狂犬病病毒糖蛋白和核蛋白基因的克隆及其重组蛋白在昆虫细胞中的表达

目的从国内狂犬病疫苗ａＧ株中克隆狂犬病病毒糖蛋白（ＧＰ）基因和核蛋白（ＮＰ）基因，应用杆状病毒－昆虫细胞表达系统使其在昆虫细胞中表达。方法从狂犬病病毒感染细胞上清液中提取病毒ＲＮＡ，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增ＧＰ基因和ＮＰ基因。扩增的基因与转移质粒连接并转化大肠杆菌，得到重组转移质粒。将其与野生杆状病毒（ＡｃＭＮＰＶ）线性ＤＮＡ共转染Ｓｆ９昆虫细胞，通过有限稀释法筛选含有ＧＰ基因和ＮＰ基因重组病毒。初步检测了重组蛋白的抗原性。结果用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到ＧＰ基因和ＮＰ基因，通过重组转移后重组病毒感染的细胞经免疫印染实验表明可分别表达ＧＰ和ＮＰ重组蛋白。重组蛋白的分子量分别为５８×１０３和５３×１０３。用重组病毒感染的细胞免疫小鼠后可诱导动物产生特异性抗体。结论可以应用杆状病毒－昆虫细胞表达系统表达狂犬病病毒ＧＰ和ＮＰ重组蛋白，为开发基因工程化狂犬病疫苗提供有意义的资料     

加热及感染诱导热休克蛋白70表达及分布改变的观察

目的：了解加热和病毒感染状态下细胞中热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的表达及分布情况。方法：分别对体外培养的Ｖｅｒｏ Ｅ６细胞进行加热或病毒感染,然后用免疫组化、免疫印迹杂交和ＲＮＡ斑点杂交检测。结果：加热和感染均可使培养细胞高表达ＨＳＰ７０,但其分布定位的改变则有差异。结论：高热和病毒感染可导致ＨＳＰ７０表达增强及分布的改变。     

Epstein—Barr病毒基因工程亚单位疫苗膜抗原gp340／ …

利用病毒学研究所免疫研究室重组的表达Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒膜抗原（ＭＡ）ｇｐ３４０／２２０重组痘苗病毒感染１４３细胞，２４小时后裂解细胞，获得的上清液经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２００层析纯化，经免疫打点分析后收集阳性蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝Ｒ－２５０染色，显示为单一的蛋白带，从而获得纯化的亚单位疫苗ＭＡ ｇｐ３４０／２２０。将纯化的ＭＡ与Ａ１（     

应用痘苗病毒载体表达猴轮状病毒VP4抗原基因

把编码猴轮状病毒（Ｒｈｅｓｕｓｒｏｔａｖｉｒｕｓ，ＲＲＶ）Ｖｐ４抗原的第４基因片段插入到痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５的Ｐ７．５启动子下游，构建成在痘苗病毒Ｐ７．５启动子调控下表达猴轮状病毒Ｖｐ４抗原基因的重组质粒ＰＪＳＡ１１７５－ＶＰ４。应用磷酸钙沉淀技术将ＰＪＳＡ１１７５－ＶＰ４ＤＮＡ转入ＴＫ－１４３细胞，在ＢＵＤＲ和Ｘ－ｇａｌ存在下筛选蓝色蚀斑。经３代以上纯化和病毒增殖，获重组病毒Ｒ－ＶＪＳＡ１１７５－Ｖｐ４。蚀斑滴定其满度达到１５×１０１１ＰＦＵ／Ｌ。经核酸杂交试验证明所获得的重组痘苗病毒带有猴轮状病毒Ｖｐ４抗原基因。用重组病毒感染ＴＫ－１４３细胞（或Ｖｅｒｏ细胞），在感染后４８ｈ，用酶免疫法（ＥＩＡ）检测受染细胞上清液和细胞裂解液中表达的猴轮状病毒Ｖｐ４抗原基因均呈阳性反应。本试验为本研究室轮状病毒基因工程疫苗的一部分，为深入了解轮状病毒基因结构及其功能在方法学上奠定了必要的基础。     

