γ-促分泌酶抑制剂阻断Notch信号对支气管哮喘模型小鼠气道炎症的影响

目的 研究γ-促分泌酶抑制剂阻断Notch信号对支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠气道炎症反应的影响,为哮喘治疗寻找新的药物提供理论基础.方法 制作小鼠哮喘模型,在小鼠激发阶段尾静脉注射γ-促分泌酶抑制剂MW167,采用RT-PCR方法检测小鼠肺T细胞IL-4 mRNA及IFN-γmRNA的表达,ELISA方法检测外周血清及BALF上清中IL-4及IFN-γ水平.结果 MW167注射组较哮喘组病理学改变减轻,而肝及肾无明显形态学改变,MW167阻断Notch信号后,MW167注射组小鼠肺T细胞IL-4 mRNA的表达较哮喘组减弱,而IFN-γ mRNA的表达增强(IL-4:0.119±0.045比0.414±0.214,P＜0.01; IFN-γ:0.459±0.205比0.170±0.050,P＜0.01);MW167注射组外周血清及BALF中IL-4的表达较哮喘组减弱[血清:(19.601±0.870) ng/L比(26.046±2.211) ng/L,P＜0.05;BALF:(75.077±14.438) ng/L比(113.478±8.628) ng/L,P＜0.01)];外周血清中及BALF中IFN-γ的表达较对照组增强[血清:(10.644±3.338) ng/L比(5.119±2.230) ng/L,P＜0.01]; BALF:(26.131±3.608) ng/L比(21.299±2.830) ng/L,P＜0.01].结论 静脉注射γ-促分泌酶抑制剂抑制了哮喘模型小鼠气道炎症,对哮喘有潜在的治疗价值.     

儿童支气管哮喘血清IL-4、IL-10和IFN-γ浓度的测定及其临床意义

目的探讨血清白介素4（IL-4）、IL-10和干扰素γ（IFN-γ）与支气管哮喘（简称哮喘）的关系及其临床意义。方法随机收集于2008年6月至2009年1月期间在山东大学齐鲁儿童医院就诊的哮喘患儿纳入哮喘组,哮喘诊断全部符合2003年中华医学会儿科分会呼吸学组修订的支气管哮喘诊断标准,共计47例。同时选取性别和年龄与哮喘组匹配的51例健康体检儿童作为正常对照组。收集外周静脉血,采用双抗体夹心ELISA方法测定两组血清IL-4、IL-10、IFN-γ浓度,比较两组之间血清IL-4、IL-10、IFN-γ浓度的差异。结果哮喘组血清IL-4浓度[（346.74±82.92）ng/L]显著高于正常对照组[（199.87±59.25）ng/L]（P〈0.01）;哮喘组血清IL-10浓度[（86.38±58.58）ng/L]与正常对照组[（98.77±37.05）ng/L]的差异无统计学意义（P〉0.05）,哮喘组血清IFN-γ浓度[（94.51±22.92）ng/L]低于正常对照组[（110.75±47.11）ng/L]（P〈0.05）。结论 Th2类细胞因子IL-4在哮喘患儿血清中浓度升高,而Th1类细胞因子IFN-γ浓度下降,哮喘患儿存在Th1/Th2细胞免疫失衡;血清IL-4、IFN-γ浓度检测可以作为儿童哮喘的辅助诊断手段,同时本研究为使用抗IL-4制剂、补充IFN-γ等免疫学方法治疗哮喘提供依据。     

支气管扩张症合并哮喘患者中IL-4和IFN-γ的表达水平及临床意义

目的检测支气管扩张症合并哮喘患者外周血清白介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)的表达水平,并分析其临床意义。方法按照支气管扩张及哮喘的诊断标准将41例支气管扩张和哮喘患者分为A、B、C组,其中14例支气管扩张患者为A组,12例哮喘患者为B组,15例支气管扩张合并哮喘患者为C组,7例健康体检者为D组。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定上述各组研究对象血清中IL-4、IFN-γ的表达水平。结果 (1)外周血清IL-4的表达水平:支扩合并哮喘组IL-4的表达水平317.02±53.53ng/L高于支扩组279.02±44.24ng/L,低于哮喘组367.60±45.10ng/L,差异有统计学意义(P0.05)。(2)外周血清IFN-γ的表达水平:支扩合并哮喘组患者血清中IFN-γ的表达水平241.68±50.33 ng/L低于支扩组295.65±77.10ng/L,高于哮喘组153.76±26.69 ng/L,差异有统计学意义(*P0.05,~△P0.01)。结论 IL-4,IFN-γ在支气管扩张症合并哮喘的发病中可能起一定作用,检测IL-4,IFN-γ对支气管扩张症合并哮喘的辅助诊断有重要参考价值。     

