利拉鲁肽对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

 目的 探究胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)类似物利拉鲁肽(GLP-1 analogue,Liraglutide)对大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells, CMEC)缺氧复氧损伤的影响。方法 双酶消化法体外分离培养SD大鼠CMEC,实验的细胞分为正常对照组、Liraglutide(0~100 nM)组、H/R组、H/R+Liraglutide组。建立缺氧复氧模型(hypoxia/reoxygenation model,H/R)诱导的细胞氧化应激凋亡模型,流式细胞学检测细胞凋亡率,DCFHDA荧光探针检测胞内ROS的变化免疫荧光染色和Western Blot检测XO、caspase3等蛋白分子的表达情况,通过比较各组中XO、ROS以及凋亡相关蛋白caspase3的表达情况阐明Liraglutide在抗细胞氧化应激过程中的保护作用机制。结果 与正常对照组细胞相比,H/R模型条件诱导细胞中XO表达增加,生成过量ROS及凋亡蛋白的表达,最终导致凋亡细胞数量显著提高至20.66%±1.30%。Liraglutide预处理12 h抑制了H/R诱导的XO的激活,最终降低胞浆过量ROS并将细胞的凋亡数量降低至8.36±1.19%。结论 H/R模型导致XO-ROS激活,生成过量胞浆ROS,最终介导了CMEC的线粒体凋亡通路激活,而予以Liraglutide预处理可以逆转上述过程。     

U50,488H抑制缺氧/复氧心肌细胞线粒体分裂作用及机制

目的探讨外源性κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50,488H对缺氧/复氧(H/R) H9C2心肌细胞线粒体分裂的作用及机制。方法将H9C2心肌细胞随机分为常氧对照组(Control组)、H/R组、H/R+U50,488H组(H/R+U组)、H/R+κ-OR阻断剂(nor-BNI)+U50,488H组(H/R+N+U组)、H/R+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂wortmannin+U50,488H组(H/R+W+U组)、H/R+蛋白激酶B(Akt)抑制剂MK2206+U50,488H组(H/R+M+U组)。采用CCK8试剂盒检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体形态;免疫印迹法检测细胞内PI3K、Akt、线粒体动力学分裂相关蛋白1(Drp1)的表达。结果与Control组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率显著增加,线粒体分裂增加,磷酸化PI3K与Akt表达略增加,磷酸化Drp1 Ser637表达显著降低(P <0. 05);与H/R组比较,H/R+U组细胞活力增加,细胞凋亡率下降,线粒体分裂减少,磷酸化PI3K、Akt Ser473与Drp1 Ser637表达均显著增加(P <0. 05)。结论 H/R可引起心肌细胞凋亡及线粒体异常分裂,使用U50,488H激活κ-OR后,可通过PI3K-Akt通路促使Drp1 Ser637磷酸化,抑制H/R心肌细胞线粒体异常分裂,减少细胞凋亡。     

Tom70/PNPT1线粒体转位调控在大鼠心肌细胞缺氧性损伤中的作用及其机制

目的 探讨线粒体外膜转位酶70(Tom70)/多核糖核苷酸核苷转移酶1(PNPT1)线粒体转位调控在大鼠心肌细胞缺氧性损伤中的作用及其机制。方法 (1)将大鼠H9C2心肌细胞分为对照组(常氧条件培养12 h)与缺氧组(缺氧干预12 h)，采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，qPCR检测TUBA mRNA表达情况，Western blotting检测PNPT1蛋白表达情况。(2)利用携带Tom70序列的慢病毒载体转染H9C2细胞，分为NC组(慢病毒阴性对照组，转染慢病毒空载体)、Tom70过表达组(转染携带Tom70序列的慢病毒载体)、缺氧+NC组、缺氧+Tom70过表达组，采用Westernblotting检测各组Tom70、PNPT1蛋白表达水平，采用流式细胞术检测缺氧+NC组、缺氧+Tom70过表达组细胞凋亡率，qPCR检测缺氧+NC组、缺氧+Tom70过表达组TUBA mRNA表达情况，免疫共沉淀技术检测细胞中Tom70与PNPT1的相互作用情况。结果 (1)流式细胞术检测结果显示，与对照组比较，缺氧组细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。qPCR检测结果显示，与对照组比较，缺...     

