休克淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：观察休克淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）凋亡相关基因表达的影响，探讨休克淋巴液诱导PMVECs细胞凋亡的分子机制。方法：无菌条件下复制大鼠重症失血性休克模型，引流休克时肠系膜淋巴液或收集门静脉血，同时引流正常的淋巴液或正常门静脉血作为对照。以不同处理因素与第3代原代培养的PMVECs共同孵育，应用流式细胞仪检测细胞凋亡率，RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及fas、fas L的表达。结果：4%终浓度的休克淋巴液作用4 h后，PMVECs凋亡率为9.86%±3.24%，显著高于其它组（P<0.01）；4%终浓度的休克淋巴液作用6 h后，PMVEC的fas、fas L、bax mRNA表达高于其它组、bcl-2 mRNA表达低于其它组（P<0.01）。结论：休克淋巴液可诱导大鼠PMVECs凋亡，其机制与凋亡促进基因fas、fas L、bax表达增强、凋亡抑制基因〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗表达降低有关。     

CHK1shRNA抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡

目的：构建针对CHK(checkpoint kinase，细胞周期检测点激酶)1基因的短发夹状RNA（short hairpin RNA，shRNA），观察其对高表达〖STBX〗CHK1〖STBZ〗的宫颈癌细胞系-HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响。方法：〖HTSS〗 设计并合成了针对CHK1的shRNA，将其导入本室构建的携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的RNAi（RNA interference，RNA干扰）表达载体中。通过 RT-PCR和Western blotting分别检测HeLa细胞CHK1基因和蛋白水平的表达，以流式细胞仪测细胞凋亡，MTT法检测细胞的增殖。结果：〖HTSS〗 成功构建了携带EGFP的RNAi表达载体pEGFP-H1。与对照组和空载体转染组相比, shRNA使细胞中〖STBX〗CHK1〖STBZ〗 mRNA水平下降了66％，蛋白水平下降了60％。此外，shRNA转染组的HeLa细胞凋亡率明显高于对照组，其增殖活性则明显低于对照组。结论：〖HTSS〗 本课题构建的RNAi表达载体便于观察靶基因的转染情况，且不影响H1启动子的体内转录。CHK1shRNA能诱导HeLa细胞凋亡，抑制该细胞的增殖，为进一步研究〖STBX〗CHK1〖STBZ〗在肿瘤治疗中的作用机制提供了实验基础。     

K562/AS2细胞株对三氧化二砷耐药机制的初步研究

目的：研究K562/AS2细胞株对三氧化二砷（ATO）耐药的机制。方法:采用MTT法检测细胞毒性。细胞表面P－糖蛋白（P-gp）、细胞内柔红霉素（DNR）浓度采用流式细胞术检测。DNA聚合酶、拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)、多药耐药基因1(〖STBX〗mdr1〖STBZ〗)、多药耐药相关蛋白1（〖STBX〗MRP1〖STBZ〗）以及肺耐药相关蛋白基因(lrp)表达水平的检测采用RT－PCR法。结果:K562和K562/AS2细胞表面P-gp任意荧光强度、K562/AS2细胞内DNR浓度均无显著差异（P>0.05）。K562/AS2细胞株〖STBX〗MRP1〖STBZ〗和Topo Ⅱ表达明显高于K562细胞（P<0.05），DNA 多聚酶，〖STBX〗mdr1〖STBZ〗和lrp表达与敏感细胞株K562细胞相同（P>0.05）。结论:ATO耐药细胞K562/AS2高表达〖STBX〗MRP1〖STBZ〗，并产生低倍数的多药耐药。K562/AS2细胞TopoⅡ基因表达增高，其意义有待进一步阐明。     