支气管哮喘患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系

目的探讨支气管哮喘（哮喘）患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞（PBMC）,用ELISA测定血浆中CC16、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet和Gata-3mRNA表达水平。结果 1.哮喘组CC16及IFN-γ分别为（21.96±7.31）ng/ml,（118.73±22.59）pg/ml,明显低于对照组[分别为（64.88±25.27）ng/ml和（145.53±29.50）pg/ml,（均P〈0.01）],哮喘组IL-4（425.22±4.37）pg/ml高于对照组（69.72±10.15）pg/ml,（P〈0.01）。2.哮喘组T-betmRNA、T-bet/GATA-3表达水平（0.12±0.01,0.25±0.04）显著低于对照组（0.48±0.12,1.894±0.65）（均P〈0.01）,GATA-3mRNA表达（0.45±0.05）较对照组明显升高（0.30±0.08）（P〈0.01）。3.CC16与T-betmRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关（r分别为0.792,0.761,均P〈0.01）;与GATA-3mRNA无明显相关性（r=-0.146,P=0.551）。结论 CC16参与哮喘气道炎症反应,并以Th1/Th2细胞因子失衡为特点。     

椒目油对哮喘模型豚鼠肺泡灌洗液IL-4、IFN-γ水平及肺组织NF-κB的影响

目的 探讨椒目油对支气管哮喘（哮喘）豚鼠模型肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、IFN-γ水平及肺组织中NF-κB的影响,为椒目油治疗哮喘提供理论依据。方法 实验分4组：正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组和椒目油治疗组,每组各10只豚鼠。用卵白蛋白（OVA）腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘豚鼠模型。ELISA法检测豚鼠BALF中IL-4,IFN-γ含量。免疫组化法观察NF-κB在豚鼠支气管上皮的表达。结果 哮喘组BALF中的IL-4、IFN-γ含量及PC20水平都与正常对照组有显著的差别（P均〈0.05）,分别为（41.36±6.71）ng/L和（10.58±1.28）ng/L,（21.15±2.75）ng/L和（73.52±5.23）ng/L,（0.013±0.014）g/L和（0.168±0.186）g/L,而椒目油组及地塞米松治疗组豚鼠BALF中IL-4含量分别为（15.35±4.28）ng/L、（19.20±3.78）ng/L,明显低于哮喘模型组（P〈0.05）,其IFN-γ含量分别为（50.65±4.19）ng/L、（53.34±5.64）ng/L和PC20[（0.160±0.180）g/L、（0.144±0.154）g/L]水平较后者显著升高（P〈0.05）。椒目油治疗组和地塞米松治疗组各指标之间无显著性差异（P〉0.05）。正常对照组、哮喘模型组、椒目油治疗组和地塞米松治疗组豚鼠气道中NF-κB阳性细胞百分比分别为（9.51±2.82）%、（52.71±7.80）%、（32.26±3.70）%、（29.89±2.01）%,两治疗组均和哮喘模型组有显著差异。结论 椒目油能有效降低豚鼠BALF中IL-4水平,升高IFN-γ含量,同时降低气道高反应性和NF-κB在哮喘豚鼠支气管上皮中的表达。     

支气管哮喘患者血清sCD86水平及联合吸入治疗对其影响的研究

目的通过观测慢性持续期过敏性支气管哮喘（简称哮喘）患者外周血sCD86、白介素4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）、嗜酸粒细胞（EOS）水平及其吸入沙美特罗替卡松治疗后的变化情况,探讨sCD86在哮喘发病机制中的作用。方法 23例未经过规范化治疗的慢性持续期过敏性哮喘患者给予吸入沙美特罗替卡松治疗,分别于治疗前、治疗1周、治疗1个月时检测肺功能、抽取外周静脉血检测EOS计数、测定血清sCD86、IL-4、IFN-γ,治疗前后进行上述指标的比较;12名正常组检测上述指标并与哮喘相比较。结果①哮喘组血清sCD86水平高于正常组[（0.5657±0.1239）IU/L比（0.4575±0.0748）IU/L,P〈0.05）],给予吸入沙美特罗替卡松治疗明显下降（P〈0.05）;②哮喘组外周血IL-4水平高于正常组（P〈0.01）,而IFN-γ则明显低于正常组（P〈0.01）,治疗后两者与正常组差异均无统计学意义;③哮喘组治疗前外周血EOS计数高于正常组（P〈0.01）,治疗后持续下降;④相关分析示sCD86与IL-4、EOS呈正相关。结论慢性持续期过敏性哮喘患者外周血sCD86水平和EOS计数明显升高,并存在IL-4/IFN-γ细胞因子失衡状态;给予沙美特罗替卡松吸入治疗后sCD86和EOS可下降并纠正IL-4/IFN-γ细胞因子失衡;慢性持续期过敏性哮喘患者外周血sCD86水平与EOS、IL-4密切相关,提示sCD86参与哮喘的发病。     

