毛蕊花糖苷对顺铂诱导小鼠卵巢损害的保护作用

目的研究毛蕊花糖苷对顺铂所致卵巢损害的保护作用。方法 48只昆明雌性小鼠随机分成4组:对照组、顺铂组、顺铂+毛蕊花糖苷低浓度干预组及顺铂+毛蕊花糖苷高浓度干预组。顺铂组、顺铂+毛蕊花糖苷干预组,分别给予腹腔注射顺铂(2.0 mg/kg·d),同时给予等体积生理盐水及不同浓度毛蕊花糖苷(30、60 mg/kg·d)灌胃处理。干预一周后,停止腹腔注射顺铂,毛蕊花糖苷持续干预一周。对照组小鼠给予同等剂量的生理盐水腹腔注射及灌胃处理。分别通过ELISA方法检测各组小鼠血中雌激素(estradiol,E2)及促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平、HE染色观察卵巢形态结构、TUNEL染色检测卵巢细胞凋亡情况、免疫组化法及Western blot方法检测卵巢组织中凋亡相关蛋白(cleaved-caspase 3、cleaved-PARP)的表达水平。结果顺铂组小鼠可见血FSH水平升高,卵巢可见发育中窦状卵泡内的颗粒细胞层明显减少,卵母细胞核碎裂及闭锁卵泡增加;凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、cleaved-PARP的表达水平升高,而毛蕊花糖苷药物干预后在一定程度上能逆转卵巢功能及结构损害,并使卵巢凋亡相关蛋白下调来抑制卵巢组织的凋亡。结论毛蕊花糖苷具有对抗顺铂所致卵巢组织凋亡,保护化疗药物引起的卵巢功能损伤的作用。     

参慈胶囊联合顺铂抑制小鼠Lewis肺癌组织血管生成的机制研究

目的:探讨参慈胶囊及顺铂对Lewis肺癌组织生长及血管生成的抑制作用。方法:将40只C57BL/6小鼠自接种Lewis肺癌瘤株细胞建立实体瘤模型,随机分为参慈胶囊组、参慈胶囊+顺铂组、顺铂组、模型组。模型组予等量生理盐水,其余各组荷瘤小鼠均用药21 d,测量肿瘤重量并计算抑瘤率,采用免疫组化技术检测血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)表达情况;采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测Lewis肺癌荷瘤小鼠癌细胞表达血管内皮生长因子受体-2(KDR)mRNA的情况。结果:(1)在抑瘤率方面,参慈胶囊+顺铂组抑瘤率明显高于其它3组,差异显著(P0.01)。(2)参慈胶囊+顺铂组能降低Lewis肺癌组织VEGF、KDR的表达及MVD的形成,差异显著(P0.01)。结论:(1)参慈胶囊联合顺铂能抑制Lewis肺癌组织生长及血管生成,二者联用具有相加或者协同效应;(2)下调VEGF及其受体KDR的表达,可能是二者联合抗肿瘤血管生成的机制之一。     

人参皂甙Rg3抗小鼠Lewis肺癌的机制研究

目的以小鼠Lewis肺癌为肿瘤模型探讨人参皂甙Rg3抗肿瘤机制。方法以肺癌细胞系LLC荷瘤C57/BL小鼠建立小鼠肺癌模型,随机分为人参皂甙Rg3组、阳性药顺铂组和模型组,分别给予人参皂甙Rg3、顺铂和生理盐水;同时设立空白对照组。以肿瘤质量、抑瘤率观察人参皂甙Rg3的抗肿瘤效果;以流式细胞术测定脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞数量及比值;以Elispot技术检测机体肿瘤抗原特异性CTL的诱生情况;以肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数判定人参皂甙Rg3的毒副作用。结果人参皂甙Rg3组抑瘤率高于顺铂组,差异具有统计学意义(P<0.05)。生理盐水组小鼠脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞百分率比正常小鼠低,而人参皂甙Rg3组和顺铂组高于生理盐水组,差异具有统计学意义(P<0.05)。人参皂甙Rg3组肿瘤特异性IFN-γ斑点数明显增多,与生理盐水组相比具有统计学差异(P<0.05),顺铂组脾脏无肿瘤特异性IFN-γ斑点出现。和模型组相比较,人参皂甙Rg3组小鼠肝脏、脾脏、胸腺指数无明显差异,而顺铂组的肝脏、脾脏、胸腺指数低于人参皂甙Rg3组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LLC细胞荷瘤小鼠具有明显的免疫抑制现象,人参皂甙Rg3可显著增加脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞阳性率并促进肿瘤特异性CTL细胞诱生,人参皂甙Rg3无肝脏、胸腺、脾脏毒性。     

