用聚合酶链方法对北京林区莱姆病疫源地及莱姆病病原体基因型的探索性研究

目的：进一步明确北京林区是否存在莱姆病的自然疫源地及其分布，方法基于莱姆病螺旋体外膜蛋白A基因建立半巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reactio,PCR)方法，对从北京6个林区采集的蜱和鼠进行检测和基因分型，选择阳性标准本进行克隆和序列测定，与已知序进行同源性比较，间接免疫荧光法检测抗莱姆病螺旋体IgG抗体，从长角血蜱中分离莱姆病螺旋体。结果：从门头沟区东灵山采集的标本中检测到莱姆病螺旋体DNA片段，3只游离全沟硬蜱1只检测阳性，57只寄全沟硬蜱若蜱中1只检测阳性；119只野鼠中9只检测阳性，其中8只，B.garinii阳性，1只B.afzelii阳性。50份野鼠血清有5份莱姆病螺旋体IgG抗体阳性，采集采的160只长角血蜱（20只／组）。未分离到莱姆病螺旋体菌株。结论：北京门头沟区东灵山可能存在莱姆病的自然疫源地，包括两个基因型，全沟硬蜱可能是莱姆病的传播媒体，野鼠可能是贮存宿主。     

宁夏六盘山地区莱姆病调查研究

目的：调查宁夏六盘山及周边地区莱姆病自然疫源地状况。方法：分别采用间接免疫荧光法（IFA）、ELISA法，检测人、畜血清莱姆病抗体．采集蜱类进行病原分离。结果：检测757人，抗莱姆病螺旋体IgG抗体阳性（≥1：128）24人，自然感染率3．17％，并查出典型莱姆病病例；黄牛、绵羊、山羊抗莱姆病抗体阳性水分别为23．88％（16／67）、15．82％（25／158）、20．31％（13／64）。共采集硬蜱4属5种141只，其中1属4种为宁夏首次记录；全沟硬蜱带菌率为50．0％（5／10），从80只全沟硬蜱分离出3株莱姆病疏螺旋体。结论：首次证实宁夏六盘山地两侧及前山丘陵地区、盐池县存在莱姆病自然疫源地。     

中国20个省、区、市动物莱姆病初步调查研究

目的：广泛调查我国动物莱姆病分布情况。方法：血清流行病学和病原学研究。结果：１９８７～１９９７年间，牛、羊、狗、野兔和８种野鼠有莱姆病的感染存在，其中牛、羊、狗和野鼠的感染率分别为１８．１８％～３２．６１％、１７．１２％～６１．２１％、３８．５％～６０．００％和４１．１８％～８６．０５％；从黑线姬鼠和白腹巨鼠的胎鼠分离到莱姆病螺旋体，证实莱姆病螺旋体可通过胎盘垂直传播。９种蜱的中肠携带莱姆病螺旋体，带菌率以全沟硬蜱、二棘血蜱和粒形硬蜱为高，分别为２０．００％～４５．００％、１６．００％～４０．００％和２４．００％。从华南兔、８种野鼠和８种蜱分离出１２８株莱姆病螺旋体。证实黑线姬鼠和棕背是中国莱姆病螺旋体的重要储存宿主；多种蜱的中肠内携带莱姆病螺旋体，我国北方林区莱姆病螺旋体的主要生物媒介是全沟硬蜱，南方林区二棘血蜱和粒形硬蜱是重要的生物媒介。结论：我国动物莱姆病广泛存在     

黑龙江密山口岸三种蜱媒传染病在媒介蜱中复合感染的调查

目的调查黑龙江密山口岸三种蜱媒传染病在媒介蜱中复合感染的情况。方法采集蜱类标本44份,建立伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsia)、嗜吞噬细胞无形体(anaplasma phagocytophilum)三种新发蜱传疾病病原体特异性通用引物,利用PCR方法对所有标本进行特异性片段扩增,对阳性标本测序并进行序列分析。结果在所检测的44份标本中,共检测出伯氏疏螺旋体阳性标本4份,斑点热群立克次体阳性标本6份,嗜吞噬细胞无形体阳性标本2份,感染率分别为13.63%、9.10%和4.55%。在全沟硬蜱检测到两份分别是莱姆病螺旋体与斑点热群立克次体及嗜吞噬细胞无形体和斑点热群立克次体的复合感染,复合感染率为4.55%。结论黑龙江密山地区至少存在两种莱姆病螺旋体(Borrelia garinii,Borrelia afzelii),三种斑点热群立克次体(Rickettsia raoultii,Candidatus Rickettsia tarasevichiae,Rickettsia heilongjiangensis),和嗜吞噬细胞无形体(anaplasma phagocytophilum);全沟硬蜱存在复合感染。     

