体外压力刺激对大鼠“足三里”穴筋膜组织细胞合成释放肿瘤坏死因子-α和干扰素-β影响的研究

目的通过体外实验探讨压力刺激对大鼠"足三里"穴筋膜组织细胞合成释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-β(INF-β)的影响,为腧穴"扶助正气"的治疗作用提供细胞生物力学方面的实验依据。方法体外培养大鼠"足三里"穴筋膜组织细胞,对细胞实施免疫组织化学鉴定后,实施100 kPa和200 kPa压力刺激,检测细胞外培养液INF-β和TNF-α含量的变化。结果 "足三里"穴筋膜组织细胞Keratin染色阴性,Vimnetin染色阳性,200 kPa压力刺激后,培养液中TNF-α含量增加,INF-β含量降低,差异均有统计学意义。结论 "足三里"穴筋膜组织细胞主要是成纤维细胞,压力刺激对筋膜组织成纤维细胞TNF-α和INF-β合成释放的调节,可能是腧穴接受针灸推拿治疗后特异性发挥"扶助正气"作用的细胞生物力学原理之一。     

静态压力刺激对大鼠"足三里"穴区及穴旁区域成纤维细胞PGE2和IL-6释放影响的比较研究

目的：通过探讨机械刺激对大鼠“足三里”穴筋膜组织成纤维细胞的压力信号生物转换作用,为腧穴“感受刺激,防治疾病”的现代医学生物学机制提供理论与实验依据。方法：体外培养大鼠“足三里”穴及穴旁区域的筋膜组织细胞,对细胞进行形态学鉴定后,实施压力刺激并检测细胞外培养液中前列腺素E2（PGE2）争白细胞介素-6（IL-6）含量的变化。结果：“足三里”穴及穴旁区域的筋膜组织细胞主要都是成纤维细胞,压力刺激均能够促进细胞PGE。和IL-6合成释放的增加,差异有统计学意义。结论：腧穴与非穴的筋膜组织成纤维细胞皆能直接感受刺激,从而将机械信号转换为生物信号。     

体外压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞周期和增殖指数影响的研究

目的 通过体外实验探讨压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞周期和增殖指数(PI)的影响,为推拿基本力学刺激"舒筋散结"的治疗作用提供细胞生物学方面的实验依据.方法 体外培养大鼠筋膜组织成纤维细胞,对细胞实施压力刺激后,检测细胞周期与PI变化.结果 筋膜组织成纤维细胞接受压力作用后,细胞周期发生阻滞,休止期和DNA合成前期(G0/G1期)细胞增多,分裂前期(S期)细胞减少,PI降低,差异有统计学意义.结论 压力刺激对筋膜组织成纤维细胞周期与PI的抑制性调节,可能是推拿"舒筋散结"的细胞生物力学原理之一.     

体外压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞形态和MMP-1、MMP-3合成释放影响的研究

目的:通过体外实验探讨压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞形态和MMP-1、MMP-3合成释放变化的影响,为推拿基本力学刺激"舒筋散结"的治疗作用提供细胞生物学方面的实验依据。方法:体外培养大鼠筋膜组织成纤维细胞,对细胞实施100KPa和200KPa压力刺激后,观察细胞形态的变化和检测细胞MMP-1、MMP-3合成释放的变化。结果:筋膜组织成纤维细胞接受压力作用后,100KPa压力组细胞发生回缩,细胞间隙加大,200KPa压力组出现回缩成圆形并漂浮的细胞,细胞形态缩小;100KPa和200KPa压力组MMP-1合成释放呈增加趋势,但均无显著性差异(P>0.05;P>0.05);MMP-3合成释放减少,差异均有统计学意义(P<0.01;P<0.05)。结论:压力刺激对筋膜组织成纤维细胞MMP-1、MMP-3合成释放的影响和对细胞形态的影响,可能是推拿良性发挥"舒筋散结"作用的细胞生物力学原理之一。     

黄芩含药血清对细菌脂多糖刺激的小鼠小胶质细胞的保护作用

目的:考察黄芩提取物(SBE)含药血清对细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的小鼠小胶质细胞系(N9细胞)的保护作用。方法:将黄芩提取物灌胃(大鼠)给药后,在0.5～6 h内眼眶取血,分离血清,将血清加入LPS刺激造模成功后的N9细胞培养液内,加药后培养24 h,检测培养液内NO、MDA、GSH、SOD的含量。结果:黄芩提取物不同时间的含药血清在不影响细胞的存活率的情况下,可以不同程度的降低LPS刺激后N9细胞培养液内NO及MDA的含量;并不同程度的增加LPS刺激后N9细胞培养液内SOD、GSH的含量。结论:黄芩提取物的含药血清对LPS刺激的N9细胞具有一定的保护作用。     