顺铂联合exosomes抗小鼠肝癌效应的实验研究

目的:评价顺铂(DDP)与exosomes联用的抗肿瘤效果,研究其可能机制.方法:采用MTT法检测顺铂对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响,用H21源exosomes瘤苗免疫小鼠,3 H-TdR释放法检测exosomes诱导产生的CTL活性及顺铂对CTL杀伤的增敏作用,RT-PCR检测顺铂作用后H22细胞中Fas及exosomes免疫后脾淋巴细胞FasL的mRNA表达水平,Western blot检测顺铂对H22细胞Fas的蛋白表达水平的影响.以小鼠肝癌H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,观察顺铂联合exosomes治疗对小鼠生存期的影响.结果:顺铂抑制H22细胞生长呈量效关系;exosomes免疫小鼠可诱导产生针对H22细胞的CTL反应,经2.5 mg/L顺铂预处理24 h的H22细胞对CTL杀伤的敏感性增强(P＜0.05).顺铂在mRNA和蛋白水平,显著增强H22Fas的表达;exosomes免疫小鼠后,脾淋巴细胞FasL表达增加.顺铂联合exosomes组小鼠生存期较单独治疗组及对照组明显延长(P＜0.05).结论:顺铂与exosomes联合治疗有协同抑制肿瘤的作用,产生协同作用的机制与增强CTL活性有关.     

LIGHT/TNFSF14减轻顺铂诱导的小鼠急性肾损伤及机制

目的研究与单纯疱疹病毒糖蛋白D竞争结合疱疹病毒侵入介体的淋巴毒素类似物(LIGHT)即肿瘤坏死因子超家族蛋白14(TNFSF14)在顺铂诱导的急性肾损伤(Cis-AKI)中的作用并初步探讨其机制。方法选取雄性野生型(WT)和LIGHT敲除(LIGHT~(-/-))C57BL/6小鼠,分为WT小鼠生理盐水组、 WT小鼠顺铂组、 LIGHT~(-/-)小鼠生理盐水组和LIGHT~(-/-)小鼠顺铂组。其中顺铂组予以单次腹腔注射顺铂(20 mg/kg,200μL),生理盐水组以等体积生理盐水替代。72 h后,处死小鼠,眼球取血,同时收集肾脏组织。全自动生化分析仪检测血尿素氮(BUN)及血清肌酐(Scr)水平; HE染色检测肾组织病理学改变,实时定量PCR检测小鼠肾组织中LIGHT、肾损伤分子1(KIM-1)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平;免疫组织化学染色法检测肾组织中LIGHT的表达; Western blot法检测肾组织LIGHT、Bcl2、 BAX、细胞色素C的蛋白水平。结果与生理盐水处理的WT小鼠相比,顺铂处理WT小鼠肾组织LIGHT表达明显升高。与顺铂处理的WT小鼠相比, LIGHT ~(-/-)小鼠顺铂诱导的肾损伤更为严重BUN、 Scr升高和肾脏组织损伤更严重;且肾组织IL-6、 MCP-1和TNF-α的mRNA以及BAX、细胞色素C的蛋白水平增加, Bcl2蛋白水平降低。结论 LIGHT在Cis-AKI中具有保护作用,可能与降低炎症因子分泌及减少细胞凋亡有关。     

