用分子生物学技术分析国内六株旋毛虫分离株

本文首次对来自我国不同宿主来源有代表性的６个旋毛虫分离从基因组ＤＮＡ的限制性酶切长度多态性、同工酶及可溶性蛋白进行综合研究。核酸结果显示：长春株与其余各地域株的限制性酶切图谱间存在着差异，用长春株特异性ＤＮＡ片段制成探讨针，与各株ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，发现各虫株的杂交带型不一，且仅长春株出现１．１２ｋｂ杂交带。同工酶结果显示：春株与其余各株在５种同酶（ＧＰＩ、Ｇ６ＰＤ、ＨＫ、６ＰＧＤＨ）     

对我国五株旋毛虫基因组DNA限制性片段长度多态性的研究

本文用５种限制性内切酶（包括ＥｃｏＲＩ及Ｄｒａｌ）消化５株来自长春（分自犬）、天津、西安、河南及云南（分自猪）的旋毛虫基因组ＤＮＡ，结果显示：长春株与其它各地域株的酶切图谱间存在着差异。曾选其中经ＥｃｏＲＩ酶切的特异性ＤＮＡ片段（１．１２ｋｂ），经克隆制备成探针，与经ＥｃｏＲＩ酶切的上述５株虫体ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交。结果显示，仅长春株出现１．１２ｋｂ杂交带，其它４株均未出现该杂交带，提示     

应用等电聚焦技术分析六株旋毛虫分离株可溶性蛋白

近年来，我们从基因组ＤＮＡ限制性片段长度多态性〔１〕及同工酶两方面对我国不同地区、不同宿主来源的旋毛虫分离株进行了比较研究，长春株（犬株）与其它来自天津、西安、河南及云南各（猪）株存在着明显差异。本文用聚丙烯酰胺等电聚焦技术对我国６株旋毛虫肌幼虫的可...     

DNA指纹图所显示的人株与动物株贾第虫之间的变异

将来自加拿大艾伯塔的5种十二指肠贾第虫虫株:H8,PB1,OAS1,DOGD3和MR4(其宿主分别为人、海狸、羊、狗和麝鼠),按常规方法进行培养。分别提取其基因组DNA,用限制性内切酶Hinf I切开,以单股噬菌体M13 DNA为探针做指纹图。结果表明,5种虫株的一些较小的杂交带相似,但1～4kb的杂交带显示出差异,尤以OAS1株多一条2kb左右的带。5种虫株的主带在1.5和3kb处变异明显。每种虫株均表现出其独特的DNA指纹图型。由于这些虫株在以前的研究中曾显示抗原性和DNA图型十分相似,因而有学者推断其在遗传学上有密     

不同宿主肝片吸虫DNA限制性片段长度多态性分析

本文首次对分离自黄牛、水牛和牦牛的肝片吸虫的基因组DNA，以BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ、HindⅢ和PStⅠ等6种限制性内切酶消化后进行琼脂糖电泳，分析比较它们基因组DNA的限制性片段长度多态性（RestrictionFragmentLengthPolymorphism，RFLP）；同时用地高车标记的牦牛肝片吸虫基因组DNA为探针对不同宿主肝片吸虫DNA进行Southern印迹杂交，限制性内切酸酶切结果显示只有两种限制性内切酶（BamHⅠ和EcoRⅠ）在寄生于牦牛的肝片吸虫中检测到多态性，而水牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫基因组DNA之间没有检测到多态性，根据此结果计算了牦牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫和水牛肝片吸虫基因型间的遗传距离，Southern杂交结果显示牦牛肝片吸虫基因DNA的杂交谱带与黄牛肝片吸虫、水牛肝片吸虫基因组DNA的杂交港带存在一定的差异，本文的实验结果表明牦牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫、水牛肝片吸虫的亲缘关系相对较远，而水牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫的亲缘关系较近。     

猪囊尾蚴DNA限制性片断长度多态性分析

本文采用SDS-酚-乙醇沉淀法提取猪囊尾蚴与猪细颈囊尾蚴染色体。应用6种限制性核酸内切酶及分子杂交技术对5株猪囊尾蚴和1株猪细颈囊尾蚴的染色体DNA进行分析。结果显示猪囊尾蚴与猪细颈囊尾蚴之间以及猪囊尾蚴各株之间在DNA水平上存在差异。显示出DNA技术在寄生虫种、株间鉴别中的敏感性及特异性,同时为不同地区猪爽尾蚴抗原差异和猪囊尾蚴病“血清型”的存在提供了佐证。     

