川芎嗪对大鼠缺血再灌注视网膜SOD,MD和NO水平及细胞凋亡的影响

目的 :观察川芎嗪对大鼠视网膜缺血再灌注后视网膜超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase ,SOD)、丙二醛 (malondialdehyde ,MDA)、一氧化氮 (nitricoxide ,NO)水平及视网膜细胞凋亡的影响。方法 :采用大鼠视网膜压力缺血再灌注模型 ,分光光度法测定SOD、MDA和NO ,琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂。结果 :视网膜缺血 6 0min再灌注后SOD水平下降 ,而MDA和NO水平则升高 ;视网膜缺血 6 0min再灌注 12h ,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳可见凋亡样DNA断裂 (ApoptoticDNAfragmentation)。川芎嗪能显著对抗视网膜缺血再灌注时视网膜SOD水平的下降、MDA和NO水平的升高 ;同时能阻断大鼠视网膜缺血再灌注 12h后视网膜细胞DNA凋亡样断裂。结论 :川芎嗪可能通过抑制自由基的产生和提高抗氧化能力来对抗大鼠视网膜缺血再灌注诱导的细胞凋亡     

黄芪对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响

目的:观察黄芪对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法:将90只大鼠随机分为3组:对照组、缺血组、保护组,采用前房灌注液体形成14.63kPa高眼压60min的方法建立模型,连续7d每天1次黄芪注射液6g/kg,ip,于手术前30min加注1次,对照组给予同等剂量的生理盐水。两组缺血60min后,分别再灌注0,2,6,12,24,48,72h,用比色法进行视网膜SOD、MDA、NO的测定,用光镜测量包埋切片的平均视网膜内层厚度。结果:黄芪能显著对抗大鼠视网膜缺血再灌注后MDA、NO水平的升高和SOD水平的降低,同时能改善平均视网膜内层厚度的变化。结论:黄芪可减轻大鼠视网膜缺血再灌注后的损伤,其机制可能与黄芪清除自由基,拮抗NO的毒性作用有关。     

缺血再灌注损伤诱导大鼠视网膜细胞凋亡

目的 观察缺血再灌注大鼠视网膜损伤及细胞凋亡情况。 方法 采用升高大鼠眼压到109.725 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)持续1 h的方法制作视网膜缺血再灌注模型，采用常规眼球切片观察不同缺血和再灌注时间的视网膜损伤的组织病理改变；采用DNA琼脂糖凝胶电泳法检测视网膜神经元凋亡情况；采用DNA原位末端标记(terminal dUTP nick end labelling, TUNEL)法定位凋亡的视网膜细胞。 结果 缺血30 min 再灌注24、48 h的大鼠视网膜无明显的病理改变；缺血60 min再灌注24、48 h的大鼠视网膜神经节细胞层和内核层细胞明显变薄；缺血60 min再灌注12、24 h的大鼠视网膜有梯状条带。而正常对照组、缺血30 min再灌注24、48 h组及缺血60 min再灌注48 h组大鼠视网膜均无类似表现。TUNEL法显示视网膜内的细胞凋亡主要发生在节细胞和内核层光感受细胞。 结论 大鼠视网膜缺血再灌注主要是导致视网膜神经节细胞层和内核层细胞损伤，细胞凋亡可能是损伤的重要机制。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 296-298)     

视网膜缺血再灌注损伤后HSP70、NF-κB的表达和细胞凋亡的关系

目的探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后热休克蛋白70（HSP70）、核蛋白因子-κB（NF-κB）表达和损伤神经细胞凋亡的关系。方法前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，28只大鼠随机分为正常组和缺血再灌注组，后者又按照再灌注后不同时间段分为1、6、12、24、48、72h组。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记（TUNEL）法检测视网膜神经细胞凋亡指数（AI），过氧化物酶标记的链酶卵白素（SP）免疫组织化学法检测视网膜组织中HSP70、NF-κB的表达。结果视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h，并逐渐递增，24h达到高峰．48h开始下降，72h不明显。HSP70在再灌注后1h即有表达，随时间段延长表达逐渐增加，至再灌注后24h达到高峰．之后渐下降。NF-κB的表达变化与凋亡细胞变化的规律基本一致。结论视网膜缺血再灌注损伤导致神经节细胞的凋亡：HSP70和NF-κB在视网膜缺血再灌注损伤中表达升高，对神经细胞的凋亡起着重要的调节作用。     