辛伐他汀对哮喘模型大鼠血清IL-4、IFN-γ水平影响的实验研究

目的 探讨辛伐他汀对支气管哮喘(简称哮喘)模型大鼠血清中白介素4(interleukin-4,IL-4)和干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)含量变化的影响,为辛伐他汀治疗哮喘提供实验依据.方法 选取SD雄性大鼠32只,随机分为4组:正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组和辛伐他汀治疗组.每组各8只,采用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和雾化吸入激发制备大鼠哮喘模型,用双位点夹心酶联免疫吸附试验测定各组大鼠血清中IL-4 、IFN-γ含量.结果 哮喘模型组血清中IFN-γ含量为(83.71±8.89)ng/L明显低于正常对照组;IL-4含量为(106.62±13.33)ng/L,明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P ＜0.01).与哮喘模型组相比,辛伐他汀组和地塞米松组血清中IFN-γ含量分别为(95.93±11.74) ng/L和(96.34±11.64) ng/L,明显高于哮喘模型组,差异有统计学意义(P＜0.05),而两个治疗药物组之间差异无统计学意义(P＞0.05).与哮喘模型组相比,两个治疗药物组的IL-4含量分别为(79.08±7.34) ng/L和(73.39±7.76) ng/L,均有明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01),但两个治疗药物组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 辛伐他汀和地塞米松均能显著提高哮喘大鼠血清IFN-γ的含量,降低血清IL-4含量.     

椒目油对哮喘模型豚鼠肺泡灌洗液IL-4、IFN-γ水平及肺组织NF-κB的影响

目的 探讨椒目油对支气管哮喘(哮喘)豚鼠模型肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IFN-γ水平及肺组织中NF-κB的影响,为椒目油治疗哮喘提供理论依据.方法 实验分4组:正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组和椒目油治疗组,每组各10只豚鼠.用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘豚鼠模型.ELISA法检测豚鼠BALF中IL-4,IFN-γ含量.免疫组化法观察NF-κB在豚鼠支气管上皮的表达.结果 哮喘组BALF中的IL-4、IFN-γ含量及PC20水平都与正常对照组有显著的差别(P均<0.05),分别为(41.36±6.71) ng/L 和 (10.58±1.28) ng/L,(21.15±2.75) ng/L 和 (73.52±5.23) ng/L,(0.013±0.014) g/L 和 (0.168±0.186) g/L,而椒目油组及地塞米松治疗组豚鼠BALF中IL-4含量分别为(15.35±4.28) ng/L、(19.20±3.78) ng/L,明显低于哮喘模型组(P<0.05),其IFN-γ含量分别为(50.65±4.19) ng/L、(53.34±5.64) ng/L和PC20[(0.160±0.180) g/L、(0.144±0.154) g/L]水平较后者显著升高(P<0.05).椒目油治疗组和地塞米松治疗组各指标之间无显著性差异(P>0.05).正常对照组、哮喘模型组、椒目油治疗组和地塞米松治疗组豚鼠气道中NF-κB阳性细胞百分比分别为(9.51±2.82)%、(52.71±7.80)%、(32.26±3.70)%、(29.89±2.01)%,两治疗组均和哮喘模型组有显著差异.结论 椒目油能有效降低豚鼠BALF中IL-4水平,升高IFN-γ含量,同时降低气道高反应性和NF-κB在哮喘豚鼠支气管上皮中的表达.     

