沉默PRL-3基因表达抑制胃癌生长研究

目的 探究miRNA干扰沉默PRL-4基因表达对胃癌生长的作用.方法 构建表达人工PRL-3 miRNA的慢病毒载体,转染SGC7901细胞并沉默其PRL-3表达;噻唑蓝(MTT)试验评价PRL-3在SGC7901细胞增殖中的作用;移植瘤生长试验评估其在胃癌生长中的作用.结果 与转染空载体组比较,转染PRL-3 miRNA的慢病毒载体可抑制SGC7901细胞的增殖.荷瘤动物实验表明,转染PRL-3组肿瘤大小为(1.92±0.18)cm3,转染空载体组为(4.74±0.39)cm3,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 沉默PRL-3表达可抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,并抑制移植瘤的生长,可作为一种有潜力的抗肿瘤靶点.     

蛋白激酶B siRNA 转染对胃癌SGC-7901细胞生长增殖的影响

目的:探讨蛋白激酶B（PKB）基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用。 方法:应用基因转染技术将蛋白激酶B家族的Akt2 siRNA转染至胃癌细胞中，采用Western blot、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术MTT等方法观察和检测Akt2 siRNA转染后对转染组细胞生长和增殖的影响。结果:与对照组比较，转染Akt2 siRNA组的胃癌SGC-7901细胞生长、增殖速度明显减缓（P＜0.01）， Akt2 siRNA组较对照组细胞的Akt2蛋白表达水平显著下调（P＜0.01）;转染组出现梯状凋亡条带;细胞周期显示转染组细胞聚集在G2/M期。 结论:应用RNAi使蛋白激酶B基因沉默能使人胃癌SGC－7901细胞的生长受到抑制，胃癌细胞增殖速度减缓，其作用机理可能通过诱导细胞凋亡和抑制PI3/K信号传导通路而实现。Akt2有望成为胃癌基因治疗的新靶点。     

RASSF1A 基因对胃癌SGC7901细胞NF-κB活性的影响

目的 探讨RASSF1A基因对人胃癌SCC7901细胞NF-KB活性的影响.方法 电泳迁移实验分析RASSF1A基因转染前后SGC7901细胞NF-kB活性的变化.蛋白印迹和免疫细胞化学检测RASSF1A基因转染前后SGC7901细胞P65蛋白的表达.结果 与未转染组和转染空白载体组比较,转染RASSF1A基因组SCC7901细胞的NF-kB活性明显降低,P65蛋白的表达明显减少.结论 RASSF1A基因可能通过抑制P65的表达、降低NF-kB活性抑制从而抑制胃癌SGC7901细胞生长.     

小干扰RNA抑制人端粒酶逆转录酶基因对胃癌细胞增殖的影响

目的 应用小干扰RNA(siRNA)技术特异性抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因在胃癌SGC7901细胞中的表达,观察其对细胞增殖的影响.方法 hTERT基因的RNA干扰表达重组体用脂质体介导方法转染SGC7901细胞.荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测hTERT基因表达.TRAP-PCR法检测端粒酶活性、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖.结果 SGC7901细胞转染前后hTERT基因的表达强度分别为:转染pU6组平均表达量为6.5×105拷贝/μg RNA;转染pU6-hTERT-siRNA Ⅰ组平均表达量为4.1 × 104拷贝/μg RNA;转染pU6-hTERT-siRNAⅡ组平均表达量为5.4×104拷贝/μg RNA.转染pU6组与其余两组P值<0.01;转染pU6-hTERT-siRNA Ⅰ组和转染pU6-hTERT-siRNAⅡ组P值>0.05.端粒酶活性下降,细胞生长速度明显减慢.结论 小干扰RNA能有效抑制SGC7901细胞中hTERT基因表达,hTERT基因表达下调影响SGC7901细胞增殖.     