强骨颗粒对骨质疏松症大鼠血清中NO、IL-6及骨生物力学的影响

目的:探讨强骨颗粒治疗骨质疏松症(OP)的疗效及其机制。方法:采用去势方法进行造模,8周制成大鼠OP模型。设假手术组、模型组、强骨颗粒组、雌激素组,观察大鼠血清中NO、IL-6及骨生物力学。结果:治疗30d后,强骨颗粒组均能不同程度的升高血清中NO、降低血清中IL-6含量、改善大鼠骨生物力学性能。结论:强骨颗粒对OP的疗效机理与升高血清中NO、降低血清中IL-6含量、改善大鼠骨生物力学性能有关。     

体外模拟动态力学刺激对SD幼鼠前脂肪细胞生长活力影响的研究

目的:探讨体外模拟动态力学刺激对SD幼鼠前脂肪细胞生长活力影响的研究,为推拿按摩治疗青少年单纯性肥胖的现代医学细胞生物学机制提供理论与实验依据。方法:体外培养SD幼鼠前脂肪细胞,从细胞生物力学角度,模拟推拿治疗的按摩作用方式,对细胞实施按摩动态力学刺激,观察按摩动态力学刺激对前脂肪细胞生长活力的影响。结果:体外模拟动态力学刺激抑制了前脂肪细胞的生长活力(P<0.05,P<0.01)。结论:推拿按摩治疗青少年单纯性肥胖可能通过抑制前脂肪细胞的生长活力,使前脂肪细胞向脂肪细胞转化率降低而实现。     

张力刺激对经脉筋膜成纤维细胞整合素β1亚基影响的体外研究

目的:探讨体外张力刺激对来自经脉相关筋膜结缔组织成纤维细胞的整合素β1亚基的影响,从实验和理论的角度佐证针推基本机械力学感受的基本原理。方法:应用不同强度的张力对培养的经脉相关筋膜结缔组织成纤维细胞施加单次和多次刺激,成纤维细胞整合素β1表达情况通过荧光显微镜技术和图像分析技术进行观测。结果:跟空白对照组相比,在不同的刺激强度因素和刺激次数情况下,经脉相关筋膜结缔组织成纤维细胞整合素β1荧光密度表达均增高,有统计学意义(P=0.0000.01)。结论:在张力刺激作用下,经脉相关筋膜结缔组织成纤维细胞整合素β1表达量发生了改变,在微观力学上可能揭示针推张力刺激在经脉组织细胞中信号感受的细胞生物学机制。     

脂多糖干预时间与小胶质细胞生成IL-1β和TNF-α时效关系的研究

目的以原代培养的大鼠皮质小胶质细胞为研究对象,观察脂多糖(LPS)处理小胶质细胞时间与小胶质细胞生成白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的时效关系,寻找能够使小胶质细胞产生大量IL-1β、TNF-α的LPS最佳干预时间,为建立最佳小胶质细胞炎症模型提供依据。方法培养原代大鼠皮质小胶质细胞,随机分为10组,5组为LPS组,以含LPS(终浓度为100 ng/m L)的无血清胶质细胞培养液分别孵育1 h、3 h、6h、12 h、24 h;每个LPS组均设平行对照,对照组用无血清胶质细胞培养液孵育,孵育时间同LPS组。孵育结束后,ELISA方法检测各组培养液中IL-1β和TNF-α蛋白含量,RT-PCR方法检测小胶质细胞中IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表达水平。结果孵育原代小胶质细胞1 h、3 h、6 h、12 h、24 h后,LPS组培养液中IL-1β和TNF-α蛋白含量及小胶质细胞中IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表达水平均明显高于对照组(P均0.05);LPS组培养液中IL-1β和TNF-α蛋白含量及小胶质细胞中IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表达水平随着处理时间延长逐渐上升,IL-1β在3 h达到高峰,TNF-α在6h时达到高峰,二者在6 h均处于较高水平,以后随时间延长逐渐下降,相邻LPS处理组间比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 LPS能够刺激小胶质细胞大量产生IL-1β和TNF-α,这种效应与LPS刺激时间相关,在刺激6 h时IL-1β和TNF-α均处于较高水平,LPS刺激6 h时是理想的小胶质细胞炎症模型。     

