应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱筛选急性特发性血小板减少性紫癜患儿血清生物标志物

目的 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS) 技术结合蛋白芯片检测并筛选急性血小板减少性紫癜(AITP)早期诊断、病情变化监测及判断预后的血清蛋白质标志物,建立AITP诊断模型,并验证在血清蛋白质组水平,创立AITP的分子诊断新方法.方法 应用SELDI-TOF-MS检测结合在蛋白质芯片上的血清蛋白质,获得35例AITP、35例健康对照者血清蛋白表达指纹图谱,并用Biomarker Wizard软件对数据进行分析,建立人工神经网络诊断模型.结果 在分子质量/电荷比值(质荷比,M/E)为2 000～20 000,AITP组与健康对照组之间差异有统计学意义(P<0.01)的蛋白质峰有29个,其中高表达的蛋白质峰7个,低表达的蛋白质峰22个,从分析的结果看最有意义的蛋白质为质荷比为4 109.23、5 521.35 的蛋白质,可以将其作为AITP的血清生物标志物;在蛋白质库中搜索与上述M/E值相对应的蛋白质,M/E为4 109.23的标志物是核蛋白体large subunit,M/E为 5 521.35 的标志物在蛋白质库中未发现.应用其血清标志物进入人工神经网络组合的诊断模型,将AITP组与健康儿童准确分组,敏感度为95%,特异度为90%.结论 1.M/E比为4 109.23、5 521.35 的蛋白质组合的诊断模型能将AITP与健康儿童完全准确地分开,提示该蛋白质可能是AITP的血清生物标志物;其中M/E为5 521.35的蛋白质可能是新的蛋白质.2.SELDI-TOF-MS技术是寻找疾病相关性蛋白质的有效工具.     

急性淋巴细胞白血病患儿血清蛋白质指纹图谱模型建立及应用评价

目的 应用SELDI-TOF-MS技术构建ALL患儿、对照组AML患儿及正常儿童血清蛋白质指纹图谱,寻找血清差异表达蛋白并建立初步模型,分析其在ALL诊断中作用.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测98例血清标本(ALL 46例,AML 32例,正常儿童20例)的蛋白质质谱,并...     

肿瘤

072913蛋白质芯片筛选儿童急性淋巴细胞白血病血清标志蛋白质的临床研究/张军…∥北京医学.-2007,29(5).-290～292采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术和弱阳离子交换蛋白质芯片对44例急性淋巴细胞白血病(ALL)初诊患儿血清和35例健康儿童血清的蛋白质谱图进行检测。结果:ALL初诊患儿与正常儿童血清蛋白质谱相比有7个显著差异蛋白(P<0.00001),其中3个蛋白质在患儿血清中高表达,4个蛋白质低表达,图1表1参5(李志文)072914急性淋巴细胞白血病6q16、3微卫星DNA缺失及临床相关性研究/杨明华…∥临床儿科杂志.-2007,25(5).-376～379取6q1…     

应用SELDI-TOF-MS筛选激素耐药型肾病综合征患儿尿液生物标志物

目的应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片技术筛选激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿尿液生物标志物。方法激素敏感型肾病综合征(SSNS)组32例,SRNS组9例,正常对照组45例,应用金芯片检测各组尿液标本。结果SRNS有差异明显的生物标志物4个,相对分子量分别为6703、7212、11820、14356,其中7212、11820、14356差异表达蛋白质在SRNS呈高表达,在SSNS呈低表达,6703差异表达蛋白质在SSNS高表达,在SRNS低表达。4个蛋白质峰[6703、7212、11820、14356质荷比(m/z)]组合构建的诊断模型鉴别SRNS和SSNS,灵敏度为88.89%,特异度93.75%。结论SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术是一种无创、快速、简便易行、用量少和高通量分析方法,能直接筛选出SRNS患儿尿液中的生物标志物,具有较好的临床应用价值。     

先天性巨结肠血清蛋白质标记物检测

目的检测先天性巨结肠患儿血清蛋白质,筛选特异的蛋白质标记物,构建用于先天性巨结肠早期筛选及诊断的血清蛋白质指纹图谱模型。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enbanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra,SELDI-TOF-MS)技术检测62例血清标本(先天性巨结肠42例,正常对照20例)的蛋白质质谱,并结合生物信息学方法(支持向量机)分析数据。结果筛选出3个m/z位于3221.7、5639.2、6884.2的蛋白质标记物,构建先天性巨结肠早期筛选及诊断模型。经留一法交叉验证,区分先天性巨结肠和正常小儿的血清蛋白质指纹图谱模型的特异性为100%,敏感性为100%。结论SELDI-TOF-MS结合SVM建立先天性巨结肠血清蛋白质指纹图谱模型是早期筛选及诊断先天性巨结肠的一种特异性强、敏感性高的新方法,值得进一步研究和应用。     

