从母系遗传研究肾阴虚型慢性再生障碍性贫血的发病机制

背景:多项研究表明恶性血液病可以出现线粒体的突变,但尚未有关于慢性再生障碍性贫血中线粒体变化的研究。目的:研究肾阴虚和肾阳虚型慢性再生障碍性贫血患者线粒体突变情况,探讨母系遗传的本质——线粒体与肾阴虚型慢性再障发生、发展的关系,以期进一步研究慢性再障的发病机制。方法:收集10例诊断明确的肾阴虚型5例肾阳虚型慢性再生障碍性贫血患者骨髓和口腔黏膜上皮,提取DNA,进行线粒体DNA的全测序,比较线粒体基因。结果与结论:肾阴虚型慢性再生障碍性贫血患者线粒体全测序表明许多患者的突变位点发生在与线粒体氧化呼吸链密切相关的区域,涵盖了还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶1~2、4~6,细胞色素B等多个线粒体DNA的编码基因。而肾阳虚型慢性再生障碍性贫血患者线粒体突变不明显。提示线粒体基因突变引起的呼吸链酶复合体表达水平的改变,造成细胞能量代谢障碍,可能在造血干细胞衰竭的发生发展中起到关键作用。而这一变化是与肾阴虚——母系遗传息息相关的。     

糖尿病伴耳聋患者四例临床及线粒体基因分析

目的对4例2型糖尿病伴耳聋患者行线粒体基因测序,明确线粒体基因与临床表型之间的关系。方法对山东省内分泌与代谢病医院2014至2015年期间收治的4例有母系遗传糖尿病家族史伴耳聋的2型糖尿病患者进行研究,用聚合酶链反应对线粒体3069~3842片段进行直接测序,有突变或有意义者行线粒体全基因(除D环区外)测序,以明确是否有线粒体基因突变。结果在1例患者中发现有T3535C同义突变,由稀有密码子突变为常用密码子。对此患者进一步行线粒体全基因测序(除D环区外),发现G9053A、T10609C、C10920T、G13759A、G13928C、A15326G共6个错义突变。结论本研究发现了6个线粒体错义突变,其中C10920T突变与患者母系遗传糖尿病伴耳聋临床表型相关。     

线粒体tRNALeu(UUR)基因A3243G突变糖尿病家系的基因诊断

目的确认一个由线粒体tRNA^Leu（UUR）基因A3243G点突变引起的母系遗传糖尿病家系，并分析其临床特征。方法采用PCR产物直接测序法对53例无血缘关系的有家族史的2型糖尿病（T2DM）患者线粒体DNA（mitochondria DNA，mtDNA）片段（nt3153-nt3551）进行点突变筛选，然后对筛选到的A3243G异质性突变样本作DHPLC分析确认。详细调查此突变糖尿病家系发病特征，并做线粒体基因组全序列分析。结果在53例样本中检测到1例A3243G突变，对其家系调查发现7例母系成员中5例患病（1男4女），患者多数伴听力损害，体重指数减低，口服降糖药效果不佳最终需用胰岛素治疗，呈母系遗传，发病年龄不等，平均32．75岁。线粒体全基因组测序表明患者存在包括A3243G突变的共33个变异位点，但除A3243G突变外其余都不是进化上高度保守的位点，因此A3243G突变是与这个糖尿病家系发病有关的惟一的mtDNA突变。结论线粒体tRNA^Leu（UUR）基因A3243G突变是这个三代母系遗传糖尿病家系发病的原因，其临床特点是发病年龄轻、不胖、母系遗传、耳聋发生率和使用胰岛素比率高等。     