RNA干扰组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的调控机制研究

目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法胰腺癌PaTu8988细胞株分为空白对照组(不予任何处理)、阴性对照siRNA组(予以30nmol/L阴性siRNA)、siRNA1组(予以15nmol/LHDAC1siRNA)和siRNA2组(予以30nmol/LHDAC1siRNA)。siRNA转染48h后,用相对实时定量RT-PCR法和West-ernblotting检测HDAC1基因表达情况;相对实时定量RT-PCR法检测细胞增殖凋亡相关基因p21、Bcl-2、Bax的表达;WST-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1mRNA表达量在siRNA1组和siRNA2组分别为46.1%±6.1%和32.3%±1.4%,均显著低于空白对照组(100.0%±3.4%)和阴性对照siRNA组(87.4%±28.3%,P<0.05)。Westernblotting显示HDAC1蛋白表达量亦明显下降,以siRNA2组表达量最低(P<0.05)。WST-8法检测显示4组细...     

miR-149-5p靶向FGF21对大鼠心肌细胞的缺氧/复氧损伤的促进作用

目的 探究miR-149-5p与成纤维细胞生长因子21(FGF21)的靶向关系，及其对大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响。方法 将10只C56BL/6J雄性小鼠构建缺血再灌注(I/R)模型，qRT-PCR法检测I/R小鼠心脏组织中miR-149-5p表达水平的变化。将培养至生长对数期的H9c2大鼠心肌细胞分为对照组、H/R组、H/R+miR-149-5pinhibitor组、H/R+miR-149-5p NC组、H/R+miR-149-5p mimics组、H/R+miR-149-5p mimics+FGF21组，并诱导H/R模型及转染处理。ELISA法检测H9c2细胞中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性；MTT法检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡情况；qRT-PCR检测细胞中miR-149-5p的表达水平；Western blotting检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、FGF21蛋白的表达水平；双荧光素酶测定miR-149-5p与FGF21的靶向关系。结果 与假手术组比较，I/R小鼠心脏组织中miR-149-5p表达水平明显升高(P&l...     