虫草菌丝提取物对白介素1β损伤的胰岛细胞损伤保护作用的实验研究

目的:研究虫草菌丝(Cordyceps sinensis,CS)提取物对白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)损伤胰岛细胞的保护作用以及其机制与氧自由基和NO的关系.方法:IL-1β损伤离体培养的乳鼠胰岛细胞,采用不同浓度CS虫草菌丝提取物共同孵育,应用MTT法检测细胞活性,放免法检测基础和高糖胰岛素分泌量,比色法检测细胞培养上清液中NO的含量,诱生型一氧化氮合酶(Induced nitric oxide synthase,iNOS)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione perioxidase,GSH-PX)的活性.结果:CS提取物显著提高IL-1β损伤的胰岛细胞活性、胰岛细胞基础和高糖刺激胰岛素分泌量;并且可反转IL-1β作用后细胞培养上清液中iNOS活性和NO含量以及SOD、GSH-PX的活性水平,且呈剂量依赖性.结论:CS提取物对IL-1β损伤的胰岛细胞有保护作用,其机制与降低iNOS的活性,减少NO生成以及提高SOD、GSH-PX的活性,增加抗氧化能力有关.     

虫草菌丝提取物对白介素1β损伤的胰岛细胞损伤保护作用的实验研究

目的:研究虫草菌丝(Cordyceps sinensis,CS)提取物对白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)损伤胰岛细胞的保护作用以及其机制与氧自由基和NO的关系。方法:IL-1β损伤离体培养的乳鼠胰岛细胞,采用不同浓度CS虫草菌丝提取物共同孵育,应用MTT法检测细胞活性,放免法检测基础和高糖胰岛素分泌量,比色法检测细胞培养上清液中NO的含量,诱生型一氧化氮合酶(Inducednitric oxide synthase,iNOS)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione perioxidase,GSH-PX)的活性。结果:CS提取物显著提高IL-1β损伤的胰岛细胞活性、胰岛细胞基础和高糖刺激胰岛素分泌量;并且可反转IL-1β作用后细胞培养上清液中iNOS活性和NO含量以及SOD、GSH-PX的活性水平,且呈剂量依赖性。结论:CS提取物对IL-1β损伤的胰岛细胞有保护作用,其机制与降低iNOS的活性,减少NO生成以及提高SOD、GSH-PX的活性,增加抗氧化能力有关。     

黔棘茎楤木对佐剂性关节炎大鼠治疗作用及机制探讨

目的:观察黔棘茎楤木对佐剂性关节炎(AA)大鼠的作用,并探讨其作用机制。方法:设正常对照组、模型对照组、阳性药对照组(雷公藤多苷12 mg·kg-1)、黔棘茎楤木高、中、低剂量组(剂量分别为3.5,1.75,0.88 g·kg-1);除正常对照组外,其余各组均采用弗氏完全佐剂足跖sc复制AA模型;各组于造模当天ig给药,连续35 d;观察该药对AA大鼠原发性和继发性踝关节足肿胀及病理形态学影响;采用硝酸还原法检测各组血清中一氧化氮(NO)含量;放免法检测各组血清中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果:与模型组比较,黔棘茎楤木高剂量组可抑制AA大鼠继发性关节肿胀,抑制效果随剂量(中、低剂量组)降低而减轻。黔棘茎楤木高剂量组能显著降低AA大鼠血清中IL-1含量;高、中剂量组显著降低AA大鼠血清中TNF-αμg.L-1含量;高、中、低剂量组显著降低AA大鼠血清中NOμmol.L-1含量。病理学观察,黔产棘茎楤木高剂量组大鼠踝关节炎症细胞明显减少,滑膜组织细胞及成纤维细胞增生不明显,关节软骨破坏较少。结论:高剂量的黔棘茎楤木可以通过抑制炎症细胞因子,从而实现对AA大鼠的治疗作用。     

