来源于马尾树树皮的化合物蜡果杨梅酸B抑制HIV进入的机制研究

目的利用假病毒技术,研究来源于马尾树树皮的化合物蜡果杨梅酸B抑制HIV-1进入的活性及作用机制。方法利用pHXB2和pVSV-G两个病毒包膜蛋白质粒,与pNL4-3.Luc.R-E-共转染,构建HIV-1Env假病毒和VSV-G假病毒,检测化合物抑制假病毒感染的活性。采用针对包膜蛋白亚基gp41的ELISA方法,结合分子对接,研究活性化合物抗HIV-1的作用机制。结果从马尾树树皮中来源的2个三萜类单体化合物蜡果杨梅酸B(myriceric acid B)和蜡果杨梅酸C(myriceric acid C)中,仅蜡果杨梅酸B能特异性地抑制HIV-1 Env假病毒感染,其半数抑制浓度(IC50)值为(8.3±0.2)mg·L-1。此外,蜡果杨梅酸B在C-28位羧基的酯化产物蜡果杨梅酸B甲酯(myriceric acid B methyl ester)没有抑制HIV-1进入的活性。蜡果杨梅酸B的进入抑制活性与其抑制gp41六螺旋束结构形成的机制有关。分子对接表明,蜡果杨梅酸B能靶向gp41上N-螺旋三聚体的靶穴位置。结论蜡果杨梅酸B是作用于gp41的HIV-1进入抑制剂,其分子结构中C-28位的羧基及C-3位羟基与抑制活性密切相关。蜡果杨梅酸B可作为先导化合物来研发新的HIV进入抑制剂类抗艾滋病药物。     

HIV融合抑制剂的研究进展

人免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）进入靶细胞的过程是由病毒表面的包膜糖蛋白（Env）跨膜亚基gp41介导的。gp41中含有2个α-螺旋疏水重复序列，即N末端重复序列（HR1）和C末端重复序列（HR2）。在融合过程中，它们能寡聚化形成gp4l介导膜融合的功能性结构（6股α-螺旋束核心结构），该结构的形成使得病毒膜与细胞膜接近，继而发生融合。任何可有效阻止6股α-螺旋束核心结构形成的化合物，均有可能产生抗HIV融合活性。多肽类HIV融合抑制剂中C肽和N肽分别衍生于HR2和HR1，具有很好的抗HIV融合活性，C肽类中的新药enfuvirtide（T-20）已于2003年被美国FDA批准上市。现综述近几年HIV融合抑制剂的研究现状及发展方向。     

HIV-1融合抑制剂研究现状及发展趋势

HIV-1融合抑制剂是继逆转录酶和蛋白酶抑制剂后的新一类抗HIV感染药物, 通过阻断病毒与靶细胞膜的融合从而抑制病毒进入靶细胞, 在感染的初始环节切断HIV-1的传播, 其中多肽类融合抑制剂T-20已于2003年上市。HIV-1融合抑制剂以HIV-1跨膜糖蛋白gp41为作用靶标, 它们是一些天然或合成的多肽以及小分子化合物, 通过与gp41功能区结合从而抑制其促融合功能的发挥。近年来, 随着对膜融合过程分子机制以及gp41功能研究的不断深入, 新的以gp41不同功能区为靶点的融合抑制剂分子不断被发现, 成为倍受关注的研究热点之一。本文着重对近年来HIV-1融合抑制剂的研究现状及发展趋势进行综述。     

EGCG乙酸酯的HIV融合抑制活性及其作用机制研究

 目的：研究EGCG乙酸酯的HIV融合抑制活性,并探讨其作用靶点。方法：采用HPLC分析pH对于EGCG乙酸酯稳定性的影响以及EGCG乙酸酯在细胞中的水解产物;采用酶联免疫测定法、细胞-细胞融合方法以及假病毒实验检测EGCG乙酸酯抑制HIV与靶细胞融合的活性;应用分子对接软件研究EGCG与gp41的结合位点。结果：EGCG通过其苯环结构和羟基分别与gp41 NHR区域的疏水残基和正电荷残基结合从而抑制病毒的进入。用乙酰基保护EGCG活性酚羟基形成EGCG乙酸酯,稳定性明显增强。EGCG乙酸酯在酶联免疫反应中无活性,但在细胞实验中能有效抑制HIV介导的细胞融合及HIV假病毒感染,其半数抑制浓度IC50分别为（4.93±0.57）和（1.45±0.32） μg?mL-1。EGCG乙酸酯在细胞中的水解产物被证明为EGCG。结论：EGCG乙酸酯在细胞中能转化为母体药物,从而具有HIV融合抑制活性,且靶向作用于HIV gp41。该前药有望研发为稳定、高效的抗HIV药物,用于HIV的治疗。     

