学变化并确定大体病理分级,肺损伤病理评分;测定肺湿/干质量比值.免疫组织化学方法和Western blot方法检测肺组织泛素化蛋白的表达和蛋白酶体20 s的活性,评价泛素-蛋白酶体途径激活情况.结果 1.成功复制高氧肺损伤大鼠模型.2.大鼠高氧暴露后,出现明显肺水肿,肺湿/干质量比值增高(P=0).3.高氧组大鼠高氧暴露72 h肺组织鲜红色,饱满状,表面有点片状出血或局灶状出血,胸腔有少量积液.高氧组大体病理分级与空气组比较差异有显著性(P=0.005).光镜观察高氧组肺泡上皮肿胀,肺泡壁增宽,毛细血管扩张和充血,肺泡间质和肺泡腔水肿明显,肺泡内炎性细胞增多.高氧组肺损伤病理评分较空气组显著增高(P=0).4.免疫组织化学和Western blot结果均显示大鼠高氧暴露72 h肺组织泛素化蛋白表达显著增强(P=0).5.高氧组蛋白酶体20 s活性较空气组明显升高(P=0).结论 高氧暴露72 h对大鼠肺脏有明显损伤,弥散性肺泡上皮细胞、肺血管内皮细胞损伤,肺内炎性反应细胞浸润伴肺水肿为主要病理学改变.高氧暴露早期大鼠肺组织泛素-蛋白酶体途径激活,并参与肺损伤病理生理过程.     

p38丝裂素活化蛋白激酶在新生大鼠高氧肺损伤中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)在新生大鼠高氧肺损伤中的表达及其特异性抑制剂SB203580,对其产生保护作用的机制。方法160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤 SB203580组和高氧肺损伤 生理盐水组,建立模型。作用12、24、72h和1周后,分别处死大鼠。取右上肺进行肺组织病理学检查,取右下肺进行肺湿/干重比值(W/D)测定,取左肺以Western免疫印迹法检测肺组织中p38MAPK的表达,以酶联免疫吸附试验检测肺组织中TGF-β1的含量。结果72h时,高氧肺损伤组和高氧肺损伤 生理盐水组p38MAPK呈强阳性表达;在这两组中,肺组织TGF-β1浓度随时间延长呈持续上升趋势,在各时相点均明显高于空气对照组和高氧肺损伤 SB203580组(P均<0.01)。结论p38MAPK参与了新生大鼠高氧肺损伤的过程,SB203580能够通过阻断p38MAPK表达,进而抑制TGF-β1表达来减轻这种损伤。     

细胞色素b在早产新生大鼠高氧肺损伤肺组织中的表达和意义

目的探讨细胞色素b（cytochrome b，Cytb）与高氧肺损伤发生、发展的关系。方法早产新生SD（Sprague-Dawley）大鼠生后1d随机分为空气组、高氧组，高氧组持续暴露于常压氧舱中，氧浓度〉85％；空气组置于同一室常压空气中。两组分别于高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d时提取肺组织RNA，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定CytbmRNA表达；同时应用免疫组化方法检测肺组织切片中Cytb蛋白表达；应用Western-blot检测高氧肺损伤肺组织中Cytb蛋白水平的表达变化。结果与空气组相比，高氧暴露1d、4d CytbmRNA含量及其表达显著增强（P〈0．05）；7d后Cytb呈下降趋势，其表达较空气组减弱，但两者相比差异无统计学意义（P〉0．05）。高氧暴露后，随日龄变化肺组织Cytb免化结果与CytbmRNA表达相似；与空气组相比，高氧暴露1d、4d肺组织Cytb表达显著增强（P〈0．05）；7d后Cytb呈逐渐下降趋势，其表达较空气组减弱，但7、10d两组相比差异无统计学意义，14d极显著减弱（P〈0．01）。Western-blot实验结果：与空气组相比，高氧暴露1d、4dCytb蛋白水平表达增强但两组相比差异无统计学意义（P〉0．05）；7d后Cytb呈下降趋势，其表达较空气组减弱，但7、10d两组相比差异无统计学意义（P〉0．05），而14d显著减弱（P〈0．05）。结论85％高浓度氧暴露诱导早产新生大鼠线粒体编码的Cytb异常表达，这种变化可能参与高氧肺损伤的发生。     