弓形虫P30基因在昆虫杆状病毒载体体系中的初步表达

将弓形虫主要表面抗原（Ｐ３０）基因插入转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３中，然后将重组质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３－Ｐ３０ＤＮＡ与粉纹夜蛾核形多角体病毒ＴｎＮＰＶＤＮＡ共转染培养的草地夜蛾细胞（Ｓｆ），通过同源重组和空斑纯化，得到重组病毒ＴｎＮＰＶ－Ｐ３０．对重组病毒感染的Ｓｆ细胞及银纹夜蛾幼虫进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果显示：Ｐ３０基因在Ｓｆ细胞及虫体中得到了表达，表达产物具有特异的免疫反应性。     

从小鼠乳腺肿瘤病毒来观察超抗原和逆转录病毒的感染

超抗原（ＳＡｇ）可通过刺激Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ链诱导强烈的免疫反应。小鼠乳腺病毒是一种牛乳传递的逆转录病毒，可转录ＳＡｇ，而ＳＡｇ诱导的免疫应答又通过Ｔ细胞使被感的Ｂ细胞扩增，从而维持了病毒的生存。     

病毒相关性再生障碍性贫血的研究进展

流行病学调查及大量实验研究表明，多种病毒感染与再生障碍性贫血（ＡＡ）发生有关，其中以肝炎病毒，细小病毒Ｂ１９，巨细胞病毒和ＥＢ病毒最为重要，病毒致ＡＡ的机制相当复杂，既有病毒本身对造血干细胞的直接破坏，又有病毒激发的免疫损伤，此外，有的病毒还可能因破坏骨髓的基质细胞，破坏骨髓环境而影响骨髓的造血功能。     

Epstein—Barr病毒膜抗原在昆虫细胞sf9中的表达,纯 …

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒膜抗原基因（ＥＢＶ－ＭＡ）称ＭＡ１和截去穿膜区的ＭＡ基因称ＭＡ２分别插入杆状病毒表达载体ｐＶＬ－９４１。将两种重组质粒分别与杆状病毒ＤＮＡ共转染ｓｆ９细胞后获得Ｂａｃｕｌｏ－ＭＡ１和Ｂａｃｕｌｏ－ＭＡ２两种重组病毒，表达产物分别位于重组病毒感染的细胞表面或释放到细胞培养液中。免疫荧光方法检查，在感染的细胞表面表达产物与抗ＭＡ的单克隆抗体特异性地结合，ＳＤＳ－Ｐ     

逆转录病毒介导的人TNF在人肝癌细胞系（SMMC）中的表达

利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ构建了含人ＴＮＦａ基因的重组逆转录病毒载体Ｌ－ｔｎｆＳＮ。磷酸钙沉淀法将重组载体引入病毒包装细胞ＰＡ３１７，挑选Ｇ４１８抗性克隆，用ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度，获得滴度为１×１０５ＣＦＵ／ｍｌ的细胞克隆。应用这一重组病毒感染人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１，经Ｇ４１８筛选获得抗性克隆。ＰＣＲ可从转导的细胞ＤＮＡ中扩增出ＴＮＦａ基因片段，提示目的基因完整地整合在细胞基因组中。测定转导细胞培养上清中ＴＮＦａ活性，结果显示ＴＮＦａ有相对稳定的表达（１５０～３７０Ｕ／１０６ｃｅｌｌｓ／２４小时）。实验还表明转导细胞的体外生长能力无明显变化，但是其在裸鼠中的致瘤性却明显降低，提示逆转录病毒介导ＴＮＦａ基因对人原发性肝场可能有一定的治疗作用。     

前列腺素A1体外对人免疫缺陷病毒1型的复制作用

在感染人免疫缺陷病毒１型的人Ｔ细胞ＣＤ４的ＣＥＭｓ细胞中，应用核酸杂交法检测病毒ＲＮＡ水平，观察前列腺素Ａ１对人免疫缺陷病毒１型复制作用的影响。结果表明，在低感染多重性下，用前列腺素Ａ１处理组，病毒ＲＮＡ水平在病毒感染７２～９６小时明显低于对照组，感染２４小时后给予前列腺素Ａ１，仍可抑制病毒ＲＮＡ。连续用前列腺素处理，其抑制作用达９天。     