儿童节细胞神经母细胞瘤血清特异性蛋白的筛选与鉴定

目的构建更为完善的儿童节细胞神经母细胞瘤(GNB)的早期诊断血清蛋白质指纹图谱模型。方法入选30例GNB术前患儿及30例正常对照儿童,采集血清标本;以弱阳离子交换磁珠芯片(MB-WCX)处理血清,用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选方法检测和分析蛋白m/z峰值,筛选特异性蛋白,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)方法对特异性蛋白进行鉴定。结果 SELDI-TOF-MS质谱筛选GNB术前患儿与正常对照儿童得到m/z峰位于5 920的蛋白标记物,该标记物在GNB术前患儿中高表达(6 180.6±2 328.0),相比正常对照儿童(419.1±493.3),差异有统计学意义(P0.05);经MALDI-TOF/TOF鉴定,该蛋白标记物为类载脂蛋白C-Ⅲ(Apo C-Ⅲ)。结论 m/z峰位于5 920的蛋白标记物考虑为儿童GNB特异性标记物,其有助于儿童GNB的早期诊断。     

胆道闭锁血清蛋白质标记物的检测

目的 寻找特异性诊断胆道闭锁的血清蛋白标记物.方法 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测28例血清标本(胆道闭锁7例,先天性胆总管囊肿7例,婴肝综合征3例,正常对照11例)的蛋白质质谱表达,结合生物信息学方法(SVM)分析数据.结果 筛选出m/z位于3403、2108、2111、2131、2823的5个蛋白质标记物区分肝胆疾病和正常对照小儿的血清蛋白指纹图谱模型,敏感性94.1%,特异性81.8%;筛选出m/z位于3403蛋白质标记物区分胆道闭锁和正常对照小儿的血清蛋白指纹图谱模型,敏感性100%,特异性100%;筛选出m/z位于3403、4796的2个蛋白质标记物区分胆道闭锁和其他肝胆疾病的血清蛋白指纹图谱模型,敏感性71.4%,特异性80.0%.结论 应用SELDI-TOF-MS结合SVM构建的胆道闭锁血清蛋白指纹图谱模型为胆道闭锁的早期诊断方法开拓了新方向,值得进一步研究.     

血清蛋白质标记物在先天性巨结肠患儿中的应用

目的 通过检测先天性巨结肠(HD)患儿血清蛋白质筛选特异的蛋白质标记物,构建用于HD早期筛选及诊断的血清蛋白质指纹图谱模型.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测82例血清标本(HD组42例,其他类型肠梗阻组、健康对照组各20例)的蛋白质质谱,并结合生物信息学方法 (支持向量机)分析数据.结果 1.HD组与健康对照组比较:筛选出3个M/Z位于3 221.7、5 639.2、6 884.2的蛋白质标记物,构建HD早期筛选及诊断模型,3个标记物在HD组低表达,其在HD组和健康对照组的表达强度分别为378.29±273.34、295.65±159.38、444.13±254.06和1 428.18±1 192.61、1 039.60±785.64、1 115.72±680.48,2组比较均有显著性差异(Pa<0.01).经留一法交叉验证,区分HD和健康儿童的血清蛋白质指纹图谱模型的特异性和敏感性均为100%.2.其他类型肠梗阻组与健康对照组比较:在M/Z位于2 694.2、3 520.2位点上均无显著性差异(Pa>0.05).结论 SELDI-TOF-MS结合支持向量机建立HD血清蛋白质指纹图谱模型是早期筛选及诊断HD的一种特异性强、敏感性高的新方法 .     

