化痰散结方含药血清诱导人肺癌细胞凋亡的机理研究

为探讨中药化痰散结方诱导人肺癌细胞 (SPC A1)凋亡的作用及其对正常人胚肺细胞的毒性作用 ,通过血清药理学方法 ,选择不同浓度的含药兔血清与人肺癌细胞共同孵育处理 ,并以正常人胚肺细胞 (HEL)作对照。结果 :人肺癌细胞经含中药兔血清作用 ,由贴壁生长而逐渐脱落 ,外形变圆 ,体积缩小 ,折光性增强 ;荧光镜下可见细胞核破碎 ,裂解为大小不等的凋亡小体 ;流式细胞仪检测显现典型的细胞凋亡峰 ,以 5%含药血清作用 4 8h凋亡峰最为明显 ,凋亡率为 4 2 .8% ;出现S期细胞阻滞 ;而该含药血清对人胚肺细胞无诱导凋亡作用。化痰散结方通过血清药理学方法诱导人肺癌细胞的凋亡 ,可能是其抗肿瘤的分子学机制之一。     

鹤蟾片含药血清对人肺腺癌细胞株增殖和凋亡的影响

【目的】探讨中药复方鹤蟾片含药血清对人肺腺癌细胞株(LAC)增殖和凋亡的影响。【方法】制备中药复方鹤蟾片含药血清,按常规进行人肺腺癌LAC细胞培养。加入体积分数为30%浓度的含药血清培养液5 mL(含药血清组),另设相同浓度的无含药血清组(空白血清组)和RPMI-1640培养液组(空白对照组)。于倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,荧光显微镜下观察细胞核凋亡的形态学改变,并分别采用DNA含量分析法和TUNEL法进行细胞凋亡的流式细胞仪检测。【结果】LAC细胞经鹤蟾片含药血清处理后发生了凋亡特征改变;流式细胞仪DNA含量分析法分析含药血清组凋亡率为5.6%,空白血清组和空白对照组分别为0.9%和0.1%;细胞周期分析结果显示,经体积分数为30%含药血清作用72 h后,LAC细胞S期和G2-M期细胞数减少,低于空白血清组和空白对照组,含药血清组细胞增殖指数低于其他2组;进一步采用TUNEL法检测细胞凋亡的发生情况,发现含药血清作用72 h后,细胞凋亡发生率为12.3%,空白血清组为5.7%,空白对照组为1.2%。【结论】鹤蟾片含药血清对LAC肿瘤细胞增殖具有一定的抑制作用,其机理可能与抑制LAC细胞DNA的合成和分裂,将细胞周期阻滞于G0-G1期,促进LAC肿瘤细胞的凋亡有关。     

软坚散结胶囊含药血清调控VEGF-ERK信号通路诱导胃癌细胞凋亡机制研究

目的研究VEGF-ERK信号通路在软坚散结胶囊含药血清诱导胃癌SGC7901细胞凋亡过程中的变化,探讨软坚散结胶囊含药血清调控胃癌细胞凋亡的机制。方法制备软坚散结胶囊含药血清;激光共聚焦显微镜观察软坚散结胶囊含药血清处理后胃癌SGC7901细胞形态变化;流式细胞仪检测软坚散结胶囊含药血清处理后胃癌SGC7901细胞凋亡率;Western Blot检测软坚散结胶囊含药血清对人胃癌SGC7901细胞ERK、P-ERK及VEGF蛋白表达影响。结果软坚散结胶囊含药血清处理细胞后,激光共聚焦显微镜下见:阴性对照组以正常活性细胞为主,Annexin V和PI均为低染,细胞膜完整,细胞形态正常;低剂量组可见Annexin V高染、PI低染,细胞膜呈绿色荧光,细胞核着色浅或不着色;中剂量组可见Annexin V高染、PI低染,细胞膜呈绿色荧光,细胞核呈桔红色荧光;高剂量组PI高染,细胞核呈红色荧光,出现部分细胞的细胞膜破裂、细胞核呈大小不等形态不规则的碎片状,为典型的细胞凋亡形态特征。流式细胞仪检测经阴性对照组及低中高剂量组含药血清处理的SGC7901细胞后,各组细胞凋亡率分别为:(6.053±0.223)%、(9.117±1.583)%、(23.663±3.428)%、(37.707±1.328)%,细胞凋亡率随软坚散结胶囊含药血清剂量的增加而升高。Western Blot检测发现SGC7901细胞中VEGF蛋白水平随含药血清剂量的增加而降低(P0.05);ERK蛋白表达无明显变化(P0.05),P-ERK(ERK磷酸化)蛋白水平随含药血清剂量增加而降低(P0.05)。结论软坚散结胶囊含药血清能诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡;其作用机制可能是通过抑制VEGF蛋白表达,调控ERK信号通路,抑制ERK磷酸化(p-ERK)表达进而促进胃癌细胞凋亡。     

