苏木乙酸乙酯提取物对心脏移植模型大鼠LFA-1mRNA表达的影响

目的观察苏木乙酸乙酯提取物对同种异位心脏移植急性排斥反应模型大鼠移植心肌淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)mR NA表达的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法采用改良的Ono术式,以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,制备大鼠同种异位心脏移植模型,造模成功后,采用Real Time-PCR法测定LFA-1mR NA的表达。结果与模型对照组相比,苏木组、CsA组及苏木加半量CsA组均能明显抑制LFA-1mR NA的表达,而苏木乙酸乙酯提取物及苏木乙酸乙酯提取物加半量CsA抑制LFA-1 mRNA的表达的作用相当,且在抗排斥反应时,苏木乙酸乙酯提取物可以减少CsA的用量。结论在大鼠心脏移植模型中,苏木乙酸乙酯提取物具有抑制同种异位心脏移植模型大鼠心肌的LFA-1mR NA的表达,减轻移植心脏的急性排斥反应。     

苏木醇提取物对心脏移植后外周血部分辅助性T淋巴细胞因子水平的影响

目的 探讨苏木醇提物对心脏移植后外周血部分辅助性T淋巴细胞因子(Th1)细胞因子水平的影响。方法 应用大鼠腹腔同种异位心脏移植模型。受体SD大鼠，供体Wistar大鼠，苏木醇提物分为大、小剂量组，环孢素A(CsA)组，苏木 半量CsA合作组，对照组。术前2d给药，术后5，9d抽血检测白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，观察术后移植心脏的存活天数及心脏跳动情况及病理改变。结果 苏木醇提物、苏木 半量CsA合作组可明显延长供心存活时间，减轻移植心的病理损害，不同程度上降低移植后血清IL-2、IFN-γ、TNF-α水平。结论 苏木醇提物有较强的免疫抑制作用，可能是一种很有前途的心脏移植后抗排斥反应新药。     

CD8＋CD28＋T淋巴细胞胞外钙离子摄取与心脏移植急性排斥反应的相关性研究

目的探讨CD8＋CD28＋T淋巴细胞胞外钙离子摄取与心脏移植急性排斥反应的相关性。方法用流式细胞仪分选对照组T0（正常SD大鼠组）、假手术组T1（sD大鼠除不进行心脏移植外,其他操过程都相同）、实验组T2（同种心脏移植组,WISTAR--}SD大鼠）术后第1、3、5、7、9、11天外周血CD8＋CD28＋T淋巴细胞,并用液闪仪测量CD8＋CD28＋T淋巴细胞胞外钙离子摄取量,分析CD8＋CD28＋T淋巴细胞胞外钙离子摄取量与心脏移植急性排斥反应程度的相关性。结果移植组CD8＋CD28＋T淋巴细胞胞外钙离子摄取率较假手术组、对照组明显升高,差异具有统计学意义（P〈0．05）。心脏移植后CD8＋CD28＋T淋巴细胞胞外钙离子摄取水平显著升高,与急性排斥反应严重程度成显著正相关,Spearman相关系数为0．488（P〈0．001）。结论通过测量外周血CD8＋CD28＋T淋巴细胞胞外钙离子摄取量,有助于早期监测心脏移植术后排斥反应,指导相应治疗。     

肝硬化患者外周血及腹水T淋巴细胞亚群的变化及意义

目的研究肝硬化患者外周血及腹水T淋巴细胞亚群的变化及意义。方法流式细胞仪测定31例肝炎后肝硬化患者外周血及腹水T淋巴细胞亚群，同时检测15例正常人的外周血T淋巴细胞亚群。结果肝硬化患者外周血T淋巴细胞（CD3^＋）、T辅助／诱导细胞亚群（CD4^＋）、T辅助淋巴细胞／T抑制淋巴细胞亚群（CD4^＋／CD8^＋）较正常对照明显降低（p＜0．01），腹水CD3^＋、CIM^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋较外周血显著降低（P＜0．001）。结论肝硬化患者外周血及腹水T淋巴细胞亚群存在明显异常，表现为全身及腹膜腔局部的免疫力低下。     