系统性红斑狼疮患者外周血干扰素α、白介素6和肿瘤坏死因子α水平

摘要： 目的 检测系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中干扰素α（interferon α,IFN-α）、白介素6（interleukin 6,IL-6）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）的水平,探讨其在SLE中的作用.方法 采用酶联免疫吸附法检测SLE患者及正常对照者血清IFN-α、IL-6及TNF-α水平;分析其与SLE实验室指标及临床表现的相关性.结果 SLE患者外周血中IFN-α、IL-6水平显著高于正常对照组,差异均有统计学意义[（4.99±7.47）ng/L vs.（2.07±1.98）ng/L,（4.36±7.62）ng/L vs.（1.72±2.87）ng/L,均P〈0.05];其中活动期SLE患者IFN-α水平明显高于稳定期,差异有统计学意义[（9.79±12.04）ng/L vs.（3.13±3.47）ng/L,P〈0.05].SLE患者血红蛋白减低组血清IFN-α水平显著高于血红蛋白正常组,差异有统计学意义[（5.34±6.36）ng/L vs.（2.84±3.58）ng/L,P〈0.05];抗双链DNA抗体阳性患者血清IFN-α、IL-6水平明显高于阴性者,差异均有统计学意义[（7.35±8.12）ng/L vs.（4.22±8.11）ng/L,（10.26±12.76）ng/L vs.（2.37±1.61）ng/L,均P〈0.05].SLE患者血清IFN-α水平与TNF-α、SLE疾病活动指数积分、抗双链DNA抗体呈正相关（r=0.303,P〈0.05;r=0.427,P〈0.01;r=0.368,P〈0.05）,与血红蛋白水平呈负相关（r=-0.345,P〈0.05）;IL-6水平与血细胞沉降率、抗双链DNA抗体呈正相关（r=0.526,P〈0.01;r=0.437,P〈0.05）.SLE患者血清IFN-α水平在有血液系统受累患者中表达水平明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;血清IL-6水平在伴有发热、关节炎或血液系统损害的患者中明显高于无上述临床表现的患者,差异具有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）.结论 SLE患者外周血细胞因子分泌存在异常,各细胞因子相互作用,共同参与疾病的发生与发展.     

联合IL-5可溶性受体与IL-4突变体对支气管哮喘小鼠气道高反应性及IgE、IFN-γ水平的影响

目的通过观察IL-5可溶性受体（sIL-5Ra）及IL-4突变体（IL-4mutant,IL-4MT）对哮喘小鼠气道高反应性（airwayhyperresponsiveness,AHR）及IgE、γ干扰素（IFN-γ）水平的影响,探讨其潜在的临床应用价值。方法随机将50只BALB／c雌性小鼠分成5组,分别为正常对照组、哮喘组、IL-4MT治疗组、sIL-5Ra治疗组和IL-4MT联合sIL-5Ra治疗组（简称联合治疗组）。采用腹腔注射卵蛋白（ovalbumin,OVA）与氢氧化铝混悬液对小鼠进行致敏,卵蛋白雾化,建立小鼠哮喘模型,其中正常对照组用生理盐水替代。雾化前30rain,IL-4MT治疗组、sIL-5Ra治疗组及联合治疗组分别腹腔注射IL-4MT100μg、sIL-5Ra100μg、IL-4MT和sIL～5Ra各100μg,正常对照组与哮喘组用生理盐水替代。末次激发24h后,用不同浓度的氯化乙酰胆碱激发各组小鼠,测定其肺阻力,ELISA法观察比较各组血清及BALFIgE、IFN-γ水平变化,肺组织行HE染色,观察病理变化。结果与正常对照组相比,哮喘组肺阻力显著增加（P〈0．01）;与哮喘组相比,IL-4MT组和联合治疗组肺阻力显著降低（P〈O．05）,联合治疗组下降更明显;与sIL-5Ra治疗组相比,联合治疗组肺阻力显著降低（P〈O．05）。与正常对照组相比,哮喘组血清及BALF中IgE含量显著升高,IFN-γ含量显著下降（P〈O．01）;与哮喘组相比,联合治疗组血清及BALF中IgE含量显著下降,IFN-γ含量显著升高（P〈O．01）;与单独治疗组相比,联合治疗组血清及BALF中IgE含量显著下降,IFN-γ含量显著升高（Pd0．05）。与哮喘组比,单独治疗组与联合治疗组肺组织炎症细胞渗出、浸润及对气道上皮的炎性损伤明显减轻,联合治疗组减轻更明显。结论联合应用sIL-5Ra与IL-4MT可以明显减轻哮喘小鼠AHR,降低血清及BALF中IgE含量,同时升高IFN-γ含量,减轻气道炎症。     