倍他洛尔对实验性视网膜缺血再灌注损伤后 视神经的保护作用

目的探讨倍他洛尔对实验性视网膜缺血再灌注损伤后视神经的保护作用及其可能的作用机制。方法采用升高眼内压的方法，制作大鼠实验性视网膜缺血再灌注损伤模型。将68只SD大鼠随机分为正常对照组（8只）、0.25%倍他洛尔治疗组（30只）和生理盐水对照组（30只）。其中后两组根据再灌注的不同时间各分为1、3、7 d组，每组10只大鼠。治疗组鼠右眼滴入0.25%倍他洛尔眼药水，生理盐水对照组鼠右眼滴入生理盐水。观察治疗组和生理盐水对照组及正常对照组鼠视网膜电图（ERG）b波振幅及光学显微镜、电子显微镜下视网膜结构变化；免疫组织化学法检测神经性一氧化氮合酶（nNOS）的表达,分光光度法测定丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果从再灌注1 d开始，生理盐水对照组ERG的b波振幅持续下降，病理组织损害逐渐加重，视网膜中nNOS阳性表达明显增多，MDA水平持续升高，SOD水平持续下降，其差异与正常对照组比较均有统计学意义（P＜0.01）；与生理盐水对照组相比，再灌注各时段倍他洛尔治疗组ERG的 b波振幅明显恢复（P＜0.01），病理组织损害明显减轻，nNOS阳性神经元明显减少（P＜0.01），MDA含量降低（P＜0.01），SOD活性升高（P＜0.01），其中nNOS阳性神经元与正常对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论倍他洛尔可能通过减少细胞内Ca²⁺超载，抑制NO的产生和提高抗氧化能力，对大鼠实验性视网膜缺血再灌注损伤有一定的保护作用。(中华眼底病杂志,2005,21:249-252)      

Fas/FasL在视网膜缺血再灌注损伤中的表达与细胞凋亡的关系及碱性成纤维细胞生长因子的治疗作用

目的 探讨Fas/FasL在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达与细胞凋亡的关系及碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor bFGF）的治疗作用。 方法 前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，28只大鼠随机分为正常组和手术组，其中手术组大鼠左眼为缺血再灌注组，右眼为治疗组（玻璃体腔内注射bFGF），手术组又按照再灌注后不同时间段分为1、6、12、24、48、72 h组。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotinnick-end，TUNEL）法检测视网膜神经细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)，免疫组织化学法检测视网膜组织中Fas、FasL的表达。 结果 视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6 h，并逐渐递增，24 h达到高峰，48 h开始下降，72 h组不明显。Fas、FasL 表达改变与凋亡的神经细胞改变基本一致。bFGF治疗组各观察指标表达变化规律与缺血组基本一致，但AI值在12、24、48 h组明显低于缺血组（P＜0.05）；Fas表达在6、12、24 h组较缺血组显著下降（P＜0.05）；FasL表达在12、24、48 h组较缺血组明显下降（P＜0.05）。 结论 Fas/FasL死亡诱导系统参与视网膜缺血再灌注损伤，导致神经节细胞的凋亡；bFGF可抑制Fas 、FasL的表达，减少神经节细胞凋亡，对视网膜缺血再灌注损伤有治疗作用。 （中华眼底病杂志，2003，19：160-163）     

果糖二磷酸镁对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨果糖二磷酸镁(magnesium fructose diphosphata,FDPMg)时实验性大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响及其作用机制.方法 通过升高眼压的方法,制作大鼠实验性视网膜缺血再灌注损伤的模型.将66只SD大鼠随机分为正常组、缺血再灌注模型组、FDPMg干预组.后两组各分为6 h、12 h、24 h、48 h、72 h 5个时间段.采用DNA原位末端标记法检测凋亡的视网膜细胞;免疫组织化学法检测视网膜组织中Fas/FasL蛋白的表达变化.结果 正常组大鼠视网膜未见凋亡细胞.缺血再灌注模型组再灌注6 h可观察到凋亡细胞;12 h凋亡细胞逐渐增加;24 h细胞凋亡达高峰;48 h凋亡细胞减少;72 h视网膜仍可见凋亡细胞.各组Fas/FasL表达情况与视网膜细胞凋亡情况基本一致.FDPMg干预组各时段各观察指标表达均较缺血再灌注模型组明显下降,两组间比较差异均有显著统计学意义(均为P＜0.01).结论 FDPMg明显抑制Fas/FasL蛋白在视网膜缺血再灌注损伤中的表达,进而抑制细胞凋亡来实现其对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用.     

