Kupffer细胞Fas配体的表达及其对移植肝内淋巴细胞的杀伤作用

目的 观察移植肝脏中Kupffer细胞(KCs)和T淋巴细胞(T lymphocytes,TLCs)中Fas、FasL基因和蛋白的表达,以及KCs对侵入肝脏内的淋巴细胞的细胞毒性作用.方法 肝移植后0、48 h分离肝移植组、氯化钆(GdCl3 )组动物肝脏的KCs和TLCs,并对TLCs进一步分类;用RT-PCR法测定KCs和TLCs中Fas、FasL基因表达,用免疫组化、激光扫描共聚焦显微镜和Western blot蛋白印迹等方法测定KCs和TLCs中Fas、FasL蛋白质表达;观察不同培养条件下淋巴细胞凋亡与KCs的相互作用.结果 GdCl3 组分离出的KCs显著少于肝移植组,淋巴细胞数量及CD8 T细胞显著多于肝移植组(P<0.05),免疫组化和激光共聚焦显微镜显示GdCl3 组FasL阳性KCs显著少于肝移植组(P<0.05),2组Fas阳性淋巴细胞无显著差异(P>0.05);RT-PCR和Western blot显示KCs中 FasL mRNA及蛋白表达GdCl3 组较弱(P<0.05),2组淋巴细胞中Fas、FasL mRNA无显著差异(P>0.05).GdCl3组中分离出的KCs对TLCs杀伤率明显低于肝移植组(P<0.05),抗FasL抗体对KCs杀伤力有抑制作用.结论 KCs能表达FasL蛋白,并通过Fas、FasL途径杀伤移植肝脏中的淋巴细胞,诱导移植肝脏产生免疫耐受.GdCl3能阻止KCs中FasL基因和蛋白表达,抑制肝移植中免疫耐受的产生.     

Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3在人脑胶质瘤中的表达

目的 研究Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)在人脑胶质瘤组织中的表达,探讨NLRP3在人脑胶质瘤的发生、发展中的作用.方法 按照2007年WHO中枢神经系统肿瘤分类及分级标准,将所收集的49例人脑胶质瘤组织根据其病理类型分为低级别组(20例)和高级别组(29例),并收集脑外伤后行颅内减压手术切除的正常脑组织10例做对照.应用免疫组织化学技术,并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)和免疫印迹技术,检测NLRP3在各组人脑胶质瘤及人正常脑组织中的表达.结果 NLRP3在正常脑组织中表达不明显,在低级别胶质瘤中表达较少,在高级别胶质瘤中表达明显.NLRP3 mRNA在正常脑组织(1.04±0.52)、低级别组(1.85±1.02)和高级别组(3.36±1.38)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).人脑胶质瘤组织中NLRP3在mRNA水平及蛋白水平均高于正常脑组织(P＜0.01).NLRP3的表达与人脑胶质瘤的恶性程度呈正相关.结论 人脑胶质瘤中存在NLRP3的异常表达,其表达量随胶质瘤恶性程度的升高而增加,NLRP3在人胶质瘤的发生和侵袭中可能发挥着重要的作用,检测NLRP3的表达有助于胶质瘤分化程度的判断.     

类风湿性关节炎患者血清ASC NLRP3水平及意义

目的:探讨血清人细胞凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对类风湿性关节炎(RA)患者的预测价值。方法:选取2021年11月至2023年6月我院收治88例类风湿性关节炎患者作为RA组、同期88例健康体检者为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清ASC和NLRP3水平。采用Spearman相关性分析类风湿性关节炎患者血清ASC、NLRP3水平与DAS28评分的相关性,采用Logistic回归分析类风湿性关节炎患者的影响因素。结果:RA组血清ASC水平高于健康对照组,NLRP3水平高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,ASC、NLRP3为RA患者独立危险因素(P<0.05)。结论:血清ASC和NLRP3水平升高与DAS28评分独立相关,血清ASC、NLRP3对RA及其疾病活动度有潜在的诊断价值。     

X盒结合蛋白1对脂多糖处理的Kupffer细胞炎性因子表达的影响

目的 探讨X盒结合蛋白1 (X-box binding protein 1,XBP1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs) TNF-α表达的影响.方法 将BALB/c小鼠KCs随机区组法分为质粒组、阴性组和空白组.分别给予XBP1-shR...     