早产儿出生早期粪便钙卫蛋白水平变化及临床意义

目的：探讨早产儿生后早期粪便钙卫蛋白（fecal calprotectin,FC）水平及影响因素,寻找早产儿胃肠道损伤的早期诊断指标。方法：将38例胎龄为29～33周的早产儿按早产原因分为胎膜早破（premature rapture of membrane,PROM）组、自发性早产(spontaneous preterm birth,SPB)组及有医学指征早产(indicated preterm birth,IPB)组,收集出生后第1次胎便及生后第3天最后1次粪便（以下简称为第1次和第2次粪便）,用ELISA法测定FC水平。结果：38例早产儿第1次与第2次FC水平差异无统学计意义（P>0.05）。PROM组第1次FC水平明显高于IPB组（P0.05）。结论：胎膜早破及出生窒息促进早产儿胃肠道分泌FC,生后早期FC水平可反映早产儿早期胃肠道喂养状况,可作为评价早产儿生后早期消化道功能的指标。     

高氧、维甲酸对早产鼠肺组织基质金属蛋白酶-2、-9 及特异性组织抑制物-1、-2表达的影响

目的探讨基质金属原蛋白-2(MMP-2)、MMP-9、基质金属蛋白酶特异性组织抑制物-1(TIMP-1)和TIMP-2在高氧肺损伤中的作用及维甲酸(RA)的保护作用机制。方法建立高氧(FiO285%)暴露早产SD大鼠肺损伤模型,应用RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2mRNA表达,采用明胶酶谱检测MMP-2和MMP-9酶原及活酶表达,采用Western blot技术检测TIMP-1和TIMP-2蛋白表达。结果与空气组比较,高氧暴露4、7、14d,MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达均显著升高(P均<0.01),MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶和TIMP-1蛋白的表达明显上调(P<0.05);RA对空气暴露下它们的表达均无明显影响(P均>0.05),但不同程度下调高氧暴露后MMP-2、MMP-9、TIMP-1mRNA的表达和MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶的表达,进一步提高TIMP-1蛋白表达;高氧、RA对TIMP-2 mRNA和蛋白的表达均无明显影响(P均>0.05)。结论高氧暴露明显改变MMPs/TIMPs的表达,在肺泡形成关键时期,MMPs/TIMPs之间平衡关系的破坏是造成肺发育受阻和纤维化的重要因素;通过协调MMPs/TIMPs之间的表达,改善肺泡结构,降低肺纤维化程度,从而逆转高氧所致肺损伤,是RA发挥保护作用的重要机制之一。     

高氧暴露对早产儿血单个核细胞血红素加氧酶-1蛋白表达水平及活性的影响

目的观察高氧暴露早产儿血单个核细胞血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白表达水平及活性变化。方法选择2008年2月至2009年8月本科住院吸入高浓度氧的40例早产儿（高氧组）和吸入常压空气的40例早产儿（对照组）,用Western Blot法检测血中单个核细胞HO-1蛋白表达水平、血清胆红素水平和血浆一氧化碳血红蛋白（COHb）百分比,并进行比较分析。结果与对照组相比,高氧组HO-1蛋白表达明显增加[（1.78±0.25）比（1.12±0.31）,P〈0.01],胆红素生成量（nmol.mg-1.h-1）及血浆COHb含量（μmol/L）均显著增加[（76.25±11.33）比（53.47±8.73）,（6.73±0.42）比（2.47±0.34）,P均〈0.01]。结论高氧暴露可上调早产儿血单个核细胞HO-1的表达及活性。     

三磷酸腺苷合成酶6、8与早产新生大鼠高氧肺损伤的相关性

目的 探讨线粒体呼吸链三磷酸腺苷合成酶6、8（ATPase6、8）与早产新生大鼠高氧肺损伤的关系。方法 早产新生SD大鼠生后1d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于常压氧舱中，氧体积分数〉850mL／L；空气组置于同一室常压空气中。二组分别于实验后1、4、7、10和14d提取其肺组织RNA．采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定ATPase6、8mRNA表达。结果 1．与空气组比较，高氧暴露1dATPase6mRNA表达显著增强（P〈0．05）；4、7、10d时无显著性差异（Pa〉0．05）；14d又显著增强（P〈0.01）。2．高氧组与空气组比较，ATPase8mRNA表达于1、4、10d时无显著改变（Pa〉0．05）；7、14d时明显增强（Pa〈0．05）。结论 高体积分数氧暴露诱导线粒体呼吸链中ATPase6、8异常表达，这种变化可能参与早产新生大鼠高氧肺损伤的发病过程。     