不同分离株弓形虫hsp70基因体外扩增及其酶切分析

目的　不同分离株弓形虫hsp70基因的比较 ;运用限制性内切酶分析 (PRA)建立一种简单的虫株鉴定方法。 方法　采用PCR技术扩增hsp70基因 ;采用 3种限制性内切酶Bsp12 86Ⅰ、BstXⅠ、MboⅠ分别对该基因进行酶切比较。 结果　从 5种不同分离株的弓形虫基因组DNA中扩增出相似的约 2 0 2 2bp的完整HSP70基因阅读框序列 ;Bsp12 86Ⅰ酶切 5株弓形虫有 2组不同酶谱 ,而BstXⅠ、MboⅠ酶切的片段各株间没有差异。结论　 5种不同分离株弓形虫的hsp70基因片段大小基本相同 ;但酶切图谱有差异 ,这可以为虫株鉴定和毒力研究提供参考。     

中国大陆日本血吸虫品系的研究Ⅶ．五地隔离群血吸虫DNA杂交

以pSM889为探针，对分布于中国大陆安徽、湖北、广西、云南、四川5地日本血吸虫自然隔离群的雄虫DNA进行了杂交，分析其长度多态性差异。经限制性内切酶EcoRI和BamHI酶切的杂交图谱分析，结果表明其强杂交带虽相同，但在EcoRI酶切的杂交图谱中，分子量分别在4．4－9．6kb和2．3－4．4kb的上述5地隔离群的弱杂交带上却呈现明显的差别。这表明5地自然隔离群日本血吸虫的DNA结构发生了某些变异，此结果进一步为中国大陆境内日本血吸虫存在品系差别提供了分子生物学的依据。     

中国利什曼原虫分离株分子核型分析

目的：通过核型分析探讨中国利什曼原虫分离株遗传变异情况。方法：应用脉冲电泳技术对16株中国利什曼原虫分离株基因组核型进行分析。结果：被测分离株分有14条－26条染色体（低于2200kb）被区分，核型差异大多集中于225kb－850kb染色体区域，较大染色体相对保守。其中14株属于杜氏利什曼原虫复合体的分离株存在明显的种内核型差异，但来自同一流行区的分离株核型显示差异较小。所有杜氏利什曼原虫复合体的分离株均含有11条相似染色体带：320kb,350kb,380kb,870kb,910kb,1070kb， 200 kb, 1 250 kb, 1 350 kb, 1 600 kb 和1 900 kb。其中, 从白蛉体内分离出的771 分离株核型显示较为独特, 共分离出26 条染色体带。另两株从大沙鼠体内分离的、先前已分被命名为沙鼠利什曼原虫和都兰利什曼原虫的R12 和R20 分离株显示相近核型。结论: 中国杜氏利什曼原虫复合体内存在明显种内遗传变异, 但亲缘关系越近的分离株核型也越相近。地理环境与媒介白蛉均对杜氏利什曼原虫复合体内遗传变异起一定作用。R12 和R 20 分离株倾向于属于同一个种或两个亲缘关系极近的种。同时, 可见寄生的哺乳动物宿主不同可能与利什曼原虫遗传关系密切。     

人腺病毒4型分离株的限制性内切酶分析

用限制性内切酶EcoRI,HindⅢ和BamHI对最近由呼吸道疾病和眼病患者分离到的19株人腺病毒4型分离株基因DNA的酶切点与其标准株进行了比较分析,并制成了限制性内切酶切点图。结果表明,分离株之间酶切点相同,而分离株和标准株的酶切点不同。     