长春地区首次发现莱姆病疫源地

目的确认长春地区是否莱姆病疫源地。方法用酶联免疫吸附试验等方法检测莱姆病人群特异IgG、IgM抗体，全沟硬蜱中肠伯氏疏螺旋体培养。长春地区全沟硬蜱733只，用BSK33℃培养，获得伯氏疏螺旋体培养物278株，用兔抗美国B31特异性单克隆抗体和针对莱姆病螺旋体种属特异M7，间接免疫荧光抗体进行试验。其结果与美国菌株稍有差异，同国内分离株M7相同。血清学调查298人份，15人阳性，平均感染率为5．03％。结果长春地区莱姆病疫源人群、家畜、动物感染莱姆病。结论首次确认长春地区存在莱姆病自然疫源地。     

全沟硬蜱经期传播莱姆病螺旋体的研究

目的：研究全沟硬蜱经期传播莱姆病螺旋体的能力。方法：以莱姆病螺旋体感染的KM鼠作为宿主动物，利用培养和PCR方法检测全沟硬蜱对吸血感染的莱姆病螺旋体的保持能力以及蜕化后若蜱对敏感动物的感染能力。结果：全沟硬蜱幼蜱攻击感染KM鼠后获得97.5%的阳性感染，并能保持所感染的莱姆病螺旋体至若蜱。幼蜱蜕化后,45.0%的若蜱仍携带姆病螺旋体并可通过叮咬感染敏感KM鼠。结论：全沟硬蜱具备经期传播莱姆病螺旋体的能力。     

大兴安岭林区蜱和鼠中莱姆病螺旋体感染及其基因分型研究

目的 了解内蒙古大兴安岭林区蜱和鼠中伯氏疏螺旋体的感染及基因分型情况。方法 应用巢式PCR扩增蜱和鼠中伯氏疏螺旋体5S-23SrRNA间隔区片段，对阳性产物进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析和单链构象多态性（SSCP）分析，RFLP分析显示特殊带型的样本测序分析。结果 检测全沟硬蜱1336只，293只阳性，阳性率为21．93％；森林革蜱144只，6只阳性，阳性率为4．17％；嗜群血蜱144只，未发现有伯氏疏螺旋体感染。检测鼠9种145只，感染伯氏疏螺旋体的4种5只，感染率为3．45％；其中检测8只棕背鼠平，2只阳性。RFLP分析及序列分析显示蜱中有B．garinii20047亚型、B．gariniiNT29亚型、B．afzelii基因型以及不同基因型或亚型伯氏疏螺旋体的混合感染；鼠感染的伯氏疏螺旋体包括B．garinii20047亚型和B．gariniiNT29亚型。SSCP分析结果显示带型多于36种。结论 大兴安岭林区蜱及鼠中均存在伯氏疏螺旋体的感染，其中全沟硬蜱的感染率较高；B．garinii型为主要基因型，且该地区伯氏疏螺旋体存在遗传多态性。单只蜱中存在同时感染不同基因型伯氏疏螺旋体的情况，人和宿主动物是否存在不同基因型伯氏疏螺旋体混合感染尚待进一步研究。全沟硬蜱和棕背鼾分别是该林区伯氏疏螺旋体的主要媒介和主要储存宿主。     

黑龙江省小兴安岭林区莱姆病调查研究

目的：探讨小兴安岭林区莱姆病流行情况。方法：间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ）、宿主调查、病原分离。结果：林区人群普遍易感，平均感染率１１７３％。确诊４８例莱姆病患者，临床症状以慢性游走性红斑（３３３３％）、关节炎（２７０９％）和神经系统损害（２７０９％）为主。全沟硬蜱是莱姆病螺旋体的主要生物媒介，属野鼠是重要动物宿主。从神经麻痹和游走性红斑病人、全沟硬蜱、棕背、花鼠分离出６株病原体。结论：首次确证该地区为莱姆病自然疫源地     

吉林省莱姆病病原调查和基因分型研究

目的为进一步了解吉林省莱姆病的病原学,为莱姆病的预防和控制提供科学依据。方法采用布旗法捕获蜱;采用BSKⅡ培养基对蜱进行莱姆病螺旋体的分离培养,并对分离到的病原体进行单克隆抗体鉴定及5S~23SrRNA基因间隔区PCR-RFLP分析。结果2004年从吉林省11个地区捕蜱1308只,其中全沟硬蜱1250只,占95.6%;血蜱58只,占4.4%。从全沟硬蜱中分离到7株螺旋体,经单克隆抗体鉴定均为莱姆病螺旋体。5S~23S rRNA基因间隔区PCR-RFLP基因分型结果表明,6株菌为Borrelia garinii基因型,1株菌为Borrelia afzelii基因型。结论吉林省11个地区莱姆病的主要传播媒介为全沟硬蜱,至少存在2个致病基因型,即B.garinii和B.afzelii,以B.garinii基因型为主。因此应加强这些地区莱姆病的防控工作。     