高压氧对脑缺血再灌注致线粒体过氧化损伤的保护作用研究

目的 通过观察高压氧(HBO)对局灶性脑缺血再灌注(CI/R)所致脑组织细胞线粒体过氧化损伤及凋亡的影响,探讨HBO对抗CI/R损伤的作用及其机制.方法 将80只SD大鼠按随机数字表法分为4组:假手术对照组(假手术组)8只,CI/R组、CI/R后常压吸氧(CI/R+N)组、CI/R后HBO治疗(CI/R+HBO)组,每组24只.采用大脑中动脉内线栓阻断法(MCAO)制备大鼠局灶性CI/R模型.(假手术组)操作步骤相同,但仅将线栓插入大脑中动脉10 mm后退出.假手术组、CI/R组术后不予任何处理,CI/R+N组术后30 min常压下吸纯氧,CI/R+HBO组术后30 min行常规HBO处理,均为60 min/次,1次/12 h.每组于CI/R术后12、24、48 h各处死8只大鼠,取CI/R损伤灶脑组织,采用比色法检测脑组织内线粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,流式细胞技术检测脑细胞凋亡率.结果 CI/R组术后12、24、48 h SOD活性持续下降,显著低于假手术组[(139.21±11.52与(214.13±13.76)、(127.41±12.36)与(214.13±13.76)、(112.33±11.69)与(214.33±13.76)×10-6U/g)](均P＜0.01);CI/R+N组12、24、48 h SOD活性[(157.16±8.91)、(146.33±9.93)、(133.49±10.21)×10-6 U/g)]明显高于CI/R组(均P＜0.05),CI/R+HBO组12、24、48 h SOD活性[(176.80±12.35)、(169.43±12.41)、(161.56±13.81)×10-6 U/g)]显著高于CI/R组和CI/R+N组(均P＜0.05),显示CI/R后HBO治疗能有效地保护线粒体SOD的活性.CI/R组MDA含量术后持续增高,12、24、48 h显著高于假手术组(均P＜0.01).CI/R+N组MDA含量术后12、24、48 h时均低于CI/R组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05);CI/R+HBO组MDA含量术后24、48 h时均显著低于CI/R组(均为P＜0.01)和CI/R+N48 h组(均P＜0.05),显示HBO治疗可有效抑制MDA的产生.CI/R组术后12、24、48 h脑细胞凋亡率持续增高,均显著高于假手术组(均P＜0.01);CI/R+N组术后24、48 h组脑细胞凋亡率均低于CI/R组,但差异无统计学意义(均P＞0.05);CI/R+HBO组术后24、48 h脑细胞凋亡率均显著低于CI/R组(均P＜0.05)和CUR+N 48 h组时(均P＜0.05);显示HBO治疗能有效降低CI/R后脑细胞凋亡率.结论 HBO治疗可明显增强细胞线粒体的稳定性,有效保护CI/R后脑组织线粒体SOD的活性,减轻大鼠CI/R所致线粒体过氧化损伤及脑细胞凋亡,较常压吸氧具有更显著的脑保护作用.     

p53调控信号转导子和转录激活子3对肺癌细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨p53调控信号转导子和转录激活子3(STAT3)对肺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 细胞分组为空白对照组、阴性对照组、p53 小干扰RNA(siRNA)组、p53 siRNA+STAT3 siRNA组,采用western blot法检测组织中p53和STAT3蛋白表达水平;采用Transwell法检测转染后体外迁移能力和侵袭能力;采用流式细胞术膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(AV-PI)双染法检测转染后凋亡情况。结果 肺癌组织中p53表达水平明显下调,而STAT3表达阳性率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染p53的siRNA能显著上调肺癌细胞中STAT3的表达水平;p53 siRNA组和p53 siRNA+STAT3 siRNA组A549细胞凋亡率(17.91%±0.67%,22.51%±0.56%)、细胞的迁移速度[(55.16±6.50)μm/h,(63.30±5.98)μm/h]、穿膜细胞数(58.23±7.12,68.23±7.14),与空白对照组和阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 p53在肺癌中呈现低表达,p53能负向调控STAT3的表达,从而抑制其增殖和凋亡能力。     

利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响

 目的 研究利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响。方法 采用原代培养的乳鼠心肌细胞,建立缺氧和高糖模型。实验分为:正常对照组、利拉鲁肽对照组、缺氧和高糖模型组、利拉鲁肽处理组、胰高血糖素样肽-1 (glucagon like peptide-1, GLP-1)受体抑制剂组、高渗对照组6组。采用荧光分光光度法检测心肌细胞内钙离子变化,化学荧光法检测活性氧族(reactive oxygen species, ROS)水平、利用生化方法检测Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性、RT-PCR技术检测钙敏感的钙蛋白酶(μ-calpain)基因表达、流式细胞仪测定细胞凋亡率、ELISA法检测细胞caspase-3活性。结果 与正常对照组相比,缺氧高糖模型组细胞内ROS水平、μ-calpain mRNA表达量、caspase-3活性均显著升高(P<0.01);Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.01);游离钙离子浓度由(117.19±15.04)nmol/L增加至(508.53±26.11)nmol/L,细胞凋亡率由(3.95±0.12)%增加至(31.03±4.30)%(P<0.01)。利拉鲁肽处理组细胞较缺氧高糖模型组上述参数均明显改善,游离钙离子浓度和细胞凋亡率显著降低(P<0.01);GLP-1R抑制剂exendin(9-39)可拮抗利拉鲁肽的上述作用(P<0.05)。结论 利拉鲁肽可明显抑制缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载及μ-calpain基因的上调,降低caspase-3水平,减少心肌细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用。     