N-乙酰半胱氨酸对顺铂导致肾毒性的保护作用及作用机制分析

目的:通过动物实验分析探讨N-乙酰半胱氨酸对于顺铂诱导的肾毒性和肾损伤的保护功能及其机制,为临床药理研究提供参考。方法:选取60只BALB/c小鼠,雌雄各半,喂养7 d后腹腔注射20 mg/kg的顺铂,持续注射3 d诱导并建立急性肾损伤小鼠模型(AKI),后随机分为6组,A组给予5 mg/kg顺铂,B组给予250μg/(100 g·d)的N-乙酰半胱氨酸,C组给予5 mg/kg顺铂+250μg/(100 g·d)的N-乙酰半胱氨酸;D组给予500μg/(100 g·d)的N-乙酰半胱氨酸;E组给予5 mg/kg顺铂+500μg/(100 g·d)的N-乙酰半胱氨酸,F组注射生理盐水做对照,连续治疗7 d后,抽取小鼠眼球血,测定生化指标、炎症因子水平;做肾脏病理切片图评价肾损伤水平,并加以比较。结果:在给药前,6组小鼠的血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾损伤评分(RIS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、谷胱甘肽(GSH)水平比较差异无统计学意义(P0.05);给药后,6组上述指标差异有统计学意义(P0.05):①血清Scr、BUN、TNF-α和肾损伤评分RIS:A组F组C组E组B组D组,与治疗前相比,A组显著增加(P0.05);B组、D组、E组显著降低(P0.05),C组、F组差异无统计学意义(P0.05);②血清GSH:A组F组C组E组B组D组,与治疗前相比,A组显著降低(P0.05);B组、D组、E组显著增加(P0.05),C组、F组差异无统计学意义(P0.05)。结论:N-乙酰半胱氨酸可减轻因顺铂导致的小鼠肾毒性和肾损伤程度,对肾脏具有保护作用,且动物实验的疗效与N-乙酰半胱氨酸的剂量有高度相关性,其机制则与N-乙酰半胱氨酸具有抑制炎症反应和肾组织细胞凋亡、抗氧化应激等药理作用有关。     

丹参酮增强化疗药物拮抗黑色素瘤效果的研究

目的:研究中药制剂丹参酮(TA)和抗肿瘤药物的卡铂(CA)联合应用对黑色素细胞瘤的抑制作用。方法:建立肿瘤模型后,分为模型组、丹参酮组、卡铂组、丹参酮+卡铂组,同时设立正常鼠为空白组。不同组别的小鼠分别给予腹腔注射PBS、丹参酮、卡铂、丹参酮和卡铂,空白组小鼠不做任何处理。结果:丹参酮+卡铂组小鼠的肿瘤体积和肿瘤质量显著小于丹参酮组、卡铂组和模型组(P0.05);卡铂组小鼠的肿瘤体积和肿瘤质量显著小于丹参组和模型组(P0.05);丹参酮+卡铂组小鼠体重增加显著好于丹参酮组和卡铂组(P0.05)。结论:丹参酮和卡铂联合用药可以产生更好地抑制B16黑色素瘤增殖的效果。     

香菇多糖联合顺铂对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤S-100蛋白表达影响的研究

目的研究香菇多糖(lentinan,LNT)联合顺铂(DDP)对荷瘤小鼠实体瘤中S-100蛋白表达的影响。方法体外培养Lewis肺癌小鼠肿瘤细胞,接种健康BALB/c小鼠,荷瘤成功后予以治疗,实验分组为:荷瘤组,LNT组,DDP组以及LNT+DDP组。观察小鼠一般情况,并采用免疫组化法检测S-100蛋白表达,RTPCR检测S-100基因表达。结果肿瘤组织内S-100蛋白和m RNA表达水平LNT组、DDP组或LNT+DDP组比荷瘤组增多(0.05),LNT+DDP组比LNT组和DDP组增多(0.05)。结论 LNT同DDP联合使用上调S-100蛋白和基因的表达有协同作用。     