苏木水提物对心脏异位移植大鼠血清I-4和IL-10的影响

目的 观察苏木水提物对心脏异位移植大鼠血清IL-4与IL-10水平的影响，探讨苏木水提物的免疫抑制作用。方法采用大鼠腹腔同种异位心脏移植术，受体来源于SD大鼠，供体Wistar大鼠。实验分为苏木水提物大、小剂量（生药37．5、25．0g／kg）组，环孢素A（5．0mg／kg）组，苏木（25．0g／kg）＋环孢素A（2．5g／kg）组，对照组（移植心脏但不给药）。术前2d给药，术后3、7d采血测定血清IL-4、IL-10水平，取大鼠心脏观察移植心脏心肌病理变化。结果与对照组比较，大剂量苏木仅在术后3d时，能减轻心脏的排斥反应（t=3．006，P＜0，01）。苏木＋环孢素A合用，术后3d和7d时，都能降低心脏的排斥反应（t=3．009，P＜0．01；t=2．524，P＜0．05），同时血清IL-4低于对照组（t=2．192，P＜0．05；t=2．997，P＜0．01）。苏木大剂量组血清IL-4仅是在7d时，较对照组降低（t=2，988，P＜0．05）。与对照组相比，环孢素A组和苏木小剂量组在术后7d时，血清IL-10水平升高（t=2．198、t=2．173，P＜0．05），苏木大剂量组仅在术后3d时IL-10升高（t=2．203，P＜0．05）；结论 苏木水提物可降低心脏移植后血清IL-4水平，升高移植后血清IL-10的水平，有较强的免疫抑制作用，是一种很有前途的心脏移植后免疫抑制剂。     

苏木水提物对心脏异位移植大鼠血清IL-4和IL-10的影响

目的观察苏木水提物对心脏异位移植大鼠血清IL-4与IL-10水平的影响,探讨苏木水提物的免疫抑制作用。方法采用大鼠腹腔同种异位心脏移植术,受体来源于SD大鼠,供体Wistar大鼠。实验分为苏木水提物大、小剂量(生药37．5、25．0 g/kg)组,环孢素A(5．0 mg/kg)组,苏木(25．0 g/kg) 环孢素A(2．5 g/kg)组,对照组(移植心脏但不给药)。术前2 d给药,术后3、7 d采血测定血清IL-4、IL-10水平,取大鼠心脏观察移植心脏心肌病理变化。结果与对照组比较,大剂量苏木仅在术后3 d时,能减轻心脏的排斥反应(t=3．006,P＜0．01)。苏木 环孢素A合用,术后3 d和7 d时,都能降低心脏的排斥反应(t=3．009,P＜0．01：t=2．524．P＜0．05),同时血清IL-4低于对照组(t=2．192,P＜0．05；t=2．997,P＜0．01)。苏木大剂量组血清IL-4仅是在7 d时,较对照组降低(t=2．988,P＜0．05)。与对照组相比,环孢素A组和苏木小剂量组在术后7 d时,血清IL-10水平升高(t=2．198、t=2．173,P＜0．05),苏木大剂量组仅在术后3 d时IL-10升高(t=2．203,P＜0．05)；结论苏木水提物可降低心脏移植后血清IL-4水平,升高移植后血清IL-10的水平,有较强的免疫抑制作用．是一种很有前途的心脏移植后免疫抑制剂。     