屋尘螨变应原Der p2 T细胞表位疫苗对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果

目的 探讨屋尘螨变应原Der p2的4个T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为阴性对照组(PBS组)、阳性对照组(哮喘组)以及Der p2 T细胞融合肽治疗组(Der p2 T组)。用屋尘螨粗提取液致敏小鼠建立哮喘模型,PBS组以PBS缓冲液代替,Der p2 T组分别于小鼠致敏第25~27天雾化致敏前30 min行背部皮下注射相应治疗蛋白。最后一次雾化激发24 h后,收集各组小鼠血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)。采用ELISA法检测小鼠BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13以及血清中屋尘螨粗提取液致敏的特异性IgE、IgG2a抗体水平,并行肺组织切片HE染色。结果 哮喘组小鼠BALF中的嗜酸性粒细胞数量为(5.57±0.64)×10~5个/ml,高于PBS组[(0.50±0.30)×10~5个/ml](P0.01)和Der p2 T组[(3.45±0.36)×10~5个/ml](P0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IFN-γ含量分别为(267.00±21.98)、(155.80±20.53)pg/ml和(234.40±24.46)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中产生了较高的IFN-γ水平(P0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量分别为(23.40±5.96)、(53.28±8.26)pg/ml和(30.00±5.50)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量显著降低(P0.01)。与哮喘组[(308.10±28.32)pg/ml]比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-13含量[(174.50±25.99)pg/ml]显著下降(P0.01);PBS组鼠BALF中IL-13含量为(95.99±31.14)pg/ml。肺组织切片显示,Der p2 T组小鼠肺部炎症较哮喘组明显减轻,且炎性细胞浸润显著减少、气道上皮结构重塑。结论 Der p2 T细胞表位融合肽可有效改善哮喘小鼠变态反应性气道及肺部炎症,可作为屋尘螨哮喘患者特异性免疫治疗的候选疫苗。     

辛伐他汀对哮喘模型大鼠血清IL-4、IFN-γ水平影响的实验研究

目的探讨辛伐他汀对支气管哮喘(简称哮喘)模型大鼠血清中白介素4(interleukin-4,IL-4)和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)含量变化的影响,为辛伐他汀治疗哮喘提供实验依据。方法选取SD雄性大鼠32只,随机分为4组:正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组和辛伐他汀治疗组。每组各8只,采用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和雾化吸入激发制备大鼠哮喘模型,用双位点夹心酶联免疫吸附试验测定各组大鼠血清中IL-4、IFN-γ含量。结果哮喘模型组血清中IFN-γ含量为(83.71±8.89)ng/L明显低于正常对照组;IL-4含量为(106.62±13.33)ng/L,明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。与哮喘模型组相比,辛伐他汀组和地塞米松组血清中IFN-γ含量分别为(95.93±11.74)ng/L和(96.34±11.64)ng/L,明显高于哮喘模型组,差异有统计学意义(P<0.05),而两个治疗药物组之间差异无统计学意义(P>0.05)。与哮喘模型组相比,两个治疗药物组的IL-4含量分别为(79.08±7.34)ng/L和(73.39±7.76)ng/L,均有明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),但两个治疗药物组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论辛伐他汀和地塞米松均能显著提高哮喘大鼠血清IFN-γ的含量,降低血清IL-4含量。     

支气管哮喘患儿外周血树突状细胞上前列腺素D2受体改变研究

目的研究不同病期支气管哮喘（简称哮喘）患儿单核细胞衍生的树突状细胞（dendritic cells,DC）上前列腺素D2受体（DP／CRTH2）结合容量改变,探讨其对Th2极化的影响。方法随机病例对照研究。分哮喘急性发作期组32例,平均年龄（6．1±3．5）岁,缓解期组30例,平均年龄（5．8±2．6）岁,正常对照组34例,平均年龄（7．2±3．8）岁。用放射配体结合分析法测定外周血DC上DP1／CRTH2结合容量;用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定外周血白介素4（IL-4）、IL-5和γ干扰素（IFN-γ）。结果哮喘发作期和缓解期组DC上总结合和CRTH2受体结合容量比正常对照组显著增加,DP总结合为：（532．42±123．87）fmol／10^6细胞、（491．78±110．64）fmol／10^6细胞、（274．61±87．16）fmol／10^6细胞;CRTH2为：（355．66±99．19）fmol／10^6细胞、（316．83±81．42）fmol／10^6细胞、（123．74±49．27）fmol／10^6细胞;而DPI差异无统计学意义（P〈0．01）。发作期和缓解期组Th2细胞因子IL-4、IL-5比正常对照组显著增加,IL-4为：（12．76±3．54）ng／L、（11．44±2．65）ng／L、（7．49±1．45）ng／L;IL-5为：（36．28±10．21）ng／L（32．11±11．56）ng／L、（18．48±5．65）ng／L（P〈0．01）;发作期和缓解期组Th1细胞因子IFN-7比正常对照组显著减少,IFN-γ为：（7．47±2．49）ng／L（7．56±1．41）ng／L、（13．13±1．44）ng／L（P〈0．01）。结论哮喘患儿发作期和缓解期外周血DC上CRTH2受体表达和Th2细胞因子IL-4、IL-5分泌增加。     