高血压病线粒体DNA 8414位点C>T突变一例家系报告

目的探讨一例母系家族遗传性高血压家系发病特点,为探讨高血压病的遗传机制与防治对策提供一定的理论依据。方法以2015年6月在江苏省苏北人民医院心血管内科住院的1例高血压病患者为先证者,实地调查得到高血压病遗传家系,抽取家系成员外周静脉血,对序列3777~4679位置的线粒体DNA(mt DNA)进行直接基因测序,然后进行线粒体基因分析。结果该家系母系成员高血压病发病率高,发病年龄显著提前,所有母系成员的mt DNA发生了8414位C>T突变。结论高血压家族遗传与线粒体基因突变相关,具有家族聚集倾向。     

再生障碍性贫血IFN-γ基因＋874位点的单核苷酸多态性

本研究采用扩增不应突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）-PCR对51名健康者和54例再生障性贫血患者IFN-γ基因＋874位点单核苷酸多态性进行检测，旨在探讨再生障碍性贫血患者的遗传易感因素。结果表明，再生障碍性贫血患者IFN-γ＋874位点TT基因型及T等位基因分布频率分别为42．6％与65．7％，显著高于健康对照组中的17．6％与39．2％（Χ^2=13．780，P=0．01；Χ^2=14．811，P〈0．001）。结论：IFN-γ＋874A／T基因多态性可能与再生障碍性贫血患者的遗传易感性相关。IFN-γ4-874位点单核苷酸多态性与再生障碍性贫血的病情严重程度没有相关性。     

IL-2-330T/G基因多态性与再生障碍性贫血遗传易感性和免疫抑制治疗疗效的关系

目的:探讨IL-2-330T/G基因多态性与再生障碍性贫血遗传易感性及免疫抑制治疗疗效的关系。方法:收集四川大学华西医院血液科确诊的103例汉族再生障碍性贫血患者的静脉血标本,其中有46例患者接受免疫抑制治疗且观察期超过4个月,100例汉族健康成人作为对照组。采用PCR、琼脂糖凝胶电泳和DNA测序法检测再生障碍性贫血患者和健康对照者IL-2-330T/G单核苷酸多态性。结果:再生障碍性贫血组中IL-2-330 GG基因型频率和G等位基因的分布频率分别为12.6%和27.7%,与健康对照组的12.0%和33.5%均无明显差异(P0.05)。46例再生障碍性贫血患者中,29例免疫抑制治疗有效,其中携带IL-2-330T/G位点GG基因型和G等位基因者的有效率分别为31.0%和64.8%,与携带TT基因型和T等位基因者的48.3%和61.8%相比较,均无明显差异(P0.05)。结论:IL-2-330T/G基因多态性与再生障碍性贫血遗传易感性和免疫抑制治疗疗效可能无关。     

细胞粘附分子CD11a、CD49d在再生障碍性贫血中的检测及应用

目的 探讨细胞粘附分子(CAMs)CD11a、CD49d在再生障碍性贫血(AA)患者的表达特点及临床应用.方法 采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法(APAAP法)测定26例慢性再生障碍性贫血(CAA)、6例急性再牛障碍性贫血(AAA)患者和20例非血液病的外科手术患者骨髓及外周血单个核细胞(MNC)粘附分子CD11a、CD49d表达的阳性细胞百分率.结果慢性再生障碍性贫血患者骨髓及外周血MNC的CD11a及骨髓MNC的CD49d表达的阳性细胞百分率较对照组降低,外周血MNC的CD49d表达与对照组无显著差异.急性再生障碍性贫血患者骨髓及外周血MNC的CD11a及骨髓、外周血MNC的CD49d表达与对照组无显著差异.结论 细胞粘附分子表达在急、慢性再生障碍性贫血有所不同.细胞粘附分子表达降低在慢性再生障碍性贫血的发病中发挥了一定作用,纠正再障患者粘附分子的异常表达,可以改善其骨髓造血动能.     

小儿慢性再生障碍性贫血红细胞免疫粘附功能检测及其意义

小儿慢性再生障碍性贫血红细胞免疫粘附功能检测及其意义郭瑞官，徐琳玲，陈晓东，李健我们对２０例慢性再生障碍性贫血（再障）患儿进行红细胞免疫粘附功能的检测，以观察其在再障发病中的变化和意义。病例和方法１病例：１．１再障组：２０例患者中，男性１５例，女性５...     