rhG-CSF未经动员与动员后供者外周血淋巴细胞与干细胞采集物的细胞构成及功能比较

目的比较重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员后供者外周血干细胞（PBSC）采集物与未经动员供者外周血淋巴细胞采集物的细胞构成及功能。方法取异基因造血干细胞移植供者的rhG-CSF动员后PBSC采集物（A组）和未经动员的淋巴细胞采集物（B组）,以流式细胞术测定采集物组分、T细胞亚群、树突细胞（DC）及其亚群、CD14^＋细胞和CD19^＋细胞B7分子的表达、CD4^＋T细胞IL-4和IFNγ等细胞因子的分泌情况,四甲基偶氮唑盐法测定T淋巴细胞增殖能力。结果两组采集物的CD3^＋、CD4^＋、CD34^＋、CD14^＋细胞比例有明显差异,A组DC细胞及其亚群的比例明显高于B组,尤以DC2升高为著（P=0．000）,CD14^＋细胞上B7分子的表达A组明显低于B组,CD19^＋细胞上B7分子的表达无明显差异,分析两组CD4细胞内因子的分泌情况,A组的Ⅱ类细胞因子IL-4及IL-4／IFNγ均明显高于B组（P值分别为0．044,0．012）,经rhG—CSF动员后采集物的T淋巴细胞增殖能力明显下降。结论动员后的PBSC采集物较未经动员的淋巴细胞采集物富集了更多的CD34^＋、CD14^＋细胞,同时rhG—CSF动员后DC2比例的明显升高使得CD4细胞向Th2分化,PBSC含有更多的Ⅱ类细胞因子和其T细胞增殖能力的下降、共刺激分子的下调均提示PBSC较供者淋巴细胞输注更少地引起急性移植物抗宿主病的发生。     

消化道恶性肿瘤患者化疗前后外周血T淋巴细胞亚群变化及其对PG-SGA评分的影响

目的通过分析消化道肿瘤患者在化疗前后外周血T淋巴细胞亚群水平、主观全面评价法(PG-SGA)评分的变化及二者之间的相关性,探讨消化道恶性肿瘤患者经过化疗后的免疫功能变化及对患者营养状况的影响。方法对消化道肿瘤患者进行化疗,分别于化疗前和化疗后对不同疗效的患者进行外周血T淋巴细胞亚群水平检测和PG-SGA评估,同时对化疗前后患者的PG-SGA评分和T淋巴细胞亚群水平进行相关性分析。结果所有患者治疗的缓解率为43.3%,经过4个疗程化疗后,化疗后各疗效组患者外周血CD3^+和CD8^+ T细胞水平较化疗前显著升高,化疗后CD4^+/CD8^+较化疗前显著降低。化疗后患者的PG-SGA评分较化疗前显著增加。患者在化疗前和化疗后PG-SGA评分和外周血CD3^+和CD4^+T淋巴细胞亚群水平及CD4^+/CD8^+呈显著负相关。结论 T淋巴细胞亚群水平能够影响到胃肠道肿瘤患者的营养状况。     

细胞凋亡与移植心脏急性排斥反应的实验研究

目的 探讨大鼠异位心脏移植的急性排斤反应与细胞凋亡之间的关系.方法采用大鼠颈部心脏移植的动物模型,在移植术后的不同时间,取下移植心脏,流式细胞术测定移植心脏组织的细胞凋亡率.结果急性排斥反应时,移植心脏的细胞凋亡率比正常心脏组织增高.结论 细胞凋亡参与大鼠心脏移植的急性排斥反应,在整个排斥反应过程中细胞凋亡率均增高.     