大豆异黄酮诱导裸鼠人胃癌移植瘤凋亡（英文）

目的：探讨大豆异黄酮诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的机制。方法： 建立人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤模型并测定移植瘤的生长曲线；25只BALB/C裸鼠接种胃癌原代细胞悬液生成移植瘤后，不同剂量的大豆异黄酮进行瘤旁注射，透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况，免疫组化法和RT-PCR法检测肿瘤组织的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况。结果： 大豆异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用，在剂量为0.5 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg时，其抑制率分别为10.6%、29.7%和39.1%；透射电镜发现大豆异黄酮导致移植瘤内大量细胞发生调亡；TUNEL染色法发现大豆异黄酮注射组瘤细胞的凋亡指数是随剂量递增（28.7%±1.1%、33.4%±1.4%和37.1%±1.0%）。免疫组织化学法发现大豆异黄酮注射组的Bcl-2蛋白阳性细胞率随剂量递减（11.8%±0.9%、5.7%±0.8%和4.0%±0.8%），而Bax蛋白阳性细胞率随剂量递增（20.0％±±1.2%、24.7％±0.9%和29.3%±1.6%）；RT-PCR法发现,大豆异黄酮注射组的〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗 mRNA条带强度随剂量的增大而递减，并明显低于对照组P<0.05）；而bax mRNA条带强度递增，并明显低于对照组（P<0.05），而2对照组bcl-2，bax之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论： 大豆异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用，通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌裸鼠移植瘤细胞发生凋亡，是其抗胃癌作用的机制之一。     

阿魏酸钠对SNP诱导的凋亡海马神经元bcl-2、bax基因表达的影响

目的：探讨阿魏酸钠(SF)对一氧化氮（NO）供体硝普钠(SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响。方法:采用SD大鼠海马神经元原代培养，经终浓度分别为10、20、40、80、120、160 μmol/L SF预处理后，用50 μmol/L SNP处理24 h，采用MTT法检测细胞存活率，Hoechst 33258荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法检测凋亡，Western blotting及RT-PCR检测bcl-2、bax基因表达。结果:不同剂量SF (10-160 μmol/L)预处理6 h可显著提高神经元的存活率，减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象；DNA凝胶电泳图谱未见典型的“梯状”改变；增加bcl-2 mRNA及蛋白的表达, 降低bax mRNA及蛋白的表达。结论:SF 抑制NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡，其机制可能与其增加Bcl-2蛋白表达，降低Bax蛋白表达，增高Bcl-2/Bax的比值有关。     

异丙肾性心肌梗死大鼠钙敏感受体的表达和凋亡通路的变化

目的：观察钙敏感受体（CaSR）在异丙肾性心肌梗死大鼠的表达和凋亡通路的变化。方法: 采用连续2 d大剂量异丙肾上腺素（200 mg/kg）皮下注射制备大鼠心肌梗死模型。Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组（control）;异丙肾上腺素1 d组(ISO/1d);异丙肾上腺素2 d组（ISO/2d）。采用RT-PCR和Western blotting分别观察CaSR、bax、〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗、caspase-3 mRNA和蛋白表达;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;光镜和电镜分别观察心肌形态学和超微结构变化;紫外分光法检测乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛(MDA)含量,电化学免疫发光法检测肌钙蛋白（cTnT）水平。结果: 与正常组比较,ISO/1d组：LDH 和CK活性、cTnT水平和MDA含量、细胞凋亡指数以及CaSR、Bax和caspase-3的表达均达高峰,同时SOD活性降低,Bcl-2表达减少,心肌细胞超微结构损伤严重;ISO/2d的心肌损伤指标较ISO/1d组有所减轻。结论: CaSR表达增多可能参与了异丙肾性大鼠心肌梗死的发生,其机制与氧化应激和细胞凋亡有关。     

白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响及可能机制。方法采用不同浓度白杨素(0,2.5,5,10,20,40 mg/L)作用于MG-63细胞后,MTT法和流式细胞仪分别检测白杨素对细胞增殖与凋亡的影响。蛋白免疫印迹检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin蛋白表达的影响。Real-time PCR方法检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA、Survivin mRNA表达水平的影响。结果白杨素抑制MG-63细胞增殖、促进MG-63细胞凋亡,并呈浓度依赖性。经20 mg/L白杨素处理后,MG-63细胞Bax与Caspase-3蛋白与mRNA表达水平显著升高,而Bcl-2与Survivin蛋白与mRNA表达水平显著降低。结论白杨素在体外抑制MG-63细胞增殖,促进MG-63细胞凋亡,与调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达相关。     