中药复方更年春含药血清及其主要单体对β淀粉样蛋白所致细胞损伤的保护作用

目的：观察中药复方更年春含药血清及其主要单体成分对β淀粉样蛋白（amyloid β—protein,Aβ）所致肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞损伤的保护作用。方法：采用Aβ25-35作用PC12细胞构建阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）细胞模型,相差显微镜观察细胞形态改变。运用中药血清药理学方法制备大鼠更年春含药血清,以四甲基偶氮唑盐法观察更年春含药血清及其主要单体芍药苷、黄连素、知母皂苷AⅢ、淫羊藿苷对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗Aβ损伤的作用,采用流式细胞仪观察更年春复方含药血清及复方主要单体对Aβ诱导的PC12细胞凋亡的影响。结果：PC12细胞在Aβ25-35作用后,有活力细胞数目减少,细胞间连接较松,胞浆较暗淡,细胞碎片较多,贴壁细胞欠透明,部分发生皱缩,胞浆中有较多颗粒。Aβ25-35剂量、时间依赖性地抑制PC12细胞的活力。更年春含药血清可以增强PC12细胞活力,不同浓度更年春含药血清培养细胞24、48、72h后,其增强PC12细胞活力均在20％浓度作用最强。更年春复方含药血清及复方主要单体之一的黄连素及主要单体混合液（包括芍药苷、黄连素、知母皂苷A-Ⅲ、淫羊藿苷）均有拮抗Aβ对PC12细胞损伤的作用,且均能抑制Aβ诱导的PC12细胞早期凋亡,其中更年春含药血清作用最强,中药单体混合液作用其次,而单体黄连素作用最弱。结论：更年春对AD细胞模型有保护作用,其含药血清作用强于主要中药单体及主要单体的混合液。     

中药肉苁蓉含药血清对PC12细胞凋亡的影响

目的:观察中药肉苁蓉含药血清对PC12细胞凋亡的影响. 方法:采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP )建立PC12细胞凋亡模型,应用血清药理学方法,结合光镜荧光染色核形分析、透射电镜、流式细胞仪等检测,研究中药兔血清对PC12,细胞凋亡的保护作用. 结果:含1/2和2倍等效剂量组中药兔血清(ig剂量为肉苁蓉生药1.6, 3.2和6.4 g/kg)处理的PC12细胞经MPP 作用后,凋亡率分别为16.0%, 10.2%和2.8%,与空白组(18.6%)相比差异显著(P<0.05). 结论:肉苁蓉具有拮抗MPP 导致的细胞凋亡作用.     

补肾健脾方含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和细胞凋亡的影响

目的：探讨中药补肾健脾方含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法：制备补肾健脾方含药血清,分为高、中、低浓度组;另设复方斑蝥组和甲状腺素组作为阳性对照组,并以空白细胞组作为空白对照组。培养人肝癌细胞株SMMC-7721进行体外实验,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测各组培养24、48、72 h时细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：各药物组含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用与浓度呈负相关、与作用时间呈正相关,在5%浓度、48 h作用下达到抑制率的高峰。中药干预组细胞凋亡率呈现浓度依赖性,高浓度组显著高于低浓度组（P〈0.05）;复方斑蝥组的细胞凋亡率略低于中药高浓度组（P〉0.05）,甲状腺素片组略高于中药低浓度组（P〉0.05）。结论：补肾健脾方含药血清可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的增殖,具有诱导人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡的趋势。     

