黄芪多糖对人红白血病K562细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪多糖(简称APS)对人红白血病K562细胞凋亡产生的影响。方法:经流式细胞术来研究APS对人红白血病K562细胞凋亡产生的影响,而APS在K562细胞之中对Caspase-3产生的影响可通过Caspase-3活性测定法进行检测;经Westernblot以及RT-PCR对对照组(K562细胞)及APS组(通过200mg/L的APS进行48h诱导形成的K562细胞)之中的Bcl-X_L、Bcl-2、IAP-1、Bax、SmacmRNA和蛋白进行表达。结果:APS组细胞凋亡数量相较于对照组更高,两组有显性差异,有统计学意义,P0.05;APS组K562细胞中的Caspase-3相较于对照组明显增加,但IAP-1及Bcl-2的mRNA和蛋白的表达都显示降低,而Smac以及Bax的mRNA和蛋白的表达均明显增加,两组有显性差异,有统计学意义,P0.05;两组在Bcl-X_L的mRNA和蛋白方面的表达无显性差异,无统计学意义,P0.05。结论:APS对人红白血病K562细胞进行诱导凋亡可能是通过对Smac、Bax上调以及对IAP-1、Bcl-2下调来实现的。     

靶向抑制存活素表达对卵巢癌细胞株生物学行为的影响和意义

目的：通过存活素（ Survivin）反义寡核苷酸（ ASODN）转染人卵巢癌SKOV3细胞株抑制存活素Survivin蛋白表达,分析靶向抑制 Survivin 表达对卵巢癌细胞生长、细胞周期改变、凋亡、侵袭迁移能力的影响和意义。方法用脂质体（LipofectamineTM2000）介导Survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,通过四唑盐比色法（MTT法）分析细胞生长活性改变,通过流式细胞仪检测Survivin蛋白表达改变、细胞周期分布和细胞凋亡率,通过Transwell小室检测细胞侵袭迁移能力的改变。结果转染Survivin ASODN后卵巢癌细胞株中Survivin蛋白表达明显下降（t＝7．82,P＜0．01）。细胞生长明显减慢（F＝3．75,P＜0．01）,600nm/L ASODN转染48小时细胞存活率为49．50±20．76％,接近IC50值。细胞凋亡明显增加（t＝6．37,P＜0．05）,细胞增殖明显下降（t＝-10．35,P＜0．01）,更多的细胞停留在G0/G1期（t＝10．38,P＜0．01）。细胞迁移和侵袭能力下降（t值分别为19．26、27．42,均P＜0．01）。结论 Survivin ASODN通过靶向抑制卵巢癌细胞存活素表达,可抑制细胞生长,促进细胞凋亡,减少进入有丝分裂的细胞数,降低细胞的侵袭迁移能力,从而达到治疗卵巢癌的作用。靶向抑制存活素的治疗将成为卵巢癌治疗的重要手段。     

1，25-二羟基维生素D3对K562细胞周期及凋亡的影响

目的观察1，25-二羟基维生素D3[1，25（OH）2D3]对白血病细胞株K562细胞周期及细胞凋亡的作用。方法Western印迹检测维生素D受体（VDR）在K562细胞的表达；四噻唑蓝法（MTT）、AO／EB、流式细胞仪分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期。结果（1）K562细胞核阳性表达VDR；（2）0-10^-6mol／L浓度的1，25（OH）2D3呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖，10^-8mol／L 1，25（OH）2D3明显抑制K562细胞增殖，促进凋亡，细胞周期阻滞主要发生在G2期或M早期，凋亡率从4．1％（对照组）增至26．5％（P〈0．01）。结论1，25（OH）2D3可明显抑制K562细胞增殖，促进细胞凋亡。     