CXC趋化因子配体10联合顺铂抑制LL/2肿瘤肺转移的实验研究

目的 研究CXC趋化因子配体10(CXCL10)联合顺铂对荷瘤小鼠LL/2肿瘤肺转移的治疗效果.方法小鼠Lewis肺癌LL/2肿瘤模型建立在C57BL/6小鼠上.实验小鼠随机分4组:CXCL10 顺铂组;CXCL10组;顺铂组;PBS对照组.CXCL10按25 μg/(kg·d)使用,皮下注射,连用30 d.顺铂采用腹腔内注射[5 mg/(kg·week)],于CXCL10治疗的第14、21天使用,连用2个周期.观察肿瘤体积与小鼠生存时间,观察各组小鼠肺表面的肿瘤转移结节数.结果 CXCL10治疗明显抑制了Lewis肺癌的肺转移,肺表面的肿瘤结节数少于对照组(P＜0.05).联合治疗组表现较强的抗肿瘤疗效,其肿瘤生长速度减慢,治疗效果(P＜0.01)优于顺铂或者CXCL10组(P＜0.05).结论 CXC趋化因子配体10联合顺铂更有效地抑制LL/2肿瘤肺转移和延长生存期.     

抑制Wnt/β-catenin信号通路增加食管癌顺铂化疗敏感性的研究

目的:探讨抑制 Wnt/β-catenin信号通路后食管癌细胞对化疗药物顺铂敏感性的变化.方法:双链SiRNA转染干扰β-catenin基因表达；半定量RT-PCR和Western blot检测基因沉默效果；MTT细胞毒实验检测细胞的生长抑制率.结果:合成的Wnt/β-catenin SiRNA可以显著下调β-catenin mRNA和蛋白的表达水平,对内参对照基因GAPDH没有影响；对照组,SiRNA干扰组,顺铂处理组,SiRNA干扰+顺铂处理组的细胞存活率分别为(100±6.8)％、(87.3±5.2)％、(66.4±4.4)％和(41.8±3.64)％.顺铂处理组与SiRNA干扰+顺铂处理组比较细胞的存活率降低增加了大约30％.结论:干扰β-catenin的表达能显著增强食管癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,为减少化疗药物顺铂用量和其耐药的克服带来了曙光,也为食管癌等恶性肿瘤的化学治疗开辟新途径提供了理论依据.     

阻断Dll4-Notch信号通路对哮喘小鼠Th17细胞分化的影响

目的:探讨哮喘小鼠体内Delta样配体4(Delta-like ligand 4,Dll4)-Notch信号通路阻断对辅助性T细胞17(Th17细胞)分化的影响。方法:30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、生理盐水对照组、哮喘模型组、Dll4单克隆抗体干预组和Ig G对照组。肺组织切片进行免疫组织化学染色,定性分析Dll4的表达。流式细胞术分析各组小鼠脾脏Th17细胞在CD4~+T淋巴细胞中的比例。采用Western blot法检测小鼠脾脏分离淋巴细胞中维甲酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan receptorγt,RORγt)的蛋白表达。应用酶联免疫吸附实验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测各组小鼠血清中白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)的含量。结果:与哮喘模型组比较,Dll4单克隆抗体干预组Dll4表达存在明显差异。与哮喘模型组比较,Dll4单克隆抗体干预组脾脏分离CD4~+T淋巴细胞中Th17细胞的比例和RORγt表达水平均存在统计学显著性(P0.05)。Dll4单克隆抗体干预组小鼠血清IL-17的表达与哮喘模型组之间的差异也存在统计学显著性(P0.01)。结论:阻断Dll4-Notch信号通路对哮喘小鼠Th17细胞分化起到抑制作用。     