度他雄胺和“扶正抑瘤”中药复方对人前列腺癌PC-3细胞转移抑制效应的对照研究

目的:通过失巢凋亡抑制,对照研究新型5α还原酶抑制剂—度他雄胺和由人参、姜黄、肿节风组成的"扶正抑瘤"中药复方调控人前列腺癌PC-3细胞转移的效应。方法:采用人前列腺癌PC-3细胞体外培养的方法;MTT法检测PC-3细胞对度他雄胺和中药复方含药血清的敏感度,并确定两者的浓度梯度;软琼脂集落形成实验法观察两者对PC-3细胞失巢条件下增殖的影响;以Poly-HEMA包被培养细胞悬浮生长和琼脂糖电泳实验观察两者对PC-3细胞失巢凋亡的诱导作用;并采用流式细胞仪PI单染和AV-PI双染定量检测各组细胞凋亡率。结果:MTT比色法确定度他雄胺的浓度梯度为15%(低剂量),30%(中剂量)和45%(高剂量),中药复方为30%(中剂量);软琼脂集落实验表明度他雄胺45%含药血清组和中药复方含药血清组对细胞集落形成数量具有抑制作用(P0.05),2组间比较无差异(P0.05);琼脂糖电泳显示度他雄胺45%含药血清组和中药复方含药血清组出现较明显凋亡DNA-Ladder条带;流式细胞检测PI单染显示,度他雄胺45%含药血清组和中药复方含药血清组可提高PC-3细胞失巢凋亡率(P0.01),AV-PI双染显示度他雄胺各浓度组和中药复方含药血清组仅具有提高细胞早期失巢凋亡率的趋势(P0.05)。结论:度他雄胺可抑制人前列腺癌PC-3细胞在失巢条件下增殖,并呈现一定的浓度依赖性,中药复方也可抑制人前列腺癌PC-3细胞在失巢条件下增殖,两者效应相当,两者均对PC-3细胞失巢凋亡具有相似诱导作用,但对细胞早期凋亡诱导作用均有限。     

莪术不同品种含药血清对人胃癌细胞BGC823增殖、凋亡及核质比的影响

目的 探讨莪术3个不同品种蓬莪术、广莪术和温莪术含药血清对人胃癌细胞BGC823增殖、凋亡及核质比的影响,为临床治疗胃癌及中药抗肿瘤复方中莪术药材的品种选择提供实验依据.方法 体外培养人胃癌细胞BGC823,加入高、中、低剂量莪术不同品种含药血清,倒置相差显微镜下观察各组细胞形态.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测胃癌细胞BGC823增殖抑制状况,流式细胞仪检测胃癌细胞BGC823凋亡,应用Image.pro.pius.5软件分析了各药物含药血清对胃癌细胞BGC823核质比的作用.结果 与阴性对照组比较,温莪术大小剂量、广莪术大中剂量及蓬莪术中剂量含药血清在加药后48 h都能抑制胃癌BGC823细胞增殖(P＜0.05),抑制率以温莪术大剂量最高(P＜0.01).温莪术对BGC823的凋亡抑制作用较高,与阴性对照组相比有显著性差异(P＜0.05);温莪术大剂量含药血清组对胃癌BGC823核质比的作用较大,细胞出现核固缩,核质比较阴性对照组明显变小.结论 蓬莪术、广莪术和温莪术含药血清均能明显抑制胃癌BGC823细胞增殖及凋亡,温莪术大剂量含药血清组对胃癌BGC823核质比的作用较大.莪术品种用于治疗胃癌时建议选用温莪术.     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡的作用

目的 探讨二烯丙基三硫（diallyl trisulfede，DAlS）诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。方法 采用倒置显微镜、光学显微镜、透射电镜分别观察DATS诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的形态学改变以及用流式细胞术观察亚G1峰。结果 MGC-803细胞经DATS处理24h后，光镜可见细胞胞浆浓缩、核固缩深染等早期凋亡细胞；电镜可见到不同时期凋亡细胞；流式细胞术检测有亚G1峰的出现。结论 DATS具有诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。     

复方苦参方剂对大肠癌LoVo细胞体外增殖凋亡的影响

目的：探讨复方苦参方剂对大肠癌LoVo细胞体外增殖及凋亡的影响．方法：台盼蓝染色法和MTT法测定中药对LoVo细胞抑制作用与时间和剂量的关系,用荧光显微镜、流式细胞仪对细胞凋亡进行检测．结果：复方苦参方剂可抑制Lovo细胞的生长,实验范围内其抑制作用呈时间与剂量依赖关系．经中药作用48h后,LoVo细胞可检测细胞凋亡峰．中药组凋亡率为（7．3±1．5）％,与对照组（2．1±0．5）％相比有明显升高（P〈0．05）．结论：复方苦参方剂具有一定的抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的作用．     

藤珠胃康颗粒含药血清对小鼠胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究藤珠胃康颗粒含药血清对小鼠胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响.方法 MFC细胞经不同浓度藤珠胃康颗粒含药血清处理后,采用MTT法检测藤珠胃康颗粒含药血清对细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态变化;采用流式细胞仪及AnnexinV/PI染色的方法检测对细胞凋亡的影响.结果 与对照组比较,藤珠胃康颗粒含药血清中、高剂量组细胞增殖抑制率显著增高(P＜0.05);显微镜下观察,贴壁细胞逐渐脱落、缩成圆形;与对照组比较,给药组细胞凋亡率均显著增高(P＜0.05),并呈现剂量依赖性.结论 藤珠胃康颗粒含药血清对小鼠胃癌MFC细胞增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡.     