体外动态力学刺激对SD幼鼠前脂肪细胞形态及肿瘤坏死因子表达释放影响的研究

目的探讨动态力学刺激对SD幼鼠前脂肪细胞形态及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达释放影响的研究,为推拿按摩治疗青少年单纯性肥胖的现代医学细胞生物学机制提供理论与实验依据。方法体外培养SD幼鼠前脂肪细胞,从细胞生物力学角度,模拟推拿治疗的按摩作用方式,对细胞实施动态力学刺激,观察动态力学刺激对前脂肪细胞形态及TNF-α表达释放的影响。结果体外动态力学刺激未对前脂肪细胞的细胞形态产生明显影响,但抑制了前脂肪细胞TNF-α的释放表达(P<0.01)。结论推拿按摩治疗青少年单纯性肥胖可能通过抑制前脂肪细胞TNF-α的释放表达,降低脂肪细胞源性细胞因子的病理作用而实现。     

表儿茶素对脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

目的:观察表儿茶素对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分泌炎症因子的影响,并探讨其作用机制。方法:用脂多糖(1 mg·L-1)刺激生长良好的RAW264.7细胞24 h建立体外细胞炎症模型,以噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度表儿茶素对RAW 264.7细胞的毒性作用,Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-6(IL-6)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞一氧化氮合酶(i NOS)及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)磷酸化表达。结果:表儿茶素在100μmol·L-1时对RAW 264.7细胞无毒性作用。与空白组比较,LPS可明显诱导RAW264.7细胞分泌炎症因子NO,TNF-α,IL-1和IL-6(P0.01);与LPS组比较,25~100μmol·L-1的表儿茶素可以明显降低LPS诱导的RAW 264.7细胞释放炎症因子NO,TNF-α,IL-1和IL-6(P0.05,P0.01),抑制i NOS蛋白及MAPKs亚族p38,细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinases,ERK)和c-jun氨基末端激酶(c-jun terminal kinase,JNK)蛋白磷酸化水平表达,并呈现浓度依赖关系。结论:表儿茶素可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用可能与减少炎症因子NO,TNF-α,IL-1和IL-6,抑制i NOS蛋白表达及p38MAPK,ERK1/2和JNK的磷酸化水平有关。     

阿魏酸钠通过抑制β淀粉样蛋白1-42所致的星形胶质细胞炎症因子释放

目的:研究阿魏酸钠对Aβ1-42激活的培养星形胶质细胞引起的海马神经细胞损伤的保护作用。方法:原代培养海马神经细胞与星形胶质细胞,星形胶质细胞用阿魏酸钠(50,100,200 mol/L)预处理6 h后,加入50 nmol/L的Aβ1-42作用24 h,将作用后的星形胶质细胞条件培养液(astrocytic conditioned medium,ACM)加入到培养海马神经细胞中作用48 h,以加入Aβ1-42的无细胞培养液为对照。ELISA法测定星形胶质细胞培养液中IL-1β、TNF-α表达,Griess法测定培养液中NO的含量;测定各组海马神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放、采用突触素荧光免疫组织化学染色观察神经元损伤、Western蛋白印迹法检测神经元caspase-3蛋白表达。结果:与正常对照组相比,星形胶质细胞培养液加入Aβ1-42处理后IL-1β、TNF-α、NO生成量明显增加,海马神经元细胞加入ACM后突触素减少,LDH漏出量增加,磷酸化的caspase-3蛋白表达明显增加;应用阿魏酸钠(50,100,200 mol/L)预处理6 h可明显对抗Aβ1-42引起的星形胶质细胞及海马神经元细胞的这些改变。结论:阿魏酸钠通过抑制星形胶质细胞炎症因子释放对抗Aβ1-42引起的海马神经元损伤。     

荣骨定痛膏对骨性关节炎大鼠IL-1β、NO及氧自由基代谢的影响

目的:探讨荣骨定痛膏对骨性关节炎模型大鼠白介素1β(IL-1β)、一氧化氮(NO)及氧自由基代谢的影响。方法:采用注射4%木瓜蛋白酶复制骨性关节炎大鼠模型,通过观测膝关节功能,血清IL-1β、关节液NO与NOS、关节组织氧自由基代谢等指标,探讨荣骨定痛膏对骨性关节炎的治疗作用及作用机制。结果:荣骨定痛膏可明显减小骨性关节炎大鼠关节滑膜肿胀厚度,扩大膝关节的活动范围,降低血清IL-1β、关节液NO及NOS的水平,提高滑膜组织中SOD的活性而降低MDA的含量。结论:荣骨定痛膏对骨性关节炎模型大鼠具有一定治疗作用,抑制IL-1β诱导的NO的产生而发挥抗氧化、抑制滑膜细胞的凋亡是其治疗骨性关节炎的作用机制之一。     