儿童肝母细胞瘤潜在标志物载脂蛋白A-I的筛选及鉴定

目的筛选并鉴定出小儿肝母细胞瘤(HB)血清生物学标记物,以助HB的早期诊断。方法使用弱阳离子磁珠技术处理30例HB患儿、20例全身炎症反应综合征(SIRS)患儿和20例正常儿童的血清样品,利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)平台筛选出肿瘤组和正常组的差异性蛋白。SDS-PAGE纯化分离出目标蛋白质后,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定出目标蛋白质的氨基酸序列,并通过Swiss Prot数据库查找与之匹配的蛋白质。最后使用Real-time PCR和ELISA技术验证该蛋白质的表达情况。结果 SELDI-TOF-MS筛选并排除炎症因子干扰后,发现HB组和正常组存在质合比为9 348 Da的差异性蛋白质,在HB组的表达较低(P0.05)。经鉴定此蛋白为载脂蛋白A-I(Apo A-I)。Real-time PCR和ELISA验证Apo A-I基因和蛋白在HB组均低表达,在正常组高表达。结论 Apo A-I可作为HB非炎症性蛋白质标记物,对其早期诊断有意义。     

儿童表皮葡萄球菌脑膜炎脑脊液蛋白质组学的初步研究

目的：细菌性脑膜炎是致残、致死率较高的儿童时期常见中枢神经系统感染性疾病，其预后与诊断时间的早晚、是否及时治疗密切相关。而目前脑脊液(cerebrospinal fluid，CSF)中细菌培养的阳性率较低，使其确诊困难。该实验拟通过建立正常中国儿童CSF蛋白质双向凝胶电泳图谱，筛选表皮葡萄球菌脑膜炎(Staphylococcus epidermidis meningitis，SeM)特异性蛋白，为SeM的早期诊断提供线索，同时也为进一步治疗提供靶参考。方法：收集SeM患儿和同年龄正常儿童CSF各4 mL，固相pH梯度二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE）技术分离蛋白质，以正常儿童CSF的2-DE凝胶为参考胶，将SeM患儿CSF的凝胶与之进行比较分析，寻找两组患儿CSF蛋白质谱的异常变化斑点。结果：正常儿童CSF分离获得蛋白质斑点438个，SeM患儿CSF分离获得蛋白质斑点425个，其中发现有25个蛋白质点仅在正常CSF表达，在SeM CSF中表达而在正常CSF中无表达的蛋白质点为12个；与正常CSF蛋白质点表达量比较，SeM有6个蛋白质点表达量有2倍以上上调，而19个蛋白质点表达量有2倍以上下调。结论：该实验成功建立了正常儿童和SeM患儿CSF蛋白质2-DE图谱，通过凝胶图像分析和计算机信息处理，发现了一些与SeM相关的蛋白质差异位点。对这些差异位点的进一步分析和鉴定，可能有助于发现与SeM相关的疾病特异性蛋白，为早期诊断及寻找新的药物靶点提供了新的思路。     

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??Objective??To investigate the change of the platelet state and function in acute lymphocytic leukemia. Methods??The changes of platelet indices??PLT??PCT??MPV??PDW????immature platelet fraction??IPF%????immature platelet counts??IPC????granule membrane glycoprotein of platelet ??CD62p?? and PAC-1 were obtained by using automatic blood cell analyzer and whole blood flow cytometry??FCM?? respectively??in children with acute lymphocytic
leukemia??ALL????ALL in first complete remission ??ALL-CR1?? and children undergoing elective surgical procedure??control group??. Results????1??Without addition of platelet agonists ADP??expression of platelet surface activated CD62p and PAC-1 in ALL was higher than that in control group??P??0.05????while expression of platelet surface activated PAC-1 in ALL-CR1 was higher than that in control group??P??0.05????and lower than that in ALL??P??0.05??????2??With addition of platelet agonists ADP??expression of platelet surface activated CD62p and PAC-1 in ALL was lower than that in control group??P??0.05????while expression of platelet surface activated PAC-1 in ALL-CR1 was lower than that in control group??P??0.05????and higher than that in ALL??P??0.05??????3?? PLT??PCT and MPV in ALL was lower than that in control group and ALL-CR1 ??P??0.05??????4?? IPF% in ALL was higher than that in control group and ALL-CR1??P??0.05????and IPC was lower than that in control group and ALL-CR1??P??0.05??. Conclusion??The children who are newly diagnosed with acute lymphocytic leukemia have peripheral platelet reactivity and platelet function defects. Platelet indices and platelet membrane glycoprotein can be used as effective indicators to judge the effect on ALL.     