Relaxin-3通过抑制HMGB1介导的NLRP3炎性小体活化抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞转分化

目的:探究人松弛素3(relaxin-3)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理心肌成纤维细胞的作用及其可能的作用机制.方法:AngⅡ处理心肌成纤维细胞,建立体外心肌纤维化模型,CCK-8检测细胞活力;EdU试剂盒检测细胞增殖能力;Western blot检测细胞中抗α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cleaved caspase-1)和高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)表达;间接免疫荧光检测细胞中NLRP3的表达.结果:与空白对照组相比,AngⅡ组细胞活力、EdU阳性细胞数明显升高(P＜0.05),细胞中α-SMA、vimentin、collagen Ⅰ和collagenⅢ蛋白表达明显升高(P＜0.05),NLRP3荧光强度和NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、HMGB1蛋白表达均明显升高(P＜0.05);与AngⅡ组相比,relaxin-3组细胞活力、EdU阳性细胞数明显降低(P＜0.05),细胞中α-SMA、vimentin、collagen Ⅰ和collagenⅢ蛋白表达明显降低(P＜0.05),NLRP3荧光强度和NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、HMGB1蛋白表达均明显降低(P＜0.05);relaxin-3组和relaxin-3+ oe-NC组两组间的各项指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与relaxin-3+ oe-NC组相比,relaxin-3+ oe-HMGB1组胞活力、EdU阳性细胞数明显升高(P＜0.05),细胞中α-SMA、vimentin、collagen Ⅰ和collagenⅢ蛋白表达明显升高(P＜0.05),NLRP3荧光强度和NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、HMGB1蛋白表达均明显升高(P＜0.05).结论:relaxin-3通过下调HMGB1的表达抑制NLRP3炎性小体活化,从而抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞转分化.     

NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3介导的细胞焦亡对哮喘大鼠炎症水平的调控作用

目的:探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)在哮喘中炎症水平的调控作用机制。方法:从GSE40732和GSE69683数据集中分析哮喘组和对照组之间的差异表达基因(DEGs),并鉴定程序性细胞死亡在哮喘中的水平。在NLRP3敲降大鼠中建立哮喘大鼠模型,通过HE染色和Tunel染色分析肺组织的病理变化和凋亡水平,通过免疫组化检测肺组织中NLRP3的表达,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测NLRP3介导细胞焦亡相关mRNA和蛋白表达的改变。结果:哮喘组和对照组之间鉴定了926个差异表达基因(DEGs),细胞焦亡在哮喘中的水平显著高于对照组。哮喘模型中的炎症、凋亡和NLRP3水平明显高于对照组,而在NLRP3敲降后,哮喘大鼠中的炎症和凋亡水平降低。与对照组比较,NLRP3、Gasdermin D蛋白(GSDMD)、胱天蛋白酶-1 (Caspase-1)和Caspase-8在哮喘大鼠模型中的表达升高,高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达降低(均P<0.05),这些异常表达在NLRP3敲降后得到了显著的改善(P<0.05)。结论...     

LPS激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用研究

目的 探讨脂多糖(LPS)激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用.方法 用佛波酯诱导人单核细胞(THP-1)分化为巨噬细胞.实验分为对照组、LPS组、LPS+NLRP3 siRNA组、LPS+Scrambled siRNA组.采用免疫荧光染色检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白ASC的共定位、Western blotting检测NLRP3蛋白的表达、ELISA检测细胞培养上清白介素1β(IL-1β)的浓度.结果 与对照组相比,NLRP3和ASC蛋白的共定位明显增多,LPS组NLRP3蛋白的表达增强.LPS还能使细胞培养上清IL-1β的浓度显著升高,NLRP3 siRNA干扰后细胞培养上清IL-1β的浓度显著降低.结论 LPS可以促进炎性小体成分NLRP3、ASC的表达,激活NLRP3炎性小体,刺激巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β.     