乙型肝炎病毒表面抗原S基因在人5型重组腺病毒中…

从美国Ｗｙｅｔｈ公司引进ｐＡｄ５△Ｅ３载体，将乙型肝炎病毒表面抗原基因（ＨＢＶＳ）ＰｒｅＳ２＋Ｓ，腺病毒晚期表达盒＋ＨＢＶＳ基因插入Ｅ３区，与ＥｃｏＲＩ消化的Ａｄ５ＤＮＡＡ片段共转染细胞获得重组腺病毒，相应命名为ｒＡｄ５Ｓ，ｒＡｄ５ＭＳ，ｒＡｄ５Ｓ２Ｓ。对所获得的重组病毒进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）分析，证实重组病毒中含有目的基因，用ＥＬＩＳＡ分析ｒＡｄ５ＭＳ的表达量，其病变细胞和上清液滴度均为１：     

从小鼠服腺肿瘤病毒来观察超抗原和逆转录病毒的感染

超抗原可通过刺激Ｔ细胞受体Ｖβ链诱导强烈的免疫反应。小鼠乳腺病毒是一种牛乳传递的逆转录病毒，可转录ＳＡｇ，而ＳＡｇ诱导的免疫应答又通过Ｔ细胞使被感的Ｂ细胞扩增，从而维持了病毒的生存。     

氧氟沙星、叠氮胸苷单独及与干扰素合用对黄病毒增殖的影响

选用氧氟沙星 (ＯＦＬＸ)和叠氮胸苷(ＡＺＴ)单独投入及与ＩＦＮ并用 ,观察其抗病毒活性结果如下 :1　材料和方法1 1　病毒和细胞　所用黄病毒为乙型脑炎病毒ＪＥＶ的ＪａＧＡｒ - 0 1株。细胞是人肝癌细胞株ＨｅｐＧ2。细胞培养所用培养液为ＤＭＥＭ加 10 %胎牛血清 (ＦＣＳ)。1 2　感染病毒　病毒感染剂量为 10ｍ .ｏ.ｉ(ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ) ,37℃吸附 6 0ｍｉｎ ,在 5 %ＣＯ2 孵箱中培养。将各种浓度的药物添加至含病毒的细胞培养液中 ,2 4ｈ后采取培养上清液 ,测定病毒的含量。1 3　病毒滴定　用空斑形成…     

甲基丙烯酸环氧丙酯诱导的转化成纤维细胞中P^53基因改变

本研究选用人胚肺成纤维细胞的体外转化实验，建立起细胞转化模型。结果表明甲基丙烯酸环氧丙酯可诱导其表型改变，从转化集落分离的细胞经ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测出Ｐ＾５３蛋白增高，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析揭示抑癌基因Ｐ＾５３等７外显子发生突变，从ＰＣＲ双链直接测离的结果发现第７外显子的２４７位ＡＡＣ突变为ＡＧＣ，即由Ａｓｎ变为Ｓｅｒ。因此，Ｐ＾５３基因的改变可能是甲基丙烯酸环氧丙酯诱导人胚成纤维细胞转化的机制     

呼吸道合胞病毒感染患儿可溶性白细胞介素2的检测及其临床意义

呼吸道合胞病毒感染患儿可溶性白细胞介素２的检测及其临床意义李世光，赵习芳，岳月娥，赵俊萍，张泮生应用间接免疫荧光法对急性下呼吸道感染（ＡＬＲＴＩ）患儿１０８份鼻咽分泌物（ＮＰＳ）脱落细胞中呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）抗原和１１２份双份血清标本进行了研究，...     