rrBMP-7基因对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用

目的 探讨骨形态发生蛋白-7(BMP-7)基因对缺氧复氧损伤后心肌细胞的保护作用.方法 将体外培养的乳大鼠心肌细胞分为3组:对照组(C组);缺氧复氧组(HR组):将培养的心肌细胞缺氧120min,复氧240min;转染组(BT组):将重组鼠BMP-7质粒转染心肌细胞后,再缺氧120min/复氧240min.每组重复8次.心肌细胞损伤程度以心肌细胞搏动功能评定、台盼蓝摄取率和乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CPK)活性来表示,同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.通过荧光成像技术检测各组心肌细胞内钙含量的变化.结果 与C组比较,HR组心肌细胞LDH、CPK含量显著增高,台盼蓝摄取率增加,SOD活性和细胞搏动频率显著下降,MDA和钙离子含量显著增高.与HR组比较,BT组心肌细胞台盼蓝摄取率降低,LDH活性减低,SOD活性增高,MDA含量下降,细胞内钙离子含量降低.结论 BMP-7转染可对抗缺氧复氧对心肌细胞的损伤,其机制与提高心肌细胞抗氧化损伤能力,对抗缺氧复氧引起的细胞内钙超载有关.     

小干扰RNA抑制核因子-κB增强131I治疗甲状腺癌疗效的研究

目的 探讨小干扰RNA (siRNA)抑制核因子-κB (NF-κB)对131I致DTC细胞凋亡能否产生协同作用.方法 2×104 MBq/L 131I作用人甲状腺乳头状癌细胞株KTC-1 24 h后做DNA结合实验,48 h后做细胞存活分析.Western blot鉴定131I作用6h后细胞NF-κB p65的变化,24 h后凋亡抑制因子[X-染色体相关凋亡抑制蛋白(XIAP)、细胞凋亡抑制因子1(clAP1)、B细胞淋巴瘤因子大亚基(Bcl-xL)]、凋亡关键因子[半胱氨酸蛋白酶(caspase 3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)]的变化.p65和凋亡抑制因子的Western blot检测分4组:未转染(A)组、未转染+131I(B)组、转染对照siRNA+ 131I(C)组和转染p65 siRNA+131I(D)组;其余实验分为6组:未转染(1)组、转染对照siRNA(2)组、转染p65 siRNA(3)组、未转染+131I(4)组、转染对照siRNA+131I(5)组和转染p65 siRNA+131I(6)组.多组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用q检验.结果 1至6组DNA结合率分别为(100.00±11.65)％、(96.00±17.98)％、(9.28±5.01)％、(322.72±50.81)％、(311.36±44.81)％和(36.96±15.66)％,差异有统计学意义(F=137.74,P＜0.01);131I作用后KTC-1细胞NF-κB活性均增强(q4∶1组=10.90,q5∶2组=11.38,均P＜0.01);p65 siRNA可抑制NF-κB功能(q1∶3组=18.25,q4∶6组=13.71,均P＜0.01).6组细胞存活率分别为(100.00±11.65)％、(96.32±9.44)％、(70.88±7.41)％、(64.16±9.50)％、(62.24±9.37)％和(28.64±6.74)％ (F=52.76,P＜0.01);3、4和6组比,q=10.76和7.79,均P＜0.01.Western blot结果显示A、B、C和D组p65相对表达水平分别为(56.60 ±7.37)％、(111.07±13.31)％、(113.16±15.04)％和(12.46±2.74)％,差异有统计学意义(F=60.17,P＜0.01);131I作用后p65浓度增高(qB∶A组=6.20,qc∶A组=5.85,均P＜0.01);p65 siRNA可抑制其浓度增高(qB∶D组=12.57,qc∶D组=11.41,均P＜0.01).4组XIAP、cIAP1和Bcl-xL分别为(17.59±1.96)％、(16.45±1.85)％和(19.92±2.22)％,(98.37±17.92)％、(109.81±19.16)％和(95.59±22.20)％,(98.43±18.71)％、(98.86±15.88)％和(100.99±21.70)％,(7.00±0.95)％、(5.86±0.35)％和(9.52±0.90)％,差异均有统计学意义(F =44.22、56.51和29.11,均P＜0.01);131I作用后三者表达增加(qB∶A组 =7.76、8.40和5.88,均P＜0.01);p65 siRNA可抑制三者表达(qB∶D组=8.82、9.40和6.71,均P＜0.01).6组caspase 3亚基p19和p17、PARP活性蛋白p116和失活产物p89差异均有统计学意义(F=39.03、48.45、32.56和52.20,均P＜0.01);3、4和6组比q =3.18 ～9.98,均P＜0.05.结论 131I通过活化NF-κB导致甲状腺癌细胞内凋亡抑制因子表达升高,p65 siRNA可抑制这种变化;联合使用p65 siRNA对131I致DTC细胞凋亡产生协同效应.     