慢性再生障碍性贫血患者肿瘤坏死因子的研究

慢性再生障碍性贫血患者肿瘤坏死因子的研究赵青李树浓梁晓燕国内外一些学者都是从总体上对再生障碍性贫血（再障）患者的血浆肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）水平及其单个核细胞ＴＮＦ的诱生水平的检测对再障与ＴＮＦ的关系进行研究，且各家报道的结果也不一致。为进一步探讨再障...     

再生障碍性贫血患者血清表皮转化生长因子β含量表达

再生障碍性贫血患者血清表皮转化生长因子β含量表达徐文罗萍夏大文徐静近年研究表明，再生障碍性贫血（再障）发病与免疫缺陷有关。因此，我们从细胞转化生长因子的含量水平探讨再障的发病因素，旨在对再障的病因学及治疗研究提供理论依据。病例和方法１病例和标本处理３...     

冠心病不同中医证型与血浆纤维蛋白原的相关性研究

目的:检测冠心病中医各证型患者血浆纤维蛋白原(FIB)浓度,为冠心病的中医辨证分型及辨证论治提供参考。方法:179例冠心病患者(冠心病组)按中医辨证分为心血瘀阻29例、痰浊内阻27例、阴寒凝滞33例、心肾阴虚30例、气阴两虚33例及阳气虚衰27例共6型,与排除冠心病的体检人员(对照组)30例均进行血浆FIB浓度测定。结果:与对照组比较,冠心病组患者FIB浓度均值明显升高(P0.05);冠心病组中各证型间比较,阳气虚衰型FIB浓度阴寒凝滞型痰浊内阻型气阴两虚型心血瘀阻型心肾阴虚型。阳气虚衰型急性冠脉综合征,其FIB阳性率明显高于其他各证型(P0.05)。结论:FIB浓度的变化可能与冠心病严重程度有一定关系,在不同证型中阳气虚衰型FIB浓度增高其临床指导意义更大。     

Exercise intolerance resulting from a muscle-restricted mutation in the mitochondrial tRNA(Leu (CUN)) gene.

BACKGROUND: Some patients presenting with isolated lifelong exercise intolerance and ragged-red fibres, harbour skeletal-muscle restricted mutations in their mitochondrial DNA. AIM: To identify the molecular defect in a patient presenting with lifelong exercise intolerance, ragged-red fibres and deficiencies of complexes III and IV in skeletal muscle. METHODS: The muscle biopsy was studied for activities of the respiratory chain, histochemical stains, and sequencing the tRNA genes of mitochondrial DNA. RESULTS: The patient had a heteroplasmic mutation in the tRNA(Leu (CUN)) gene of mitochondrial DNA (G12334A). Clinical and morphological data as well as restriction fragment length polymorphism (RFLP) and single-fibre polymerase chain reaction (PCR) analyses strongly indicate that this molecular defect is the primary cause of the myopathy. CONCLUSION: Mutations in any mitochondrial gene should be considered in the differential diagnosis of patients with lifelong exercise intolerance, even when the neurological examination is normal.     

河南地区遗传性脊髓小脑共济失调3型患者临床特征及分子生物学的研究

目的 探讨河南地区汉族人群中遗传性脊髓小脑共济失调3型(spinocerebellar ataxia type 3,SCA3)患者临床表现与分子生物学的特征.方法 应用聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳和基因测序等技术,检测临床诊断脊髓小脑型共济失调(spinocerebellar ataxia type,SCA)的9个家系55例患者SCA3基因内CAG三核苷酸重复序列,并对异常等位基因片段进行DNA测序.结果 检出2个家系(10例患者)为SCA3,阳性率17.1%,测序证实其异常等位基因的CAG重复数目在70～79次之间,平均重复数(74.2±3.8)次.测序发现SCA3基因在重复起始序列的第3、4、6拷贝位置出现变异,CAG分别由CAA、AAG和CAA替代.SCA3基因中在重复起始序列的第3、4、6拷贝位置出现变异,CAG分别由CAA、AAG和CAA替代.结论 CAG重复数检测是确定患者基因突变的重要证据;CAG重复序列的异常扩增是SCA3患者基因突变的重要原因.     