渥曼青霉素通过Chemerin/CMKLR1途径抑制Kupffer细胞NLRP3的活性缓解小鼠非酒精性脂肪肝

目的 探讨Chemerin诱导枯否细胞(Kupffer cells,KCs)的炎性反应在小鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)进展中的作用和机制.方法 分别用磷脂酰肌醇3-激酶的抑制剂渥曼青霉素作用于预先用Chemerin体外刺激的KCs 2 h,以及由高脂饮食饲养的C57BL/6J小鼠12周.然后,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液及血清细胞因子水平;反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测体内外KCs中目的分子的mRNA和蛋白表达水平;记录小鼠体质量变化并检测小鼠胰岛素耐受和葡糖糖耐受情况;HE染色结合NAS评分评测小鼠肝脏脂肪变性程度.结果 在渥曼青霉素处理的Chemerin-KCs或者NAFLD模型小鼠中:细胞上清液和血清中白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和IL-18的水平明显低于单独用Chemerin处理组或者单独高脂饮食组;Chemerin细胞受体(CMKLR1)和炎症小体3样受体蛋白(NLRP3)的mRNA和蛋白表达明显低于单独用Chemerin处理KCs或者单独高脂饮食的小鼠.此外,在高脂饮食单独饲养的小鼠的体质量变化、肝功能变化、胰岛素抵抗情况、葡糖糖抵抗情况及肝脏脂肪指数变化均比渥曼青霉素处理的NAFLD模型小鼠变化明显.结论 渥曼青霉素能通过下调CMKLR1和NL-RP3的表达减轻由高脂饮食诱导的肝脏脂肪变和KCs介导的炎性反应.     

急性缺血性脑卒中NLRP3的变化及其与神经功能缺损的关系

目的：探讨急性缺血性脑卒中早期NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的变化特征。方法：纳入98例急性缺血性脑卒中患者,并按神经功能缺损的严重程度分为轻度、中度、重度三组,采集血液样本,采用RT-qPCR分析血液中NLRP3 mRNA表达水平;分析其与神经功能缺失及脑梗死体积的关系。结果：三组中罹患冠心病、高血压、高血脂和高血糖的比例,差异有统计学意义（P<0.05）;年龄、性别、吸烟和饮酒方面,三组间差异无统计学意义（P>0.05）。与轻度神经功能缺损组（轻度组）相比,在发病6、12和24 h,中、重度组的NLRP3 mRNA表达水平显著增高(P<0.05)。与小梗死组比较,中、大梗死组NLRP3 mRNA表达水平显著增高(P<0.05)。结论：血液中NLRP3表达水平越高,急性缺血性脑卒中患者神经功能缺损评分越高,脑梗死体积增大。NLRP3表达水平与梗死损伤的严重程度相关。     

NLRP3、HMGB1及TBIL在慢性阻塞性肺病患者外周血的表达意义及诊断价值

目的探究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及总胆红素(TBIL)在慢性阻塞性肺病(COPD)患者外周血的表达意义及诊断价值。方法选择COPD急性发作期75例为急性期组(根据病情严重程度分轻度组、中度组及重度组),稳定期60例为稳定期组,另选同期体检健康者60例为健康组。观察各组NLRP3、HMGB1及TBIL水平;相关性分析各指标与患者肺功能分级(GOLD)间关系;通过受试者工作特征曲线分析NLRP3、HMGB1及TBIL对COPD的诊断效能。结果NLRP3、HMGB1水平变化在急性期组、稳定期组、健康组和重度组、中度组、轻度组均依次降低(P＜0.05),而TBIL水平变化趋势与之相反(P＜0.05)。COPD患者NLRP3、HMGB1与GOLD分级呈正相关,TBIL与GOLD分级呈负相关(P＜0.05)。血清NLRP3、HMGB1、TBIL三者联合诊断COPD急性发作期和稳定期患者的诊断价值最高。结论COPD急性发作期患者NLRP3、HMGB1、TBIL水平较稳定期患者更为异常,与病情严重程度密切相关,且三者联合检测有助于COPD急性发作期及稳定期的诊断研究。