作用于HIV包膜蛋白亚基gp41的多肽类融合抑制剂

HIVgp4 1是病毒包膜上介导HIV与靶细胞膜融合的跨膜糖蛋白 ,其包膜外区包括位于N末端的融合多肽和下游的N末端重复序列 (NHR) ,以及C末端的重复序列(CHR)。衍生于gp4 1NHR和CHR的N 多肽和C 多肽具有抑制HIV与靶细胞融合的活性 ,其中C 多肽T 2 0已获得美国FDA批准 ,成为继逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂后的第三类抗艾滋病药物 ,即HIV融合抑制剂。由于T 2 0等为多肽类药物 ,容易被体内蛋白酶降解 ,临床剂量大 ,用基因工程手段难以满足需要 ,因此只能采用多肽合成技术进行生产 ,成本高昂。为此 ,人们希望寻找到具有相似机制的活性短肽 ,或通过多肽设计使活性多肽适合用基因工程进行大规模生产。近年来 ,对N 多肽和C 多肽进行结构改造已成为研究的热点 ,出现了许多相对分子质量较小 ,不容易被内源性蛋白酶降解 ,或者能用基因工程手段生产的活性多肽 ,同时多肽药物抑制HIV感染的作用机制也因此而逐渐清晰起来     

作用于gp41的HIV融合抑制剂高通量筛选方法的研究

目的　对作用于gp4 1的HIV融合抑制剂筛选方法进行研究和改进 ,使其成为更加简便的高通量药物筛选模型。方法　采用夹心ELISA方法 ,检测HIVgp4 1六股α 螺旋束的形成。结果　以特异性识别HIVgp4 1六股α 螺旋束的单克隆和多克隆抗体为基础建立的改良夹心ELISA方法 ,特异性好 ,准确性高 ,更为简便和经济 ,能稳定有效地检测样品对 gp4 1六股α 螺旋束形成的抑制作用。 结论　本研究建立的改良方法可作为高通量药物筛选方法 ,用于从中草药库、噬菌体肽库和微生物发酵液等复杂组分样品中筛选作用于 gp4 1的HIV融合抑制剂 ,以研究开发抗HIV药物     

靶向HIV-1跨膜蛋白gp41的多肽类融合抑制剂的研究进展

跨膜蛋白gp41是治疗获得性免疫缺陷综合征的重要靶点。恩夫韦肽是首个被FDA批准的以gp41为靶点的多肽类融合抑制剂。然后,恩夫韦肽较短的半衰期、较低的耐药遗传屏障和较低的效力限制了它的临床应用。近年来,以gp41为作用靶点开发出来的多肽类融合抑制剂表现出了较好的效力和稳定性。为此,笔者主要对靶向跨膜蛋白gp41的多肽类融合抑制剂的研究状况进行了综述。     

作用于HIV gp120的进入抑制剂研究进展

HIV-1病毒为包膜病毒,其感染靶细胞的第一步是由HIV包膜蛋白表面亚基gp120与靶细胞上的CD4分子和辅助受体（趋化因子受体CCR5或CXCR4等）结合,导致gp41的构型发生改变,启动病毒包膜与靶细胞膜的融合。与gp120相结合的一些抗体、蛋白、多糖、多肽和小分子化合物,都可能影响HIV-1病毒包膜和靶细胞膜融合的过程,从而起到抗HIV-1病毒的作用。该文对近年来以HIV gp120为靶点的HIV进入抑制剂的研究进展进行综述。     

HIV包膜蛋白的结构及其相应的病毒进入抑制剂

HIV-1病毒包膜蛋白gp120和gp41在病毒感染中起着重要的作用。在病毒进入细胞的过程中,gp120先和CD4分子结合,发生构象改变,进而导致gp41构象的变化,使病毒包膜和细胞膜融合而感染细胞。与gp120或者gp41相结合的多肽、大分子和小分子化合物,都可能影响HIV-1病毒包膜和靶细胞膜结合的过程,从而起到抗HIV-1病毒的作用。该文对gp120和gp41的结构及其相互作用,以及以HIV-1包膜糖蛋白为靶点的病毒进入抑制剂类抗艾滋病药物进行综述。     