Radiation-induced apoptosis in vivo: therapeutic significance of apoptosis in radiation therapy

Apoptotic cell death is frequently found in certain tumor cells after irradiation; however, the incidence is not always high in vivo. Seven tumors were transplanted to nude mice, and their organs were histologically examined after irradiation to study the therapeutic significance of apoptosis in radiation therapy. A high incidence of apoptosis was found only in radiosensitive tumors or normal cells with wild-type p53, but the peak incidence in most cells was only a few percent or less. However, the calculated total incidence of apoptotic cell death was much higher than the actual peak incidence, because the half-life of apoptosis is very short. Even in radioresistant tumors, total radiation-induced apoptosis was estimated to be about 10 percent. These results suggest that apoptotic cell death in radiotherapy may be more important in vivo than previously estimated.     

Cardiovascular molecular imaging of apoptosis

INTRODUCTION: Molecular imaging strives to visualise processes at the molecular and cellular level in vivo. Understanding these processes supports diagnosis and evaluation of therapeutic efficacy on an individual basis and thereby makes personalised medicine possible. APOPTOSIS AND MOLECULAR IMAGING: Apoptosis is a well-organised mode of cell suicide that plays a role in cardiovascular diseases (CVD). Apoptosis is associated with loss of cardiomyocytes following myocardial infarction, atherosclerotic plaque instability, congestive heart failure and allograft rejection of the transplanted heart. Thus, apoptosis constitutes an attractive target for molecular imaging of CVD. Our current knowledge about the molecular players and mechanisms underlying apoptosis offers a rich palette of potential molecular targets for molecular imaging. However, only a few have been successfully developed so far. AIMS: This review highlights aspects of the molecular machinery and biochemistry of apoptosis relevant to the development of molecular imaging probes. It surveys the role of apoptosis in four major areas of CVD and portrays the importance and future perspectives of apoptosis imaging. The annexin A5 imaging protocol is emphasised since it is the most advanced protocol to measure apoptosis in both preclinical and clinical studies.     

线粒体在细胞凋亡中的作用研究进展

在细胞凋亡中,线粒体起着中心调控作用,在某种意义上,线粒体可以决定细胞的生存或死亡[1,2]。线粒体具有氧化磷酸化、传递电子、贮存Ｃａ2+、能量代谢、抗活性氧化等重要生理作用,它为细胞的各种生命活动提供基础能量。细胞凋亡过程中许多重要事件的发生都与线粒体密切相关,包括Ｃａｓｐａｓｅ激活因子的释放,如细胞色素Ｃ(ＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣ,ＣｙｔＣ)、电子传递链的改变、线粒体膜电位(ΔΨｍｔ)的丧失、细胞内氧化还原状态的改变、Ｂｃｌ-2家族促进和抑制凋亡蛋白的参与等。不同信号的传导最终都集中到线粒体上来启动或抑制这些…     