儿童急性淋巴细胞白血病化疗前后血清生化指标测定及其意义

探讨同型半胱氨酸（p-Hcy）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、乳酸脱氢酶（LDH）及肿瘤特异性生长因子（TSGF）在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）患者外周血中的表达及临床意义。方法　郑州大学第一附属医院2009年1月至2010年7月儿科血液病区收治的ALL患儿68例,其中男36例,女32例。所有患儿确诊后均进行正规化疗,其中完全缓解56例（缓解组）,复发12例（复发组）。另选取门诊健康体检儿童46名作为对照组。测定ALL患儿化疗前、缓解后、复发后及对照组儿童外周血p-Hcy、hs-CRP、LDH和TSGF。结果　缓解组化疗前和缓解后p-Hcy、hs-CRP、LDH和TSGF高于对照组,且缓解后低于化疗前,差异均有统计学意义（P值分别为 < 0.01、 < 0.05）。复发组复发后各项指标高于缓解组缓解后和对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）,但与缓解组化疗前比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。缓解组化疗前p-Hcy与TSGF呈正相关（r = 0.72,P < 0.05）,p-Hcy与LDH呈正相关（r = 0.82,P < 0.01） ,p-Hcy与hs-CRP呈正相关（r = 0.82,P < 0.01）。结论　动态监测外周血中p-Hcy、LDH、hs-CRP及TSGF的表达,于明确儿童ALL化疗疗效及辅助诊断有一定参考价值。     

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??Abstract??Objective??To detect the changes of the plasma homocysteine??p-Hcy????high-sensitivity C-reactive protein??hs-CRP????1actic dehydrogenase??LDH?? and tumor specific growth factor??TSGF?? determination in patients with acute lymphocytic leukemia??ALL?? and its clinical significance. Methods??p-Hcy??enzymatic cycling assay????hs-CRP??turbidimetry respectively????LDH??automatic analyzer?? and TSGF ??with biochemistry??before treatment and after remission were measured between ALL children and normal children in Department of Pediatrics??Zhengzhou university's First Hospital from Jan. 2009 to Jul. 2010. Results??Before chemotherapy and after complete remission??p-Hcy??hs-CRP??TSGF and LDH levels in the ALL-CR patients were significantly higher than those in the controls??P < 0.01?? .The level of p-Hcy??hs-CRP??TSGF and LDH after complete remission was lower than that before treatment??P < 0.05??.The level of p-Hcy??hs-CRP??TSGF and LDH after cancer recurrence was higher than that of normal children and after complete remission of ALL-CR children??P < 0.05??.p-Hcy level was significantly correlated with LDH??TSGF and hs-CRP level before chemotherapy of ALL-CR children??P < 0.01??. Conclusion??p-Hcy??hs-CRP??TSGF and LDH can be used as a reference marker in diagnosis??monitoring patients’condition and prognosis evaluation in acute lymphocytic leukemia of children.     

儿童急性淋巴细胞白血病血清IGF-1和IGFBP-3表达变化及其意义

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿血清中胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）水平的表达变化及其临床意义。 方法：36例ALL患儿分别在治疗前和完全缓解后6个月留取血清, 对照组血清来自30例外科疾病患儿。应用放射免疫法（RIA）测定IGF-1和免疫放射法（IRMA）测定IGFBP-3水平。结果：ALL组治疗前血清IGF-1、IGFBP-3水平分别为19±4 ng/mL和1216±132 ng/mL,低于对照组的IGF-1、IGFBP-3水平（分别为32±3 ng/mL、2104±191 ng/mL）, 差异有统计学意义（P0.05）。结论：ALL患儿血清IGF-1和IGFBP-3水平降低,并随着病情缓解而升高。提示IGF-1和IGFBP-3可能可以作为儿童ALL诊断及疗效判断的有效指标。     

p73基因在儿童急性淋巴细胞白血病的表达

目的探讨p73基因在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及其与临床特征、疗效的关系。方法采用逆转录—聚合酶链反应,对31例ALL、10例ALL缓解(CR)患儿骨髓单个核细胞进行p73 mRNA检测,并进行p73表达与临床特征的相关分析;10例非肿瘤患儿为对照组。结果31例初发ALL p73 mRNA表达阳性率为64.5%,强度为0.316;10例ALL-CR组阳性率90.0%,强度0.641;10例对照组患儿均表达p73 mRNA,强度0.685。CR组和对照组阳性表达率和相对表达强度均明显高于ALL组(P0.05),CR组和对照组的表达差异无统计学意义(P0.05)。p73阴性表达与高危年龄(≥10岁)、外周血高白细胞数(≥50×109/L)、T细胞型、高危临床分型、早期诱导缓解治疗反应差等临床特征相关(P0.05),与性别、FAB分型无关(P0.05)。结论儿童ALL患者p73 mRNA的表达率较低,p73 mRNA的阴性表达可能与儿童ALL的发生发展有关;儿童ALL p73基因阴性表达者可能预后不良;p73基因检测对儿童ALL临床治疗、估计预后有意义。     