布地奈德对支气管哮喘小鼠树突细胞胸腺基质淋巴生成素受体表达的影响

目的 探讨布地奈德对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠胸腺基质淋巴生成素(TSLP)-树突细胞(DC)途径和Th2极化的影响及其机制.方法 将18只清洁级雌性6～8周龄BALB/c小鼠按随机数字表法分为哮喘组[卵清白蛋白(OVA)腹腔致敏,OVA吸入激发]、布地奈德(BUD)干预组(OVA腹腔致敏,气道内吸入OVA和布地奈德)和对照组(以生理盐水代替OVA混悬液腹腔注射及雾化吸入),每组6只.观察各组小鼠生物学及肺组织病理学改变,收集BALF,并分离培养小鼠脾脏树突细胞,酶联免疫吸附试验( ELISA)检测BALF中TSLP水平、树突细胞上清液中TSLP受体(TSLPR)水平和DC-T细胞共培养上清液中细胞因子.流式细胞仪检测树突细胞表型.多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用t检验.结果 布地奈德干预组支气管及血管周围炎症细胞浸润轻于哮喘组.哮喘组BALF中TSLP水平[(44.0±5.1)ng/L]和树突细胞培养上清液中TSLPR水平[(19.7±2.2) ng/L]均高于对照组[分别为(14.2±3.6) ng/L和(10.4±1.2) ng/L,t值分别为11.74和9.13,均P＜0.01],BALF中TSLP水平与IL-5水平和嗜酸粒细胞呈正相关(r值分别为0.89和0.82,均P＜0.05);布地奈德干预组BALF中TSLP水平[(19.2±5.8) ng/L]及树突细胞表达TSLPR水平[(12.5 ±2.8) ng/L]均低于哮喘组[分别为(44.0±5.1)ng/L和(19.7±2.2)ng/L],差异有统计学意义(t值分别为-7.86和-4.97,均P＜0.01);布地奈德干预组BALF及DC-T细胞共培养上清液中IL-5[分别为(41±4)ng/L和(28 ±9) ng/L]低于哮喘组[分别为(81 ±8) ng/L和(51±14) ng/L],差异有统计学意义(t值分别为-11.00和-3.35,均P＜0.01),3组间IFN-γ差异无统计学意义(F值分别为0.97和0.82,均P＞0.05);布地奈德干预组与哮喘组相比CD40、CD80和CD86等树突细胞表型下降.结论 布地奈德影响树突细胞表型,下调BALF中TSLP水平和树突细胞表达TSLPR水平,可能通过影响TSLP-DC途径而抑制哮喘Th2极化反应.     

腹腔注射川芎嗪对哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子的影响及机制

目的探讨腹腔注射川芎嗪对哮喘大鼠模型Th1／Th2细胞因子表达的影响及其机制。方法40只SD大鼠随机分为正常对照组（Con组），哮喘组（Ast组），哮喘生理盐水对照组（Ast—C组），川芎嗪组（Lig组），地塞米松组（Dex组），每组8只。ELISA检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4和IFN-γ的浓度并进行嗜酸性粒细胞（EOS）计数，同时用免疫组化法检测肺组织GATA-3和T-bet蛋白的表达。结果①Ast组及Ast—C组大鼠BALF中EOS均高于Con组，而Lig组和Dex组均低于Ast组及Ast—C组（P〈0．05）。②与Con组相比，Ast组及Ast—C组BALF中IL-4和肺组织GATA-3水平均明显升高，IFN-γ和T-bet水平明显减低（P〈0．05）。③与Ast组及Ast-C组相比，Lig组BALF中IL_4和肺组织GATA-3水平均明显降低（P〈0．05），IFN-γ和T—bet水平明显升高（P〈0．05），而Dex组IL-4、IFN-γ、GATA-3和T-bet水平则均降低（P〈0．05），IL-4和GATA-3分别比IFN-γ和T—bet减低更明显。结论川芎嗪可通过使哮喘肺组织GATA-3下调、T—bet上调进而调节Th1／Th2细胞因子比例，从而扭转哮喘时的Th2细胞优势，改善相应炎性症状。     