高频超声心动图对大鼠异位移植心脏急性排斥反应的评价

目的:探讨高频超声心动图评价大鼠颈部异位移植心脏急性排斥反应的价值。方法:建立27只大鼠颈部异位心脏移植模型,其中同种异体移植20只,同系移植7只。7只同系移植大鼠和10只同种异体移植大鼠,分别于移植术后第1、3、5天,应用高频超声心动图观察异位移植心脏,第5天观察完毕后处死并行病检。另10只同种异体移植大鼠,分别于移植术后第1、3天各观察1次,第3天观察完毕后处死行病检。超声观察指标包括左室心肌厚度、左室质量和左室射血分数。结果:同种异体移植术后,随着移植时间的延长,超声检查显示左室心肌厚度和左室质量逐渐增加,术后第3天,病理学提示轻中度排斥反应(1～2级)时,左室心肌厚度和左室质量明显高于同系移植组,差异有统计学意义(P<0.05),至术后第5天病理学提示严重排斥反应(3～4级)时,左室心肌厚度和左室质量较同系移植组进一步升高(P<0.01)。左室射血分数在严重排斥反应发生时才出现明显减低。同系移植大鼠各指标在术后连续观察中无明显改变。结论:高频超声心动图可动态显示大鼠异位移植心脏的结构及功能改变,为心脏移植实验研究提供了一种无创且简便可靠的观察方法,也为临床心脏移植的排斥反应的超声评价提供了实验依据。室壁厚度、左室质量可作为超声评价急性排斥反应发生的敏感指标。     

大鼠心脏移植术后环孢素A对弓形虫感染及淋巴细胞亚群的作用

目的　　观察大鼠心脏移植受体经不同途径感染弓形虫及术后使用环孢素A (CyclosporinA ,CsA)对免疫功能和弓形虫感染的影响。　方法　用ELISA法检测大鼠心脏移植术后受体弓形虫特异性抗体IgM、IgG及循环抗原 ,流式细胞术测定移植术后受体的T淋巴细胞亚群的变化。　结果　移植术后使用CsA可使弓形虫感染危险度提高 ,供体携带弓形虫病原体引起的感染大于受体隐性感染的复发的发生率 ,CD8+ T淋巴细胞升高更快。感染发作时CD8+ T淋巴细胞明显升高 ,CD4+ CD8+ 比值降低或倒置。　结论　移植术后使用CsA导致免疫抑制是弓形虫感染的重要原因 ,感染发作时CD8+ 是主要的细胞毒T淋巴细胞。     

连续灌注不停跳心脏移植对供心的保护作用

目的 通过建立大鼠同种异位供心停跳心脏移植模型与连续血液灌注供心不停跳心脏移植模型,探讨连续灌注不停跳心脏移植对供心的影响.方法 建立大鼠同种异位连续灌注心脏不停跳心脏移植模型（不停跳移植组）和改良Heron法建立大鼠异位心脏移植模型（停跳移植组）.移植成功后2h检测受体外周血肌酸激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量,测定供心心肌脂质过氧化终产物丙二醛（MDA）、过氧化物歧化酶（SOD）含量,电镜观察心肌结构变化,并观察心肌凋亡情况.结果 连续灌注心脏不停跳移植组受体外周血CK-MB及cTnI含量低于停跳移植组,差异有统计学意义（P＜0.05）.与停跳移植组比较,不停跳移植组心肌MDA含量相对较少,SOD含量相对较多,心肌细胞凋亡指数较小,差异均有统计学意义（P＜0.05）.不停跳移植组心肌线粒体等结构损伤相对较轻.结论 心脏不停跳技术能有效减轻心脏移植供心的脂质过氧化反应,保护心肌线粒体,抑制心肌细胞凋亡,可减轻心脏移植供心的再灌注损伤.     

调节性T细胞在不同品系小鼠心脏移植后的变化及意义

目的探讨不同品系小鼠颈部心脏移植后调节性T细胞的变化及意义。方法建立小鼠颈部心脏异位移植模型,实验分2组,受体小鼠均为C57BL／6,供体分别为BALB／c和C57BL／6小鼠。比较两组供心存活时间、排斥反应程度,流式细胞仪测定CD4＋CD25＋调节性T细胞（Tregs）及CD3＋CD8＋T细胞水平。结果术后第7天,异基因组Tregs水平明显低于同基因组（P〈0．05）,而CD8＋T细胞却明显高于同基因组（P〈0．05）。结论Tregs水平高低与心脏移植后免疫耐受的发生、发展密切相关,可作为心脏移植后免疫耐受的监测指标,对移植物的预后估计和急性排斥反应的早期诊断具有重要的临床意义。     