新生儿心肌炎柯萨奇B病毒感染的研究

用间接ＥＬＩＳＡ、ＭａｃＥＬＩＳＡ检测２６例新生儿心肌炎血清ＣｏｘＢ病毒特异性ＩｇＧ和ＩｇＭ，其中１４例用聚合酶链反应检测血清肠道病毒（ＥＶ）－ＲＮＡ。结果ＣｏｘＢ病毒ＩｇＧ的阳性检出率为３８％，ＩｇＭ的阳性检出率为５４％，ＥＶ－ＲＮＡ的阳性率为５０％，三者阳性率均明显高于对照组。检测了１０例母婴血清的ＣｏｘＢ病毒的ＩｇＭ，提示ＣｏｘＢ病毒可能通过胎盘传播，１４例做了急性期和恢复期双份血清检测，ＩｇＧ有４倍滴度改变者６例。     

辛德毕斯病毒结构蛋白基因对宿主细胞影响的初步研究

目的 了解辛德毕斯病毒基因结构与功能的关系,阐明其分子致病分子机理。方法 构建了辛德毕斯病毒（ＸＪ－１６０病毒株）结构基因的真核表达质粒,ｐｃＤＮＡ３．１ＡＢＣ,转染ＢＨＫ－２１细胞后观察其对宿主细胞的影响。结果 转染病毒结构基因的ＢＨＫ－２１细胞,可以发生辛协毕斯病毒感染所出现的细胞毒性反应,表现为：细胞存活率降低;细胞核染色质浓缩、凝集;Ｇ１期细胞减少、而处于Ｓ期的细胞增多。结论 辛德毕斯病毒     

氧化应激与病毒感染

近来氧化应激与病毒感染之间多种病理学关系引起人们的广泛关注。病毒诱导宿主细胞产生氧化应激,释放大量活性氧介质（ＲＯＳ）,ＲＯＳ又对病毒的复制及宿主细胞抗病毒作用产生影响。在病毒性感染的控制上有人尝试应用抗氧化剂作为治疗手段。本文的目的在于分析ＤＮＡ病毒,ＲＮＡ病毒及逆转录病毒感染的病理学机制中ＲＯＳ的作用。分别以流感病毒,乙肝病毒和ＨＩＶ为代表讨论ＲＯＳ的产生、作用及作用机制。以此探讨临床治疗病毒性疾病的新理论、新方法。     

TBE病毒E蛋白分子生物学研究的进展

森林脑炎（ＴＢＥ）病毒是黄病毒科中的成员，象其它的黄病毒一样，成熟的ＴＢＥ病毒含有单链正股ＲＮＡ、３个结构蛋白即衣壳蛋白（Ｃ）、膜蛋白（Ｍ）、包膜（Ｅ）蛋白和七个非结构蛋白。病毒的蛋白开始以一个聚蛋白的形式合成，然后通过病毒和细胞编码的蛋白酶裂解产生病毒的单个蛋白，裂解后的蛋白和病毒的基因组ＲＮＡ首先组装成含有ＰｒＭ蛋白（Ｍ蛋白的前体）的未成熟的病毒，ＰｒＭ通过细胞编码的蛋白酶裂解成Ｍ蛋白成为成熟的病毒。在３个结构蛋白中Ｅ蛋白是病毒最重要的结构蛋白，决定着病毒的组织的嗜性，介导病毒与细胞受体的结合，诱导保护性的免疫反应。Ｅ蛋白内单个氨基酸的改变可导致病毒的组织嗜性、病毒的毒力、血凝活性和融合活性的改变。因此对ＴＢＥ病毒Ｅ蛋白结构和功能的研究有助于了解病毒与宿主细胞相互作用、病毒致病性以及病毒毒力改变的机理，从而，为病毒感染的特异性诊断、疫苗的研制和抗病毒药物的设计、进而为病毒的预防、控制和治疗提供理论依据，     

应用改建的人5型腺病毒载体表达成人腹泻轮状病毒第5 …

应用前期工作克隆的腺病毒晚期表达盒对引进的５型腺病毒（Ａｄ５）载体进行改建，首先将成人腹泻轮状病毒（ＡＤＲＶ）第５基因克隆入表达盒中，而后将该表达盒插入到Ａｄ５载体的Ｅ３区，最后重组质粒与Ａｄ５ ＤＮＡ ＥｃｏＲ Ｉ大片段共转染Ａ５４９细胞，经打点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印筛选出重组病毒空斑。酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测重组病毒感染细胞上清和沉淀的抗原滴度分别为１：８，１：６４。Ｗｅｓｔｅｒ