慢性阻塞性肺疾病合并肺结核患者部分细胞因子水平的表达及其意义

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）合并肺结核患者部分细胞因子水平的表达及其意义。 方法 对2012年7月至2013年6月间住院诊治的50例COPD合并肺结核患者（研究组）、50例肺结核患者（肺结核对照组）、50例COPD患者（COPD对照组）,以及50名健康志愿者（健康对照组）的细胞免疫功能进行检测。采用流式细胞仪抗体双标法检测各组人员的外周血自然杀伤细胞（natural killer cell,NK细胞）、T淋巴细胞亚群（CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋）的表达率,采用ELISA法测定患者血清中白细胞介素（IL）-1、可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）、IL-6、γ干扰素（IFN-γ）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验。 结果 COPD对照组的NK细胞比率［（15.34±8.11）%］高于研究组［（12.37±6.96）%］和肺结核对照组［（12.53±7.14）%］（t值分别为2.20和2.08,P值均＜0.05）,研究组CD4＋ T淋巴细胞比率［（30.09±11.09）%］低于肺结核对照组［（39.80±9.42）%］（t=2.80,P〈0.01）。研究组的IL-1表达水平［（30.14±20.84）ng/L］高于COPD对照组［（23.54±9.94）ng/L］（t=2.00,P〈0.05）;COPD对照组的sIL-2R的表达水平［（114.70±49.32）pmol/L］低于研究组［（168.78±94.92）pmol/L］与肺结核对照组［（182.68±74.91）pmol/L］（t=4.07和5.12,P值均＜0.01）;在IL-6的表达上,肺结核对照组［（75.62±75.97）ng/L］高于研究组［（51.46±35.86）ng/L］与COPD对照组［（48.90±30.04）ng/L］（t值分别为2.68和2.97,P值均＜0.01）;研究组［（28.82±32.40）ng/L］与肺结核对照组［（29.90±23.79）ng/L］的IFN-γ表达均高于COPD对照组［（16.60±9.27）ng/L］（t值分别为2.89和3.15,P值均＜0.01）。 结论 与对照组相比,研究组患者存在以NK细胞、CD4＋ T淋巴细胞为主的细胞免疫功能低下,同时还存在IL-1、sIL-2R、IL-6、IFN-γ等细胞因子表达异常。     

病毒性心肌炎患者血清sB7-H4、IFN-γ水平变化及意义

目的 观察病毒性心肌炎（VMC）患者血清可溶性B7-H4（sB7-H4）和γ-干扰素（IFN-γ）水平变化,并探讨其临床意义.方法 VMC患者46例（VMC组）,健康志愿献血者50例（对照组）,采用ELISA法检测两组血清sB7-H4、IFN-γ水平,并分析VMC组两项指标的相关性.结果 VMC组急性期B7-H4、IFN-γ水平分别为（43.41±3.58） μg/L、（1 673.47±493.66） ng/L,迁延期分别为（35.72±3.26） μg/L、（1283.51 ±441.53） ng/L,对照组分别为（33.23±2.56） μg/L、（1156.35 ±346.35） ng/L,VMC组急性期血清sB7-H4和IFN-γ水平均高于对照组（P均＜0.05）；VMC组血清sB7-H4和IFN-γ水平呈正相关（r=0.353,P=0.006）.结论 VMC患者sB7-H4、IFN-γ水平升高,sB7-H4表达下调可能参与了VMC的发病.     

粒细胞集落刺激因子对慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞产生细胞因子的影响

目的 观察重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)产生细胞因子的影响.方法 收集15例慢性重型肝炎患者和10例健康志愿者的外周静脉血,分离PBMC,分为空白对照组、G-CSF预处理加脂多糖(LPS)刺激组和LPS刺激组.体外培养48 h后分别用放射免疫法和酶联免疫吸附测定法检测各组培养上清液中的TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-10水平;并用反转录(RT)-PCR法检测PBMC中的TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-10 mRNA表达水平.数据行t检验和方差分析.结果 慢性重型肝炎患者和健康志愿者的PBMC在体外经LPS刺激后,培养上清液中的TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-10水平均明显高于空白对照组,而经G-CSF预处理的PBMC上清液中的TNF-α水平显著低于LPS单独刺激组[慢性重型肝炎:(2.56±1.28)μg/L比(5.30±4.27)μg/L,F=8.365,P=0.006;健康对照:(2.11±1.01)μg/L比(3.93±1.84)μg/L,F=16.346,P=0.003],IFN-γ水平亦显著低于LPS刺激组[慢性重型肝炎:(520.76±201.66)ng/L比(735.85±263.83)ng/L,F=41.799,P=0.005;健康对照:(264.74±100.21)ng/L比(410.51±191.78)ng/L,F=23.021,P=0.016],IL-6水平显著高于LPS刺激组[慢性重型肝炎:(982.35±387.06)ng/L比(733.00±278.69)ng/L,F=16.190,P=0.019;健康对照:(793.99±214.71)ng/L比(620.65±222.57)ng/L,F=47.921,P=0.015],IL-10水平亦显著高于LPS刺激组[慢性重型肝炎:(655.13±324.12)μg/L比(441.85±200.23)μg/L,F=22.986,P=0.012;健康对照:(491.52±139.46)μg/L比(355.90±154.02)μg/L,F=34.139,P=0.019].PBMC中的TNF-α、IL-6、IFN-γ、11710的mRNA水平变化与培养上清液相同.结论 G-CSF对慢性重型肝炎患者和健康志愿者的PBMC功能均有调节作用,G-CSF预培养可抑制PBMC在LPS刺激下TNF-α和IFN-7的释放,同时促进IL-6、IL-10的释放.     