中国六省蜱中莱姆病螺旋体分离与鉴定

目的 了解中国6省蜱中莱姆病螺旋体携带情况.方法 在6省各选取2个采样点捕蜱,采用病原分离培养和巢式PCR方法对蜱进行莱姆病螺旋体检测,通过基因测序确定分型.结果 6省共采集到2200余只蜱,约1000只蜱用于病原分离培养,从吉林省长白县全沟硬蜱标本中分离到13株螺旋体,从贵州省道真粒形硬蜱标本中分离到9株螺旋体.1255只蜱用于PCR检测,从6省的蜱标本中检测到莱姆病螺旋体特异片段,其中吉林省(长白县27.08%、通化县20.41%)、青海省(互助县25.06%、黄南县21.11%)和贵州省(道真县25.63%)蜱中莱姆病螺旋体阳性率较高,山西省(垣曲县4.72%、交城县3.64%)蜱中莱姆病螺旋体阳性率较低.通过序列同源性分析确定吉林、青海、甘肃和山西省蜱中莱姆病螺旋体基因型均为Borrelia garinii.贵州、湖南省的基因型均为Borrelia valaisiana.结论 6省蜱中均带有莱姆病螺旋体,且带菌率有差异;山西省蜱中存在Borrelia ganmi型莱姆病螺旋体,湖南省蜱中存在Borrelia valaisiana型莱姆病螺旋体.     

全沟硬蜱是我国北方地区莱姆病螺旋体的主要传播媒介

研究我国北方地区莱姆病螺旋体的生物媒介—蜱的种类、带菌状况及在传播莱姆病中的作用。用布旗法和动物诱捕法在山林地区采集蜱，分类鉴定，直接荧光抗体染色法查蜱中肠带菌率，ＢＳＫ培养基分离病原体，单克隆抗体鉴定菌株。调查蜱叮咬率与人群莱姆病感染率、患病率以及蜱的季节消长与莱姆病慢性游走性红斑（ＥＣＭ）病例发生的季节性关系。在北方１０省（市、区）共采集到１００００多只蜱，分属为２科７属１１种，以全沟硬蜱为优势种，占８０％～９５％。４种蜱的中肠携带莱姆病螺旋体，全沟硬蜱的带菌率高达２０．００％～４５．００％。从４种蜱分离到９８株莱姆病螺旋体，其中９０％以上是从全沟硬蜱分离的。全沟硬蜱叮咬率高的人群，莱姆病的感染率和患病率也高。全沟硬蜱的季节消长与ＥＣＭ发生的季节性相一致。证实我国北方地区至少有４种蜱的中肠内携带莱姆病螺旋体，莱姆病螺旋体的主要生物媒介是全沟硬蜱。     

我国莱姆病的流行病学和病原学研究

１９８７－１９９６年对２２个省市（市、区）的６０个县、区进行了莱姆病的调查研究。血清流行病学证实２２个省市（市、区）林区人群均存在莱姆病感染，感染率平均为５．０６％（１７２４／３４１０４）。病原学证实１７个省（市、区）存在莱姆病自然疫源地。１１个省（市、区）有典型病例存在。     

黑龙江省东部边境口岸莱姆病生物媒介调查及病原分型研究

目的调查黑龙江省东部中俄边境口岸蜱的种类、分布、携带莱姆病螺旋体情况及病原基因型。方法捕蜱采用布旗法;蜱带莱姆病螺旋体率采用直接荧光法检查;病原体分离培养采用BSKⅡ培养基,对分离到的螺旋体用单克隆抗体(H_(5332)、H_(6831)、H_(9724))、SDS-PAGE蛋白图谱分析、PCR-RFLP分析以及基因测序等方法进行表型和基因分型研究。结果黑龙江省东部7个中俄边境口岸蜱的种类为1科3属4种,即硬蜱科硬蜱属全沟硬蜱,革蜱属森林革蜱,血蜱属嗜群血蜱和日本血蜱。不同生态环境中蜱的分布不同,各口岸优势蜱种不同。全沟硬蜱带莱姆病螺旋体率较高,平均为31.4%,森林革蜱和嗜群血蜱的带菌率较低,平均为2.2%和3.8%,日本血蜱中未检出阳性者。首次在中俄边境口岸——东宁、同江采集的全沟硬蜱中分离到伯氏疏螺旋体并鉴定为B.garinii基因型。结论黑龙江省东部边境口岸为莱姆病的自然疫源地。     