Analysis of potential cancer biomarkers in mitochondrial DNA

Understanding mitochondrial biology is a fundamental research goal in human genetics and medicine. The use of mitochondria to serve as a biomarker is rapidly expanding in disciplines ranging from cancer, rare metabolic diseases, aging, the tracing of human migration patterns in antiquity, population characterization using maternal markers, and human identification. Mitochondrial DNA (mtDNA) mutations occur frequently in cancer, and there is an important need for validating mtDNA mutations as cancer biomarkers for the detection of early-stage disease. Although a few studies have suggested tissue-specific mtDNA mutations, there is no single mutational hotspot associated with the wide spectrum of cancer patients; hence, sequencing the entire mitochondrial genome and further characterization of the multiple deletions associated with tumors is required to detect the mutation load on an individual basis. Microarray-based technology provides a reliable and rapid method to detect all mutations of the entire mitochondrial genome. In addition to microarray-based sequencing, real-time PCR is an important method for deletion analysis. Mutations throughout the mitochondrial genome are recurrent events in primary tumor tissues and in corresponding non-invasively collected body fluids. Thus, mtDNA mutation analysis may provide a molecular tool for the early detection and prognosis of cancer. Recent findings have verified that relatively simple diagnostic tests for detecting mtDNA mutations, involving mitochondrial microarray chips and/or real-time PCR bioassays, have exciting predictive potential for cancer detection and prognosis.     

应用多聚酶链反应和双链DNA循环测序对FIX基因点突变的研究

应用多聚酶链反应扩增因子ＩＸ（ＦＩＸ）基因外显子８的４８１ｂｐＤＮＡ片段，并利用双链ＤＮＡ循环测序，对两例血友病乙ＦＩＸ基因缺陷进行了研究。发现这两例都发生在３１１１９位的碱基替换，Ｇ（ＣＧＡ）→Ａ（ＣＡＡ）。该突变为ＦＩＸ基因ＣＧ双核苷酸突变热点，改变了正常ＦＩＸ的结构和凝血功能，因而导致血友病乙。重复点突变的发现，对血友病乙分子缺陷的发病机制研究十分重要。     

从肾论治老年性失眠

失眠是以经常不能获得正常睡眠为特征的一类病症。其在各个年龄层均存在,但以老年人居多。失眠主要病位在于心,与肝脾肾有着密切的关系,但根据老年人的生理特点,肾虚为老年人失眠的主要病机,包括肾精气阴阳的亏虚。临床常见心肾不交、肝肾阴虚、肾阳虚弱等型,治法上可采用滋阴补肾、交通心肾、温肾安神等法,为临床诊疗提供一定的思路与方法。     

NDUFS6 mutations are a novel cause of lethal neonatal mitochondrial complex I deficiency

complex I deficiency, the most common respiratory chain defect, is genetically heterogeneous: mutations in 8 nuclear and 7 mitochondrial DNA genes encoding complex I subunits have been described. However, these genes account for disease in only a minority of complex I-deficient patients. We investigated whether there may be an unknown common gene by performing functional complementation analysis of cell lines from 10 unrelated patients. Two of the patients were found to have mitochondrial DNA mutations. The other 8 represented 7 different (nuclear) complementation groups, all but 1 of which showed abnormalities of complex I assembly. It is thus unlikely that any one unknown gene accounts for a large proportion of complex I cases. The 2 patients sharing a nuclear complementation group had a similar abnormal complex I assembly profile and were studied further by homozygosity mapping, chromosome transfers, and microarray expression analysis. NDUFS6, a complex I subunit gene not previously associated with complex I deficiency, was grossly underexpressed in the 2 patient cell lines. Both patients had homozygous mutations in this gene, one causing a splicing abnormality and the other a large deletion. This integrated approach to gene identification offers promise for identifying other unknown causes of respiratory chain disorders.     