肿瘤辐射敏感性与细胞凋亡

辐射敏感性是肿瘤细胞复杂的生物学现象,在辐射诱导的细胞反应中具有不同的组织细胞类型特异性。肿瘤瘤射敏感性与辐射诱导的细胞凋亡密切相关,并受P53及其相关蛋白、Bcl-2基因家族蛋白、Fas及神经鞘磷脂-神经酰胺介导的信号途径、caspases级联反应等调控。     

氧化应激与细胞凋亡

哺乳动物细胞的生存要求适当的氧化与抗氧化平衡，而活性氧中间产物则破坏这一平衡且在细胞凋亡中起重要作用。氧化应激介导的细胞凋亡，可能与活性氧中间产物对ＤＮＡ损伤导致的聚ＡＤＰ核糖转移酶活化和Ｐ５３的积累以及脂质过氧化物使细胞内Ｃａ＾２＋水平增加有关，氧化应激也可通过活化对其敏感的核转录因子如ＮＦ－ＫＢ诱导细胞凋亡。     

存活素与辐射诱导的凋亡

存活素(survivin)是一种新发现的细胞内蛋白,属于抗细胞凋亡蛋白家族,在胚胎和各类肿瘤中均表达,但在除胸腺和睾丸以外的成人组织中未被发现。阐明存活素在细胞凋亡和增生中的分子机制及其作用,在抗癌治疗和抑制对机体有害的细胞凋亡方面具有重要意义。     

电离辐射与细胞凋亡

电离辐射诱导细胞凋亡已成为治疗恶性肿瘤的重要方法,细胞凋亡作为一种主动的细胞消亡过程,与电离辐射的诱导关系正逐步完善,细胞膜改变是电离辐射诱导细胞凋亡的主要特征,电离辐射诱导细胞凋亡的程度与辐射剂量、照射方式及传能线密度密切相关,它的机制包括基因调控、信号转导、离子代谢、酶和蛋白因子的参与,共同形成一个复杂的生物学网络。     

CIDEs在细胞程序化死亡中作用的研究进展

与DNA裂解因子DFF45同源性高的一类蛋白称之为CIDE（Cell death-inducing DFF45-like effector，CIDE），即诱导细胞死亡DFF45样的效应因子，是重要的凋亡相关因子，参与或调节DNA的降解。当DNA降解不完全时，凋亡表现为不典型，或称为类凋亡。本文就CIDEs参与程序化死亡的进展作一综述。     

Molecular imaging of apoptosis in cancer

Apoptosis plays an important role in cancer. Mechanisms hindering its action are implicated in a number of malignancies. Also, the induction of apoptosis plays a pivotal role in non-surgical cancer treatment regimes such as irradiation, chemotherapy, or hormones. Recent advanced in imaging science have made it now possible for us to detect and visualize previously inaccessible and even unrecognized biological phenomena in cells and tissue undergoing apoptosis in vivo. Not only are these imaging techniques painting an intriguing picture of the spatiotemporal characteristics and metabolic and biophysical of apoptosis in situ, but they are expected to have an ever increasing impact in preclinical testing and design of new anticancer agents as well. Rapid and accurate visualization of apoptotic response in the clinical settings can also be of significant diagnostic and prognostic worth. With the advent of molecular medicine and patient-tailored treatment options and therapeutic agents, such monitoring techniques are becoming paramount.     

细胞凋亡的分子功能显像

细胞凋亡（cell apoptosis）,又称为程序性细胞死亡（programmed cell death,PCD）,是一种由多种基因调控的主动性细胞死亡过程,见于胚胎发育、组织分化、免疫调节等诸多生理过程和恶性肿瘤、自身免疫疾病等多种病理情况.早期研究细胞凋亡几乎都是体外检测法,如电子显微镜形态学观察,DNA凝胶电泳,ELISA测定核小体,流式细胞仪定量分析法,DNA原位切口末端标记（TUNEL）法等[1].