神经肽Y对大鼠皮质神经元凋亡的调节作用研究

目的探讨神经肽Y(NPY)对大鼠神经小胶质细胞生成白细胞介素-1β(IL-1β)的影响以及对神经元凋亡的调节作用。方法培养原代大鼠皮质小胶质细胞,分为5组,对照组以无血清培养基孵育,LPS组以含脂多糖(LPS)的无血清培养基孵育,NPY+LPS组先后予含NPY和LPS的无血清培养基孵育,NPY组以含NPY的无血清培养基孵育,BIBP3226+NPY+LPS组先后用含BIBP3226、NPY和LPS的无血清培养基孵育。孵育6 h后,ELISA方法检测各组培养液中IL-1β蛋白含量,RT-PCR方法检测各组小胶质细胞中IL-1βmRNA表达水平。然后用各组培养液分别孵育原代培养的大鼠皮质神经元,采用Hoechst33258染色鉴定神经元凋亡情况。结果 LPS组培养液中IL-1β蛋白含量及小胶质细胞中IL-1βmRNA表达水平均显著高于对照组(P均0.05),神经元凋亡率明显高于对照组(P0.05)。NPY+LPS组培养液中IL-1β蛋白含量和小胶质细胞中IL-1βmRNA表达水平均明显低于LPS组(P均0.05),神经元凋亡率明显低于LPS组(P0.05)。BIBP3226+NPY+LPS组培养液中IL-1β蛋白含量及小胶质细胞中IL-1βmRNA表达水平明显高于NPY+LPS组(P均0.05),神经元凋亡率显著高于NPY+LPS组(P0.05)。结论 NPY有可能通过其Y1受体降低过度激活的小胶质细胞免疫活性,抑制其生成IL-1β,从而减少大鼠皮质神经元凋亡。     

雷公藤内酯酮对大鼠类风湿性关节炎的影响

目的:研究雷公藤内酯酮对大鼠类风湿性关节炎的影响及作用机制。方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠类风湿性关节炎模型;观察药物对实验性大鼠足肿胀的抑制作用;检测脾淋巴细胞增殖活性;检测脾细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6和关节浸液内NO、PGE2的含量。结果:与模型组相比,雷公藤内酯酮能剂量依赖性抑制大鼠足肿胀的程度(P<0.01);能明显抑制ConA诱导刺激的脾T淋巴细胞增殖活性(P<0.01);对LPS诱导刺激的脾B淋巴细胞增殖活性的抑制作用不明显(P>0.05);能明显降低脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量以及关节浸液NO、PGE2含量(P<0.01)。结论:雷公藤内酯酮对大鼠类风湿性关节炎有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制脾T淋巴细胞增殖活性、降低致炎因子和相关炎症介质水平密切相关。     

黄芪多糖对内毒素诱导巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β及NO的影响

目的:观察不同浓度黄芪多糖对内毒素(LPS)诱导巨噬细胞产生炎症因子的影响。方法:培养人单核巨噬细胞系U937细胞,体外诱导成熟。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定LPS诱导的U937细胞上清液中炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的含量。采用Griess试剂检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量。结果:与对照组相比,LPS作用于经PMA诱导成熟的U937细胞后,细胞上清液中TNF-α、IL-1β及NO的含量明显增加(P<0.01)。黄芪多糖作用后,TNF-α、IL-1β及NO的含量明显下降,与LPS组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:黄芪多糖能抑制LPS诱导的巨噬细胞产生TNF-α,IL-1β及NO。     

慢性胃炎1号对T淋巴细胞IL-2、CSFs表达的影响

目的:探讨慢性胃炎1号对脾(阳)气虚模型T淋巴细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)、集落刺激因子(CSFs)的影响.方法:以ConA活化的小鼠淋巴细胞作为反应细胞,测定大鼠脾条件培养液(SCM)和混合SCM中IL-2水平;以骨髓细胞作为反应细胞,测定大鼠SCM和混合SCM以及小鼠肺条件培养液(LCM)中CSFs活性.结果:该方药能显著促进脾(阳)气虚证大鼠脾淋巴细胞和混合脾淋巴细胞分泌IL-2(P均＜0.01),显著或明显促进大鼠脾淋巴细胞和混合脾淋巴细胞分泌CSFs(P＜0.01),显著促进小鼠肺组织自发性分泌CSFs(P＜0.01).结论:慢性胃炎1号有显著增强脾(阳)气虚证模型细胞免疫和骨髓造血功能的作用.