ISSR-PCR对我国旋毛虫7个地理株的分子鉴定

目的探讨对不同种和地理株旋毛虫进行分子鉴定。方法利用简单重复序列区间-PCR(inter simple sequencerepeat-PCR,ISSR-PCR)标准引物对5种旋毛虫及我国旋毛虫7个地理株基因组DNA进行扩增,并观察影响扩增效果的因素。结果5种旋毛虫均分别扩增出了各自的特异性条带:旋毛虫(T1)2条(950bp和850bp),乡土旋毛虫(T2)1条(850bp),布氏旋毛虫(T3)3条(1 300bp、950bp和700bp),伪旋毛虫(T4)1条(600bp),纳氏旋毛虫(T7)有4条带(1 700bp、1 450bp、1 050bp、900bp)。我国有6个猪源旋毛虫地理株均扩增出了与T1相同的2个特异性条带(950bp、850bp)。此外,T1、河南株、云南株、哈尔滨株、黑龙江同江株还扩增出了另外2条弱带(500bp和400bp);但湖北株和天津株则无这2条弱带,湖北株扩增出了1 350bp的条带,天津株扩增出了1 600bp的条带。非猪源的广西株与T1相比,缺少950bp的条带。对1条旋毛虫肌幼虫,在80%酒精保存24w的肌幼虫,在10%甲醛、0.2%叠氮钠及0.05%柳硫汞溶液保存9 w的肌幼虫,应用ISSR-PCR均可扩增出其特异性条带。结论ISSR-PCR用于旋毛虫种的分子鉴定具有良好的稳定性和敏感性;我国6个猪源旋毛虫地理株均为T1,其中云南株、河南株、哈尔滨株及黑龙江同江株可归为一类,湖北株和天津株可归为另一类,来自果子狸的广西株分类地位待定。     

应用COXⅠ基因PCR-RFLP对我国旋毛虫地理株的鉴定

目的对我国旋毛虫不同地理株进行分子鉴定。方法根据旋毛虫线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ（cytochromec-oxidase subunitⅠ,COXⅠ）基因序列合成1对引物,以旋毛虫（Trichinella spiralis,T1）、乡土旋毛虫（T.nativa,T2）、布氏旋毛虫（T.britovi,T3）、伪旋毛虫（T.pseudospiralis,T4）、纳氏旋毛虫（T.nelsoni,T7）的国际参考株作为对照,应用PCR-限制性片段长度多态性（PCR-restrictionfragment length polymorphism,PCR-RFLP）技术对我国7个猪源旋毛虫地理株（河南、湖北、云南、西安、哈尔滨、同江及天津株）进行分子鉴定。结果T1、T2、T3、T4、T7和我国7个猪源旋毛虫地理株的COXⅠ基因均扩增出419 bp的片段,PCR扩增产物Tru1Ⅰ（MseⅠ）酶切后经RFLP分析,T2、T3、T4、T7和天津株均具有独特的酶切带型：T2为22、70和327 bp,T3为92和327 bp,T4为419 bp,T7为62、64、70和223 bp,天津株为92、126和201 bp;其他6个地理株的酶切带型和T1一致,为22、70、126和201 bp。结论我国7个旋毛虫地理株的COXⅠ基因片段（92、70和22 bp）存在种内多态性;河南、湖北、云南、西安、哈尔滨及同江株可归为一类,天津株可归为另一类。     

应用PCR检测旋毛虫DNA的研究

根据旋毛虫幼虫１．６ｋｂ基因序列而设计合成引物，并进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）以检测含鼠肌肉旋毛虫幼虫及纯幼虫。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，可见扩增出了特异的６７０ｂｐ与５００ｂｐ大小的ＤＮＡ条带，而正常肌肉对照未见扩增出此条带。本法可检测０．０１条幼虫产物，具有高敏感性和特异性     

中国大陆不同自然隔离群钉螺的同工酶谱分析

本文对中国大陆的福建、湖北、云南、四川４个自然隔离群的１３个县钉螺进行酯酶同工酶（ＥＳＴ）和苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）电泳酶谱比较,ＥＳＴ共出现１０～１４条酶带,ＭＤＨ共出现３～４条酶带。比较它们的酶谱特征可见：（１）同一省内不同地区间钉螺的酶谱非常相似,具有较密切的亲缘关系;（２）四川、云南２省钉螺的酶谱特征差异较小,而与福建、湖北２省的酶谱比较,差异明显;（３）４个自然隔离群钉螺呈现为３个地理分布种群,分别分布于福建、湖北和滇川３个区域,各群体共有的ＥＳＴ酶带有３条,ＭＤＨ酶带仅１条,其它酶带数目和电泳迁移率均呈现明显差异,提示它们在进化过程中已出现明显的分化     

五个地理株周期型马来丝虫成虫蛋白和同工酶电泳分析

本文应用圆盘电泳对五个地理株——福建建阳株、安徽泾县株、四川乐山株、贵州独山株和贵州荔波株周期型马来丝虫成虫的蛋白和七种酶进行了区带分析和比较。结果显示五个虫株的蛋白、PGM和PO同工酶电泳型没有差异;而MDH和GPI的同工酶电泳型出现了两种类型,即贵州省内的两个株与另外三个株不同;G6PD、EsT和LDH没有区带出现。     

Restriction-endonuclease analysis of DNA from 15 Giardia isolates obtained from humans and animals