早产儿生后2周内粪便钙卫蛋白水平检测的临床研究

目的 动态测定早产儿生后2周内粪便钙卫蛋白（fecal calprotectin,FC）水平,分析影响FC分泌的临床因素,探讨其在评价早产儿胃肠功能的价值.方法 2012年5-9月中国医科大学附属盛京医院新生儿科收治的胎龄≤32周或出生体重≤l 200g的早产儿47例,根据生后第7d的喂养情况分成喂养耐受组29例及喂养不耐受组18例.收集生后第1次胎便、第7d及第14 d最后一次粪便（以下依次简称为FC1、FC2和FC3）50-100 mg.用酶联免疫吸附法（ELASA）测定FC水平.结果 47例早产儿FC3水平明显高于FC1和FC2水平（P＜0.05）;FC1与FC2水平差异无统计学意义（P＞0.05）.母亲分娩前有产前感染的早产儿FC1水平明显高于无产前感染者（P＜0.05）.FC2水平与生后抗生素使用时间（d）呈显著负相关（r =-0.325,P＜0.05）.喂养不耐受组FC2水平明显低于喂养耐受组（P＜0.05）.喂养耐受组FC2、喂养不耐受组FC3水平分别与第7d和第14 d的肠道喂养量呈显著正相关（r =0.433,0.479,P＜0.05）.结论 产前感染及生后肠道喂养可促进早产儿胃肠道分泌FC,生后早期FC水平可反映早产儿早期胃肠道喂养情况,可作为评价早产儿生后早期消化道功能的无创性生物学指标.     

新生大鼠高氧肺损伤P38活化和MMP-2 mRNA表达的研究

目的：观察高氧肺损伤新生大鼠肺组织中P38-丝裂原活化蛋白激酶（P38）的活化与基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA表达水平的变化,并探讨P38的活化对MMP-2 mRNA表达的影响。方法：将36只新生Sprague-Dawley大鼠随机分为空气组、高氧组和SB203580干预组,每组12只。建立高氧肺损伤动物模型,处理组给予相应的干预。各组分别于第3天和第7天处死大鼠,常规苏木精-伊红染色,观察肺组织病理学变化;Western blot检测肺组织P38蛋白的活化水平,RT-PCR检测肺组织MMP-2 mRNA表达的变化。结果：高氧组大鼠肺组织P38的活化和MMP-2 mRNA表达水平较空气组和干预组明显增强,差异有统计学意义（P<0.01）。结论：P38在新生大鼠高氧肺损伤中活化增强,可能参与MMP-2 mRNA表达的调控。     

高氧暴露对早产鼠肺组织HO-1和GCLC表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对新生早产大鼠肺组织中血红素加氧酶-1（HO-1）和谷氨酰-L-半胱氨酸连接酶催化亚单位（GCLC）动态表达的影响。方法受孕21 d大鼠行剖宫产取出早产鼠80只，喂养1 d后随机分为空气组和高氧组。空气组早产鼠放置在室内常压空气中饲养，高氧组早产鼠放置在同一室内常压氧箱中（氧浓度85%~95%）饲养，分别于第1、4、7、10、14天，每组取8只大鼠，采集两组早产鼠肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法检测两组早产鼠不同时间点肺组织结构的病理变化；采用Western blot技术和RT-qPCR检测两组早产鼠不同时间点肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化。结果与空气组相比，高氧组早产鼠体重下降显著（P < 0.05）。与空气组相比，高氧组早产鼠肺组织病理切片显示肺组织结构紊乱、肺泡间隔增宽、肺泡数目减少和肺泡简单化。高氧组早产鼠肺组织中HO-1 mRNA相对表达量在第7天时低于空气组，在第10、14天时高于空气组（P < 0.05）。高氧组早产鼠肺组织中GCLC mRNA表达量在第1、4、7天时低于空气组，在第10天时高于空气组（P < 0.05）。与空气组比较，高氧组早产鼠肺组织中HO-1蛋白表达水平在各时间点均升高；除第1天外，GCLC蛋白表达水平在其他各时间点均升高（P < 0.05）。结论高氧暴露导致早产鼠生长发育迟缓、肺发育阻滞。早产鼠肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化可能与高氧暴露导致早产鼠肺损伤发病过程相关。