Epidemiological and aetiological evidence for transmission of Lyme disease by adult Ixodes persulcatus in an endemic area in China

Involvement of adult Ixodes persulcatus ticks in the transmission of Lyme disease in Hailin County, Heilongjiang Province, China, is reported. In 1986 from April through August adult I. persulcatus was the dominant tick in this endemic area with an infection rate of 43% for the Lyme disease spirochaete, Borrelia burgdorferi. The incidence of Lyme disease cases presenting the symptom of erythema chronicum migrans (ECM) within this area was correlated with the seasonal abundance of adult I. persulcatus and the number of people bitten by ticks. The frequency of ECM formation in all age groups varied and was associated with the frequency of tick bites. In addition, a strain of B. burgdorferi was isolated from a pool of six female I. persulcatus collected from this area. We demonstrate that the seasonal abundance of adult I. persulcatus and its frequent attachment to humans result in the spring and summer transmission of Lyme disease in this endemic area. The role of immature I. persulcatus in Lyme disease transmission is apparently minimal.     

我国东北林区莱姆病的调查

1987~1988年我们在牡丹江和延边林区对莱姆病进行了流行病学调查和临床观察,发现一些林场莱姆病的患病率和自然感染率较高。大青林场共有人口1 030人,在检查的628人中,发现莱姆病患者37例。在小白林场人群中进行了血清流行病学调查,发现伯氏包柔氏体自然感染率为22.5%。从牡丹江林区收集的全沟硬蜱中,分离出了3株包柔氏体,其中M7菌株经单克隆抗体测定和电镜观察,确证为伯氏包柔氏体。在医院收集162份疑似森林脑炎病人血清,其中38份血清抗伯氏包柔氏体抗体阳性。对15例经临床和血清学确诊的莱姆病患者进行了临床观察和治疗,证明大剂量青霉素可以治愈全身性红斑。并从1例慢性游走性红斑患者血液中分离出1株包柔氏体。     

中俄,中哈边境地区莱姆病自然疫源地调查研究

目的：调查边境地区莱杂姆病和自然疫源地的状况。方法;对血清学、病原学、宿主、媒介,病例和地理景观方面进行调查。结果：用ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ法共检测人畜血清１５０１份,从１９９份人血清中检出抗体阳性１８份,阳性率为９．０５％,并发现莱姆病典型患者１５例;检查马血清２０份,阳性５份,阳性率为２５．００％;检查牛血清３９９份,阳性６９份,阳性率１７．２９％;检查羊血清８８３份,阳性１９９份,阳性率２２．５     

Tickborne pathogen detection, Western Siberia, Russia

Ixodes persulcatus (n = 125) and Dermacentor reticulatus (n = 84) ticks from Western Siberia, Russia, were tested for infection with Borrelia, Anaplasma/Ehrlichia, Bartonella, and Babesia spp. by using nested polymerase chain reaction assays with subsequent sequencing. I. persulcatus ticks were infected with Borrelia burgdorferi sensu lato (37.6% +/- 4.3% [standard deviation]), Anaplasma phagocytophilum (2.4% +/- 1.4%), Ehrlichia muris (8.8% +/- 2.5%), and Bartonella spp. (37.6% +/- 4.3%). D. reticulatus ticks contained DNA of B. burgdorferi sensu lato (3.6% +/- 2.0%), Bartonella spp. (21.4% +/- 4.5%), and Babesia canis canis (3.6% +/- 2.0%). Borrelia garinii, Borrelia afzelii, and their mixed infections were observed among I. persulcatus, whereas B. garinii NT29 DNA was seen in samples from D. reticulatus. Among the I. persulcatus ticks studied, no Babesia spp. were observed, whereas B. canis canis was the single subspecies found in D. reticulatus.     

我国莱姆病螺旋体生物媒介的初步调查

自1987年以来,我们在全国开展了莱姆病调查,从黑龙江、吉林、辽宁、内蒙、河北、新疆、湖北、四川、福建和北京等省、市采集的全沟硬蜱、粒形硬蜱、壤塘硬蜱、嗜群血蜱、二棘血蜱和长角血蜱分离出71株莱姆病螺旋体,其中55株从全沟硬蜱分离。全沟硬蜱是东北和西北针阔叶林区的优势蜱种,其带菌率为20~45%,表明全沟硬蜱是我国北方莱姆病螺旋体的主要生物媒介。虽然从我国南方的某些硬蜱属和血蜱属种类分离到莱姆病螺旋体,但是南方的主要生物媒介还不清楚。从我国蜱体内分离的螺旋体在超微结构、单克隆抗体反应和外表蛋白等方面与美国菌株有某些区别。