CsA对大鼠移植心脏细胞凋亡的影响

目的 :探讨细胞凋亡与心脏移植急、慢性排斥反应之间的关系。方法 :Wistar大鼠为供体 ,SD大鼠为受体 ,心脏移植术后给予环孢霉素A(CsA)治疗 ,在移植术后的不同时间 ,取下移植心脏 ,流式细胞术测定移植心脏组织的细胞凋亡率。结果 :CsA治疗的慢性排斥反应组 ,移植心脏的细胞凋亡率显著增高。结论 :细胞凋亡参与移植排斥反应 ,移植心脏细胞凋亡率的检测可作为诊断排斥反应和移植物能否长期存活的指标之一。     

Infarctus du myocarde antérieur indolore chez un transplanté cardiaque

Cardiac allograft vasculopathy is the major determinant of long-term survival in patients after heart transplantation. Clinical presentations are congestive heart failure, ventricular arrhythmias and sudden cardiac death. Acute coronary syndrome is a rare presentation of cardiac allograft vasculopathy due to myocardial denervation. We present the case of a 31-year-old patient, who had undergone heart transplantation 6 months earlier and who developed a painless anterior myocardial infarction revealed by syncope. He was successfully treated by percutaneous coronary intervention with drug eluting stent implantation.     

干细胞移植后合并巨细胞病毒感染时淋巴细胞亚群变化

目的　研究异基因外周血干细胞移植 (PBSCT)后早期巨细胞病毒 (CMV)活动性感染时淋巴细胞亚群变化及其意义 ,探讨活动性CMV感染对免疫的影响。方法　根据CMV感染情况 ,将 2 7例早期PBSCT受者分为症状性感染、无症状活动性感染以及同期未出现活动性感染 3组 ,5 1例正常人作为对照组 ,用流式细胞仪测定其淋巴细胞表面CD3 、CD4、CD8、CD16、CD56、CD19、CD2 8的表达 ,比较各组间的差异。结果　PBSCT后早期CD+ 4 T和B细胞数量显著低于正常人 (P值均 <0 0 1) ;2 7例受者中无活动性CMV感染 5例、无症状活动性CMV感染 10例和症状性CMV感染 12例。上述 3组病人的平均CD+ 4 T细胞计数 (× 10 6/L)分别为 32 8± 2 0 3、2 39± 2 18和 199± 92 ;CD+ 8T细胞计数 (× 10 6/L)分别为 4 0 0± 380、2 6 7± 2 0 6和 6 0 3± 4 6 1;CD+ 4 CD+ 2 8的功能细胞亚群的比例分别为 (89 2± 8 9) %、(84 2±10 1) %和 (6 3 5± 11 4 ) % ;自然杀伤 (NK)细胞比例分别为 (16 2± 11 1) %、(2 9 3± 9 9) %和 (19 2±10 2 ) %。与无活动性CMV感染者相比 ,无症状CMV活动性感染者除NK细胞升高外 (P <0 0 1) ,其他指标差异无显著性 ;而症状性CMV感染者和无症状CMV感染者相比 ,其CD+ 4 T细胞数量显著减少(P <0 0 1) ,CD+ 8T     