视网膜缺血再灌注损伤后视网膜神经节细胞pax6的表达变化与意义

【摘要】 目的 探索视网膜缺血再灌注损伤后视网膜神经节细胞pax6的表达变化及意义。 设计 实验研究。研究对象 缺血再灌注损伤大鼠视网膜。方法 成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠 30只,随机选取5只作为空白对照组,其余25只为视网膜缺血再灌注损伤组,采用升高右眼眼压的 方法制作视网膜缺血再灌注损伤模型。视网膜缺血再灌注后1、2、4、6、8周分5组,每组5只,不 同时间点取右眼行免疫荧光染色,观察视网膜神经节细胞中pax6表达情况。主要指标 pax6的表达 。结果 视网膜缺血再灌注损伤后随着时间推移视网膜各层逐渐出现pax6表达阳性的细胞,对照组 视网膜神经节细胞pax6表达阳性率为（1.28±1.41）%,损伤后1、2、4、6、8周分别为（0.99± 1.23）%、（14.45±2.72）%、（50.88±4.73）%、（71.00±4.72）%、（78.80±4.62）% （F=1.350,P＜0.0001）。各组与对照组两两比较,缺血后1周视网膜神经节细胞pax6表达阳性率 差异无统计学意义（P=0.835）,缺血再灌注损伤2、4、6、8周视网膜神经节细胞pax6表达阳性率 均明显升高（P均＜0.0001）。结论 视网膜缺血再灌注损伤后视网膜各层均出现pax6表达阳性细胞 ,视网膜缺血再灌注损伤能诱导视网膜内源性干细胞激活。（眼科, 2012, 21： 414-417）     

大鼠视网膜缺血再灌注后HIF-1α的表达与视网膜细胞凋亡的研究

目的:探讨大鼠视网膜细胞缺血再灌注后低氧诱导因子(HIF-1α)的表达、视网膜细胞凋亡的发生以及二者之间的关系.方法:采用前房灌注生理盐水升高大鼠眼压到110mmHg(1kPa=7.5mmHg)持续1 h的方法制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型,分别于再灌注不同时间点取材,行免疫组织化学法染色观察HIF-1α在视网膜细胞的阳性表达;采用DNA原位末端标记(terminal dUTP nick end labelling,TUNEL)法定位凋亡的视网膜细胞来检测视网膜凋亡细胞.结果:缺血再灌注2h组视网膜神经节细胞层及内核层细胞出现HIF-1α弱阳性表达,12h组阳性表达至高峰,24h组HIF-1α表达渐减少.视网膜组织细胞凋亡见于缺血再灌注12,24及48h组,凋亡细胞主要位于内核层,且24h组凋亡阳性表达最强.结论:缺血再灌注后大鼠视网膜HIF-1α的表达增加.参与视网膜缺血再灌注损伤;视网膜细胞的损伤部分以凋亡的形式发生,HIF-1α的表达可能与视网膜细胞凋亡有密切的关系.     

3'-大豆苷元磺酸钠在缺血再灌注损伤时对视网膜抗氧化能力及NOS活性的影响

目的 研究3'-大豆苷元磺酸钠(DSS)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤时对视网膜抗氧化能力及一氧化氮合酶(NOS)活性的影响.方法 24只SD大鼠按随机数字表法分成4组:对照组、视网膜缺血再灌注模型组、低剂量(1 mg/kg)及高剂量(2 mg/kg)DSS组.颈总动脉夹闭法制作视网膜缺血再灌注模型,比色法测定血清丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)浓度及NOS、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 与对照组相比,模型组血清MDA浓度升高(P＜0.05),NO浓度降低、eNOS活性降低(P＜0.01).与模型组比较,低剂量DSS组MDA浓度降低、SOD活性升高(P＜0.05);高剂量DSS组GSH-Px活性升高(P＜0.05),tNOS活性升高(P＜0.05);DSS低剂量组(P＜0.05)及高剂量组(P＜0.01)NO浓度与模型组比较均升高,低剂量及高剂量DSS组eNOS活性均升高(P＜0.05).结论 DSS可通过提高eNOS、SOD及GSH-Px的活性,从而提高视网膜缺血再灌注损伤时的抗氧化能力及NO的释放,降低组织细胞损伤,保护眼功能.     