同型半胱氨酸诱导PC12细胞凋亡的研究

目的：研究同型半胱氨酸（Hcy）在生理浓度铜离子（10 μmol/L Cu²⁺）作用下能否诱导PC12细胞凋亡及对bcl-2、bax基因表达的影响。 方法: 将细胞随机分成对照组和处理组，采用MTT法检测细胞活力；倒置相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡；半定量RT-PCR分析bcl-2和bax mRNA的表达水平。 结果: 0.125-1.0 mmol/L Hcy在Cu²⁺的作用下可以导致PC12细胞凋亡，具有明显的剂量-效应关系；bcl-2 mRNA表达降低，bax mRNA表达升高，且效应与Hcy浓度相关。 结论: 高浓度Hcy在生理浓度Cu²⁺作用下可诱导PC12细胞凋亡，且凋亡作用与Hcy浓度相关。其机制可能是通过调节bcl-2和bax mRNA的比值起作用的。     

bcl—2／bax对不同乳腺癌细胞凋亡的调节作用

目的：了解bcl-2/bax在乳腺癌细胞的p53依赖性凋亡和p53非依赖性凋亡中的作用。方法：用原位杂交的方法检测化疗药物VM-26诱导入乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S凋亡前后bcl-2和bax的mRNA表达情况。结果：与MDA-MB-435S细胞相比,MCF-7细胞的bcl-2 mRNA水平较高。两株细胞均能在VM-26的作用下发生凋亡。药物诱导后,MCF-7细胞的bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达增加;MDA-MB-435S细胞bax mRNA表达增加,bcl-2、mRNA无明显变化。结论：wt p53可在转录水平调节bcl-2/bax的表达,从而介导凋亡作用;bax在p53非依赖性凋亡中也发挥一定作用;bcl-2的高表达可能与肿瘤耐药性有关。     

白藜芦醇诱导胃癌原代细胞凋亡(英文)

目的：探讨白藜芦醇诱导胃癌原代细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与Bcl-2和Bax之间的关系。 方法： 在体外实验中，采用MTT比色法测定白藜芦醇对胃癌原代细胞的生长抑制率；以透射电镜和TUNEL 染色法，定性、定量地研究白藜芦醇与胃癌原代细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。 结果： 白藜芦醇对胃癌原代细胞生长有明显抑制作用，随白藜芦醇浓度增加和培养时间的延长而增强；白藜芦醇诱导胃癌原代细胞出现典型的凋亡细胞形态；TUNEL 染色法可见，经白藜芦醇处理24 h、48 h、72 h、96 h后，胃癌原代细胞凋亡数明显随时间增加。免疫组化发现经白藜芦醇处理24 h、48 h、72 h、96 h后，胃癌原代细胞的Bcl-2蛋白阳性率减少，Bax蛋白阳性率增加。经白藜芦醇处理24、48、72、96 h后，RT-PCR检测发现胃癌原代细胞bcl-2和bax的mRNA表达阳性，并显示bcl-2 mRNA条带密度随时间的延长而递减，bax mRNA条带密度随时间的延长而增强。 结论： 白藜芦醇可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌原代细胞发生凋亡。     

四逆汤对大鼠局灶性脑缺血后bax、bcl-2表达的影响

目的：研究四逆汤对大鼠局部脑缺血后bax、bcl-2表达的影响。 方法： 采用大鼠大脑中动脉局部阻塞（MCAO）模型，观察四逆汤对脑缺血大鼠的神经功能、丙二醛（MDA）和神经酰胺含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及bax、bcl-2表达的影响。 结果： 四逆汤组脑含水量、MDA含量、神经酰胺含量、bax基因在转录和翻译水平的表达明显低于缺血模型组（P<0.05和P<0.01），神经功能评分、SOD活性、Bcl-2蛋白的表达高于缺血模型组（P<0.05和P<0.01）。 结论： 四逆汤对局部脑缺血大鼠具有显著的保护作用，其作用机制可能与四逆汤能对抗脑缺血引起的氧化损伤，减少神经酰胺的生成量，抑制bax mRNA的转录及其蛋白的表达、增加Bcl-2蛋白的表达有关。     