原花青素对宫颈癌HeLa细胞Caspase-3和Survivin基因表达的影响

目的 探讨原花青素对官颈癌HeLa细胞Caspase-3和Survivin基因表达的影响.方法 将按照不同终浓度原花青素(0,37.5μmol/L,75.0 μmol/L,150.0μmol/L,300.0μmo/L和600.0 μmol/L)处理宫颈癌HeLa细胞,分别纳入对照组(空白对照),37.5μmol/L PC组,75.0μmol/L PC组,150.0μmol/L PC组,300.0 μmol/L PC组和600.0 μmol/L PC组.继续培养24 h,收集细胞进行实验.采用RT-PCR检测Caspase-3 mRNA和Survivin mRNA表达变化.采取Western blot检测caspase-3和survivin蛋白表达的变化.采用比色法检测caspase-3相对活性.结果 随着原花青索浓度增加,Caspase-3 mRNA和caspase-3蛋白表达水平逐渐增加,而Survivin mRNA和survivin蛋白表达水平逐渐减少;随着处理官颈癌HeLa细胞原花青素浓度升高,caspase-3相对活性逐渐增加,且差异有显著意义(P＜0.05),在原花青素为600.0/μmol/L 时,活性最大.结论 原花青素可剂量依赖性地增加Caspase-3 mRNA和caspase-3蛋白表达水平及caspase-3活性,并且可剂量依赖性减少Survivin mRNA和survivin蛋白表达水平.     

硒化壳聚糖逆转K562/ADM细胞耐药与PI-3K/Akt信号通路的关系

目的研究硒化壳聚糖对体外培养多药耐药白血病细胞株K562/ADM的耐药逆转作用,探讨其与PI-3K/Akt信号通路的关系。方法 K562/ADM细胞培养于含0.6μg/ml阿霉素的培养液中维持其耐药性,应用MTT法检测硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的作用,计算逆转倍数;应用流式细胞法检测细胞凋亡;应用免疫印迹法检测磷酸化Akt(p-Akt)和P糖蛋白(P-gp)表达的改变。结果 K562/ADM细胞对阿霉素(ADM)耐药,硒化壳聚糖可有效抑制K562/ADM细胞增殖,呈一定的剂量和时间效应关系(P0.05,P0.01);硒化壳聚糖能够对K562/ADM细胞耐ADM产生一定的逆转作用,明显增强ADM对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用(P0.05,P0.01),下调p-Akt和P-gp水平(P0.01)。结论硒化壳聚糖对耐药白血病细胞株K562/ADM可产生增殖抑制和多药耐药逆转作用,其部分逆转机制可能是通过诱导细胞凋亡,抑制细胞P-gp表达,阻断细胞PI-3K/Akt信号通路而实现。     

甲基莲心碱对难治/复发急性白血病细胞增殖及P-糖蛋白表达的影响

目的以急性难治/复发白血病患者为研究对象，探讨甲基莲心碱（nefefine）对耐药白血病细胞增殖及P-糖蛋白（P-gp）表达的影响，为临床应用提供实验依据。方法采用MTT法及免疫细胞化学SABC法观察经nefefine处理后耐药白血病细胞的增殖及P-gp表达的改变。结果10μg/ml nefefine干预白血病细胞48h，nefefine＋ADM组对白血病细胞的抑制率比ADM组明显升高（P＜0．01）；与ADM组比较，nefefine＋ADM组和异博定＋ADM组的P-gp阳性表达率及P-gp平均光密度显著下降（P＜0．01）。Nefefine＋ADM组和异博定＋ADM组比较，P-gp的阳性表达率和平均光密度无显著差异（P＞0．05）。结论Neferine能抑制耐药白血病细胞增殖。Nefefine通过降低耐药白血病细胞P-gp的表达逆转MDR。     