8例遗传性凝血因子VII缺陷症患者基因诊断与临床特征分析

目的：探讨8例遗传性凝血因子VII（FVII）缺陷症患者的基因突变类型与临床特征。方法：采用一期法检测患者的FⅦ活性（FVII：C）,用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测其FⅦ抗原（FVII：Ag）水平;并抽提先证者及其家系成员的外周血基因组DNA-PCR扩增FVII基因所有外显子及其侧翼序列．采用DNA直接测序进行基因分析。结果：在8例遗传性FⅦ缺陷症患者中发现9种类型的基因突变,包括3种剪切位点突变和6种错义突变,其中p．Glu76（16）G1n和p．Gly343（283）Asp这2种突变为国际首次报道。1例患者为p．Tyr128（68）Cys纯合突变,其FVII：C〈1％,FⅦ：Ag为l％,临床表型为重度出血;另1例为p．Cys389029）G1y纯合突变,其FⅦ：C为2．7％,FVII：Ag为50％,为交叉反应物质阳性（CRM＋）的FⅦ缺陷症,其临床无出血表现。4例患者携带FVII基因双杂合突变,分别为IVS5—1G〉A和p．Arg350f290）Cys、IVS5．1G〉A和p．Cys389（329）Gly、IVSla＋5G〉A和p．Glu76（16）GIn、IVSla＋5G〉A和p．Gly343（283）Asp突变,其相应的FⅦ：C分别为4．9％、1．8％、2．2％和1．5％,患者临床出血症状较轻或无临床出血表现。2例患者携带单杂合突变,分别为p．Arg337（277）Cy8和IVS5．2A〉G,其FⅦ：C分别为4．5％和1．2％,前者无临床出血表现,后者有反复鼻出血。结论：在8例遗传性FⅦ缺陷症患者中发现了9种类型的FⅦ基因突变,其中2种为新发现突变。IVS5．1G〉A、IVSla＋5G〉A、p．Cys389（329）Gly突变在8例患者中较常见,而FⅦ基因突变及FVII：C情况与患者的临床表型间无相关性。     

云南玉溪葡萄糖-6-磷酸脱氧酶缺乏症基因突变研究

目的：调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率．分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征，探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法。方法：NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人，NBT定量酶活性，PCR-ARMS法检测中国人中最常见的三种突变，作PCR-SSCP分析，最后用DNA测序分析和证实。结果：（1）450例当地居民筛查发现G6PD缺乏症患者48例（男31例，女17例）。（2）PCR-ARMS发现G1388A 21例（43．75％）、G1376T4例（8．33％），未见A93G。（3）PCR-SSCP发现27例异常，PCR—DNA测序结果与PCR—ARMS结果吻合。2份未知突变样本测序分析证实为C1311T。（4）测序发现复合型突变：1例G1376T／IVS-11T93C，1例G1376T／C1311T和1例G1388A／IVS-11＇I＇93C。结论：（1）云南玉溪G6PD缺乏症发病率为10．67％，男性13．78％．女性7．56％；男、女性别比例1．82。（2）云南玉溪G6PD缺乏症基因突变以G1388A突变最常见，其次是G1376T突变，两种突变共占52．08％，未发现A95G突变。（3）研究云南玉溪G6PD缺乏症基因突变型对指导优生、优育，预防该病的遗传传播．提高我省各地州人口素质具有一定的社会意义。对开展G6PD缺乏症的基因诊断具有一定的应用价值和指导意义