Matrine inhibited proliferation and increased apoptosis in human breast cancer MCF-7 cells via upregulation of Bax and downregulation of Bcl-2

Purpose: The aim of the present study was to investigate the effects of matrine on proliferation and apoptosis in human breast cancer MCF-7 cells and its relevant molecular mechanisms. Methods: Breast carcinoma cell line MCF-7 was cultured with series concentrations of Matrine in vitro. The proliferation and apoptosis of MCF-7 cells were investigated by 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, flow cytometry, and Mitochondrial membrane potential (MMP) measurements. The expression levels of Bax and Bcl-2 proteins were detected by Annexin V/propidium iodide coupled staining. The morphological changes of MCF-7 cell were examined. Results: The inhibition rates of MCF-7 cells were 6.01%-37.01%, 7.56%-53.92%, and 10.86%-70.23% for 24, 48, and 72 hours after Matrine treatment, respectively. The proliferation of MCF-7 cells was significantly inhibited by Matrine administration, with a time and dose dependent manner. The rates apoptotic cells was between 4.17±0.25% and 19.63±0.17% in 0.25-2.0 mg/ml Matrine groups, which had significant increased compare with the control groups (1.10±0.08%, P<0.05). Meanwhile, increased Bax expression, but decreased Bcl-2 expression was observed in MCF-7 cell line. MMP were significantly decreased by Matrine treatment. Conclusions: Matrine significantly inhibited the growth and induced apoptosis in breast carcinoma MCF-7 cells, which is related to Bax, Bcl-2 signaling and MMP.     

Bcl-2、Bax在NHE-1抑制导致的大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨Bcl-2、Bax蛋白表达在Na⁺/H⁺交换器-1(NHE-1)抑制而诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)凋亡中的作用。方法: 荧光指示剂(Fura-2/AM)测定法检测转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMC内Ca²⁺(i)变化;RT-PCR方法检测细胞内bcl-2和baxmRNA表达变化, 免疫组化法检测细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达变化。 结果:转染NHE-1特异性核酶基因后, 大鼠PASMC内i显著升高, bcl-2mRNA及蛋白表达显著降低, baxmRNA和蛋白表达显著增加。结论: NHE-1抑制诱导的PASMC凋亡与i增加、bcl-2表达降低及bax表达增加有关。     

Bax/bcl-2: cellular modulator of apoptosis in feline skin and basal cell tumours

Bcl-2 and bax are two members of the BCL-2 gene family that play a prominent role in the regulation of apoptosis. Bax and bcl-2 expression were examined immunohistochemically in normal (healthy) feline skin and in 24 benign feline cutaneous basal cell tumours. The tumours were also examined for cellular proliferation by measurement of reactivity for the proliferation marker Ki-67, and for apoptosis by in-situ labelling for fragmented DNA. Bcl-2 was detected in normal basal epithelium and in 23 of 24 basal cell tumours. Bax was detected in both basal and suprabasal epithelium, but in only seven of 24 tumours. For tumours that expressed both bax and bcl-2, the bax:bcl-2 ratio was low. Neither bax nor bcl-2 expression was detected in 14 feline cutaneous squamous cell carcinomas. Basal cell tumours showed modest cellular proliferation (median, 17.5% Ki-67- reactive cells), but few (less than 1%) apoptotic cells. The slow, indolent growth of feline cutaneous basal cells in these benign skin tumours may be a response, at least in part, to opposing regulatory expressions of bcl-2 and bax. Copyright Harcourt Publishers Ltd.     