缺乏gp41的重组痘苗病毒锚定的gp120可提高免疫原性

包膜（Env）糖蛋白是1型人类免疫缺陷症病毒（HIV－l）的主要蛋白，其前体是由861个氨基酸组成的多肽。氨基端连接糖基化产生160kDa糖蛋白，即gp160。两个潜在的蛋白酶切割位点将gp160分成氨基端细胞外蛋白gp120及浚基端跨膜蛋白gp41。动物及人     

HIV entry inhibitors targeting gp41: from polypeptides to small-molecule compounds

HIV envelope glycoprotein transmembrane subunit gp41 plays a critical role in the fusion between viral and target cell membranes. Upon gp120 binding to CD4 and a coreceptor (CCR5 or CXCR4), gp41 changes its conformation by forming N-helix trimer between N-heptad repeats (NHRs) and then six-helix bundle between the N-trimer and the C-heptad repeats (CHRs). Peptides derived from the NHR and CHR of gp41 extracellular region have demonstrated potent inhibitory activity on the HIV mediated cell fusion. One of these peptides, T-20, became the first success of a new class of anti-HIV agents, named HIV entry inhibitors. However, a relatively long peptide such as T-20 suffers from several limitations including lack of oral bioavailability and high cost of production. Great efforts have been made to develop alternative peptides and proteins with improved anti-HIV-1 activity, increased bioavailability and reduced cost of production. The most promising approach is the development of small molecule HIV entry inhibitors targeting gp41. Any molecule that blocks the process of NHR homotrimerization and the six-helix bundle formation by targeting the gp41 NHR, NHR trimer and CHR may inhibit HIV-mediated membrane fusion. The progress in development of those anti-HIV agents targeting gp41, from polypeptides to small-molecule compounds, is reviewed.     

新型抗艾滋病药物——HIV进入抑制剂的研究进展

HIV与靶细胞融合的过程是药物干预的重要环节。融合过程主要由H IV包被蛋白表面亚基gp120和跨膜亚基gp41介导。H IV gp120与靶细胞上的CD4分子和辅助受体(趋化因子受体CCR5或CXCR4等)结合,导致gp41的构型发生改变,启动病毒包膜与靶细胞膜的融合。在融合过程中,病毒和靶细胞上的这些蛋白和受体均可作为药物的作用靶点,寻找抑制H IV进入靶细胞的药物用来治疗H IV感染和艾滋病。作用于gp41的肽类药物T-20已被美国FDA批准上市,表明继逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂后,H IV进入抑制剂作为第3类抗H IV药物开始在临床上应用。作为一种新机制的抗H IV药物,H IV进入抑制剂单独或与逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂联合应用,将有助于提高药物的疗效,降低毒副作用,并可望挽救对现有抗H IV药物耐药的艾滋病病人的生命。该文综述了近年来H IV进入抑制剂的研究进展。     

Small-molecule HIV-1 entry inhibitors targeting gp120 and gp41: a patent review (2010-2015)

Introduction: It is essential to discover and develop small-molecule HIV-1 entry inhibitors with suitable pharmaceutical properties.

Areas covered: We review the development of small-molecule HIV-1 entry inhibitors as evidenced in patents, patent applications, and related research articles published between 2010 and 2015.

Expert opinion: HIV-1 Env gp120 and gp41 are important targets for development of HIV-1 entry inhibitors. The Phe43 pocket in gp120 and the highly conserved hydrophobic pocket on gp41 NHR-trimer are important targets for identification of HIV-1 attachment and fusion inhibitors, respectively. Compounds that bind to Phe43 pocket can block viral gp120 binding to CD4 on T cells, thus inhibiting HIV-1 attachment. However, most compounds targeting Phe43 pocket identified so far are HIV-1 entry agonists with the ability to enhance infectivity of HIV-1 in CD4-negative cells. Therefore, it is essential to identify HIV-1 entry antagonist-based HIV-1 attachment/entry inhibitors. Compounds binding to the gp41 hydrophobic pocket may inhibit CHR binding to the gp41 NHR trimer, thus blocking six-helix bundle formation and gp41-mediated virus-cell fusion. However, most lead compounds targeting this pocket have low potency, possibly because the pocket is too big or too deep. Therefore, it is necessary to identify other pockets in gp41 for developing HIV-1 fusion/entry inhibitors.