支气管哮喘患儿外周血树突状细胞上前列腺素D2受体改变研究

目的 研究不同病期支气管哮喘(简称哮喘)患儿单核细胞衍生的树突状细胞(dendriticcells,DC)上前列腺素D2受体(DP/CRTH2)结合容量改变,探讨其对Th2极化的影响.方法 随机病例对照研究.分哮喘急性发作期组32例.平均年龄(6.1±3.5)岁.缓解期组30例,平均年龄(5.8±2.6)岁,正常对照组34例,平均年龄(7.2±3.8)岁.用放射配体结合分析法测定外周血DC上DP1/CRTH2结合容量;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定外周血白介素4(IL-4)、IL-5和γ干扰素(IFN-γ).结果 哮喘发作期和缓解期组DC上总结合和CRTH2受体结合容量比正常对照组显著增加,DP总结合为:(532.42±123.87)fmol/106细胞、(491.78±110.64)fmol/106细胞、(274.61±87.16)fmol/106细胞;CRTH2为:(355.66±99.19)fmol/106细胞、(316.83±81.42)fmol/106细胞、(123.74±49.27)fmol/106细胞;而DP1差异无统计学意义(P<0.01).发作期和缓解期组Th2细胞因子IL-4、IL-5比正常对照组显著增加,IL-4为:(12.76±3.54)ng/L、(11.44±2.65)ng/L、(7.49±1.45)ng/L;IL-5为:(36.28±10.21)ng/L、(32.11±11.56)ng/L、(18.484±5.65)ng/L(P<0.01);发作期和缓解期组Th1细胞因子IFN-γ比正常对照组显著减少,IFN-γ为:(7.47±2.49)ng/L、(7.56±1.41)ng/L、(13.13±1.44)ng/L(P<0.01).结论 哮喘患儿发作期和缓解期外周血DC上CRTH2受体表达和Th2细胞因子IL-4、IL-5分泌增加.     

法舒地尔对支气管哮喘小鼠肺组织Rho激酶-1表达及气道炎症的影响

目的 观察Rho激酶-1抑制剂法舒地尔对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织Rho激酶-1表达及气道炎症的影响,探讨Rho激酶-1在哮喘气道炎症中的作用机制.方法 将24只BalB/c小鼠采用随机数字表法分为对照组、哮喘组和干预组,每组8只.哮喘组、干预组小鼠分别给予卵清白蛋白(OVA)致敏和激发.每次雾化前1 h,干预组给予法舒地尔(10 mg/kg)腹腔注射.末次激发后收集BalF,离心后计数细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)数量.ELISA法测定BalF上清液中嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)、白细胞介素(IL)-5和IL-13水平.肺组织HE染色.采用逆转录PCR和免疫组织化学测定各组小鼠肺组织中Rho激酶-1 mRNA和蛋白的表达水平.结果 (1)哮喘组BalF中细胞总数及EOS数量分别为(1.45±0.12)× 10~9/L和(0.52 ±0.06)× 10~9/L,明显高于对照组[分别为(0.58±0.06)×10~9/L和(0.01±0.01)×10~9/L](q值分别为25.909和35.002,均P＜0.01)和干预组[分别为(0.89 ±0.09)×10~9/L和(0.20±0.04)×10~9/L](q值分别为16.676和21.537,均P＜0.01).(2)哮喘组Eotaxin、IL-5及IL-13水平分别为(45±8)ng/L、(157 ±23)ng/L和(429±46)ng/L,明显高于对照组[分别为(10 ±3)ng/L、(26±6)ng/L和(126 ±20)ng/L](q值分别为18.246、23.009、25.826,均P＜0.01);干预组分别为(20±5)ng/L、(57 ±14)ng/L和(254±28)ng/L,明显低于哮喘组(q值分别为13.119、17.503、8.449,均P＜0.01).(3)对照组小鼠气道周围无炎症细胞浸润,哮喘组小鼠气道黏膜水肿,气道壁及管周有大量以EOS为主的炎症细胞浸润,干预组气道炎症反应较哮喘组减轻.(4)哮喘组肺组织Rho激酶-1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组(q值分别为25.614和8.156,均P＜0.01),干预组Rho激酶-1 mRNA和蛋白表达水平低于哮喘组(q值分别为20.379和4.135,均P＜0.01).(5)Rho激酶-1 mRNA表达量与BalF中EOS数量、Eotaxin、IL-5和IL-13水平呈正相关(r值分别为0.709、0.600、0.613、0.650,均P＜0.01).结论 Rho激酶-1参与过敏原诱导的哮喘小鼠气道炎症的发生,应用法舒地尔抑制其表达和活性可能改善哮喘气道炎症.