Survivin基因沉默对胰腺癌细胞Patu8988增殖及其对吉西他滨敏感性的影响

目的研究Survivin基因沉默对人胰腺癌Patu8988细胞增殖和对化疗药物吉西他滨敏感性的影响。方法设计合成Survivin的siRNA序列,Lipofectamine^TM 2000转染入Patu8988细胞。采用RT．PCR和Western blot检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTY法和细胞克隆形成试验法观察Survivin基因沉默后Patu8988细胞对吉西他滨的敏感性。结果Survivin基因沉默48h后,Patu8988细胞的Survivin基因和蛋白表达明显降低,基因表达分别为：对照组：0．78±0．03,空白组：0．82±0．06,实验组：0．52±0．05;蛋白表达分别为：对照组：0．77±0．21,空白组：0．77±0．26,实验组：0．57±0．03,差异有统计学意义（P〈0．05）。细胞周期被阻滞在G0／G1期,S期细胞数减少,其差异有统计学意义（P〈0．05）。Survivin基因沉默组细胞对吉西他滨的敏感性显著性增强。结论Survivin特异性siRNA能显著沉默Patu8988细胞Survivin基因,抑制细胞增殖,并增强Patu8988细胞对吉西他滨的敏感性。     

急性淋巴细胞白血病患儿骨髓间充质干细胞对K562细胞株药物耐受性的影响

目的 研究急性淋巴细胞白血病患儿骨髓间充质干细胞（MSCs）对K562细胞药物耐受性的影响,并初步探讨其机制.方法 从白血病患儿骨髓中分离、培养并鉴定MSCs;建立K562细胞株与MSCs共培养的体系,观察MSCs对K562细胞生长的影响;AnnexinV-FITC检测一定浓度的阿霉素（ADM）对K562细胞凋亡的影响;流式细胞仪测定不同培养条件下的K562细胞周期;RT-PCR检测K562细胞的Bcl-2和Bax基因.结果 和单独培养的K562细胞相比,与MSCs黏附共培养的K562细胞生长较为缓慢,未见明显的对数生长期.单独培养组细胞早期凋亡率为（9.19±0.53）%,而黏附培养组为（4.00±0.37）%,差异具有统计学意义（P＜0.05）.黏附共培养组K562细胞,G0-G1期细胞比例为（80.95±3.83）%,显著高于单独培养组（50.2±2.26）%（P＜0.05）;而S期细胞比例为（17.40±1.50）%,显著低于单独培养组（37.03±3.50）%（P＜0.05）.相对于单独悬浮培养的K562细胞,黏附共培养的K562细胞Bcl-2基因相对表达明显增强,Bcl-2/Bax显著增高.结论 白血病患儿MSCs能抑制白血病细胞株K562生长,改变细胞周期而逃避药物的促凋亡作用,K562对阿霉素产生耐药性可能与黏附共培养后Bcl-2基因表达增强有关.     

缺氧诱导因子对肝癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的检测在缺氧条件下缺氧诱导因子2α对肝癌SMMC-7721细胞生长和侵袭能力的影响。方法缺氧培养条件下脂质体Lipofectamine介导缺氧诱导因子（HIF-20α）脱氧寡核苷酸转染SMMC-7721肝癌细胞，测转染前后HIF-2α mRNA量和蛋白量检验转染效果；MTY法测定细胞生长和黏附能力变化；Transwell小室测定细胞的体外侵袭能力。结果HIF-2αmRNA和蛋白表达在反义转染组显著低于正义组、随机组与对照组（P〈0．01）。HIF-2仪表达阻断对细胞生长和活力无显著性影响（P〉0．05），但显著抑制体外粘附能力（抑制率16．99％～31．07％）和侵袭能力（抑制率17．9％）（P〈0．01）。结论HIF-2α表达阻断可抑制SMMC-7721肝癌细胞的黏附和侵袭活性。对其生长无显著影响。     

紫杉醇诱导胰腺癌细胞凋亡Survivin表达的变化及意义

目的研究紫杉醇（PA）体外化疗对胰腺癌细胞凋亡抑制蛋白Survivin基因表达的影响。方法培养人胰腺癌细胞株SW1990，加入低浓度的PA，用流式细胞仪分别检测加药前和加药后24、48h的细胞凋亡率，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹技术（Western blot）检测Survivin mRNA和蛋白的表达。结果SW1990细胞给予低浓度的PA后，加药前和加药后24、48h的细胞凋亡率分别为（2．59±0．35）％、（14．75±1．29）％、（22．65±2．80）％；其Survivin mRNA的表达则分别比加药前提高了1．1倍和2．9倍；Survivin蛋白的表达分别增加了1．3倍和3．6倍。结论应用PA化疗可促使胰腺癌细胞内Survivin表达的增加，抵抗化疗诱导的细胞凋亡。     