Regulatory T cells ameliorate cardiac remodeling after myocardial infarction

Persistent inflammatory responses participate in the pathogenesis of adverse ventricular remodeling after myocardial infarction (MI). We hypothesized that regulatory T (Treg) cells modulate inflammatory responses, attenuate ventricular remodeling and subsequently improve cardiac function after MI. Acute MI was induced by ligation of the left anterior descending coronary artery in rats. Infiltration of Foxp3(+) Treg cells was detected in the infarcted heart. Expansion of Treg cells in vivo by means of adoptive transfer as well as a CD28 superagonistic antibody (JJ316) resulted in an increased number of Foxp3(+) Treg cells in the infarcted heart. Subsequently, rats with MI showed improved cardiac function following Treg cells transfer or JJ316 injection. Interstitial fibrosis, myocardial matrix metalloproteinase-2 activity and cardiac apoptosis were attenuated in the rats that received Treg cells transfer. Infiltration of neutrophils, macrophages and lymphocytes as well as expression of tumor necrosis factor (TNF)-α and interleukin (IL)-1β were also significantly decreased, and the CD8(+) cardiac-specific cytotoxic T lymphocyte response was inhibited. Expression of interleukin (IL)-10 in the heart, however, was increased. Additional studies in vitro indicated that Treg cells directly protect neonatal rat cardiomyocytes against LPS-induced apoptosis, and this protection depends on the cell-cell contact and IL-10 expression. Furthermore, Treg cells inhibited proinflammatory cytokines production by cardiomyocytes. These data demonstrate that Treg cells serve to protect against adverse ventricular remodeling and contribute to improve cardiac function after myocardial infarction via inhibition of inflammation and direct protection of cardiomyocytes.     

LFA-1 blockade induces effector and regulatory T-cell enrichment in lymph nodes and synergizes with CTLA-4Ig to inhibit effector function

Despite encouraging results using lymphocyte function antigen-1 (LFA-1) blockade to inhibit BM and solid organ transplantation rejection in nonhuman primates and humans, the precise mechanisms underlying its therapeutic potential are still poorly understood. Using a fully allogeneic murine transplantation model, we assessed the relative distribution of total lymphocyte subsets in untreated versus anti-LFA-1-treated animals. Our results demonstrated a striking loss of naive T cells from peripheral lymph nodes, a concomitant gain in blood after LFA-1 blockade, and a shift in phenotype of the cells remaining in the node to a CD62LloCD44hi profile. We determined that this change was due to a specific enrichment of activated, graft-specific effectors in the peripheral lymph nodes of anti-LFA-1-treated mice compared with untreated controls, and not to a direct effect of anti-LFA-1 on CD62L expression. LFA-1 blockade also resulted in a dramatic increase in the frequency of CD4+ FoxP3+ regulatory T cells in graft-draining nodes. Our results suggest that the differential impact of LFA-1 blockade on the distribution of naive versus effector and regulatory T cells may underlie its ability to inhibit alloreactive T-cell responses after transplantation.     

The changes of vaccinia related kinase 1 in grafted heart after rat heart transplantation

Objective

To assess the expression and significance of vaccinia-related kinase 1 (VRK1) after rat heart transplantation.

Materials and methods

Lewis and Wistar rats weighing 250 to 300 g were used as donors and recipients. Allografts were from Wistar transplanted into Lewis, and isografts were transplanted from Lewis into Lewis. Grafts were harvested at 1, 3, 5, and 7 days after transplantation. We performed Western Blot of heart tissues after cardiac transplantation. To analyze VRK1 express between the isografts and allografts for immunohistochemical staining. At 5th day after heart transplantation use related cytokines VRK1 for immunohistochemical. We used double immunofluorescent staining on transverse cryosections of graft tissues by co-labeling with different markers, including those for VRK1, activate caspase-3, α-actinin, VCAM-1, CD4.

Results

Compared with rare expression in syngeneic Lewis rat hearts, VRK1 protein level in allogeneic hearts were detected at various survival times after heterotopic heart transplantation, which observably expressed on day 5 postoperative. In addition, we examined the expression of activate caspase-3 in allogeneic hearts, which has a similar expression with VRK1. Immunohistochemical and immunofluorescent method displayed that VRK1 was widely expressed in cytoplasm of cardiac tissue and activate caspase-3 was also expressed in cardiomyocytes. However, the VRK1 wasn’t express in inflammation.

Conclusions

The VRK1 expression has increased after heart transplantation in allograft and isograft, and VRK1 may play a significant role in myocardial apoptosis after heterotopic heart transplantation in rats.