反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的抑制作用及诱导细胞凋亡的研究

目的:观察反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸(AS-PS-ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H446mRNA、蛋白以及增殖、活力和凋亡的影响。方法: 合成bcl-2AS-PS-ODN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H446, 半定量RT-PCR检测bcl-2mRNA表达;免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Bcl-2蛋白表达;通过克隆形成率、细胞计数、流式细胞仪DNA倍体分析、TUNEL等指标观察bcl-2 AS-PS-ODN对细胞增殖、活力和凋亡的影响。结果:①bcl-2 AS-PS-ODN能特异性地降低NCI-H446细胞bcl-2mRNA和Bcl-2蛋白的表达。1μmol/LAS-PS-ODN作用24h后bcl-2mRNA表达量下降69.5%, 48h后Bcl-2蛋白下降62.7%。②bcl-2 AS-PS-ODN能够抑制细胞增殖和活力, 诱导细胞凋亡, 1μmol/LAS-PS-ODN作用24h后, 细胞凋亡率约为22.3%-32.7%。结论:bcl-2 AS-PS-ODN能够特异性降低bcl-2mRNA、蛋白表达, 抑制NCI-H446细胞的增殖和活力, 并诱导细胞凋亡。     

二甲双胍联合紫杉醇对人乳腺癌细胞凋亡及AMPK信号通路的影响

目的:探索二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(2、5、10、20、40和80 mmol/L)二甲双胍作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞的活力。采用2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合处理细胞,并加入一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)信号转导通路抑制剂compound C。实验分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、联合组和联合+compound C组;流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR和Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达量,Western blot检测AMPK和P21蛋白的表达量。结果:不同浓度二甲双胍(2、5、10、20、40和80 mmol/L)显著抑制乳腺癌细胞的活力(P 0. 05),且具有一定浓度依赖性。与对照组相比,2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合均可显著抑制细胞活力并诱导其凋亡(P 0. 05),显著下调Bcl-2水平(P 0. 05),上调Bax和caspase-3水平(P 0. 05),促进AMPK和P21蛋白表达。联合使用的效果优于单独使用。加入AMPK抑制剂可削弱此作用。结论:二甲双胍联合紫杉醇可抑制乳腺癌MCF-7细胞活力,诱导其凋亡。此作用与激活AMPK信号转导通路并调节细胞凋亡信号通路有关。     

镉影响大鼠胎盘发育及Bcl-2和Bax的表达

目的通过观察镉暴露后胎盘组织形态结构和凋亡相关蛋白表达量的改变，探讨镉对胎盘组织中细胞增殖与凋亡的影响。方法将孕6天（E6）的20只孕鼠随机分成染镉组和对照组，染镉组一次性腹腔注射氯化镉，剂量为2mgCd／kg体重。两组的孕鼠分别于E14和E18断椎处死，每只孕鼠随机取出6个胎盘，制备石蜡切片。行HE染色观察染镉后胎盘的形态改变，免疫组织化学技术显示镉对Bcl-2和Bax表达的影响。结果染镉组胎盘海绵带滋养层细胞、巨细胞和空泡化细胞增多，且迷路带及海绵带滋养细胞呈退行性改变。染镉组胎盘组织细胞中的Bcl-2蛋白表达量比相应的对照组表达量明显降低（E14：t=7．067，P〈0．01；E18：t=6．988，P〈0．01）；Bax蛋白表达量比相应的对照组表达量明显增多（E14：t=4．008，P〈0．01；E18：t=4．732，P〈0．01）；Bcl-2／Bax比值与相应对照组之间的差异有统计学意义（E14：t=9．517，P〈0．05；E18：t=23．380，P〈0．01）。结论镉可以通过影响Bcl-2和Bax的表达，改变Bcl-2／Bax比值，使胎盘组织细胞的增殖和凋亡平衡紊乱，导致胎盘发育异常。     

环氧合酶抑制剂NS-398增强放射诱导的肝癌细胞凋亡

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398对放射诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡的影响及可能作用机制。 方法:应用MTT 法检测NS-398对细胞的抑制率;透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bc1-2、Bax蛋白表达;比色法分析caspase-3酶活性变化。 结果:NS-398对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间与剂量依赖性;电镜下处理组细胞呈现典型的凋亡形态学变化,NS-398显著增加放射诱导的细胞凋亡,上调bax mRNA、Bax蛋白及caspase-3mRNA 表达,并增强caspase-3酶活性,而Bcl-2 表达无明显变化（P>0.05）。 结论:NS-398能增加放射诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、 caspase-3表达,上升Bax／Bcl-2比例,激活线粒体凋亡通路,活化caspase-3,最终诱导细胞凋亡相关。