Livin蛋白在急性淋巴细胞白血病儿童中的表达

目的探讨Livin蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)骨髓组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学链霉素-抗生物素-过氧化物酶复合法(SP法)检测Livin蛋白在40例ALL和同期住院20例非白血病儿童的骨髓组织表达情况,分析其与儿童ALL发生发展的关系。结果ALL患儿40例骨髓组织中Livin蛋白阳性表达率为40%,较对照组(5%)明显增高,二者比较有统计学意义(P<0.05)。化疗16例患儿骨髓组织中7例完全缓解,其Livin蛋白阳性表达率明显低于未完全缓解者(P<0.05)。结论Livin蛋白在儿童ALL骨髓组织中高表达,Livin蛋白可能参与儿童ALL的发生发展和化疗耐受机制过程。     

儿童急性白血病心肌酶谱的变化

检测了72例儿童急性白血病心肌酶谱及部分病例作治疗前，完全缓解后心肌酶谱的变化。结果表明急性白血病（各类型）心肌酶在治疗前明显高于对照组，完全缓解后下降，尤以CKMB、LDH、HBDH差异尤为显著，说明急性白血病对心肌有损害。当急性白血病心肌酶各项指标异常升高时预后不良。     

Serum lysozyme level in children with acute leukemia and malignant diseases

Serum lysozyme activity was measured in samples from 65 children with acute lymphatic and myelogenous leukemia, solid tumors and malignant lymphoma in comparison with 45 healthy children. All children with acute lymphatic leukemia (ALL) had significantly reduced levels of lysozyme before starting therapy compared with a control group (p less than 0,01). Children with ALL in complete remission had lysozyme levels comparable to normal children, while children with ALL in relapse showed pathological low levels again. Children with acute myelogenous leukemia (AML), solid tumors and malignant lymphomas had higher lysozyme concentration before therapy than healthy children. Determination of lysozyme activity in children with acute leukemia and malignant tumors is of value for diagnosis and to control the effect of therapy.     

Cis-diamminedichloroplatinum (NSC-119875) in childhood malignancies: A southwest oncology group study

Children with malignancies resistant to conventional therapy were treated with cis-diamminedichloroplatinum (PDD), 1 5 to 20 mg/m², given daily by rapid intravenous infusion for 5 days at 3-wk intervals. Eleven of 24 children with acute lymphocytic leukemia (ALL) received two or more courses; among these no remissions occurred. Fifty-four children with solid tumors were treated: 25 neuroblastoma, 9 rhabdomyosarcoma, 4 Ewing sarcoma, 2 testicular embryonal carcinoma, 2 retinoblastoma, and 12 miscellaneous tumors. One complete remission, 3 partial remissions, and 2 improvements were observed in children with neuroblastoma. One girl with metastatic osteogenic sarcoma achieved a partial remission. One child with metastatic testicular embryonal carcinoma showed improvement. The side effects were vomiting controlled by antiemetics in 26 children and transient elevations of serum creatinine and BUN in 14 children. Nineteen of 39 children with solid tumors, who received more than one course of PDD, had moderately severe myelosuppression caused by PDD. In summary, PDD is a promising agent in neuroblastoma, osteogenic sarcoma, and testicular embryonal carcinoma, and an ineffective agent in ALL. The effect of PDD on other types of solid tumors should be evaluated in the future.     

Wnt通路中Wif-1和β-catenin在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达

目的研究Wnt通路中Wnt通路抑制因子1(Wif-1)和β连环蛋白(β-catenin)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及可能的作用。方法收集初发并且诱导缓解治疗第33天完全缓解的35例ALL患儿的临床资料,以治疗前作为初发组,第33天达完全缓解时作为缓解组,对照组为15例非恶性血液病患儿。RT-PCR方法检测Wif-1和β-cateninm RNA的表达,ELISA法测Wif-1蛋白的表达。结果初发组Wif-1m RNA及蛋白的表达明显低于对照组和缓解组,β-cateninm RNA的表达高于对照组和缓解组(P0.05)。在初发组和缓解组,高危患儿的β-cateninm RNA表达均高于中危和低危患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于中危和低危患儿(P0.05)。在初发组和缓解组,T-ALL患儿β-cateninm RNA的表达高于B-ALL患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于B-ALL患儿(P0.05)。各组Wif-1和β-cateninm RNA表达呈负相关(P0.05)。结论 Wif-1表达下降、β-catenin表达增高是儿童急淋发病机制之一,Wif-1下降和/或β-catenin增高的程度可能与预后相关。