PTK787对K562细胞增殖及细胞周期作甩的影响

目的：观察酪氨酸激酶抑制剂PTK787对K562细胞增殖、细胞周期的作用,探讨PTK787抗急性髓系白血病的作用机制。方法：应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）观察不同浓度P,rK787在不同时间对K562细胞增殖作用的影响;用流式细胞仪检测浓度PTK787对K562细胞周期的抑制作用。结果：随着PTK787浓度增加与作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高。同一时间不同浓度组之间比较,或者同一浓度不同时间组问比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,其中PTK787作用48h,以浓度320μmol／L对细胞抑制率最强。随着PTK787浓度增加,G1期细胞比例逐渐升高,s期细胞比例逐渐下降,各组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：PTK787可以抑制K562增殖,阻止K562细胞由G1期向S期转化,从而达到抗白血病的作用。     

老年白血病患者Survivin基因表达及临床意义

目的 探讨Survivin基因在老年白血病患者白血病细胞中的表达,并分析与预后的关系.方法 应用RT-PCR对32例不同时期老年急性白血病(AL)患者及5例慢性淋巴细胞白血病患者的白血病细胞Survivin基因mRNA表达情况进行检测,以10例健康人作为对照.结果 32例老年AL患者白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率为71.87%,急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞Survivin mRNA表达率为71.42%与急性非淋巴细胞白血病(ANLL)细胞76%的表达率比较差异无统计学意义,二者均高于对照组(x2=5.90、6.81,P<0.05).初治和复发AL患者白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率分别为78.01%、84.15%,明显高于对照组(x2=12.61、9.23,P<0.05),老年慢性淋巴细胞白血病患者的白血病细胞中无Survivin表达.结论 老年急性白血病的发生、发展可能与Survivin基因的过度表达密切相关.     

氯化高铁血红素和热应激对JWA基因表达的影响

目的探讨JWA基因在氯化高铁血红素(hemin)和热应激单独或联合作用下的表达规律。方法用Western blot方法检测JWA蛋白表达；用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测JWA mRNA表达变化；用氯霉素乙酰转移酶-酶联免疫吸附试验(CAT-ELISA)方法检测hemin和热应激对JWA基因近端启动子转录活性的影响。结果50μmol/L hemin处理K 562细胞1周可使JWA蛋白表达增高(3,23±0．57)倍；而30μmol/L hemin处理K 562细胞48 h可使JWA mRNA表达增加(1．37±0．06)倍。42℃处理K 562细胞2 h可使JWA蛋白表达增高(8．00±1．73)倍；42℃处理K 562细胞30 min可使JWA mRNA表达明显升高(1．87±0．13)倍。hemin和热应激联合作用于K 562细胞后,JWA蛋白和mRNA的表达均低于单独处理。CAT-ELISA结果显示hemin及热应激单独处理可上调各自反应元件的应答,但二者联合作用后反应元件的应答似乎呈现一种部分拮抗的作用。结论hemin和热应激可能分别通过JWA近端启动子上各自的反应元件而调节JWA基因的表达。     

MMP-9ASODN对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制初步探讨

目的 探讨基质金属蛋白酶-9反义寡核苷酸(MMP-9ASODN)对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其机制.方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长增殖的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN转染对A549细胞周期和凋亡比率的影响;RT-PCR法与Western blot法分别检测MMP-9ASODN转染对A549细胞内MMP-9mRNA及蛋白表达的影响.结果 在一定范围内,MMP-9ASODN对A549细胞生长抑制呈浓度和时间依赖性,反叉寡核苷酸浓度为600 nmo/L作用48 h时其抑制作用最明显;MMP-9ASODN转染A549细胞48 h后G1期细胞数明显增多,S期细胞数明显减少,G2期细胞数则无明显变化,其凋亡百分比明显升高;与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);细胞内MMP-9mRNA及其蛋白的相对表达量明显低于对照组(P＜0.01).结论 MMP-9ASODN转染能够有效能够抑制肺腺癌A549细胞的增殖同时诱导其凋亡,其机制可能是通过下调MMP-9mRNA及蛋白的表达.     