RASSF1A对人胃癌细胞株SGC7901增殖的影响

目的:观察外源性RASSF1A基因对人胃癌细胞SGC7901增殖的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3.0-RASSF1A质粒和空载体pcDNA3.0质粒分别导入SGC7901细胞，经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆。采用RT-PCR和蛋白印迹检测RASSF1A基因表达。绘制细胞生长曲线，并用裸鼠成瘤实验、平板克隆形成实验、流式细胞术分析转染细胞的生物学行为。结果〖HT8.5SS〗经脂质体转染和筛选，建立了高表达RASSF1A基因的SGC7901细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较，转染RASSF1A基因的SGC7901细胞生长速度明显减慢; 细胞周期中G1/G0期比例明显增加，而S期比例减少; 克隆形成率明显减少; 裸鼠成瘤抑制率为57.1%。结论:RASSF1A基因能抑制人胃癌细胞SGC7901的增殖。     

抑制HO-1基因表达对人胃癌细胞系SGC-7901的影响

目的：通过构建shRNA沉默HO-1基因,研究抑制HO-1基因表达对胃癌细胞系SGC-7901的影响。方法：构建靶向HO-1基因的shRNA干扰质粒转染人胃癌细胞系SGC-7901,荧光共聚焦显微镜下观察转染效率;应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、细胞免疫化学法分别在基因、蛋白质水平检测HO-1基因的抑制效果;应用MTT法检测HO-1基因沉默后胃癌细胞的生长情况。结果：与对照组比较,shRNA在基因、蛋白质水平特异地抑制了胃癌细胞SGC-7901中HO-1的表达,抑制率分别为62.4%、67.6%;HO-1的表达被抑制后,胃癌细胞SGC-7901生长受抑制（P〈0.05）。结论：shRNA-HO-1可有效抑制胃癌细胞中HO-1的表达;HO-1的沉默表达可抑制肿瘤细胞生长。     

RNA干扰沉默STIL基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨STIL在胃癌中的表达以及沉默STIL基因对胃癌细胞株SGC-7901各生物学活性的影响.方法 采用实时定量PCR（qPCR）法和Western Blot法检测STIL在胃癌及癌旁组织中的表达.构建靶向STIL的SiRNA并转染SGC-7901细胞,以MTT法检测细胞增殖、平板克隆法检测细胞克隆形成,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中STIL在mRNA和蛋白水平表达显著增高.与对照组相比,STIL特异性SiRNA（Si-STIL）转染后,SGC-7901细胞中STIL mRNA表达受到抑制,细胞增殖、克隆形成能力下降,凋亡增加,细胞周期被阻滞于S期.结论 STIL在胃癌组织中高表达,STIL基因沉默可抑制胃癌细胞生长和克隆增殖、抑制有丝分裂期（M期）转换,促进细胞凋亡.     

INI1基因对胃癌细胞增殖活性的影响及其机制

目的 通过改变INI1基因表达水平探讨INI1对胃癌细胞增殖活性影响的分子机制.方法 荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法检测15例胃癌及癌旁组织INI1 基因mRNA和蛋白质的表达水平;将INI1-GFP真核表达质粒及INI1特异性小干扰RNA(INI1-siRNA)分别转染人胃癌SGC7901细胞株,Western blot方法检测过表达及下调表达INI1的效率;噻唑蓝(MTT)比色法检测过表达及下调表达INI1后SGC7901细胞的增殖活性的改变,荧光定量RT-PCR及Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达改变.结果 临床胃癌组织中INI1蛋白及mRNA表达水平明显低于癌旁组织(P＜0.01);INI1-GFP转染S1GC7901细胞可明显增加INI1表达水平,同时降低细胞增殖活性(P值均＜0.01);而INI1-siRNA转染可明显降低INI1表达水平,同时增加SGC7901细胞增殖活性(P值均＜0.01);上调INI1表达可抑制PCNA表达水平,而下调INI1表达则增加PCNA的表达(P值均＜0.01).结论 INI1具有抑制胃癌细胞增殖的作用,此作用与其负向调节PCNA表达有关.     

跨膜丝氨酸蛋白酶4对肝细胞癌增殖侵袭作用的影响

目的 探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4 (transmembrane protease serine 4,TMPRSS4)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖侵袭的作用.方法 构建并鉴定慢病毒转染TMPRSS4过表达的人肝细胞癌细胞系BEL-7402.Western blot及RT-PCR检测TMPRSS4的表达.MTT实验检测TMPRSS4对BEL-7402细胞增殖能力的影响.Transwell实验检测TMPRSS4对细胞侵袭性的影响.结果 RT-PCR及Western blot结果显示TMPRSS4过表达组细胞TMPRSS4蛋白及mRNA表达均显著高于对照组及空白载体转染组.MTT实验结果显示,慢病毒转染后,对照组、空白载体转染组和TMPRSS4过表达组细胞增殖能力无显著差异(P＞0.05).侵袭实验显示TMPRSS4过表达组细胞穿过Matrigel胶到达Transwell小室膜背面的细胞数为49.3±7.4,显著高于对照组(23.3±5.0)和空白载体转染组(19.3±3.2)(P＜0.05).结论 HCC细胞表达TMPRSS4.TMPRSS4过表达可促进HCC细胞的侵袭能力,但是不影响HCC细胞增殖.     