Comparison of pre-treatment and post-treatment use of selenium in retinal ischemia reperfusion injury

AIM: To investigate the effects of selenium in rat retinal ischemia reperfusion (IR) model and compare pre-treatment and post-treatment use. METHODS: Selenium pre-treatment group (n=8) was treated with intraperitoneal (i.p.) selenium 0.5 mg/kg for 7d and terminated 24h after the IR injury. Selenium post-treatment group (n=8) was treated with i.p. selenium 0.5 mg/kg for 7d after the IR injury with termination at the end of the 7d period. Sham group (n=8) received i.p. saline injections identical to the selenium volume for 7d with termination 24h after the IR injury. Control group (n=8) received no intervention. Main outcome measures were retina superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), total antioxidant status (TAS), malondialdehyde (MDA), DNA fragmentation levels, and immunohistological apoptosis evaluation. RESULTS: Compared to the Sham group, selenium pre-treatment had a statistical difference in all parameters except SOD. Post-treatment selenium also resulted in statistical differences in all parameters except the MDA levels. When comparing selenium groups, the pre-treatment selenium group had a statistically higher success in reduction of markers of cell damage such as MDA and DNA fragmentation. In contrast, the post-selenium treatment group had resulted in statistically higher levels of GSH. Histologically both selenium groups succeeded to limit retinal thickening and apoptosis. Pre-treatment use was statistically more successful in decreasing apoptosis in ganglion cell layer compared to post-treatment use. CONCLUSION: Selenium was successful in retinal protection in IR injuries. Pre-treatment efficacy was superior in terms of prevention of tissue damage and apoptosis.     

Apoptosis and caspases after ischemia-reperfusion injury in rat retina

PURPOSE: Extensive cell loss in the retinal ganglion cell layer (RGCL) and the inner nuclear layer (INL) was noted in a rat model of retinal ischemia-reperfusion injury by transient elevated intraocular pressure (IOP). The possible involvement of apoptosis and caspases was examined in this model of neuronal loss. METHODS: Transient elevated IOP was induced in albino Lewis rats through the insertion of a needle into the anterior chamber connected to a saline column. Elevated IOP at 110 mm Hg was maintained for 60 minutes. Groups of animals were euthanatized at various times after reperfusion, and their retinas were evaluated by morphology, agarose gel electrophoresis of DNA, in situ terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated biotin-deoxyuridine triphosphate nick-end labeling (TUNEL), immunohistochemistry of caspases II (ICH1) and III (CPP32), and morphometry. YVAD.CMK, a tetrapeptide inhibitor of caspases, was used to examine the involvement of caspases. RESULTS: A marked ladder pattern in retinal DNA gel analysis, typical of internucleosomal DNA fragmentation and characteristic of apoptosis, was present 12 and 18 hours after reperfusion. Labeling of nuclei in the RGCL and the inner nuclear layer (INL) by TUNEL was noted between 8 and 18 hours after reperfusion. Histologic and ultrastructural features typical of apoptosis were also observed in the inner retina after ischemia. YVAD.CMK administered during the ischemic period inhibited apoptotic fragmentation of retinal DNA and ameliorated the tissue damage. When administered intravitreally 0, 2, or 4 hours after reperfusion, YVAD.CMK was also effective in preserving the inner retina but had no significant effect when administered 6 or 8 hours after reperfusion. The inner retina showed transient elevated immunoreactivity of caspases II and III 4 and 8 hours after reperfusion. CONCLUSIONS: Retinal ischemia-reperfusion after transient elevated IOP induced apoptosis of cells in the retinal ganglion cell layer and the INL. Caspases may have a pivotal role in the early events of the apoptotic pathway(s). Rescue by using anti-apoptotic agents after ischemia-reperfusion is feasible.     

电刺激大鼠小脑顶核对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的　探讨电刺激大鼠小脑顶核对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用。方法　大鼠随机分为缺血再灌注组、电刺激组和假手术组。观察视网膜形态学改变 ;用NADPH黄递酶组织化学染色法 (NADPH NDP)观察视网膜内诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)的表达 ;采用TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况。结果　 (1)缺血再灌注组的内视网膜层 (包括内核层、内丛状层、节细胞 )、神经纤维层和内界膜厚度增加 ,尤其是内丛状层厚度明显高于假手术组 (t=3 6 80 ,P <0 0 1) ;电刺激组的内视网膜厚度与假手术组相比 ,差异无显著意义 (t=1 0 6 4 ,P >0 0 5 ) ;(2 )光镜观察可见缺血再灌注组有明显的细胞核染色质致密浓缩、核碎裂等改变 ,电刺激组仅见少量核浓缩及碎裂 ;(3)电刺激组的iNOS阳性的神经节细胞数明显低于缺血再灌注组 ,其差异有显著意义 (t=3 32 6 ,P <0 0 1) ;(4)电刺激组大鼠发生凋亡的视网膜细胞数明显低于缺血再灌注组 ,其差异有显著意义 (t=4 0 38,P <0 0 1)。结论　电刺激大鼠小脑顶核对缺血再灌注所导致的视网膜组织损伤具有保护作用。     