The DNA banding pattern of 11 human and four animal isolates (two beaver, one cat, and one guinea pig) of Giardia were compared by using two related techniques. Patterns were compared after endonuclease restriction of DNA followed by agarose gel electrophoresis and ethidium bromide staining and after Southern blot analysis using recombinant plasmids containing Giardia DNA as probes. Two major groups could be distinguished with ethidium bromide staining of eight isolates. Southern blot analysis, however, could distinguish nine different patterns among the 15 isolates studied. One common banding pattern was seen in six isolates (two animal and four human); the remainder of the isolates were unique, with the exception of two identical isolates from sisters. Three isolates (one from a beaver and two from humans) were markedly different from Giardia with the common banding pattern, whereas the other six unique isolates varied moderately. Beavers and other mammals do not seem to possess their own species of Giardia. This methodology introduces a way of distinguishing one species of Giardia isolate from another and promises to be helpful in epidemiological investigations.     

旋毛虫ES抗原特异性蛋白两个结构基因的序列分析及重组质粒的构建

目的：获取旋毛虫ＥＳ抗原的结构基因，对其鉴定和克隆，并研制旋毛虫基因重组抗原。方法：先用反转录ＰＣＲ技术获取目的基因，经序列测定和酶切分析后，再用重组ＤＮＡ技术分别将目的基因与融合表达载体ｐＥＸ３１Ｃ、ｐＥＸ３１Ｂ及表达载体ｐＢＶ２２０连接，评价在大肠杆菌中的表达效果和鉴定表达产物的特异性。结果：获得了编码ＥＳ抗原特异性蛋白成分的两个结构基因（０．７ｋｂ和０．９５ｋｂ），其序列与文献报道的稍有差异。共构建３个重组质粒并在大肠杆菌中表达出相应分子量大小的重组蛋白，均能被猪旋毛虫病阳性血清所识别，但非融合蛋白的特异性强于融合蛋白。在相同条件下，融合蛋白的表达量高于非融合蛋白，而表达蛋白的分子量大小与表达水平呈负相关性。结论：在大肠杆菌中表达的３种重组蛋白是研制旋毛虫基因重组抗原的良好候选抗原蛋白。     

Differences in excretory-secretory products and surface antigens among 19 isolates of Giardia

The excretory-secretory (E-S) products and surface antigens of 19 isolates of Giardia were compared by reactivity of E-S products with antisera to homologous and heterologous organisms and by acrylamide gel electrophoresis of surface-labeled Giardia. Isolates could be divided into three broad groups on the basis of the previously reported DNA studies and the present studies. Group 1 consisted of five isolates with similar or highly cross-reactive E-S. These showed identical DNA banding patterns after endonuclease restriction analysis; four of five had identical surface antigens, and the remaining isolate showed a similar but different major surface antigen. Group 2 consisted of 11 isolates with moderate reactivity amongst themselves. DNA patterns showed some bands in common with group 1 organisms and themselves, but the surface-antigen molecular weight patterns were different. Group 3 consisted of three isolates with reactivity only amongst themselves. There were no DNA bands in common with group 1, and the molecular weights of the surface antigens were diverse. Surface-antigen differences are common among isolates of Giardia lamblia. These differences correlated to some degree with the DNA banding patterns observed after endonuclease restriction analysis and may result in altered virulence and host response.     

Candida albicans in patients with the acquired immunodeficiency syndrome: absence of a novel of hypervirulent strain

To determine whether Candida albicans in patients with AIDS represents a unique strain, C. albicans isolated from 24 patients with AIDS was compared with Candida isolated from 23 healthy adults. Resistance to 5-fluorocytosine, synthesis of amino acids and nucleotides, sugar use, and enzyme activity patterns were similar among isolates from the two groups. Molecular analysis revealed similar banding patterns of EcoRI restriction fragments of DNA between 2.5-3 and 6-7 kb. In addition, the frequency of a dimorphic 3.7-versus 4.2-kb band, identified by agarose gel electrophoresis and by probing Southern transfers of EcoRI digests with a cloned fragment of C. albicans DNA encoding 25S ribosomal RNA, was not significantly different between the AIDS-derived and control C. albicans. C. albicans isolated at different time points in the course of disease and from different sites in individual patients showed identical DNA fingerprints. The similarity in isolates of C. albicans that cause disease in AIDS patients and those present in healthy subjects suggests that the candidiasis associated with AIDS is not due to the presence of a unique or particularly virulent strain but is likely the consequence of a defect in host defense mechanisms.