组织因子对人胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响

目的 构建稳定转染人组织因子(TF)的人胃癌细胞株SGC7901,研究TF对胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响.方法 采用巢式PCR技术自人胎盘组织克隆目的基因TF,应用脂质体介导的转染技术将其导入人胃癌细胞株SGC7901,采用G418筛选稳定表达TF的细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测TF mRNA及蛋白的表达,并进行Transwell实验及划痕实验观察细胞体外侵袭转移能力的变化.结果 经基因测序证实成功构建了稳定、高效表达TF的人胃癌细胞系SGC7901/TF.转染组TF mRNA及TF蛋白表达增高;与阴性对照组及空白对照组相比,转染组细胞的体外侵袭转移能力增强.结论 TF能够增强人胃癌细胞的体外侵袭转移能力.     

High Expression of PRL-3 can Promote Growth of Gastric Cancer and Exhibits a Poor Prognostic Impact on Patients

High expression of PRL-3 had been implicated in lymph node metastasis of gastric cancer. In the present study, we detected the expression of PRL-3 in primary gastric cancer tissue, and evaluated its role in gastric cancer growth and the prognostic impact on patients. PRL-3 phosphatase expression was measured in 137 gastric tumor samples by using the immunohistochemistry method, and the overall survival rate was compared between the patients with high PRL-3 expression (n = 85) and those with moderate or low PRL-3 expression (n = 52). RNA interference, mediated by recombinant lentivirus expressing artificial PRL-3 miRNA, was used to knockdown PRL-3 expression in SGC7901 cell line. MTT assay and animal experiment were conducted to determine the role of PRL-3 in the proliferation of SGC7901 cells and tumor growth. PRL-3 expression was more frequently detected in tumors with a diameter >40 mm and in advanced stages. Furthermore, the overall survival rate of high PRL-3 expression was significantly lower than that of moderate or low PRL-3 expression (P < 0.001), and multivariate analysis showed that PRL-3 expression level independently influences the survival of patients (P = 0.024). Importantly, knockdown of PRL-3 significantly suppressed the proliferation of SGC7901 cells and slowed the tumor growth compared with controls (P < 0.05). PRL-3 is associated with gastric cancer progression. High PRL-3 expression in the primary lesion had a negative impact on prognosis. PRL-3 plays a key role in the control of gastric cancer growth. PRL-3 should be considered as a potential therapeutic target and a prognostic factor. Zhao Wang and Shi-Rong Cai contributed equally to this work.     

RhoC基因高表达对胃癌细胞血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 探讨RhoC基因对胃癌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及其意义。方法 常规脂质体转染法将RhoC基因重组质粒转染人胃癌细胞系SGC7901；应用免疫细胞化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)法检测胃癌细胞转染RhoC基因重组质粒前后VEGF、bFGF蛋白表达的变化。结果 转染RhoC基因重组质粒在SGC7901细胞中有稳定表达。转染RhoC基因重组质粒SGC7901表达VEGF、bFGF明显强于对照组。结论 体外条件下RhoC基因可促进胃癌细胞VEGF、bFGF的表达。这可能是RhoC基因促进胃癌细胞侵袭、转移的分子基础。RhoC基因的表达可望作为估计胃癌转移的参考指标。     