GM-1对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨单唾液酸神经节苷脂（monosialoganglioside,GM-1）对大鼠视网膜缺血冉灌注损伤后视网膜组织及超微结构的保护作用.方法 健康成年Wistar大鼠75只,随机分为3组：正常组5只、NS组35只,GM-1组35只.正常对照组不加任何处理因素,NS组和GM-1组通过升高眼压造成视网膜缺血60 min,分别于缺血前12 h、1 h及缺血结束时3次腹腔注射NS 3mL/kg或GM-1 3mL/kg（10 mg/mL）,并于再灌注0 h（单纯缺血后）、1 h、6 h、12 h、24 h、3 d和7 d共7个时间点取双眼眼球,每时间点5只,HE染色观察视网膜组织结构并测量视网膜内层平均厚度（mean thickhess of the inner retinal layers,MTIRL）,透射电镜观察视网膜超微结构变化.结果 缺血再灌注后,内层视网膜依次表现出水肿、凋亡、萎缩的损伤过程.GM-1可明显减轻其水肿和萎缩的程度,并减少凋亡的发生.结论 GM-1对视网膜缺血再灌注损伤具有明确的保护作用,可能是其有效治疗药物.     

神经生长因子联合银杏叶提取物对兔急性青光眼视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨神经生长因子联合银杏叶提取物对兔实验性高眼压视网膜缺血再灌注(retinal ischemia reperfusion,RIR)损伤的保护作用.方法:建立兔青光眼缺血再灌注模型,72只新西兰大白兔随机分为神经生长因子组(A组)、银杏叶提取物组(B组)和联合用药组(C组).分别在持续给药1、7、14d,光镜下观察视网膜各层组织形态学改变,测定视网膜组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度变化.结果:在持续给药1、7、14d,银杏叶提取物组、神经生长因子组的MDA含量和NO含量均高于联合用药组(P<0.05);各时间点,银杏叶提取物组、神经生长子组的SOD含量均低于联合用药组(P<0.05).HE染色视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)计数结果显示,联合用药组RGCs的丢失较其他组明显减少,各时间点银杏叶提取物组、神经生长因子组的RGCs计数均低于联合用药组(P<0.05).结论:神经生长因子联合银杏叶提取物对RIR损伤具有更好更持久的保护作用,机制可能与其降低自由基的大量产生,以及其增加视网膜组织中SOD含量和活性有关.     

高眼压缺血-再灌注中视网膜NOS的表达及L-NAME对其表达的影响

目的探讨高眼压缺血－再灌注损伤时视网膜一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的表达、Ｌ－ＮＡＭＥ对ＮＯＳ表达的影响及视网膜ＮＯＳ的作用。方法用免疫组织化学ＳＡＢＣ法检测ｎＮＯＳ，ｅＮＯＳ和ｉＮＯＳ在高眼压缺血－再灌注模型视网膜中的表达及ＮＯＳ抑制剂Ｌ－ＮＡＭＥ对其表达的影响。结果在高眼压缺血－再灌注下，视网膜神经节细胞、神经胶质细胞ｎＮＯＳ，ｅＮＯＳ，ｉＮＯＳ均呈阳性，对照组ｎＮＯＳ呈弱阳性；注射Ｌ－ＮＡＭＥ后，在高眼压缺血－再灌注中，视网膜神经节细胞、神经胶质细胞均呈ｉＮＯＳ强阳性，ｎＮＯＳ，ｅＮＯＳ呈阴性。结论在高眼压缺血－再灌注中ｎＮＯＳ，ｅＮＯＳ，ｉＮＯＳ合成的一氧化氮（ＮＯ）可能对视网膜细胞等有细胞毒性作用；Ｌ－ＮＡＭＥ通过抑制ｎＮＯＳ，ｅＮＯＳ的活性，对高眼压缺血－再灌注视网膜损伤产生保护作用。     

L-carnitine in experimental retinal ischemia-reperfusion injury

The effect of L-carnitine on retinal ischemia-reperfusion injury was evaluated in guinea pigs. 90 min of pressure-induced retinal ischemia followed by 24 h of reperfusion was established in both eyes of 2 groups of animals receiving either L-carnitine (100 mg/kg repeated in 5 doses) or saline intraperitoneally. After enucleation of all the eyes, including those of a control group, malonyldialdehyde (MDA) levels and the thickness of the retinal tissue were measured in 3 groups. The mean MDA value and the tissue thickness of the L-carnitine-treated group were statistically insignificant versus the control group (p > 0.05 and p > 0.05, respectively). However, these values were significantly different in the group receiving saline versus the control group and that receiving L-carnitine (p < 0.001, p < 0.001 and p < 0.001, p < 0.001 respectively). L-Carnitine might be an alternative drug for ischemia-reperfusion injury of the retina.