乳浆大戟抑制原代人胃癌多药耐药细胞增殖和诱导凋亡研究

目的:研究乳浆大戟抑制原代培养多药耐药人胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。方法:制备人胃癌多药耐药原代培养细胞,用不同稀释度的乳浆大戟提取液处理人胃癌多药耐药原代培养细胞,MTT实验观察细胞生长抑制现象,吖啶橙染色荧光显微镜观察凋亡细胞的核形态改变并测定凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率;以不加乳浆大戟提取液的细胞作对照。结果:乳浆大戟对人胃癌多药耐药原代培养细胞有增殖抑制作用,该作用有时间和浓度依赖性。乳浆大戟处理后的人胃癌多药耐药原代培养细胞,荧光显微镜下观察可见细胞核固缩、染色不均匀和核碎片等细胞凋亡的形态学改变,凋亡形态显示的凋亡指数和流式细胞术显示的凋亡率均明显上升,均有时间和浓度依赖性;以上作用与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:乳浆大戟提取液具有抑制人胃癌多药耐药原代培养细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

自噬及自噬性细胞死亡抑制紫杉醇诱导的胃癌细胞凋亡

目的明确自噬和自噬性细胞死亡在胃癌SGC-7901及BGC-823细胞紫杉醇处理过程中的存在,探讨其对紫杉醇诱导的凋亡敏感性的作用。方法流式细胞仪和MTT法分别检测紫杉醇诱导SGC-7901及BGC-823细胞的凋亡率和总死亡率,死细胞DAPI染色荧光显微镜检测非凋亡性细胞死亡,吖啶橙染色流式细胞仪和荧光显微镜分别定量、定性检测自噬和自噬性细胞死亡的存在,自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤和紫杉醇共同作用细胞后流式细胞术检测细胞死亡率和凋亡率的变化。结果紫杉醇处理SGC-7901及BGC-823细胞早期(24h内)可出现明显的细胞自噬性变化,自噬高峰期出现紫杉醇诱导3~6h,自噬性细胞死亡存在并可能是紫杉醇诱导的非凋亡性细胞死亡的主要形式,抑制紫杉醇诱导的细胞自噬可以促进紫杉醇诱导细胞凋亡的发生。结论紫杉醇可以诱导胃癌SGC-7901及BGC-823细胞自噬及自噬性细胞死亡,并且紫杉醇诱导的胃癌细胞自噬会拮抗胃癌细胞凋亡的发生,从而为胃癌化疗耐受提供新的解释,可能为胃癌治疗提供新的途径。     

奥沙利铂长循环脂质体对人结直肠癌SW480细胞凋亡影响

目的探讨奥沙利铂长循环脂质体对人结直肠癌SW480细胞的凋亡作用。方法采用荧光标记的长循环脂质体,奥沙利铂长循环脂质体和游离奥沙利铂分别处理人结直肠癌SW480细胞,流式细胞仪、荧光显微镜检测细胞对脂质体的摄取;MTT分析载药脂质体对细胞增殖影响;透射电镜观察细胞超微结构变化;流式细胞仪及TUNEL检测细胞凋亡;Western blot分析actived-caspase-3(P17)的表达。结果脂质体被细胞摄取,2 h的荧光强度为(197.72±8.92),24 h的荧光强度为(641.74±44.46);2.6 mmol/L的奥沙利铂长循环脂质体(含28 mg/L奥沙利铂)对细胞的活性影响及凋亡诱导作用大于28 mg/L游离奥沙利铂(P<0.01);actived-caspase-3蛋白的表达随细胞凋亡增加而上调(P<0.01)。结论奥沙利铂长循环脂质体对人结直肠癌SW480细胞有显著凋亡诱导作用。     

复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞株增殖抑制作用研究

目的 探讨复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞株增殖的抑制作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞48 h增殖抑制作用,并求出其48 h半数抑制浓度(IC50);用流式细胞仪分析技术及琼脂糖凝胶电泳检测复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响.结果 复方苦参注射液能明显抑制人胃癌BGC-823细胞增殖并呈浓度依赖性,IC50为9/250原液稀释倍数;人胃癌BGC-823细胞经复方苦参注射液(终浓度为1/25.0原液稀释倍数)作用24 h、48 h及72 h后,流式细胞仪分析结果显示,其早期凋亡细胞率分别为(9.58±0.88)%、(20.41±0.77)%及 (60.30±3.19)%,明显高于空白对照组的(4.17±0.11)%,差异均有统计学意义(P＜0.05),并发现明显的细胞凋亡峰(Sub-G1);人胃癌BGC-823细胞经复方苦参注射液(终浓度为1/25.0原液稀释倍数)作用48 h和72 h后,可见明显的梯状条带形成.结论 复方苦参注射液可抑制人胃癌BGC-823细胞增殖,并诱导其凋亡.     