p53及p21^wafl蛋白表达与人舌癌细胞多药耐药性的关系

目的 探讨p53及p21^wafl蛋白表达与人舌癌细胞系Tca8113多药耐药性（MDR）的关系。方法 采用脂质体介导的转染技术，将野生型p53（wt-p53）基因导入人舌癌耐药细胞系Tca8113／BLM；分子信标（Molecular Beacon）法检测人舌癌细胞系Tca8113及其耐药细胞系Tca8113／BLM中p53基因的mRNA水平；Western blot检测亲本、耐药细胞和转染细胞中p53、p21^wafl、P-gp和MRP蛋白的表达变化；MTT法检测不同细胞的药物敏感性，流式细胞仪检测细胞周期的改变，激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡。结果 在人舌癌耐药细胞系Tca8113／BLM中p53基因的表达明显下调，并且未检测到p21^wafl蛋白的表达；转染了wt—p53的耐药细胞Tca8113／BLM／p53中p53和p21^wafl蛋白表达均显著上调，而P-gP和MRP的蛋白表达则明显下调，其对药物BLM的敏感性增加10．1倍（P〈0．01）；转染细胞的周期也发生改变，G2期细胞增加，G1和S期细胞减少，转染细胞明显出现凋亡。结论 人舌癌耐药细胞系Tca8113／BLM多药耐药性的产生，可能通过p53和p21^wafl的表达下调使得多药耐药性相关蛋白P—gp和MRP表达上调来实现。     

干扰Livin对HEC-1-A细胞化疗增敏作用的研究

目的 研究Livin在提高人子宫内膜癌HEC-1-A细胞对顺铂化疗敏感性方面的作用及可能机制。方法 将Livin的小分子干扰RNA(Livin-siRNA)转染HEC-1-A细胞,qRT-PCR及Western blot法检测转染siRNA后Livin mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测转染siRNA并暴露于顺铂后,细胞增殖能力的变化。Western blot法检测干扰Livin后,相关蛋白Caspase-3、Caspase-7 、Caspase-9、Smac的表达情况。结果 抑制Livin表达并暴露于顺铂后,细胞增殖能力明显减弱(P<0.01),Caspase-3、Caspase-7 、Caspase-9、Smac蛋白的相对表达量显著增加(P<0.01)。结论 干扰Livin可显著抑制顺铂诱导下的HEC-1-A细胞的增殖能力,其化疗增敏作用是通过解除对Caspase的抑制和减少Smac降解两条途径来实现的。     

靶向Survivin反义寡核苷酸逆转MCF-7乳腺癌细胞三苯氧胺耐药的研究

目的探讨Survivin基因在乳腺癌细胞获得性三苯氧胺(TAM)耐药性形成中的作用以及靶向Survivin mRNA逆转乳腺癌细胞TAM耐药性的可行性。方法建立TAM耐药细胞株(TAM-R),用靶向Survivin mRNA的反义寡核苷酸(ASODN)联合10~(-5)M TAM分别作用于MCF-7细胞和MCF-7/TAM-R细胞72 h后,采用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞仪、原位杂交法检测细胞活性、克隆形成率、凋亡率及Survivin mRNA表达的变化。结果 MCF-7/TAM-R组的Survivin mRNA表达明显高于MCF-7组;ASODN联合应用TAM能够逆转MCF-7/TAM-R细胞对TAM的耐药性,其细胞活性、克隆形成率以及凋亡抑制程度明显强于TAM组(P0.05);靶向Survivin的反义寡核苷酸能够抑制Survivin mRNA的表达。结论 MCF-7细胞可能通过上调Survivin基因来对抗长期TAM刺激所诱导的细胞凋亡,从而促进TAM耐药性的形成,靶向Survivin mRNA的反义寡核苷酸能够逆转MCF-7细胞对TAM的耐药。     