低氧促进Th17细胞浸润于肺组织并与肺血管改建相关

目的:观察低压低氧时肺组织中维甲酸相关孤儿受体(ROR)γt的mRNA表达水平及白细胞介素17(IL-17)水平的变化,探讨Th17细胞与缺氧肺血管改建的关系。方法:50只雄性BALB/c小鼠按低氧时间随机分为0 d、3 d、7 d、14 d和28 d组,每组10只。低压低氧组小鼠均置入模拟海拔6 000 m的低压舱内饲养3 d、7 d、14 d和28 d。常氧组置常压常氧环境下饲养(即0 d组)。于相应时点通过心导管检测右室收缩压,随后快速处死取材,测量右心室重量指数,用流式细胞术检测脾脏组织Th17细胞(CD4+IL-17+RORγt+)的比例,用ELISA法检测血清中IL-4、IL-6、IL-17水平及肺组织中IL-17水平,采用real-time PCR法检测肺组织RORγt的mRNA表达水平。结果:与对照组(0 d组)相比,低压低氧7 d、14 d和28 d组小鼠右心室收缩压力、右心肥厚指数和血清IL-17含量均升高,其差异有统计学意义(P0.05);脾脏组织中IL-17+RORγt+CD4+T细胞的百分比随缺氧时间延长呈上升趋势,14 d和28 d组与对照组相比差异显著(P0.01);7 d、14 d和28 d组肺组织中RORγt的mRNA表达与对照组相比显著升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);14 d和28 d组肺组织中IL-17水平与对照组相比显著升高(P0.01)。肺组织中RORγt的mRNA表达水平、IL-17表达量与心室收缩压、右室肥厚指数呈显著正相关。结论:低压低氧促进脾脏T0细胞向Th17细胞分化,肺组织中RORγt的mRNA表达水平及IL-17水平显著升高,提示Th17细胞可能参与缺氧性肺动脉高压及肺血管改建的发生。     

miR-7敲减CD4~+ T细胞过继转输对小鼠急性肝损伤模型的影响

目的:观察过继转输微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(knockdown,KD)CD4~+ T细胞对小鼠急性肝损伤模型的影响,并探讨其意义。方法:利用磁珠分选技术分别获得正常野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠脾脏中CD4~+ CD62L~+ T细胞;CFSE染色标记后,按每只小鼠2×10~6个细胞,经尾部静脉注射给同系WT小鼠,并利用伴刀豆球蛋白A建立急性肝损伤模型;观察过继转输后2组小鼠肝脏的形态、重量及其重量指数的变化;HE染色观察小鼠肝脏组织的病理学变化;real-time PCR检测小鼠肝脏组织中凋亡相关分子Bax和P53的表达;流式细胞术检测小鼠肝脏组织中CFSE标记的CD4~+ T细胞活化相关膜分子CD62L表达水平以及细胞因子白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的表达变化。结果:与对照组相比,过继转输miR-7KD小鼠CD4~+ CD62L~+ T细胞组(miR-7KD转输组)小鼠的肝脏重量明显减轻(P0.01),但重量指数显著增加(P0.05);HE染色显示miR-7KD转输组的肝脏细胞损伤增加;real-time PCR结果显示miR-7KD转输组肝脏组织中凋亡相关细胞分子Bax和P53的相对表达水平均明显升高(P0.05);流式细胞术检测结果进一步显示肝脏组织中的CFSE~+细胞活化相关分子CD62L的表达水平明显降低(P0.01),细胞因子IFN-γ的表达水平明显增加(P0.05),而IL-4的表达水平显著降低(P0.01)。结论:过继转输miR-7敲减CD4~+ T细胞可显著加重急性肝损伤模型小鼠的肝组织损伤。这为后续深入探讨急性肝损伤的发生机制提供了重要的实验基础。     