复方中药紫龙金抑制肾癌ketr-3细胞增殖的血清药理学研究

目的观察复方中药紫龙金含药血清对人肾癌ketr-3细胞生长增殖的抑制作用。方法运用血清药理学方法,选择不同浓度的含紫龙金大鼠血清与ketr-3细胞共同孵育,于不同时间用生物倒置显微镜观察细胞形态变化,W ST-8比色法检测紫龙金含药血清对人肾癌ketr-3细胞的增殖抑制率。结果紫龙金含药血清作用ketr-3细胞48 h后,细胞呈现典型的凋亡形态学改变,可见部分细胞变圆,体积变小,有凋亡小体产生;且抑制作用呈现时间和剂量依赖关系,与对照组比较,各浓度含药血清（5%、10%、20%）作用24 h后细胞增殖抑制率无明显差异（P〉0.05）,作用48 h后细胞增殖抑制率分别为4.9%（P〉0.05）、22.6%（P〈0.01）、28.7%（P〈0.01）。结论紫龙金含药血清可有效抑制人肾癌ketr-3细胞体外增殖。     

二烯丙基三硫对MGC-803细胞凋亡的影响

目的探讨二烯丙基三硫(dially disulfide，DATS)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及作用机制。方法光学显微镜观察凋亡形态，流式细胞术检测凋亡及细胞内活性氧水平。结果12mg／LDATS作用于胃癌MGC-803细胞24小时后，在光学显微镜下出现了典型的凋亡细胞形态学改变，流式细胞仪检测结果提示，活性氧水平升高，出现明显的亚G1峰。用抗氧化剂NAC预处理细胞，能抑制细胞内活性氧水平的升高及DATS诱导的凋亡。结论DATS诱导胃癌细胞凋亡可能与细胞内活性氧产生增加有关。     

加味青蒿鳖甲汤含药血清对白血病CEM细胞株增殖及凋亡的研究

目的:观察加味青蒿鳖甲汤含药兔血清对CEM细胞株增殖周期及凋亡的影响。方法:用加味青篙鳖甲汤含药兔血清与CEM细胞共同孵育24 h,用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果:不同剂量复方含药兔血清干预后CEM细胞G0/G1期的比例明显增高,高剂量组与低剂量组比较,有统计学意义(P0.05)。高、中剂量组的S、G2/M期的比例明显下降,与正常兔血清组比较,有统计学意义(P0.05)。低剂量组的S期的比例亦较低,与正常兔血清组比较,无统计学意义(P0.05)。不同剂量复方含药兔血清组PI、SPF与正常兔血清组比较,有统计学意义(P0.05),以高剂量组最优。不同剂量复方含药兔血清组细胞凋亡率与正常兔血清组比较有统计学意义(P0.05),高剂量组与低剂量组比较,有统计学意义(P0.05)。结论:加味青蒿鳖甲汤含药兔血清可抑制CEM细胞的增殖,并提高CEM细胞的凋亡率。     

活血化瘀中药复方诱导K562细胞凋亡

目的研究活血化瘀复方对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖、凋亡的影响.方法 通过台盼蓝拒染法活细胞计数,绘制细胞生长曲线.光镜、透射电镜观察细胞形态学变化.流式细胞检测定量观察细胞凋亡及其与药物的关系.结果 活血化瘀复方对K562细胞生长具有抑制作用,并且细胞呈现典型的凋亡形态学改变.流式细胞检测显示药物血清作用6h,K562细胞即已出现凋亡,100 mL·L-1含药血清组细胞凋亡率较50 mL·L-1含药血清组高(13.4±1.3)% vs (7.6±0.9)%, P<0.01.结论 活血化瘀复方具有抑制白血病细胞生长,诱导白血病细胞凋亡的作用,从而为其临床应用提供了理论依据.     

温下方含药血清诱导肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨温下方含药血清对肠癌细胞的诱导凋亡作用。方法:运用血清药理学方法及MTT、FCM、LSCM技术,检测含药血清对细胞生长的抑制作用,从形态学、凋亡率等方面观察温下方含药血清诱导肠癌细胞凋亡的情况。结果:温下方含药血清作用24 h,可明显抑制肠癌细胞生长,形态学观察可见明显的凋亡细胞,FCM检测肠癌细胞凋亡率显著增高。结论:温下方含药血清对肠癌细胞有明确的诱导凋亡作用。