Survivin及Caspase-3在浅表性膀胱移行细胞癌中表达及临床意义

目的 Survivin及Caspase-3在浅表性膀胱移行细胞癌表达及其临床意义.方法 应用S-P免疫组织化学法检测47例行TUR-BT术切除膀胱移行细胞癌标本中Survivin和Caspase-3表达的情况,结合临床资料进行分析.所有标本均经病理证实为T1期内.10例正常膀胱黏膜为对照.结果 Survivin在膀胱移行细胞癌标本中的表达阳性率为68.1%(32/47),而正常对照组中无一例呈阳性表达;Caspase-3在膀胱移行细胞癌标本中的表达阳性率为38.3%(18/47),与对照组阳性率90%(9/10)相比差异有统计学意义(P<0.05).Survivin的表达与膀胱移行细胞癌的组织学分级、初发和复发有关(P<0.05),但与肿瘤数目无关;Caspase-3的表达与膀胱移行细胞癌的初发复发有关,但与组织学分级、肿瘤数目无关.膀胱移行细胞癌中Survivin的表达与Caspase-3表达呈负相关.结论 Survivin及Caspase-3蛋白在膀胱癌组织中选择性表达与膀胱移行细胞癌的分化程度有关,Survivin及Caspase-3蛋白对于判断膀胱移行细胞癌预后有重要临床指导意义.     

GRIM-19对子宫颈癌细胞株HeLa细胞Survivin基因表达的影响

目的:探讨稳定转染GRIM-19对子宫颈癌细胞株HeLa细胞凋亡抑制基因Survivin的表达以及细胞增殖的影响。方法:采用脂质体转染法将GRIM-19重组质粒转染子宫颈癌细胞株HeLa细胞,建立稳定表达GRIM-19的HeLa细胞株,采用RT-PCR检测HeLa细胞转染GRIM-19后mRNA水平表达情况,采用WesternBlot检测稳定转染后GRIM-19与Survivin的表达情况,应用细胞计数法观察各组细胞增殖水平。结果:建立稳定的GRIM-19基因表达的HeLa细胞株,命名为HeLa/G19细胞,对照组细胞命名为HeLa/Con细胞。RT-PCR检测显示GRIM-19mRNA表达明显增加,WesternBlot检测显示GRIM-19的蛋白表达显著升高、Survivin蛋白的表达水平显著降低。细胞计数法实验显示HeLa/GRIM-19细胞增殖较HeLa/Con细胞明显减慢(P<0.05)。结论:GRIM-19可以抑制子宫颈癌细胞Survivin的表达,阻滞细胞的生长,可能是子宫颈癌治疗的新靶点。     

HSP70高表达对K562细胞化疗敏感性研究

目的：研究化学因素引起的热应激蛋白70（HSP70）升高对K562细胞化疗药物体外敏感性的影响。方法：用氯化镉诱导K562细胞使其HSP70高表达，在高表达细胞中分别加入甲氨蝶呤（MTX）、丝裂霉素C（Mitomycin C）、顺氯氨铂（PDD）、平阳霉素（Bleomycin）等4种化疗药物，药物浓度以临床一次用量的1／250为中剂量，中剂量的1／10、10倍分别为低剂量和高剂量，作用16h后用MTT比色法检测细胞活力；HSP70用RT－PCR检测。结果：氯化镉可诱导细胞HSP70高表达，其中作用4h后表达最高；HSP70高表达可以降低细胞对化疗药物的敏感性，HSP70表达水平越高，细胞对化疗药物的敏感性越低。结论：非热诱导的HSP70高表达可以降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，其结果与热诱导的作用相似。