不同致敏模式支气管哮喘患儿外周血T淋巴细胞亚群比较及临床意义

目的：分析比较不同过敏原致敏模式下支气管哮喘患儿外周血T淋巴细胞亚群,为进一步明确不同变应原致敏哮喘患儿机体的免疫功能状态差异提供更多依据。方法：入组374例在北京儿童医院过敏反应科确诊的哮喘患儿,行过敏原皮肤点刺试验确定患儿致敏模式,流式细胞术测定外周血T细胞（CD3⁺CD19⁺）、CD4⁺T细胞（CD3⁺CD4⁺）、CD8⁺T细胞（CD3⁺CD8⁺）、Tregs（CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺）、Th1（CD4⁺IFN-γ⁺T）、Th2（CD4⁺IL-4⁺T）以及Th17细胞亚群（CD4⁺IL-17A⁺T）,横断面比较上述免疫学指标在不同致敏模式哮喘患儿组间是否存在差异。结果：根据SPT检出阳性过敏原数量,将哮喘患儿分为未致敏哮喘组、单一致敏哮喘组及多重致敏哮喘三组。与健康对照组儿童相比,未致敏哮喘组、单一致敏哮喘组以及多重致敏哮喘三组哮喘患儿的外周血T细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD4/CD8比值、Th1细胞、Th2细胞、Th1/Th2比值、Tregs、Th17细胞、Tregs/Th17比值等指标的组间差异均具有统计学意义。进一步对三组患儿进行两两比较发现,Tregs、Th17细胞以及Tregs/Th17比值在三组间差异具有统计学意义（均P<0.05）。根据SPT阳性检出过敏原种类,将入组哮喘患儿致敏谱主要分为尘螨组、霉菌组、动物皮屑组、花粉组及其他组。与健康对照组儿童相比,尘螨组、霉菌组、动物皮屑组、花粉组以及其他组过敏原致敏患儿的外周血T细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD4/CD8比值、Th1细胞、Th2细胞、Th1/Th2比值、Tregs、Th17细胞、Tregs/Th17比值等指标的组间差异均具有统计学意义（均P<0.05）。同样地,行两两比较发现,五组患儿的外周血Th1细胞、Th2细胞、Th1/Th2比值、Tregs、Th17细胞以及Tregs/Th17比值在三组间差异具有统计学意义（均P<0.05）。结论：不同致敏模式的哮喘患儿外周血T淋巴细胞亚群分布状态存在差异,因此应注意不同致敏模式的哮喘患儿免疫应答状态差异。     

Differential STAT5 activation and phenotypic marker expression by immune cells following low levels of ethanol consumption in mice

Ethanol has been recognized as an immunosuppressive agent for many years. Effects of high levels of ethanol consumption on immune functions have been extensively studied, but little is known about the effects of low levels (scuh as 5% ethanol) of ethanol consumption. Herein we report that exposure of mice to 5% ethanol for 4-8 weeks decreases IL-2-augmented splenic NK cell activity, decreases the numbers of NK cells in spleen and liver, decreases the number of granulocytes (Gr-1⁺) in bone marrow and spleen, and decreases the percentages of B cells in liver. In contrast, the percentages of CD4⁺CD8⁺ thymocytes, CD4⁺CD8^- splenocytes, CD4⁺CD8^- liver nonparenchymal cells, CD3⁺ splenocytes, and CD3⁺ bone marrow cells were increased. Furthermore, exposure to 5% ethanol increases STAT5 activation in T cells and liver cells while decreases STAT5 activation in NK cells. Taken together, these findings suggest that low levels of ethanol consumption can differentially modulate immune cells in thymus, spleen, bone marrow and liver, which may be due to differential regulation of STAT5 activation by ethanol.     

Th17细胞对动脉粥样硬化斑块易损性和斑块破裂的影响研究

目的 探讨Th17细胞及其主要效应性细胞因子IL-17A对动脉粥样硬化斑块易损性和斑块破裂的作用。方法 在Apoe-/-小鼠的颈动脉套置缩窄性套管并通过药物联合作用的方法建立小鼠动脉粥样硬化斑块破裂模型。将20只Apoe-/-小鼠进行颈动脉套管,套管后继续进行高脂饲料喂养,然后分为药物联合刺激的干预组和生理盐水对照组,每组10只,分别于套管后7周和15周处死小鼠进行检测。流式细胞术检测斑块破裂后Th17细胞的变化,ELISA检测细胞因子IL-17A的变化。同上方法制备斑块破裂模型,将30只模型小鼠分为IL-17A处理组和对照组。IL-17A处理组外源性给Apoe-/-小鼠腹腔注射IL-17A,对照组腹腔注射生理盐水,处理后2、5、7周检测对斑块大小、脂质沉积和胶原含量的影响,免疫组化染色检测巨噬细胞和平滑肌细胞在斑块局部的表达,评价IL-17A对斑块稳定性及斑块破裂的作用。结果 在动脉套管后7周,此时仅有斑块内出血时,干预组小鼠脾脏中Th17细胞的比例高于对照组（P＜0.05）;在动脉套管后15周,此时有明显斑块破裂时,两组小鼠脾脏中Th17细胞的比例统计学意义显著（P＜0.01）。对Th17细胞关键细胞因子IL-17A的检测发现,动脉套管后7周干预组小鼠与对照组相比,血清中IL-17A的水平无统计学意义,而15周干预组小鼠与对照组小鼠比较,血清中IL-17A的水平升高,统计学意义显著（P＜0.01）。外源性IL-17A处理5周可增加斑块易损性,7周更为明显。表现为处理7周斑块面积较对照组增大（P＜0.05）,但纤维帽面积减小（P＜0.05）,脂核面积增大（P＜0.05）,帽/核比值降低（P＜0.01）。对斑块破裂的研究发现,干预组5周出现埋入式纤维帽斑块,7周出现埋入式纤维帽斑块例数增多。结论 Th17细胞及IL-17A具有促进动脉粥样斑块易损性和斑块破裂的作用。     