奥曲肽对人胃癌细胞的凋亡诱导作用

目的 探讨生长抑素对人胃癌细胞的抑制作用及其作用机理。方法 以生长抑素类似物奥曲肽作用于人胃癌细胞株SGC-7901细胞，以人成纤维细胞株HF作为正常细胞对照，以5-FU作为阳性药物对照，通过MTT实验、荧光显微镜观察及流式细胞术分析，得出结论。结果 一定浓度范围内的奥曲肽对SGC-7901细胞产生抑制作用，其抑制作用具有量效关系和饱和性。奥曲肽对SGC-7901细胞的抑制程度接近于5-FU对他的抑制，而对HF细胞无影响。奥曲肽可诱导SGC-7901细胞凋亡。结论 奥曲肽在体外对SGC-7901细胞具有抑制作用，诱导肿瘤细胞凋亡可能是其作用机理之一。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞SGC7901内质网凋亡的作用

目的 观察内质网凋亡在泛素-蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡中的作用.方法 实验组分别给予终质量浓度为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0ìmol/L的MG-132加入胃癌细胞SGC-7901,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪检测细胞内质网凋亡标志物CHOP和Caspase-12的表达,透射电镜检测凋亡小体.结果 MG-132对胃癌细胞有显著抑制作用,24、48、72 h的ICS0分别为13.233 82、8.595 85、0.472 28 ìmol/L,回归方程为Y=0.009X1+0.026X2-0.098;在MG-132作用后48 h胃癌细胞明显表达内质网凋亡标志物CHOP和Caspase12,透射电镜下发现大量凋亡小体.结论 MG-132能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡,并诱导内质网凋亡.     

5-Aza-CdR调控胃癌细胞系RASSF1A基因表达及对细胞生长的抑制作用

目的观察去甲基化制剂5-Aza-CdR对体外培养的胃癌细胞SGC7901RASSF1A基因的去甲基化和表达调控及生长抑制作用。方法5-Aza-CdR处理SGC7901细胞后,应用MTT法、流式细胞术、AnnexinV．FITC染色法检测细胞增殖活性、细胞周期分布及细胞凋亡率;应用MSP、RT-PCR及Westem印迹法检测RASSF1A基因的甲基化状态、mRNA及蛋白表达。结果5-Aza-CdR处理后,胃癌细胞SGC7901生长受到抑制（P〈0．05）,细胞周期呈现G1期阻滞,细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。RASSF1A基因在SGC7901中呈异常甲基化状态,在mRNA及蛋白水平表达阴性：5-Aza-CdR处理后RASSF1A基因呈去甲基化状态,在mRNA及蛋白水平重新表达。结论去甲基化制剂5-Aza-CdR调控胃癌细胞SGC7901RASSF1A基因去甲基化及重新表达．对SGC7901细胞具有生长抑制作用。     

miR-622在胃癌细胞中的表达及其功能的研究

目的 研究miR-622在胃癌细胞中的表达,探讨miR-622在胃癌中的生物学功能.方法 采用实时荧光定量PCR检测miR-622在胃癌细胞中的表达,以胃癌细胞SGC-7901和NCI-N87为模型瞬时转染miR-622寡核苷酸前体或抑制体,通过克隆形成、侵袭和划痕实验验证其在胃癌细胞中的功能.结果 荧光定量PCR实验结果表明:miR-622在胃癌细胞SGC-7901中相对表达量为1.29±0.58,而在NCI-N87细胞中相对表达量为10.96±1.02.在SGC-7901细胞中转染了miR-622 寡核苷酸前体,克隆形成率为76％.划痕试验中愈合能力为(11±7)μm,胃癌细胞侵袭能力为(732±3)个,与对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miR-622能够促进胃癌细胞克隆形成、迁移和侵袭.     

索拉菲尼对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡和P-ERK表达的影响

目的：探讨多分子靶向药物索拉菲尼（sorafenib）对体外人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响及对癌细胞P-ERK表达的影响,并探讨其可能机制。 方法：以MTT法检测索拉菲尼对SGC-7901细胞的杀伤抑制作用;免疫细胞化学法检测胃癌细胞内P-ERK蛋白的表达;流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡的变化情况。 结果：索拉菲尼对胃癌细胞生长增殖具有抑制作用,随药物浓度的增加作用也增强,呈剂量—时间双效应关系(P<0.05);经索拉菲尼处理的SGC-7901细胞的P-ERK表达明显下降(P<0.05);细胞凋亡率增高(P<0.05)。 结论：sorafenib在体外对SGC-7901细胞具有明显的抑制作用,主要机制为抑制其P-ERK表达,从而抑制其增殖和促进凋亡。