Toll样受体1对间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用

背景：课题组前期研究表明间充质干细胞具有免疫调节Th17细胞的作用,但内在的调节机制尚待阐明,为此,针对Toll样受体1在其中的作用进行探讨,为今后潜在的细胞治疗策略提供可能的实验依据。目的：探讨Toll样受体1对间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用。方法：贴壁法分离人胚胎骨髓来源间充质干细胞,免疫磁珠法分离正常人CD4⁺ T细胞。CD4⁺ T细胞单独培养或与间充质干细胞共培养4 d。实时定量聚合酶链反应测定白细胞介素17、Toll样受体1相关基因的表达水平;流式细胞仪检测Th17细胞的数量。结果与结论：CD4⁺ T细胞及间充质干细胞均表达Toll样受体1。相对于CD4⁺单独培养组,间充质干细胞共培养组(间充质干细胞+CD4)白细胞介素17明显升高(3.59±0.11,1.14±0.08,P < 0.01);进一步发现Toll样受体1 mRNA表达水平亦相应升高(6.07±1.79,1.53±0.63,P < 0.01)。流式细胞仪检测发现,共培养组(间充质干细胞+CD4)Th17细胞数量明显高于CD4⁺ T细胞组[(4.53±1.27)%,(2.39±0.80)%,P < 0.01)。研究结果表明Toll样受体1可能参与间充质干细胞免疫调节人Th17细胞的作用。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

脂肪源性干细胞对多发性硬化患者Th17的免疫调控作用

 目的: 探讨人脂肪源性干细胞(hASCs)对多发性硬化(MS)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)的免疫调控作用机制。方法: 分离、纯化脂肪组织中的hASCs。采用密度梯度离心法分离MS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选CD4⁺T细胞,体外刺激细胞向Th17极化,并加入不同比例的hASCs(hASCs:CD4⁺T为1:4和1:10)共培养4 d,设立添加anti-LIF抗体组;流式细胞术检测共培养后Th17细胞占CD4⁺T细胞的比例,real-time PCR检测白细胞介素6受体(IL-6R)、白细胞介素23受体(IL-23R)、白血病抑制因子受体(LIFR)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)及白血病抑制因子(LIF)的mRNA水平变化;ELISA法检测共培养体系上清液中LIF的水平。结果: 分离的hASCs经流式细胞术鉴定可基本判定为hASCs;PBMCs经磁珠法分选后获得90%以上纯度的CD4⁺T细胞。共培养后,1:4组和1:10组中Th17细胞所占比例下降,且存在高浓度抑制效应;共培养后RORγt、IL-6R和IL-23R的mRNA表达水平下降,LIFR和LIF的mRNA表达水平均升高;加入anti-LIF抗体后,Th17细胞比例回升至对照组水平;RORγt和IL-6R的mRNA表达水平回升;ELISA检测各组LIF的水平,共培养组LIF分泌均较对照组明显增多,加入anti-LIF抗体后明显减少。结论: hASCs可抑制MS患者Th17细胞的分化,其作用可能与其分泌LIF、通过IL-6/LIF轴竞争性抑制有关。